Cap 7

CAPITULO 7.
Estado sanitario: I. Patologa: control y prevencin en roedores

M DEL CARMEN FERNNDEZ CRIADO Gabinete Veterinario. Facultad de Medicina. Universidad Autnoma de Madrid RICARDO FEINSTEIN National Veterinary Institute, Uppsala, Suecia SUSAN SNCHEZ GAMARRA Athens Diagnosis Laboratory. College of Veterinary Medicine. University of Georgia, USA CALIDAD MICROBIOLGICA Definiciones y terminologa Gnotobiologa Produccin de gnotobiticos Aisladores Caractersticas principales del animal gnotobitico Aplicaciones de los animales gnotobiticos Control sanitario de los animales de experimentacin Prioridades Factores adicionales de importancia Muestreo Anlisis de laboratorio Control sanitario en animales inmunodeficientes Centinelas Resultados Importancia del control de calidad del laboratorio de diagnstico Ventajas del uso de animales definidos PATOLOGA DE ROEDORES Introduccin Bacterias que afectan a los diferentes sistemas Enfermedades bacterianas del aparato respiratorio Enfermedades bacterianas del aparato digestivo Enfermedades bacterianas que afectan a tegumentos externos Enfermedades virales que afectan a los diferentes sistemas y aparatos Enfermedades virales que afectan al aparato respiratorio Enfermedades virales que afectan al aparato digestivo Virus que afectan a mltiples sistemas y aparatos Virus que afectan al sistema nervioso central (SNC) Virus que afectan a tegumentos externos Parsitos que afectan a los diferentes sistemas y aparatos Parsitos parenterales Parsitos del aparato digestivo Parsitos que afectan a los tegumentos externos RESUMEN BIBLIOGRAFA
Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores
CALIDAD MICROBIOLGICA Definiciones y terminologa Las tcnicas para generar y mantener animales libres de contaminacin microbiana han permitido explorar las funciones fisiolgicas de la flora normal y los complejos mecanismos de su interaccin con el animal hospedador y con otros agentes microbianos. Tambin constituyen una herramienta indispensable para obtener animales de calidad microbiolgica definida, libres de organismos que puedan interferir en la investigacin, la produccin de reactivos biolgicos o la eficiencia de las colonias de cra. Los animales que carecen completamente de organismos asociados se denominan axnicos o libres de grmenes. Pueden mantenerse en estado de buena salud bajo condiciones adecuadas, pero difieren en varios aspectos de los holoxnicos, que poseen una flora convencional o no modificada. Cabe mencionar que en un sentido estricto los axnicos no estn completamente desprovistos de grmenes, ya que son portadores de material gentico viral integrado en cromosomas celulares, lo cual posiblemente sea vlido para otras especies animales. Animales (o vegetales) asociados a organismos conocidos (virus, bacterias, hongos, protozoos o metazoos) se denominan gnotobiotas (del griego, gnotos: conocido, bio: vida). Se incluyen en los animales gnotobiticos aquellos inicialmente libres de bacterias a los que se les introduce un cultivo puro de uno o varios microorganismos especficos (mono-, bi-, o poliasociado). La introduccin microbiana intencionada suele designarse como asociacin, para diferenciarla de la contaminacin, que es accidental. Gnotobiologa Las tcnicas gnotobiticas han evolucionado aceleradamente, y se aplican con diversas modificaciones para producir y mantener animales de los que selectivamente se han eliminado ciertos microrganismos. Estos animales, designados como heteroxnicos o microbiolgicamente definidos se emplean en investigaciones especficas o como fundadores de poblaciones libres de grmenes patgenos u oportunistas. Dependiendo de la composicin de la flora asociada o del sistema utilizado para controlar la misma, se suelen aplicar denominaciones tales como animales libres de patgenos especficos (Specific Patogen Free, SPF), animales libres de anticuerpos virales (VAF) o animales nacidos mediante cesrea y mantenidos bajo barreras (COBS). A menos que se cuente con una lista de los organismos especficos las denominaciones mencionadas carecen de valor. Conviene sealar adems que tales designaciones incluyen aquellos agentes que se han investigado (asumiendo que tal fue hecho correctamente y en un nmero representativo de animales), pero no informan acerca del resto del contenido microbiolgico. En el caso especfico de cerdos donantes de tejidos para xenotransplantes, se ha propuesto la denominacin de cerdo de flora definida para transplante (xenograft-defined flora) para aquellos porcinos de nivel microbiolgico adecuado. En el Cuadro 7-1 se indican de manera resumida el tipo de animales en funcin de sus caractersticas microbiolgicas y forma de obtencin. Obviamente, la composicin de la flora asociada, puede alterarse drsticamente dependiendo de la edad del animal, estado inmunolgico, dieta y factores del ambiente. Lo mismo puede decirse de las infecciones. Produccin de gnotobiticos La produccin de animales gnotobiticos se inicia de diferentes maneras. La forma ms simple es apareando progenitores gnotobiticos. De no ser posible se obtienen quirrgicamente los fetos a trmino de una hembra microbiolgicamente definida. La operacin consiste en una histerectoma (extirpacin del tero con los fetos) o histerectoma (remocin de fetos) efectuada en condiciones aspticas (Figura 7-1). Los fetos
se pasan seguidamente a un aislador esterilizado para ser criados por nodrizas gnotobiticas, que es el sistema ms prctico (vase Figura 7-1). En su defecto pueden ser alimentados con una dieta especial usando mamaderas. Con ese fin se seleccionan hembras gnotobiticas con buen instinto materno y se las aparea con un par de das de anticipacin al apareamiento de la hembra donante de fetos. Despus del nacimiento a la nodriza se le retiran las cras (excepto un par de ellas) y se las sustituye por las de la hembra donante. Todo el proceso se conoce tambin como derivacin o rederivacin. Una variedad menos segura es la de reemplazar las operaciones quirrgicas por un parto natural y transferir las cras inmediatamente despus del nacimiento. Tipo de animales Gnotobiticos Forma de obtencin
Por cesrea asptica, se desarrollan y permanecen siempre en aisladores. El tiempo no influye en su categora. Se conoce su flora microbiana (en el estado actual de las tcnicas de control). Son estriles, sin ningn germen, criados y mantenidos en aisladores. Proceden de axnicos. Albergan los microorganismos que se les han implantado (flora digestiva, o virus o bacterias). Controles microbiolgicos posteriores evidencian la presencia exclusiva de los microorganismos iniciales. Se cran y mantienen en aisladores. El tiempo puede influir en su categora. No se puede afirmar la continuidad de una flora conocida y controlada. Nunca se cran en aisladores. Libre de Grmenes Patgenos (SPF) Se obtienen por cesrea asptica. Criados y mantenidos en condiciones ambientales especialmente concebidas para evitar una contaminacin por grmenes patgenos para su especie. Se controlan peridicamente. Criados y mantenidos en condiciones ambientales no definidas, eventualmente pueden ser portadores de infecciones, latentes o no. Axnicos o heteroxnicos, recriados en instalaciones de alta o baja calidad.
Axnico Gnotoxnicos
Agnotobiticos
Heteroxnicos
Holoxnicos (convencionales) Neo-holoxnicos
Cuadro 7-1- Tipos de animales de experimentacin funcin de su condicin sanitaria y atendiendo a su forma de obtencin.
Otro mtodo que se usa con asiduidad es la transferencia de embriones. Si los embriones se obtienen tempranamente despus de la fecundacin, conservan intacta la zona pelcida que acta como barrera natural contra la mayora de agentes infecciosos. Al efecto se los extrae del aparato genital de la madre durante el estado de preimplantacin para ser transferidos a una hembra gnotobitica gestante o pseudogestante sincronizada en el mismo perodo. La eliminacin de la flora puede tambin lograrse mediante tratamiento prolongado con antibiticos, proceso que puede llevar algunos meses. Dado que la erradicacin bacteriana no garantiza la ausencia de virus u otros organismos, es imprescindible realizar exhaustivos controles microbiolgicos.
Figura 7.1. Obtencin de ratas gnotobiticas mediante cesrea (a) y posterior traspaso a un macroaislador (b). Se observa detalle de ruptura de cordn umbilical y grupo de neonatos Fotos cortesa de J.M. Ziga
Aisladores Si bien los animales gnotobiticos pueden mantenerse en cuartos estriles, en la actualidad se prefiere usar aisladores. Los aisladores modernos son cmaras hermticas de tamao variable, construidas de material plstico flexible transparente (vase Figura 7-1). Se fabrican a escala comercial y su armado, puesta en marcha y mantenimiento se ejecutan siguiendo las instrucciones de la compaa productora (vanse Captulos 5 y 10). Previo a su funcionamiento el interior se desinfecta, por ejemplo con vapores de formalina o cido peractico, y se realizan controles de esterilidad. Para trabajar en el aislador se usan guantes con mangas de goma o material sinttico grueso incorporados a la pared del mismo. El acceso al interior es a travs de una trampa germicida que consiste en una esclusa esterilizable. Todo elemento necesario, como jaulas, alimentos, cama, material quirrgico, y tambin animales se introducen aspticamente mediante la trampa germicida. En general, se prefiere ventilacin forzada individual para cada aislador, pero tambin es posible conectar varios aisladores a un sistema de ventilacin central. El aire se pasa por filtros de alta eficiencia y la presin en el interior del aislador se mantiene ligeramente ms elevada que en el cuarto, para evitar una posible contaminacin en el caso de ocurrir una pinchadura o ruptura del aislador. Por lo dems es necesario controlar las condiciones ambientales en el interior de manera ms o menos continua (temperatura, humedad relativa y concentraciones de CO2 y NH3). Caractersticas principales del animal gnotobitico Como se ha sealado previamente el animal gnotobitico presenta peculiaridades morfolgicas y fisiolgicas. Tales diferencias son ms acentuadas a nivel de los sistemas que en el animal normal
interaccionan con la flora asociada, tales como el intestino y sistema inmunolgico. La morfologa intestinal del animal libre de grmenes se caracteriza por un agrandamiento del ciego y reduccin concomitante del grosor de la pared intestinal. A nivel histolgico se observa un menor tamao de las vellosidades y disminucin de la profundidad de las criptas. Las modificaciones mencionadas reducen considerablemente la superficie de absorcin de la mucosa intestinal. El reducido tamao de los rganos linfticos y sistema inmune constituye otra de las caractersticas ms salientes inducidas por la ausencia de flora asociada. Tal fenmeno se refleja en la escasa infiltracin de clulas linfticas (linfocitos, clulas plasmticas) perceptible en la mucosa, especialmente la intestinal. Entre las diferencias metablicas cabe citar la incapacidad para degradar mucus y colesterol en el aparato digestivo y tambin los bajos niveles de inmunoglobulinas circulantes. Las condiciones mencionadas pueden volver a la normalidad en caso de revertirse el estado libre de grmenes. La dieta de animales axnicos debe ser estril y suplementarse especialmente con aquellas vitaminas que en el animal convencional derivan de la flora del intestino, tales como la K y las del complejo B. Aplicaciones de los animales gnotobiticos Se mencionan a continuacin slo algunos ejemplos generales de las reas ms comunes de uso de animales gnotobiticos. Para mayores detalles se recomienda consultar los textos de Coates & Gustafsson (1984) y especialmente Wostmann (1996), as como los resmenes de los Simposios Internacionales de Gnotobiologa, el ms reciente, Simposio XIII, llevado a cabo en Estocolmo (1999). Si bien los roedores ocupan un lugar preferente, otras especies tambin son utilizadas, entre las que cabe mencionar al cerdo, en parte debido al empleo en xenotransplantes y a su uso frecuente en toxicologa. Los animales gnotobiticos constituyen modelos de extrema utilidad para obtener informacin acerca de las funciones corporales que dependen directa o indirectamente de los microrganismos presentes en el organismo. Tambin permiten explorar las relaciones entre diferentes microorganismos entre s, como ocurre entre distintos miembros del ecosistema intestinal, incluyendo la facultad de ciertas bacterias de impedir la colonizacin por otras. Las infecciones experimentales e interaccin de patgenos o material antignico con el sistema inmune sin la interferencia de otros organismos es otro de los campos de mayor inters. Las bacterias intestinales poseen un poderoso arsenal enzimtico capaz de transformar sustancias ingeridas. Los animales gnotobiticos se utilizan para evaluar el papel y la funcin de la flora intestinal en tales fenmenos de transformacin. Las aplicaciones se extienden desde el sector de la nutricin al de la toxicologa y especialmente la carcinognesis por productos qumicos. La flora intestinal puede generar metabolitos cancergenos a partir de productos inocuos o, inversamente, degradar sustancias tumorignicas. Estudios de larga duracin permiten en tal contexto evaluar la patologa espontnea de roedores axnicos o gnotobiticos y obtener informacin acerca del papel de distintas especies de microorganismos. El animal gnotobitico tambin es til para el ensayo de teraputicas antitumorales. La razn es que las substancias antimitticas y citotxicas utilizadas para combatir el cncer afectan al sistema inmune causando inmunosupresin, por lo que animales convencionales sometidos a tales tratamientos sucumben por infecciones banales. En modelos gnotobiticos es posible desarrollar y refinar terapias ya que se evitan las complicaciones infecciosas. De manera similar, se usan tales modelos para abordar problemas relacionados con los mecanismos y tratamiento de infecciones en transplantes de rganos o en pacientes que sufren inmunodeficiencias, quemaduras severas, etc. o inversamente, cuando en tales estudios se desea evitar la ingerencia microbiana para concentrarse en otros aspectos.
Control sanitario de los animales de experimentacin El estado de salud del animal de laboratorio puede ejercer una profunda influencia en los resultados experimentales. La nica manera de evitar los efectos negativos de las infecciones naturales es mediante la erradicacin selectiva de agentes infecciosos para lograr un animal de calidad microbiolgica definida. Tal animal debe ser protegido sistemticamente del riesgo de infeccin. Por ese motivo las instalaciones modernas son diseadas como una compleja barrera fsica manejada en base a estrictos principios sanitarios cuyo principal objetivo es el de la prevencin de cualquier fuente de contaminacin (vase Captulo 5). La funcin de la barrera es la de excluir agentes perjudiciales para el animal o sus aplicaciones y acta de manera inversa a los sistemas de contencin empleados para trabajar con grmenes patgenos, material radiactivo o substancias qumicas nocivas. Implcitos en todo sistema de barreras estn los controles de calidad para verificar su funcionamiento. La efectividad de la barrera se demuestra mediante controles peridicos de la salud de los animales. Las instalaciones de produccin requieren adems del servicio y asesoramiento de un laboratorio de diagnstico especializado en patologa de los animales de experimentacin, ya que ante la mera sospecha de una infeccin es indispensable realizar con prontitud necropsias o los anlisis microbiolgicos e histopatolgicos necesarios con el fin de establecer un diagnstico. El diagnstico es imprescindible para poder tomar medidas de control, predecir las consecuencias de la infeccin, identificar la va de entrada, etc. En el mejor de los casos, de haber sido una falsa alarma, se pasar de un estado de alerta al de la tranquilidad de constatar que nada ha ocurrido. La forma ms comn de introduccin de patgenos en animalarios modernos es a travs de animales infectados y una de las mayores dificultades es que la ausencia de signos clnicos en el animal portador impide su deteccin. Dado que el aspecto externo o de aparente buena salud no necesariamente indican una calidad microbiolgica adecuada, el estado sanitario de una poblacin o grupo de animales solamente puede definirse mediante controles de laboratorio. Se deduce de lo anterior que los controles peridicos de la salud poseen una doble funcin. Actan por un lado como instrumento preventivo que permite conocer el estado del animal antes de su introduccin en el animalario, y por el otro son un elemento indispensable para controlar regularmente el funcionamiento del sistema de barreras. Prioridades Es imposible para los sistemas de prevencin y control sanitario comunes abarcar todos los agentes existentes. La situacin se vuelve ms conflictiva debido a la ausencia de lmites precisos para definir claramente cuales son aquellos microorganismos que deben excluirse. Inevitablemente hay que hacer una seleccin dando prioridad a determinados. Los siguientes son puntos claves a considerar: Los patgenos de roedores causan comnmente lesin y enfermedad por lo que amenazan la supervivencia de la poblacin, perjudican su salud y ocasionan sufrimiento al animal. De distintos modos conspiran contra la eficiencia de la colonia. Los organismos oportunistas se manifiestan como patgenos en ciertas ocasiones, dependiendo de la interaccin de varios elementos tales como estado inmunolgico del animal, sinergismo con otros agentes infecciosos, factores ambientales, estrs, procedimientos experimentales, etc. Existen microorganismos capaces de interferir con el propsito especfico de los animales o de reactivos biolgicos derivados de los mismos. Las infecciones zoonticas pueden alcanzar suma gravedad, como en los brotes de Hantavirus en personal expuesto a ratas de laboratorio infectadas en forma inaparente (ver tambin Captulo .9.).
Factores adicionales de importancia Prevalencia. Es uno de los determinantes principales del riesgo de infeccin en la barrera y tambin de las posibilidades de deteccin del organismo. Agentes de muy baja prevalencia requieren el muestreo de un gran nmero de animales. Esto puede resultar imposible de obtener o no poseer justificacin prctica. Disponibilidad de mtodos adecuados de deteccin. Posibilidad real de evitar o erradicar la infeccin. Caractersticas de la poblacin en riesgo. La especie animal, cepa, edad y estado inmunolgico (animales inmunodeficientes, manipulados genticamente), determinan en gran medida el espectro de grmenes a excluir y la estrategia de control sanitario. Uno de los problemas generales de las Unidades de Produccin es la necesidad de alojar una diversidad de animales de distinto origen y carga microbiana desconocida. La introduccin de un germen irrelevante para cierta lnea experimental puede al mismo tiempo invalidar completamente a otra. Corresponde a la direccin de la Unidad de Produccin y/o Experimentacin definir claramente cuales organismos son inaceptables en la barrera. Tal decisin requiere consultas con las diferentes partes involucradas y asesoramiento de especialistas en el tema. El control de la sanidad de los animales experimentales ha sido un tema de inters durante aos y con el tiempo fueron surgiendo diferentes propuestas. Si bien no existe un mtodo universalmente aceptado, la Federacin Europea de Asociaciones de Animales de Laboratorio (FELASA) ha publicado recomendaciones generales que ciertamente constituyen una base firme para armonizar conceptos (ver en Kraft et al (1994) FELASA Recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit breeding colonies. Laboratory Animals 28, 1-12.). Las propuestas de FELASA contienen listas con los organismos de importancia para cada especie de laboratorio y sus respectivos mtodos de anlisis. Vienen siendo aplicadas en diferentes pases, pero cabe sealar que dejan varios puntos claves sin especificar. Tampoco incluyen los Helicobacter, algunos de los parvovirus de rata y ratn, ni diagnstico por medio de tcnicas de biologa molecular por lo que el modelo de FELASA debe ser revaluado peridicamente para introducir los adelantos necesarios. Seleccin de muestras Las unidades de produccin y Animalario experimentales se controlan mediante la necropsia y exmenes microbiolgicos exhaustivos de un nmero limitado de animales. Tratndose de infecciones inaparentes, el nmero, mtodo de seleccin y caractersticas de los individuos seleccionados para el control sanitario de una poblacin adquieren una importancia crtica, ya que determinan en gran medida la probabilidad de detectar al menos un animal portador. La estrategia de muestreo vara, es posible seleccionar los animales al azar o en forma sistemtica, sea eligindolos de manera peridica, estratificada, o mediante combinaciones de estos. FELASA aconseja incluir 8 o 10 animales dependiendo de la especie, que deben ser de cepa, sexo, edad y estado inmunolgico adecuados. La periodicidad del control vara en funcin de la importancia del agente, su prevalencia, movimiento de animales, etc. Para organismos de prevalencia elevada suelen hacerse controles ms seguidos que en el caso de aquellos poco frecuentes. En experimentos prolongados donde la estabilidad del perfil microbiolgico es importante puede ser necesario controlar los animales antes, durante y a su finalizacin para asegurarse de que no hayan ocurrido cambios. Uno de los factores limitante del nmero de animales a examinar y la periodicidad de los controles es el costo econmico de los anlisis. Principalmente por esa razn, ciertas instituciones optan por examinar frecuentemente unos pocos agentes marcadores o diana para lo que se seleccionan organismos de alta prevalencia. Por ejemplo, en el caso del ratn, se incluyen el coronavirus de la hepatitis, bacterias de la familia Pasteurellaceae y nematodos intestinales (Oxyurus spp.). En caso de detectarse cualquiera de ellos
se ampla inmediatamente el esquema para incluir otros organismos segn las recomendaciones de FELASA. Anlisis de laboratorio El perfil microbiolgico se obtiene en base a necropsias, anlisis serolgicos, cultivos bacterianos y parasitologa. Debe destacarse que la forma de realizar los procedimientos de necropsia y muestreo puede influir marcadamente en el resultado de los exmenes sanitarios. Anlisis serolgicos: se emplean para el anlisis de virus y micoplasmas, empleando generalmente tcnicas de ELISA o inmunofluorescencia ya que son altamente especficas, sensibles, rpidas y de bajo costo. Una desventaja de mtodos basados en la deteccin de anticuerpos es que no sirven para diagnstico temprano, sea en enfermedades agudas o en la etapa inicial de una infeccin. Tampoco es posible aplicarlos en animales muy jvenes con un tiempo de exposicin demasiado corto ni en roedores inmunodeficientes. Por ltimo se agrega la posibilidad de resultados falsos y dudosos, con ttulos bajos, imposibles de interpretar. El anlisis serolgico tambin se usa para detectar agentes infecciosos en productos biolgicos. Bsicamente, el material sospechoso se inocula en ratones o ratas seronegativas con el fin de provocar su seroconversin. Cultivos bacterianos: las bacterias se evidencian por cultivo, tomando muestras del contenido del intestino grueso y de la mucosa nasofaringotraqueal y vaginal o prepucial. Tales sitios constituyen localizaciones preferentes de la generalidad de patgenos murinos. La serologa y tcnicas moleculares son usadas para unos pocos agentes (Pasteurellaceae, Leptospira, Helicobacter). Es importante tambin tomar muestras para cultivo de observarse cambios fuera de los tejidos mencionados (por ejemplo en el caso de un absceso en piel o ganglio linftico inflamado). Estudios de parasitologa: los ecto- y endoparsitos se observan directamente mediante anlisis de rutina de la piel y contenido intestinal, preferentemente de animales jvenes. Las listas de FELASA incluyen un grupo heterogneo de organismos, tales como el Bacilo asociado a las cilias respiratorias (CAR-bacillus), Clostridium piliforme, Encephalitozoon cuniculi, Klosiella, Leptospiras, Toxoplasma gondii, etc., que se pueden demostrar por histopatologa o serologa. Ciertos agentes, como CAR-bacillus o Pneumocystis carinii deben indicarse de estar asociados con signos clnicos, lesiones, alteraciones funcionales o si se los observa en animales inmunodeficientes. Anatoma patolgica: la inclusin sistemtica de histopatologa en los controles sanitarios ha sido debatida. FELASA (ver en Kraft et al 1994) la recomienda solamente en el caso de observarse lesiones macroscpicas durante la necropsia, pero existen otras opiniones a favor de un uso ms amplio, ya que la salud de un animal no depende solamente de su carga microbiana. Las lesiones, aun las de naturaleza no infecciosa, pueden dar lugar a profundas alteraciones fisiolgicas. Tal es el caso de la nefrosis crnica de la rata, que causa desajustes del metabolismo hdrico, mineral y proteico, altera la fisiologa de varias glndulas endocrinas y acorta considerablemente la vida del animal. La frecuencia de tales lesiones en estudios prolongados puede ser tan importante como el perfil microbiolgico La patologa adems es el nico mtodo que permite detectar cambios no evidenciables por otros tipos de anlisis, incluyendo el hecho de que en un brote de enfermedad infecciosa las lesiones suelen preceder a la seroconversin. Control sanitario en animales inmunodeficientes Este tipo de control difiere por varias razones. Como se ha mencionado anteriormente la baja produccin de anticuerpos impide en muchos casos el uso de anlisis serolgicos. Dado que son presa fcil de infecciones banales aumenta la importancia de grmenes oportunistas y de organismos no tpicos de
roedores. En ciertos casos debe considerarse el riesgo de patgenos humanos, ya que los inmunodeficientes tienen la capacidad de adquirir infecciones del personal tcnico e investigador y por otro lado se emplean con frecuencia como receptores de tejidos y organismos humanos. Otro aspecto a tener en cuenta son posibles diferencias de la duracin de las enfermedades, localizacin del agente causal y sus lesiones, ya que ello influye en la eleccin de tejidos a analizar. El control puede basarse entonces en una combinacin de necropsia completa con histopatologa sistemtica (incluyendo de ser necesario tcnicas inmunohistoqumicas y moleculares), exmenes microbiolgicos y parasitolgicos. A ello se agrega la evaluacin microbiolgica ambiental y necropsia completa de todo animal que muere o muestra signos clnicos. El uso de centinelas es otra alternativa empleada con frecuencia. Centinelas Los centinelas son animales microbiolgicamente definidos que se estabulan junto con los inmunodeficientes con el objeto de usarlos para los controles sanitarios. Para aumentar la probabilidad de contagio se suele colocar en sus jaulas el material de cama sucio que ha sido usado por los inmunodeficientes. El sistema de centinelas sobre cama usada es empleado asimismo para evaluar el estado de animales que por una u otra razn no se desea sacrificar para controles sanitarios, como ocurre con ciertos transgnicos o grupos experimentales. De ser posible se emplean centinelas de la misma base gentica que los animales a controlar. La desventaja de los centinelas es que dependiendo del agente infeccioso pueden requerir largo tiempo de exposicin antes de contagiarse y seroconvertir, y en ciertos casos no llegan a infectarse. Resultados Los resultados de controles sanitarios son siempre retrospectivos y se presentan en un protocolo a tal efecto que contiene fecha y laboratorio de anlisis, nmero, identidad y caractersticas de animales examinados, mtodo de diagnstico de cada organismo y resultados obtenidos. Tambin se incluyen las lesiones encontradas y su diagnstico histolgico, as como patgenos hallados en evaluaciones anteriores. De demostrarse la presencia de uno o ms animales positivos para algn agente se considera que toda la unidad de origen est infectada por tal organismo. Debido al problema de los falsos positivos, es fundamental confirmar que son seropositivos mediante un nuevo anlisis, de ser posible utilizando un mtodo alternativo. Tambin pueden buscarse lesiones compatibles con el diagnstico serolgico. Durante el intervalo entre deteccin y confirmacin del resultado (positivo o negativo) los animales se consideran como infectados por lo que deben adoptarse las medidas preventivas que correspondan. La actitud a tomar ante un resultado positivo depende del agente en cuestin, uso que se da a los animales (cra, reactivos biolgicos, investigacin), riesgo zoontico y posibilidad de implementar un tratamiento. Importancia del control de calidad del laboratorio de diagnstico Como ha sido mencionado, la informacin obtenida en el control microbiolgico permite evaluar el funcionamiento de las barreras. Es adems un elemento de juicio objetivo sobre la calidad del animal. Considerando que un diagnstico errneo puede tener consecuencias tan devastadoras como el sacrificio innecesario de toda una poblacin animal, es aconsejable dejar el control sanitario en manos de un laboratorio competente sujeto a normas estrictas de control de calidad. La forma objetiva de demostrar la competencia del laboratorio es mediante el reconocimiento o acreditacin otorgada por un ente especializado, como la Agencia de Cooperacin Europea para la Acreditacin de Laboratorios (EAL).
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Ventajas del uso de animales definidos El concepto de animales definidos abarca al animal y los necesarios controles de integridad gentica, de calidad microbiolgica y de las condiciones ambientales de estabulacin. El costo de los animales definidos puede parecer relativamente elevado, pero creer que existen alternativas ms econmicas es meramente una ilusin. Para el cientfico, la mayor ventaja de trabajar con animales de calidad definida es saber con antelacin que constituyen un instrumento apto para su propsito especfico, sea cra, experimentacin o produccin de reactivos biolgicos. Como consecuencia de una menor variabilidad experimental es posible reducir significativamente el nmero de animales. Beneficios adicionales son el poder comparar la calidad microbiolgica de poblaciones de distinto origen, o de una misma poblacin a travs del tiempo. La disminucin considerable del riesgo de contagio de enfermedades zoonticas para quienes se exponen directa o indirectamente al animal o reactivos derivados del mismo es otra ventaja a considerar. Para finalizar, las enfermedades son uno de los factores que conspiran contra el bienestar del animal. Por razones humanitarias no se justifica aceptar una causa de sufrimiento innecesario cuando la misma es evitable. PATOLOGA DE ROEDORES Introduccin Las infecciones y patologa espontnea de los animales de laboratorio interfieren de mltiples maneras en la investigacin. Las enfermedades son en general inaparentes, es decir sin signos clnicos, pero igualmente provocan importantes cambios metablicos y una serie de fenmenos adversos que pueden manifestarse a todo nivel, sea como una alteracin de resultados experimentales, mortandad de animales durante procedimientos o contaminacin de reactivos biolgicos, para citar unos pocos ejemplos. Los efectos mencionados se traducen en baja precisin y un aumento de la variabilidad experimental que escapan totalmente al control del investigador y que no pueden ser compensadas por mtodos estadsticos, solamente utilizando un mayor nmero de animales. La falta de reproducibilidad, experimentos malogrados, necesidad de emplear ms animales para compensar prdidas inesperadas, etc. incrementan por cierto el costo de los experimentos y constituyen una prdida de tiempo y recursos para la comunidad cientfica. A ello se agregan gastos de los sistemas de prevencin, y en el caso de introducirse enfermedades, tambin los del diagnstico, saneamiento y repoblacin de las colonias. Tales complicaciones son evitables mediante la prevencin y erradicacin selectiva de organismos patgenos del animal experimental. Como se ha visto anteriormente, se requiere al efecto un sistema de barreras y controles sanitarios peridicos para verificar su efectividad. Adems, es fundamental ante la mera sospecha de una infeccin contar con el servicio de un laboratorio diagnstico especializado en enfermedades de roedores para realizar necropsias y los anlisis microbiolgicos e histopatolgicos necesarios con fines de diagnstico. Los exigentes requisitos de calidad del animal de laboratorio son impuestos por el progreso de la investigacin biomdica. Es indudable que el reactivo biolgico se ha convertido en un delicado instrumento cientfico, pero su sensibilidad permanece intacta. Las enfermedades son una causa de sufrimiento innecesario que conspira contra el bienestar de animales utilizados para tal noble destino. La labor conjunta de investigadores y especialistas en medicina de animales de laboratorio consiste no solamente erradicarlas, sino tambin en motivar los cambios de actitud necesarios para dejar de lado las actitudes permisivas.
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Referidas al tratamiento, debemos de hacer algunas consideraciones; en el caso de los roedores no es conveniente tratarlos con frmacos, deben ser erradicados de la colonia: los tratamientos pueden alterar y desfigurar los resultados de las investigaciones; los animales pueden convertirse en reservorios y ser el origen de enfermedades endmicas; en muchos casos, las lesiones causadas por los agentes infecciosos, son motivo de grave sufrimiento para el animal y deben sacrificarse. Vase Cuadro 7-5.
Es por lo que en este captulo, en la mayora de los procesos, no se recomienda ningn tratamiento a excepcin de algunas enfermedades parasitarias. La forma ms efectiva de eliminar los agentes patgenos de una colonia es el lavado de embriones y la derivacin cesrea (ver gnotobiologa). No obstante en algunas cepas de roedores puede ser conveniente administrarles algn frmaco (antibioterapia) con fines preventivos, y en algunos para evitar infecciones oportunistas (caso de los ratones inmunodeprimidos). Bacterias que afectan a los diferentes sistemas Enfermedades bacterianas del aparato respiratorio CAR bacillus (bacilo asociado al tracto respiratorio). Se trata de un bacilo filamentoso gramnegativo cuya clasificacin todava no esta muy clara. Estudios del 16S rRNA aislado de rata han mostrado que est relacionado con Flavobacterium ferrugineum y Flexibacter sancti. Los organismos aislados de la rata y del conejo pertenecen a distintas cepas ya que producen enfermedad con distinto nivel de virulencia en el ratn, siendo las cepas de rata ms virulentas que las de conejo. Este patgeno ha sido identificado recientemente en ratas, ratones y conejos. Experimentalmente puede infectar cobayos y hmsters. La transmisin tiene lugar por contacto de secreciones nasales con la mucosa respiratoria. El bacilo CAR puede aparecer como patgeno primario aunque en la mayora de los casos se encuentra junto con Mycoplasma pulmonis con efectos sinrgicos exacerbando las lesiones de Mycoplasmosis respiratoria murina. Organotropismo: epitelio respiratorio Cuadro clnico: las lesiones y el cuadro clnico causados por el bacilo de CAR son los mismos que las causados por Mycoplasma pulmonis pero CAR adems produce bronquiestasis severa, atelectasis y abcesos en lbulos enteros (Figura 7-2). Estas lesiones son debidas principalmente a la acumulacin de pus en las vas respiratorias.
Figura 7-2. Histofotomicrografa de un corte de pulmn con la imagen de CAR bacillus. Cortesa de R. Feinstein
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Histopatologa: microscpicamente los bacilos se observan en las superficies epiteliales entre los cilios y hacen que este borde ciliado aparezca denso. El epitelio pulmonar no es el nico afectado, los pasajes nasales, la laringe, la traquea y el odo medio tambin se ven afectados. Klebsiella pneumoniae Se trata de un bacilo gramnegativo, comensal del tracto digestivo de muchos animales incluidos la rata y el ratn. K. pneumoniae es normalmente considerada un patgeno oportunista, y en roedores imunocomprometidos puede aparecer como patgeno primario pero esta ocurrencia no es muy comn. La transmisin de este organismo es principalmente oral-fecal. Su prevalencia en colonias de roedores es muy alta y aumenta con el uso de antibiticos. Organotropismo: pulmn. Cuadro clnico: disnea, estornudos, linfadenopatia cervical, inapetencia, lordosis Histopatologa: linfadenitis, empiema, pneumonia granulomatosa. Interferencia con la investigacin: las ratas y ratones infectados con K. pneumoniae o con productos o partes de esta bacteria se utilizan como modelos de pneumonia, endotoxemia, sepsis, cistitis y pielonefritis, farmacocintica de antibiticos, resistencia del husped a la invasin, y metabolismo de la riboflavina. Adems, se ha demostrado que la infeccin disminuye los niveles de tiroxina en el plasma. Por lo tanto ambas infecciones primaria o secundaria con ese organismo interfieren con todas estas lneas de investigacin. Mycoplasma pulmonis Este organismo carece de pared celular y tiene actividad hemoltica asociada a la membrana. Se le considera el patgeno ms importante de la rata y causa el sndrome llamado micoplasmosis respiratoria murina. La prevalencia es alta en aquellas colonias en las que se encuentra presente. La forma de transmisin ms importante es la intrauterina, tambin se disemina por aerosoles. Se establece la infeccin de manera rpida colonizando la nasofaringe y el odo medio. En la mayora de los casos no produce ninguna sintomatologa clnica por lo que algunos investigadores lo consideran un organismo comensal en ciertas circunstancias. La patogenicidad de M. pulmonis depende del husped (cepa de rata o ratn), cepa del microorganismo y medio ambiente y esto incluye co-infeccin con otros patgenos. Las cepas de ratn resistentes a la infeccin con M. pulmonis son C57BR/cdj, C57BL/6NCr, C57BL/10ScNCr and C57BL/6J. Cuadro clnico: la sintomatologa aparece despus de que se establece una infeccin crnica, esta incluye: ruidos de vas respiratorias altas en la rata y castaeo de dientes en el ratn, disnea, prdida de peso, letargia y en ratas se observan manchas de porfirina alrededor de los orificios nasales y de los ojos. Los ratones pueden tener curso asintomtico. M. pulmonis coloniza preferentemente las superficies luminales del epitelio respiratorio de las vas areas prximales, por lo que tambin se denomina enfermedad de estas vas. Histopatologa: los pulmones presentan consolidacin focal y las vas areas contienen exudado sumamente viscoso (Figura 7-3). Microscpicamente, los cambios patolgicos incluyen un amplio espectro
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incluyendo traqueitis, bronquitis supurativa, bronquiectasia, abscesos pulmonares y alveolitis. En ratas M. pulmonis induce hiperplasia del tejido linftico asociado a los bronquios, esto es debido a que este organismo es un mitgeno para los linfocitos de la rata. La severidad de la infeccin esta relacionada con la produccin de citoquinas, interaccin con las fibras sensoriales nerviosas y de la viabilidad de macrfagos alveolares. Los animales imunocomprometidos tambin son susceptibles y padecen pneumona y pueden desarrollar artritis despus de la infeccin. Micoplasmosis genital tambin tiene lugar especialmente en la cepa de rata LEW. Cuando tiene lugar durante la gestacin, la infeccin con M. pulmonis determina que pasa con sta y la diseminacin de la infeccin del aparato genital al respiratorio. Tambin en el ratn la respuesta humoral contribuye pero no garantiza la proteccin de infeccin sistmica mientras que en ratas la respuesta celular es ms importante. Interferencia en la investigacin: la respuesta del sistema inmunitario depende de la edad del husped. M. pulmonis se disemina por todo el organismo interfiriendo con resultados de experimentos de muchas maneras (Cuadro 7-2). La infeccin del ratn con M. pulmonis es usada como modelo en el estudio de las defensas del husped contra micoplasmas en vivo incluyendo M. pneumoniae el cual es una causa muy importante de mortalidad en humanos. La infeccin natural interfiere con proyectos que investigan diversos sistemas y aparatos, principalmente respiratorio, reproductor e inmunitario.
Altera la respuesta:
La respuesta a carcingenos pulmonares La respuesta inmunitaria general Funcionamiento de los cilios, y cintica celular En artritis experimental inducida mediante adyuvante
Cuadro 7-2. Alteraciones observadas en roedores infectados con Mycoplasma pulmonis
Figura 7-3 Aspecto macroscpico de pulmones de rata afectados por Mycoplasma pulmonis. Cortesa de C.F. Criado
Streptococcus pneumoniae Es un diplococo grampositivo que se encuentra en colonias de roedores de forma comn. La transmisin es principalmente mediante aerosoles de humanos infectados. Este organismo es considerado un comensal en la mayora de los casos aunque hay algunas cepas susceptibles a enfermedad. Normalmente el animal portador mantiene colonizados las vas nasales y el odo medio. Cuadro clnico: la sintomatologa clnica no es comn aunque ha habido algunos casos documentados. Cuando est presente no es especifica, incluyen disnea, perdida de peso, encorvamiento del dorso y secreciones nasales con estornudos. La infeccin se inicia en el segmento bronquio pulmonar y se dispersa de forma centrifuga, de los pulmones pasa a la pleura, pericardio, y mediante sepsis se distribuye al resto del
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organismo. El pulmn afectado inicialmente aparece edematoso, pasando a consolidado. Lesiones supurativas o fibrinosas pueden aparecer en cualquier parte del aparato respiratorio y de las estructuras adyacentes, entre las ms comunes se encuentran rinitis supurativa y otitis media. La septicemia permite la aparicin de lesiones supurativas en cualquier rgano, la muerte del husped es la secuela ms comn. Los ratones atmicos son los ms susceptibles a la enfermedad. Interferencia en la investigacin: la respuesta del husped es principalmente humoral con la ayuda considerable del complemento, del sistema fagocitario mononuclear, la protena reactiva C y el TNF-, surfactante pulmonar. Ratas y ratones infectados experimentalmente con S. pneumoniae sirven como modelo de infeccin respiratoria, peritonitis, meningitis, otitis media y efectos del ejercicio fsico durante el curso de una infeccin bacteriana. Infeccin natural en ratas y ratones con S. pneumoniae han mostrado que hay una alteracin del metabolismo heptico, de los niveles de compuestos bioqumicos en el suero, el pH de la sangre y electrolitos, la funcin tiroidea y parmetros respiratorios. Por esto, es de esperar que esta infeccin interfiera con numerosos proyectos de investigacin dependiendo si existe distribucin del organismo mediante sepsis. Pneumocystis carinii Este organismo de clasificacin incierta hasta poco, es un hongo que habita el tracto respiratorio de ratas y ratones de laboratorio. Solamente es patgeno en aquellos animales que estn inmunosuprimidos. La transmisin tiene lugar por la inhalacin de quistes infectivos, no hay infeccin transplacentaria. La susceptibilidad a este organismo depende del husped y Pneumocystis presenta diferencias en su especificidad por el husped. En animales inmunocompetentes no hay sintomatologa clnica administracin de corticosteroides permite determinar infeccin en estos roedores. Cuadro clnico: las ratas y ratones inmunosuprimidos infectados con P. carinii presentan pelo lacio y dbil, dipnea, cianosis y muerte. Los pulmones estn aumentados con coloracin obscura y apariencia gomosa. Histopatologa: los cambios microscpicos incluyen engrosamiento de la pared de los septos alveolares, los espacios alveolares aparecen llenos de material espumoso eosinoflico que consiste en organismos, clulas muertas del husped, protena del suero y surfactante pulmonar (Figura 7-4). La pneumona puede estar exacerbada debido a la presencia de otros patgenos respiratorios. La inmunidad esta relacionada con la edad del husped y es de dos tipos, humoral y celular, siendo los macrfagos y los neutrfilos los tipos celulares de mayor importancia en la destruccin de este microorganismo. Interferencia con la investigacin: P. carinnii altera en los alvolos la capilaridad de la membrana y la absorcin de compuestos administrados por la traquea, tambin eleva los niveles de TNF, IL-1, IL-6, el metabolismo del cido araquidnico y los niveles de protena A asociada al surfactante. Ratas y ratones infectados con P. carinni se usan como modelos de infeccin oportunista con este organismo en humanos. Roedores infectados con P. carinii desarrollan pneumocistosis severa si son inmunocomprometidos por lo que cualquier investigacin usando estos organismos estar severamente afectada.
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Figura 7-4. a. Aspecto microscpico de pulmones de ratn afectado por Pneumocystis carinii. b. Histofotomicrografa de un corte de pulmn. Cortesa de R. Feinstein
Enfermedades bacterianas del aparato digestivo Especies de Helicobacter Son organismos gram negativos, espirales, microaeroflicos, patgenos del aparato gastrointestinal de mamferos Las especies que normalmente infectan rata y ratn son las siguientes: H. hepaticus, H. bilis, H. muridarum, H. trogontum, H. Rodentium y Flexispira rappini. De todos ellos H. hepaticus , patgeno de ratn es el ms prominente. Aunque la prevalencia no se conoce con exactitud se considera que es muy alta. Las ratas, cobayos y hmster no son susceptibles a la infeccin con H. hepaticus. La transmisin tiene lugar de forma oro-fecal o mediante fomites. Cuadro clnico: en ratones inmunocompetentes no hay sintomatologa pero en aquellos inmunosuprimidos el prolapso rectal es comn. H. hepaticus de forma permanente y selectiva coloniza los canalculos biliares y la mucosa del ciego y del colon. Los cambios patolgicos incluyen hepatitis crnica y activa (Figura 7-5) probablemente causada de forma autoinmune, ocasionalmente enterocolitis, y neoplasmas hepato-celulares inducidos por mecanismos no endotxicos. Otros Helicobacter spp.: H. bilis a sido asociado con hepatitis multifocal crnica, y ha sido aislado del hgado, bilis, y del intestino grueso de ratones viejos inbred; H. muridarum ha sido aislado de la mucosa intestinal de ratas y ratones; H. rodentium y F. rappini son aislados del colon y ciego de ratones; H. trogontum ha sido recientemente aislado de la mucosa del colon de las ratas de las cepas Wistar y Holtzman. H. hepaticus esta asociado con carcinomas hepticos y con niveles elevados de alanina aminotransferasa en suero. Interferencia en la investigacin: La infeccin causada por este organismo se usa como modelo de gastritis producidas por H. pylori, ulceras gstricas, y adenocarcinoma gstrico. Infeccin con H. hepaticus y probablemente con otros Helicobacter spp puede confundir los resultados de investigacin en carcinogenicidad e investigacin del sistema gastrointestinal. Citrobacter rodentium Anteriormente conocido como Citrobacter freundii biotio 4280 es el agente causante de la hiperplasia clnica murina transmisible. Es un bacilo gramnegativo, anaerobio facultativo. Se transmite por contacto directo o por contacto con cama o comida contaminada. C. rodentium es normalmente considerado un patgeno oportunista, como ocurre cuando se usan antibiticos, estos permiten el sobrecrecimiento y la aparicin de sintomatologa clnica.
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Cuadro clnico: cuando hay sntomas, son muy poco especficos; incluyen pelo lacio y dbil, perdida de peso, depresin, aturdimiento, las heces blandas se pegan de la regin perianal, y prolapso rectal. Los ratones lactantes son muy susceptibles. En general la susceptibilidad depende de la cepa de ratn siendo C3H/HeJ ms susceptibles que DBA/2J, NIHS (Swiss), o C57Bl/6J. La infeccin no es permanente y los ratones infectados no se convierten en portadores crnicos. Histopatologa: la lesin patolgica ms comn y caracterstica de este organismo es hiperplasia del colon, normalmente el colon descendente es el ms afectado aunque todo el colon y el ciego pueden estarlo en algunas ocasiones. Las criptas se alargan, pueden aparecer abscesos, con inflamacin variable de la mucosa, ulceraciones ocasionales, pueden presentar hiperplasia y cicatrices. La mucosa del intestino delgado es colonizada inicialmente de forma transitoria y se contina en el intestino grueso, esta colonizacin depende de la presencia en esta bacteria del gen cromosmico eae. La inmunidad es principalmente de tipo humoral y la mayora de los anticuerpos estn dirigidos a la protena de la membrana Intimina, y es causa de lesiones que pueden aparecer enmascaradas. No hay mucha documentacin con referencia a la interferencia de este microorganismo con la investigacin. Se han descrito: aceleracin de carcinognesis debida a 1,2-dymethylhydrazina, de forma complementaria hay alteracin de la citoquinesis intestinal. C. rodentium se usa como modelo in vivo de la enfermedad intestinal crnica en humanos. Clostridium piliforme Es la bacteria causa la enfermedad de Tyzzer. Es un bastn filamentoso, Gram negativo que forma esporas. Su prevalencia en colonias de roedores es alta, a ello contribuye el hecho de que este organismo es moderadamente contagioso y de la amplia gama de huspedes susceptibles. La transmisin tiene lugar por la ingestin de endoesporas que se encuentran en la comida o la cama. La mayora de las infecciones son subclnicas. Dependiendo del tipo de husped y del estrs al que los animales estn sometidos puede haber sintomatologa clnica. La enfermedad aparece principalmente en lactantes y los sntomas ms caractersticos son muerte sbita, diarrea liquida, letargia y pelaje sucio. Este organismo coloniza inicialmente el leon y el ciego de donde pasa al hgado a travs del sistema porta y por medio de la sangre invade otros tejidos incluyendo el miocardio. Este grupo de tejidos colonizados en esta secuencia es nico de C. piliforme. En el ratn el intestino afectado esta engrosado, edematoso e hipermico. Aparecen focos necrticos en la parte de intestino, hgado y miocardio. Las lesiones son similares en rata con la excepcin del megaileo que es comn en la rata. La inmunidad contra esta bacteria es principalmente de tipo humoral pero la inmunidad celular es tambin importante. Ratas atmicas son ms susceptibles a la infeccin. Interferencia en la investigacin: produce mortalidad, alteracin de la farmacocintica de ciertos antibiticos adems de alteracin de la actividad de las transaminasas hepticas. La manipulacin de animales con infeccin subclnica puede precipitar la aparicin de sintomatologa. Adems todos aquellos proyectos que estudien el sistema gastrointestinal y cardiopulmonar se vern afectados si las ratas o ratones utilizados estn infectados con C. piliforme. Pseudomonas aeruginosa Es un bacilo gramnegativo, habitante normal de la nasofaringe, orofaringe y del intestino grueso de la mayora de los mamferos. P. aeruginosa se encuentra normalmente en la tierra y desechos orgnicos, y adems forma parte de la flora normal de la piel y crece, a veces, en el agua potable. Mantener a esta bacteria fuera del animalario es muy difcil y costoso pero se puede conseguir. La transmisin tiene lugar por contacto con agua, comida, cama, humanos y otros roedores contaminados. Los animales inmuno-
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competentes no muestran ninguna sintomatologa aunque la infeccin con esta bacteria vara con las cepas del husped por ejemplo los ratones de la cepa BALB/c resisten la infeccin pulmonar mientras que los de la cepa DBA/2 son susceptibles. La invasin de tejidos profundos provoca la aparicin de sintomatologa en ratas y ratones inmunocomprometidos presentando lordosis, apata, respiracin entrecortada, pelo lacio, emaciacin, movimientos en circulo a lo largo de su eje longitudinal. P. eruginosa se distribuye va hematgena y esto puede estar facilitado por las proteasas presentes en esta bacteria. Las lesiones patolgicas consisten principalmente en necrosis multifocal, formacin de abscesos, y lesiones supurativas. La respuesta inmunitaria a la infeccin con P. aeruginosa ha sido estudiada en infecciones experimentales y hay evidencia de que es tanto humoral como celular. Las cepas consanguneas de ratones tienen susceptibilidades diferentes, los ratones susceptibles muestran deficiencia en la produccin de TNF. Adems las cepas de P. aeruginosa varan mucho en virulencia. Los factores que determinan esta virulencia son variados e incluyen los flagelos, pioverdina, piocianina, elastasa, , la produccin de potentes exotoxinas entre las que se incluyen exotoxina A que es un superantgeno. Hay mucha informacin sobre cual es el efecto de la infeccin con P.aeruginosa en ratas y ratones inmunocomprometidos la mayora de ellos son estudios experimentales (Cuadro 7-3). Basndonos en esta informacin es bastante aparente que la infeccin de roedores inmunocomprometidos de forma natural con P. aeruginosa puede afectar varios tipos de proyectos de investigacin.

Muerte despus de irradiacin, tratamiento con ciclofosfamida, infeccin con CVM, estrs por fro. La gravedad de la infeccin aumenta cuando hay trauma de las vas respiratorias. Estimula la proliferacin de las clulas T en los ndulos linfticos del bazo en el ratn desnudo. Inhibe la cicatrizacin. Las proteasas bacterianas inactivan ciertas citoquinas. Alteracin del transporte de fluidos a travs del epitelio pulmonar. Supresin de la respuesta de hipersensibilidad retardada. Aumento de la excitabilidad cardaca y la vulnerabilidad a las agresiones causadas por la hipoxia. Inhibicin de la funcin de los macrfagos. Alteracin de parmetros patologico-clnicos despus de infeccin experimental por incisiones quirrgicas.
Cuadro 7-3. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infeccin de Pseudomonas aeruginosa en roedores
Salmonella enterica Bacilo gramnegativo que coloniza el tracto digestivo de numerosos huspedes. Es importante mencionar que Salmonella es una bacteria zoontica, que causa sintomatologa en roedores inmunocomprometidos. El serotipo que de forma ms comn produce enfermedad en ratas y ratones es S. thiphymurium, la prevalencia de este organismo en animales portadores asintomtico no se conoce pero se asume que es muy baja. La transmisin tiene lugar a travs de la comida, agua, cama y personal contaminados. Hay muy poca literatura sobre epidemias de esta enfermedad, probablemente por que esta bacteria sigue curso subclnico en la mayora de las infecciones. Cuando hay sintomatologa lo primero que se ve afectado es la reproduccin y el resto del cuadro clnico es inespecfico.
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La diarrea no es comn y tanto la sintomatologa como la severidad de la infeccin dependen de la edad y del genotipo del husped, la composicin de la flora gastrointestinal, estado nutricional, estado inmune, la presencia de infecciones concurrentes, el tipo de serotipo de la Salmonella, y condiciones de estrs. La sensibilidad a la enfermedad esta determinada por tres locus por ello ciertas cepas congnicas son ms o menos susceptibles: DBA/I, BALB/c, C57BL/6, C3H/HeJ son susceptibles mientras que CeH/HeN, A/J y DBA/2 son relativamente resistentes. Cuadro clnico: la infeccin con Salmonella se inicia con la ingestin, seguida de la invasin de la mucosa de las placas de Peyer, en el leo distal. De aqu pasa a los ndulos linfticos mesentricos donde obtiene acceso al sistema vascular, desde aqu se distribuye por todo el cuerpo. La localizacin de las lesiones depende de la distribucin del microorganismo. Los rganos afectados de forma comn son intestino delgado terminal, el intestino grueso, ndulos linfticos, hgado y bazo. Las lesiones mas caractersticas son hiperemia, necrosis focal, inflamacin poligranulomatosa, sepsis, hiperplasia de las criptas intestinales. Los roedores inmunocomprometidos son los que estn mas gravemente afectados. Ambos tipos de inmunidad celular y humoral contribuyen en controlar la infeccin mientras que interfern gamma contribuye al shock sptico. Interferencias en la investigacin: estn muy bien documentadas y algunas de ellas han sido demostradas de forma experimental en roedores (Cuadro 7-4). Adems de estos efectos el LPS de Salmonella produce efectos que han sido estudiados tanto experimentalmente como in vitro en la rata y el ratn. Estos efectos incluyen, actividad mitognica, dao al pulmn y disminucin en el nmero de leucocitos circulantes, estimulacin en la produccin de citoquinas, acmulo de neutrfilos en el pulmn, probablemente debido a la quimiotaxis de la protena inflamatoria tipo 2 producida por macrfagos. Por otra parte ratas y ratones infectados con Salmonella entrica se usan como modelos enteritis, fiebre tifoidea, y otras infecciones que producen sepsis.

Resistencia o aumento de la mortalidad con patgenos espontneos. Suprime el crecimiento de tumores transplantables. Reduccin de glucemia y enzimas hepticas en sangre. Niveles de enzimas intestinales tambin reducidos. Aumento de la proliferacin de clulas de las criptas (aumenta de tamao del intestino delgado). Vasodilatacin de lagunas arteriolas del msculo esqueltico de la rata. Disminucin en la incorporacin de aminocidos en protenas. Aumento en la expresin de Mac-1 (CD11b/CD18) y de glicoproteina de adhesin en neutrfilos. Incremento en los niveles del pptido relacionado con el gen de la calcitonina y niveles del neuropptido Y en el plasma. Alteracin de los niveles de en el hgado de 1,2 diacilglicerol y de cermidas. Cambios en la funcin de la protena reguladora del nucletido de guanidina Activacin de la trascripcin del factor kappa B y expresin del mARN para E-selectin en hepatocitos, clulas de Kupffer, y clulas endoteliales. Mortalidad en neonatos. Estimulacin de las clulas esplnicas adherentes del tromboxano B2, Il-6 y de la produccin de nitritos. Alteracin del desarrollo del eje hipotalmico-pituitario adrenal con efectos a largo plazo en las respuestas al estrs. Alteracin del metabolismo de la glucosa.
Cuadro 7-4. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infeccin de Salmonella enteritidis en roedores
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Enfermedades bacterianas de la dermis Staphylococcus aureus Se trata de un coco grampositivo, beta-hemoltico, coagulasa positivo. Se encuentra de forma comn formando parte de la flora normal de las vas areas superiores, de la piel, y del intestino grueso tanto de humanos como de animales incluyendo la rata y el ratn. Es un patgeno oportunista. Se transmite de forma directa y la enfermedad tiene lugar cuando hay cambios fisiolgicos en el husped debidos a immunosupresin, estrs, etc. Cuadro clnico: es amplia y variada desde lesiones en la cola, dermatitis ulcerativa, abscesos de la gandula prepucial, automutilacin del pene en ratones. Las lesiones son ms severas en aquellos animales inmunocomprometidos. La lesin tpica de S. aureus es una inflamacin supurativa con formacin de abscesos en cualquier rgano. La piel es el rea afectada de forma mas frecuente incluyendo en ocasiones tejidos subcutneos, pero tambin se encuentra frecuentemente lesiones en las vas areas superiores, pulmones y la conjuntiva. La inmunidad est mediada por la va del complemento que la destruye los neutrfilos, la inmunidad celular tambin es importante y en ocasiones puede participar en la patognesis de alguna de las lesiones. Interferencias en la investigacin: este agente produce diferentes enzimas y productos biolgicos, destacan la hemolisina, nucleasas, coagulasas, lipasas, hyalulonidasa, exotoxinas, fibronectina, protena A, enterotoxinas. Varios de estos productos son degradaos por clulas fagocitarias en otros productos activos y son causantes de muchas de las lesiones y efectos no deseados, como el aumento de la permeabilidad microvascular en el pulmn, alteracin de la contractilidad, epidermolisis, aumento de algunas citoquinas (TNF-IL-1). Derivados de esto se puede deducir las complicaciones causadas en los resultados de la investigacin. En el Cuadro 7-5 se resumen los tratamientos y dosificaciones de antibiticos para roedores y conejos. Especie
Cobayo Conejo Ratn Rata Hmster
Penicilina
Contraindicado 11 000- 22 000 UI/kg IM/24 h _ 11 000- 22 000 UI/kg IM/24 h Contraindicada
Sulfametazina
(en agua de bebida) dem 900-1350 mg/L 450/1200 mg/L 665-950 mg/L _
Estreptomicina
dem 10 m/kg IM/4 h Contraindicada _ _
Tetraciclina
112-350 g/L 600-900 mg/L _
450-640 mg/L 450-540 mg/L
Cuadro 7-5 Dosificacin de los antibiticos ms importantes utilizados en roedores, con carcter fundamentalmente preventivo
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Enfermedades virales que afectan a los diferentes sistemas y aparatos Enfermedades virales que afectan al aparato respiratorio Virus de la neumona del ratn (PVM) Se trata de un virus RNA, perteneciente a la Familia Paramyxoviridae. Afecta a ratones, ratas, hmster y cobayo. Se transmite por aerosoles o exposicin directa de la mucosa del tracto respiratorio (Infeccin experimental). Organotropismo: especfico del tracto respiratorio Cuadro clnico: en animales inmunocompetentes, la infeccin es asintomtica, puede cursar con rinitis. Causa una alta mortalidad en animales inmunocomprometidos. Histopatologa: neumona intersticial, no supurativa, rinitis necrotizante y bronquiolitis. Interferencia en la investigacin: incrementa la susceptibilidad a la diabetes producida experimentalmente con estreptomicina es causante de hidrocefalia en ratas y ratones recin nacidos. Altera los estudios inmunolgicos y a largo plazo que se realizan con animales infectados. Causa alteraciones en las curvas de crecimiento de ratas F344/NCr Virus Sendai Es uno de los agentes patgenos ms importantes de rata y ratn, el hmster cursa como una infeccin silente. Virus RNA, perteneciente a la Familia Paramyxoviridae. Existen varias cepas. Organotropismo: especifico del pulmn. Cuadro clnico: en general es inaparente, slo se aprecia retraso en el crecimiento de las cras. La mortalidad aumenta en presencia de otros agentes infecciosos como M.pulmonis. La severidad de la clnica varia segn la forma de presentacin y dependiendo de que la infeccin sea aguda crnica. Histopatologa: hipertrofia y necrosis del epitelio respiratorio, que dar lugar a la formacin de escaras parenquimatosas caractersticas en los procesos de reparacin. Interferencia en la investigacin: genera un incremento significativo del nmero de clulas mitticas en el epitelio bronquial y parnquima pulmonar. Causa una hipoxia moderada en ratas jvenes que se traduce en un edema pulmonar. La repercusin sobre la investigacin deriva fundamentalmente de las alteraciones que causa sobre el sistema inmune (ver Cuadro 7.6).
Es un potente inmunosupresor de la inmunidad humoral. Las clulas citocidas, mediadoras de citotoxicidad, estn aumentadas. Induce la formacin y el incremento del factor de necrosis tumoral (TNF) adems de otras
citoquinas. Aumenta los CD4 y CD8 adems de las clulas T en el tracto respiratorio. Altera el crecimiento de los tumores transplantables. Puede producir variantes de clulas tumorales. Altera la respuesta pulmonar a determinados agentes carcinognicos qumicos.
Cuadro 7-6. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente por la infeccin causada por Virus Sendai
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Enfermedades virales que afectan al sistema digestivo Diarrea epidmica del ratn (EDIM) Se trata de un virus RNA, perteneciente a la Familia Reoviridae. Hay descritas varias cepas, la que afecta al ratn pertenece al grupo A y la que afecta a la rata al grupo B. Son ms sensibles los animales jvenes, de 2 semanas de edad, as como los animales inmunodeprimidos. Se transmite va oral, area (a travs del polvo de los lechos) y por contacto directo con animales infectados. El virus se elimina con las heces a los 10 das despus de la infeccin. Organotropismo: tejido intestinal. Cuadro clnico: diarrea amarillo griscea, distensin abdominal y letargo. Hay un importante retraso en el crecimiento de las cras. Histopatologa: como lesin caracterstica los enterocitos vacuolados aparecen con los ncleos picnticos. Interferencia en la investigacin: en general, las constantes fisiolgicas estn alteradas en los animales afectados, adems estos animales son ms susceptibles a otras infecciones colaterales, (E.coli) Se alteran los resultados de los estudios nutricionales de dietas. La infeccin con este virus se ha utilizado como modelo experimental para el estudio de la diarrea humana causada por un virus de la misma Familia y que es responsable de una alta mortalidad infantil. Reovirus Tipo 3 Se trata de un virus RNA perteneciente a la Familia Reoviridae. Es el ms patgeno de los virus que afectan a los roedores de laboratorio. Se transmite por contacto directo. Cuadro clnico: cursa con diarrea, alopecia abdominal, ictericia. Histopatologa: se caracteriza por necrosis heptica y rin amarillo. La respuesta inmunitaria a este virus es humoral y tambin mediada por linfocitos T. Interferencia en la investigacin: induce apoptosis y aumenta los niveles de TNF, provocando el rechazo de los tumores de clulas de origen murino. Ratones y ratas infectados con Reovirus Tipo 3, han sido utilizados como modelos experimentales para el estudio de la hepatitis crnica humana, pancreatitis y linfomas. Virus de la hepatitis del ratn (MHV) Es un virus RNA perteneciente a la familia Coronaviridae. Se han descrito 25 cepas y dos biotipos, segn su tropismo. Afecta a ratones y en menor medida a las ratas. Es extremadamente contagioso y se transmite por aerosoles, contacto directo, fmites, a travs de tumores transplantables y va transplacentaria. Organotropismo: posee un biotipo politrpico y otro enterotrpico. Cuadro clnico: cursa como una epizootia para establecerse enzotico en la colonia. La gravedad de los sntomas depende del hospedador, de las instalaciones y de otros factores patgenos. En general hay un descenso de peso en las cras, diarrea, parlisis de los cuartos traseros y muerte. Existen dos formas clnicas: Aguda: aparece en las colonias vrgenes, cursa como una epizootia y se va sustituyendo por el patrn enzootico. Subclnica: permanecen endmicos en la colonia, los adultos son asintomticos as como las cras mientras duren los anticuerpos de la madre.
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Histopatologa: depende de la cepa del virus: Cepas politrpicas causan necrosis aguda en hgado, con formacin de sincitios en hgado como en el bazo y tejido linfoide. Encefalitis necrtica. Cepas enterotrpicas, dan lugar a la aparicin de sincitios y necrosis en el intestino terminal. Interferencia en la investigacin: existe abundante documentacin relativa a los efectos del MHV sobre la investigacin, fundamentalmente sobre los parmetros fisiolgicos y la respuesta inmunolgica. Contamina los tumores transplantables. Induce patrones anormales de invasin de tumores. Altera la respuesta a carcingenos qumicos. Provoca rechazo de xenoingertos de tumores. En animales inmunocomprometidos: produce necrosis en hgado, bazo, pulmn, intestino, cerebro, ndulos linfticos y mdula sea. Altera la actividad enzimtica y la concentracin de bilirrubina, aumenta la capacidad fagocitaria de los macrfagos e impide la regeneracin heptica. En animales inmunocompetentes: hay periodos transitorios de inmunoestimulacin o de inmunosupresin, por involucin del timo. Produce cambios en sangre perifrica: anemia microctica, leucopenia y trombocitopenia. Aumenta la actividad fagocitaria de los macrfagos y se reducen los niveles de citoquinas, interleukinas e interfern en clulas del bazo. En ratones transgnicos y knock-out, altera la patognesis. Virus de la sialoacroadenitis Es un virus RNA, perteneciente a la Familia Coronaviridae. Afecta a ratas y ratones recin nacidos o inmunocomprometidos. Se transmite por contacto directo con fomites. Organotropismo: especfico hacia los tejidos tubuloalveolares de las glndulas. Cuadro clnico: puede cursar como una enzootia, en este caso los animales slo presentan una ligera conjuntivitis. Si cursa como epizootia, los sntomas son ms graves: congestin nasal y ocular, exolftalmus que da lugar a la aparicin de ulceras corneales. Histopatologa: necrosis coagulativa de los conductos de las glndulas salivares y lacrimales que ser la causa, secundariamente de las lesiones oculares. Interferencias en la investigacin: en todos los estudios en los que estn involucrados ojos, glndulas salivares, lacrimales y sistemas respiratorio. Altera la funcin olfatoria y las curvas de crecimiento de la colonia. Reduce la produccin de interluquina por los macrfagos alveolares y reduce el Factor de Crecimiento Epidrmico en la glndula salivar submaxilar Citomegalovirus Se trata de un virus DNA, perteneciente a la Familia Herpesviridae, Subfamilia Betaherperviridae. Afecta a ratones y ratas salvajes. La prevalencia en las colonias de laboratorio es menor. Se transmite directamente por contacto con la saliva.
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Organotropismo: se ubica en las glndulas submandibulares y puede permanecer latente en diversos organismos, riones, pncreas, testculos, pulmones y sistema nervioso central. Se transmite directamente por contacto con la saliva. Cuadro clnico: curso subclnico en animales inmunocompetentes. Hay cepas de ratn ms sensibles (Balb/c y A/J). Interferencia en la investigacin: a travs de una infeccin experimental est descrito que: su presencia altera la funcin de los macrfagos y la respuesta a los eritrocitos de carnero. Aumenta la formacin de colgeno que induce la aparicin de artritis. Debido a la inflamacin hay cambios en la pared vascular. Se han utilizado ratones y ratas infectadas con CMV como modelo experimental de infeccin humana por CMV. Virus que afectan a mltiples sistemas y aparatos Minute Virus Es un virus DNA, perteneciente a la familia Parvoviridae. El hospedar comn es el ratn, la rata y el hmster son susceptibles a la infeccin experimental. Es letal para determinadas cepas de ratones, como Balb/c y DBA/2, asintomtico para C5BL/6. Se transmite directamente por exposicin a heces y orina a travs de fomites. Organotropismo: tejidos en desarrollo. Cuadro clnico: La susceptibilidad, tropismo y signos clnicos dependen de las caractersticas del virus. No hay una clnica muy evidente, solamente en animales infectados experimentalmente se encuentran que los fetos afectados mueren y son reabsorbidos. Interferencias en la investigacin: derivan de su organotropismo, el virus se replica en tejidos mitticos activos, como embriones. Se encuentra contaminando tejidos de tumores transplantables y en ratones con virus de leucemia. Uno de los problemas ms importantes relativos a esta interferencia, derivan de la afectacin del sistema inmune, desde la lisis de linfocitos T a la alteracin de la actividad de linfocitos T y B, suprime el factor de crecimiento del tumor de lquido asctico. Kilham rat virus Es un virus ADN, perteneciente a la Familia Parvoviridae, que afecta a ratas de laboratorio. Se transmite por contacto directo a travs de orina, heces, secreciones nasales, leche y fmites, adems de va transplacentaria. Persiste largo tiempo en la rata, dependiendo de la edad en la que se produce la infeccin. Organotropismo: se replica en tejidos en desarrollo, hgado y cerebelo. Cuadro clnico: su infeccin es asintomtica, solamente se describen sntomas en ratas gestantes en las que hay reabsorcin de los fetos, las cras presentan ataxia e ictericia. En animales jvenes puede aparecer distensin abdominal, deshidratacin y muerte. Histopatologa: Las lesiones son multiorgnicas, afecta a sistema nervioso central, aparto gastrointestinal y respiratorio. Aparecen necrosis focales en el hgado. Interferencia en la investigacin: Las ms destacadas se relacionan en el Cuadro 7-7.
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Altera la respuesta de los linfocitos y contamina los tumores transplantables. Induce o convierte la diabetes tipo I aguda en diabetes resistentes a la insulina. Altera la susceptibilidad a la diabetes autoinmune en cepas de ratas que normalmente son resistentes a
este sndrome. Incrementa la expresin de linfocinas liberadas por macrfagos (IL-2, TNF, IL-1).
Afecta todo trabajo de investigacin que implique trabajar durante el desarrollo fetal. Cuadro 7-7. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infeccin causada por Kilhan rat virus
Toolans H1-virus (H-1) Es un virus DNA perteneciente a la Familia Parvoviridae. La infeccin natural afecta a ratas y a hmster en infecciones experimentales. Se han encontrado anticuerpos en el hombre. La va de transmisin es directa, a travs de la exposicin a orina infectada y secreciones nasales. Organotropismo: se replica en organismos en desarrollo, sistema nervioso central y sistema msculo esqueltico, causando malformaciones, este hecho le ha convertido en un modelo experimental en el estudio de malformaciones. Histopatologa: no hay lesiones en el transcurso de la infeccin natural, si la infeccin es experimental causa malformaciones en los sistemas anteriormente citados. Interferencia en la investigacin: contamina las lneas celulares humanas e inhibe la formacin de tumores transplantables de origen humano. Causa muerte fetal y malformaciones congnitas. Provoca una reduccin del nmero de tumores producidos por adenovirus y reduce la incidencia de tumores espontneos en hmster infectados experimentalmente al nacer. Retrasa el crecimiento de ratones Nu/nu. Lactate dehydrogenase elevating virus (LDV) Se trata de un virus RNA perteneciente a la Familia Togaviridae. Afecta a ratones e infecta cultivos de clulas murinas. Se transmite a travs de la inoculacin de clulas tumorales contaminadas, por contacto directo, heridas por mordedura, va transplacentaria mamaria. Organotropismo: es politrpico, se asla de hgado, bazo, ndulos linfticos, se concentra en rganos con altas poblaciones de macrfagos, testculo. Hay cepas que son especficas del sistema nervioso central. Cuadro clnico: no suele haber signos clnicos, solamente signos neurolgicos en cepas inmunocomprometidas (AKR), en los que causa parlisis y muerte. El diagnstico de realiza mediante PCR o bien deteccin de anticuerpos en suero de ratn. Interferencias en la investigacin: vase Cuadro 7-8. Contamina tumores transplantables, aumentando suprimiendo su crecimiento. Merma la resistencia a otras infecciones bacterianas. Altera funciones derivadas de la accin de los macrfagos; causa >> transitorios de citoquinas. Incrementa los niveles de enzimas y -globulinas en suero. Suprime la accin de la streptozocina en CD-1. Induce la produccin del interfern. Suprime la inmunorespuesta mediada por clulas, suprimiendo la produccin de citoquinas IL-4 y IL-1. Induce cambios en la hematopoyesis despus del transplante de tumores. Incrementa los niveles de LDH y otros enzimas en suero.
Cuadro 7-8. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infeccin por el virus que eleva la lactato deshidrogenasa
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Virus que afectan al sistema nervioso central (SNC) Enfermedad de Theilers. (encefalomielitis murina) Causada por un virus RNA perteneciente a la Familia Picornaviridae. Afecta a ratones. Se transmite va fecal-oral. Organotropismo: sistema nervioso central. Cuadro clnico: en general no hay signos muy evidentes, ocasionalmente puede causar una parlisis flcida. Histopatologa: Necrosis en la mdula, meningitis no supurativa, desmielinizacin mediada por linfocitos T CD1, TMF- y IL-1. Este virus ha servido como modelo experimental para el estudio de la poliomielitis, esclerosis mltiple y enfermedades desmielinizantes. Linfocitis coriomeningtica (LCMV) Causada por un virus RNA perteneciente a la Familia Arenaviridae. Este agente es zoontico, causando una patologa grave en el hombre. Afecta a ratones y hmster, contamina lneas celulares de tumores transplantables. Se transmite por exposicin de mucosas, lesiones de la piel a orina y saliva infectada, va digestiva, tambin va transplacentaria. Organotropismo: es politrpico, con preferencia afecta a rin, glndulas salivares y clulas linfohematopoyticas. Cuadro clnico: la presentacin de signos clnicos depende de varios factores, como cepa del animal, edad, dosis de inoculo, va de contagio y cepa del virus. Se presenta con dos patrones distintos: Tolerancia a la infeccin, pero persistiendo de forma latente. Forma aguda, en fase perinatal, cursa como enfermedad tarda. Histopatologa: a partir de siete meses, si la infeccin es natural, hay glomerulonefritis mediada por inmunocomplejos. En infecciones experimentales, aparecen lesiones inflamatorias en varios rganos principalmente en hgado. Interferencias en la investigacin: el LCMV altera la inmunorespuesta celular y causa inmunodepresin con un descenso de la capacidad de proliferacin de linfocitos T. Induce diferente expresin de alfa/betainterfern e induce aplasia transitoria de mdula sea. Otro hecho demostrado es que incrementa la susceptibilidad de lneas celulares de tumores transplantables. Los animales diagnosticados con LCMV, deben ser excluidos de la investigacin, por ser altamente contagioso y producir una grave zoonosis en el hombre. Adenovirus del ratn Son virus DNA, pertenecientes a la familia Adenoviridae. Hay descritas dos cepas: Tipo 1 (MAd-1, cepa FL) y Tipo 2 (Mad-21 cepa K87). El hospedador principal es el ratn, no es una infeccin muy frecuente. Se transmite por contacto de entre animales. Organotropismo: es politrpico y muy persistente. En infecciones experimentales tiene un fuerte tropismo por el sistema nervioso central, causando la muerte, esta susceptibilidad vara con la cepa. Cuadro clnico: el tipo 1 se presenta con un patrn sistmico y slo en infecciones experimentales, temblores, ataxia y parlisis. Estn afectados la mdula espinal, pncreas, corazn, riones y glndulas adrenales, en los que aparecen focos necrticos y cuerpos de inclusin intranucleares. El Tipo 2, se elimina por las heces durante tres semanas en animales inmunocompetentes y durante 6 meses en animales inmuno-
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comprometidos. Slo afecta al intestino, los signos clnicos no son muy evidentes, hay cuerpos de inclusin intranucleares en criptas y clulas de vellosidades intestinales. La inmunidad que desarrollan ambos tipos en de base humoral y no presenta inmunidad cruzada entre ellos. Interferencia en la investigacin: hay pocos casos descritos en la literatura. Alteran interfieren estudios en los que est involucrado el sistema nervioso central. Aumenta la sensibilidad a algunos agentes infecciosos, como E. Coli. Virus que afectan a tegumentos externos Ectromelia Pox. Viruela del ratn Se trata de un virus DNA perteneciente a la Familia Poxviridae. El hospedador natural es el ratn, aunque las ratas pueden infectarse experimentalmente. Es una infeccin poco frecuente, con alta incidencia en Europa y menor en EEUU. Se transmite por contacto directo con fomites, a travs de heridas en la piel. La susceptibilidad a este virus vara segn la cepa de ratn, C57BL/6 y /10 son bastante resistentes, C3H, Balb/c y DBA/2, son muy sensibles. Organotropismo: politrpico, lo que da lugar a la aparicin de lesiones en mltiples rganos. Cuadro clnico: las lesiones ms graves aparecen en la piel: edema, necrosis y lceras. Hay importante hepatomegalia y esplenomegalia, con focos de necrosis.Las partes dixtales del animal, patas y cola, sufren amputaciones en los estados terminales. A causa de estas graves lesiones, estos animales deben ser desechados para la investigacin, y ser sacrificados una vez que se diagnostica la enfermedad ya que les causa gran sufrimiento. Virus de tumor mamario del ratn (MMTV) Es un virus RNA perteneciente a la familia Retroviridae. Se conocen cuatro variantes identificadas en el ratn de laboratorio: MMTV-S (cepa estndar, se transmite a travs de la leche), MMTV-L (con bajo poder oncognico), MMTV-P (gestacional) y el MMTV-O (no se considera importante). Puede transmitirse a travs de la leche, de otros grmenes a travs de ambos. Organotropismo: vara segn la cepa de ratn y puede expresarse en tejido mamario y tejidos linfoides, bazo y testculo. Hay una cepa especfica del SNC. Cuadro clnico: Se limita al tejido mamario, generando adenocarcinomas, que aparecen varios meses despus de la infeccin. Interferencias en la investigacin: es un modelo experimental que se ha utilizado para estudios de carcinognesis de origen viral. Est comprometida la inmunidad de base humoral. Interfiere en estudios de carcinogneis, alterando los estudios en un corto espacio de tiempo. PARSITOS QUE AFECTAN A LOS DIFERENTES SISTEMAS Uno de los resultados ms espectaculares conseguidos desde que se han introducido mejoras en las instalaciones de produccin y experimentacin animal, ha sido el descenso en la incidencia de parsitos, sobre todo aquellos que son transmitidos por vectores. Pero an as, hay muchas especies que siguen causando problemas y que es conveniente conocer para establecer Protocolos Normalizados de Trabajo (PNTs) tendentes a evitar endemias. Dividimos los parsitos que afectan a los roedores de laboratorio en dos grupos, segn los sistemas que parasitan y segn su taxonoma: Parsitos parenterales: parasitan clulas hemticas, msculos, vsceras no digestivas. Parsitos digestivos: parasitan rganos del aparato digestivo.
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Parsitos parenterales Flagelados Utilizan un artrpodo como vector, Nosophylus fusciatus (Pulga), para completar su ciclo, se multiplica en el aparato digestivo de la pulga, los roedores se contagian por ingestin del insecto o de sus heces (Cuadro 7-9). Estos parsitos prcticamente estn erradicados. Su control pasa por una buena desinsectacin y mejora de instalaciones que eviten la intrusin de roedores salvajes.
Especie Hospedador Manifestaciones clnicas Organotropismo Leve Sangre Trypanosoma musculi Ratn Prdida de peso Hemorragias intestinales ocasionales Rata Leve Sangre Trypanosoma lewisi Rata salvaje Sangre Trypanosoma cruci
Cuadro 7-9. Caractersticas de los flagelados parenterales
Esporozoos Toxoplasma gondii Es un coccidio que se mantiene endmico en la naturaleza y cuyo reservorio es el gato, los roedores salvajes son hospedadores intermediarios. Es transmisible al hombre (zoontico) por ingestin de ooquistes contenidos en el agua de bebida y comida. Organotropismo: Sistema Nervioso Central (SNC) y msculos, puede parasitar otros rganos como ojos, corazn, mucosa intestinal, hgado. Cuadro clnico: los animales jvenes y gestantes, estn ms afectados. Inaparente, en ocasiones puede cursar con sntomas neurolgicos. Histopatologa: lesiones necrticas y quistes en los rganos afectados. Interferencia en la investigacin: hay bastante documentacin sobre la interferencia que esta infeccin causa en el sistema inmune. Eleva los niveles de citoquinas, IL-3, Il-6Il-10 y TNF- y est implicado en la patognesis de la infeccin. Invalida investigaciones en las que se realiza histopatologa del SNC, debido a los granulomas que forma, as como en otros rganos. Altera los resultados en infecciones experimentales con otros agentes infecciosos, como citomegalovirus. Encephalitozoon cuniculi El reservorio de este parsito, es el conejo y accidentalmente puede transmitirse a roedores de laboratorio. Se transmite directamente por ingestin de esporas, procedentes del conejo, que contaminan el agua y la comida o por canibalismo entre roedores. Organotropismo: las esporas, pasan al intestino y diseminados va porta, a diversos rganos donde dan lugar a la formacin de granulomas (Figura 7-7).
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Clnica: derivada de los granulomas neurolgicos, ascitis.
que forman en lo diferentes rganos, nefritis, sntomas
Interferencias en la investigacin: todos los animales inmunodeprimidos afectados presentan una alta mortalidad, por lo que es un parsito del que deben estar exentos todos los animales que se sometan a algn tipo de inmunodepresin. Igualmente condiciona estudios en neurociencia en la que se realicen estudios histolgicos, y en oncologa, reduce el crecimiento de tumores transplantables en ratones infectados. Nematodos Capilaria heptica Es un parsito que afecta ms a roedores salvajes y del que hay muy poca documentacin sobre su incidencia en animales de laboratorio. Los adultos depositan los huevos en los conductos biliares y distorsionan la morfologa heptica y dando lugar a la formacin de granulomas. Trichosomoides crasicauda Su incidencia en relativamente frecuente en rata de laboratorio y condiciona todos los trabajos de investigacin en los que este involucrado el aparato genito-urinario, siendo necesario el empleo de animales exentos de este parsito. . Su ciclo dura de 8 a 9 semanas. Se transmite por la ingestin de huevos embrionados que una vez incubados en el estmago atraviesan su pared y va sangunea migran a: Pulmn y rin, donde dan lugar a la formacin de granulomas. Vejiga de la orina, se clava en la pared y forma clculos y tumores.
Parsitos del aparato digestivo Orden Trichomonadida (flagelados) Giardia muris Es un Protozoo flagelado cuya incidencia en roedores de laboratorio es alta, hay cepas ms susceptibles, como Balb/c y C3H entre otras. Ciclo: dura entre 4 y 14 das. Se transmite por ingestin de quistes. Se multiplica por divisin binaria y los quistes son expulsados al exterior, los adultos viven en el lumen del intestino delgado. Organotropismo: se adhieren en la base de las vellosidades intestinales movindose sobre la mucosa. Clnica: en general es inaparente y en caso de infeccin generalizada, los sntomas son inespecficos, prdida de peso, pelo lacio y aturdimiento. En ratones inmunodeprimidos hay diarreas y la mortalidad es muy alta. Las interferencias en la investigacin ms significativas se indican en el Cuadro 7-10. Altera el nivel de disacaridasa en el intestino. Reduce la respuesta a los eritrocitos de carnero. Incrementa la morbilidad de infecciones inaparentes por otros agentes infecciosos. Todos los estudios en los que intervenga el sistema gastrointestinal.
Cuadro 7-10. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infestacin de Giardia muris en roedores
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Spironucleus muris (Hexamita muris) Por su incidencia es el segundo flagelado en importancia que parasita el intestino delgado de roedores de laboratorio, adems de estar considerado como el ms patgeno. Ciclo: se transmite por la ingestin de agua y comida contaminada, los quistes pasan al intestino y los trofozoitos colonizan las criptas de Lieberknh en el intestino delgado. Cuadro clnico: asintomtico en animales inmunocomprometidos, pero en animales jvenes e inmunodeprimidos, hay prdida de peso, lordosis, deshidratacin, distensin abdominal, diarrea y muerte. En ratones irradiados se produce y establece una enteritis crnica. Histopatologa: hiperplasia de las criptas. Interferencias en la investigacin: hay bastante documentacin sobre este aspecto, que se resume en el Cuadro 7.11. Altera la actividad de los macrfagos. Altera la respuesta intrainmunitaria. Convierte infecciones inaparentes en activas, como las conocidas del virus Sendai. Acorta la vida de ratones Un/nu. Aumenta la mortalidad asociada al tratamiento con cadmio. Altera la respuesta a la toxina tetnica.
Cuadro 7.11. Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente por la infeccin de Spironucleus muris en roedores
Trichomona muris Tambin es frecuente en roedores de laboratorio, sobre todo en ratn. Ciclo: se transmite va digestiva por la ingestin de quistes que contaminan agua y comida, y que han sido eliminados por otros animales infectados. Organotropismo: se ubica en el ciego. Cuadro clnico: leve. Orden Amoebidae Entamoeba muris Tiene una relativa incidencia en roedores de laboratorio convencionales, y relativamente alta en roedores salvajes. Ciclo: se transmite va digestiva y en el intestino delgado se reproduce. Es muy resistente a desinfectantes ordinarios y soporta un rango de temperaturas grande. Organotropismo: se ubica fundamentalmente en el ciego. Cuadro clnico: inaparente, se considera muy patgeno en ratones Nu/un. Control de Protozoos intestinales: estos parsitos son de gran difusin, han sido encontrados incluso en instalaciones SPF. Para su erradicacin se aconseja la derivacin cesrea.El tratamiento farmacolgico se realiza con dimetridazol 0.05% - 0.1%, durante 14 das en el agua de bebida.
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Nematodos Pertenecientes a la Familia oxyuridae, son un grupo de parsitos con una alta incidencia en los animalarios, afectan a todos los roedores y en la prevalencia intervienen factores como edad, sexo y estatus inmunitario. Es una infeccin enzotica, los huevos contaminan los lechos, pienso y manos del cuidador, sin olvidar que estos estn flotando en el ambiente, lo que hace muy difcil su eliminacin. Ciclo: Es similar en las especies que se relacionan en el Cuadro 7-12. La va de contagio es la digestiva ya sea por: Ingestin de huevos de regin perianal (ciclo directo). Ingestin de huevos contenidos en fmites (ciclo indirecto). Retroinfeccin: los huevos eclosionan y las larvas migran a travs del ano hacia el intestino. Los huevos pasan al intestino delgado eclosionan y salen las larvas migran al ciego donde evolucionan a adultos, se fecundan las hembras migran al exterior para depositar los huevos en la regin perianal o en el lumen del colon (A.tetraptera). La duracin del ciclo varia con la especie, es importante conocer este dato a la hora de instaurar un tratamiento, para ello estas parasitosis deben ser correctamente diagnosticadas por un experto, los adultos y los huevos tienen diferencias morfolgicas, que permite hacer un diagnstico diferencial. Especie Hospedador Syphacia obvelata Ratn Rata Syphacia muris Ratn Aspicularis tetraptera *Despus de la puesta de huevos Va de infeccin Digestiva Digestiva Retroinfeccin Digestiva Duracin ciclo* Organotropismo 11 16 das Lumen del ciego 8 15 das Lumen del ciego y colon 6 7 das 23 25 das Criptas de Lieberkn del colon
Cuadro 7-12. Especies de nematodos que parasitan los roedores de laboratorio y sus caractersticas
Cuadro clnico: similar en estas tres especies, inaparente en la mayora de los casos o con sntomas inespecficos, perdida de peso, retraso en el crecimiento de las cras, pelo erizado y spero, diarreas ocasionales. En casos en que la infestacin es muy alta, cursa con estreimiento, impactos fecales, prolapso rectal e incluso se puede presentarse una enteritis mucoide. Interferencias en la investigacin: provoca diferentes alteraciones, por lo que deber tenerse en cuenta a la hora de instaurar un tratamiento si interesa erradicar la colonia para realizar determinados trabajos (ver Cuadro 7-13).
Afecta a todos los estudios sobre nutricin. Induce la proliferacin de linfocitos T y B en bazo y ganglios linfticos. Los animales parasitados no se pueden utilizar para establecer curvas de crecimiento. Los animales infectados no pueden ser utilizados en estudios de comportamiento. Reduce el efecto adyuvante que provoca artritis experimental. Reduce el transporte de electrolitos en intestino.
Cuadro 7.13.- Efectos sobre diferentes procesos demostrados experimentalmente para la infeccin de Nematodos en roedores
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Control: como anteriormente se ha expuesto, es difcil de erradicar debido a la amplia diseminacin de los huevos por las instalaciones. Los tratamientos aconsejados debern tener en cuenta la duracin del ciclo, manteniendo la administracin de frmacos durante el tiempo que dura el ciclo y se repite tres veces con un intervalo de siete das entre las aplicaciones, stos no son efectivos para los huevos. Se debe considerar el tamao de la colonia a la hora de elegir el tratamiento, no es lo mismo tratar un grupo de pocos animales que toda una colonia. Los tratamientos tienen ms xito en una instalacin de barrera (SPF) que en una convencional. El tratamiento ms efectivo es una combinacin de citrato de piperacina 2.1 mgs/ml en agua de bebida ( 2 semanas), seguida de ivermectina (0.007 mg/ml) durante dos semanas y a continuacin se repite el primer tratamiento durante dos semanas ms; en total 6 semanas de aplicacin de la combinacin de ambos antiparasitarios. Otros autores proponen tiabendazol, 0.1 0.3%, en la dieta o bien ivermectina, 300 mgs/kg, en dosis nica, en el agua de bebida, si bien estos tratamientos son menos efectivos que el anterior. En todos los caso debe simultanearse con limpieza y desinfeccin de las habitaciones y las cubetas, con la mayor intensidad posible.
Cestodos Hymenolepis nana Perteneciente a la Familia Hymenolepidae, es una especie muy cosmopolita, parasita a roedores de laboratorio y al hombre. Es otro parsito que con las mejoras introducida en las instalaciones, se ha reducido su incidencia. Ciclo: segn utilice o no un vector como hospedador intermediario. Directo: dura de 20 a 30 das. Ingestin de huevos liberacin de oncosferas en intestino que penetran en vellosidades cisticercos los adultos que migran al lumen intestinal Indirecto: utiliza como hospedador intermediario una pulga (Pulex irritans), que ingiere el huevo y en cuyo aparato digestivo evoluciona hasta la fase de cisticerco, la pulga es ingerida por el roedor y se completa el ciclo.
Cuadro clnico: solamente hay sintomatologa cuando la parasitacin es alta, sntomas inespecficos, prdida de peso, pelo lacio, etc.; en casos graves cursa con una enteritis catarral y linfoadenitis de ganglios regionales, en los que pueden aparecer granulomas. Control: es una zoonosis, por lo que se deberan ser eliminados los animales. Los tratamientos tienen las mismas consideraciones que las expuestas para Cestodos: niclosamida, 200 mg/kg en dosis nica va oral y/o tiabentazol 200 mg/ Kg en la dieta, con las mismas consideraciones expuestas para nematodos. Parsitos que afectan a los tegumentos externos Este grupo de parsitos tiene en general una existencia limitada si se cumplen controles ambientales mnimos (desinsectacin, limpieza y barreras efectivas). Igualmente el animal mediante su autolimpieza, presencia de pelo, respuesta inmune y susceptibilidad especfica difuculta el parasitismo. La clnica que presentan los animales parasitados es muy similar: prurito, alopecia, lesiones por rascado, ulceraciones.
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Histopatologa: es comn, puede encontrarse lesiones correspondientes a dermatitis crnica e hiperqueratosis. La mayora de estos parsitos prcticamente ya no existen, pero consideramos que deben conocerse sus caractersticas con el fin de evitar su aparicin en nuestras instalaciones. Orden Phthiraptera (clase Insecta) Son conocidos comnmente como piojo del ratn y pulga de la rata, respectivamente (Cuadro 7-14), Depositan sus huevos en el pelo del animal. Son una va indeseable de transmisin de enfermedades desde los roedores salvajes a los destinados a experimentacin. Especie
Polyplax serrata Polyplax spinulosa
Hospedador
ratn rata
Duracin del ciclo

13 das 23 das
Acta como vector

Eperithrozoon coccooides Francisella tularensis Hemobartonella muris Borrellia duttoni Trypanosoma lewisi
Cuadro 7-14. Caractersticas de los artrpodos de rata y ratn
Control: exige la desinsectacin de las instalaciones. Aplicacin mediante pulverizacin de animales y lechos de Lindano (0.25% - 0.5 %) o Malatin (3 5 %). Orden Acarina (clase Arachnida) Son un grupo de parsitos que tienen una gran incidencia en los Animalarios, afectan a todos los roedores de laboratorio y se alimentan de las secreciones d la piel. Ciclo: se transmiten por contacto, todos tienen un ciclo similar variando su duracin (Cuadro 7-15). Los huevos son depositados en el pelo piel, segn la especie, 1 y 2 estado larvario protoninfa deutoninfa adulto. El diagnstico diferencial debe ser realizado por un experto, que utiliza las diferencias morfolgicas de los adultos para su clasificacin. Especie
Myobia musculi
Hospedador Duracin del ciclo

Ratn 23 das
Hbitat
Base del pelo del dorso
Manifestaciones clnicas
Prurito Ulceras de rascado Prdida de peso Prurito Ulceras de rascado Prdida de peso Ndulos en la piel que contienen caros Prurito Ppulas y vesculas y eritemas
Radfordia affinis
Rata
23 das
Base del pelo del dorso
Psorergates simplex Myocoptes musculinus Notoedres muris
Ratn Ratn Rata
Sin datos 14 das 19-21 das
Folculos pilosos Tercio medio del pelo de regin inguinal Piel de orejas, puede afectas a toda la cabeza
Cuadro 7-15. Algunas caractersticas diferenciales de los caros
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Interferencias en la investigacin: causan excitacin en los animales y se vuelven agresivos. M. musculi es responsable de la aparicin de amiloidosis secundaria en el ratn. Eleva los niveles de IgE. Provocan reacciones alrgicas en el ratn. Son vectores de otras infecciones.
Control: es bastante difcil erradicar de un Animalario convencional. Se debe hacer una desinsectacin de las instalaciones y de los animales. Un procedimiento efectivo es la aplicacin mediante pulverizacin sobre el animal y los lechos, tres veces a la semana, durante tres semanas con un periodo intermedio sin tratamiento de 15 das antes de empezar otro ciclo. Este procedimiento re realiza por tres veces. Se preparar una solucin con 250 ml de agua, 250 ml de propilenglicol y 5 ml de ivermectina. RESUMEN Se hace un resumen de las caractersticas tcnicas para generar y mantener animales libres de contaminacin microbiana. Su desarrollo ha permitido explorar las funciones fisiolgicas de la flora normal y los complejos mecanismos de su interaccin con el animal hospedador y con otros agentes microbianos. En este sentido son un modelo ideal para el estudio de enfermedades de origen microbiolgico y procesos relacionados con el sistema inmunolgico. El estado de salud del animal de laboratorio puede ejercer una profunda influencia en los resultados experimentales. La nica manera de evitar los efectos negativos de las infecciones naturales, es mediante la erradicacin selectiva de agentes infecciosos para lograr un animal de calidad microbiolgica definida. Tal animal debe ser protegido sistemticamente del riesgo de infeccin. Por este motivo, las instalaciones modernas se disean como una compleja barrera fsica manejada con estrictos principios sanitarios, cuyo principal objetivo es el de la prevencin de cualquier fuente de contaminacin. Se hace mencin continua a los criterios de control sanitario establecidos por FELASA. Se deben conocer al menos de manera bsica las principales patologas de los animales de experimentacin. En este captulo se resumen las ms importantes que afectan a roedores atendiendo a su origen bacteriano, vrico o parasitario. Se clasifican segn el sistema y aparato que afectan. Para cada una de ellas se indica el agente infeccioso, especie (s) afectada y un breve cuadro indicador de su rgano-tropismo, clnica, histopatologa y posibles interferencias en la investigacin. BIBLIOGRAFA
GNOTOBIOLOGA
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Especie
Amoxicilina
Ampicilina
Cloranfenicol
Gentamicina
Penicilina
Sulfametacina
(agua de bebida)
Tetraciclina
Cobaya
Txico contraindicado
contraindicado
20 mg/kg, IM dos veces/da
5-8 mg/Kg SC una vez/da
Contraindicado
166-517 mg/l (agua de bebida)
Conejo
No se utiliza __
2-10 mg/100 g peso PO 10-25 mg/Kg, IM 2 veces/da durante 5-7 das
30 mg/Kg dos veces/da, IM durante 5-7 das 50 mg/kg, IM o SC dos veces/da
4 mg/Kg IM una vez/da 5-8 mg/Kg , SC una vez/da
Peni. G + procaina 42,000 a 84,000 UI/kg SC o IM, diferentes das de tratamiento
112-350 mg/l 20 mg/kg PO 50 mg/Kg dividido en 3 dosis 30-100 mg/Kg dosis divididas PO. 500-900 mg/l, cambio diario del agua y protegida de la luz 3-5 mg/ml de agua durante 57 das. 20 mg/Kg PO o 100 mg/Kg SC, 2 veces/da en cada caso 450-643 mg/l de agua bebida 20 mg/Kg PO o 100 mg/Kg SC, 2 veces/da en cada caso 400 mg/l agua 20 mg/Kg PO
Ratn
100 mg/kg, Sc IM 2 veces/da
2-10 mg/100 g peso PO 50-150 mg/Kg SC 2 veces/da en las dos dosificaciones
0.5 mg/100 g peso, IM una vez/da 1.2 g/l agua de bebida, 3 das
Peni. Potasium (no procaina) 100.000 IU/Kg IM
Rata
150 mg/kg, Sc IM 2 veces/da
50-150 mg/Kg SC dos/da 50 mg/ rata adulta, 2 veces/da durante 10 das __
50 mg/kg, IM, SC dos veces/da
0.5 mg/100 g de peso Kg IM una vez/da 5-8 mg/Kg , SC una vez/da Contraindicado (enterocolitis)
100.000 UI/Kg IM dos veces/da 15.000 Peni. oral/20 ml agua de bebida
Hmster
Txico contraindicado
Contraindicado

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CAPITULO 7.

Estado sanitario: I. Patologa: control y prevencin en roedores

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Holoxnicos (convencionales) Neo-holoxnicos

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

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Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

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Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

Cuadro 7-2. Alteraciones observadas en roedores infectados con Mycoplasma pulmonis

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450-640 mg/L 450-540 mg/L

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Clnica: derivada de los granulomas neurolgicos, ascitis.

que forman en lo diferentes rganos, nefritis, sntomas

Estado sanitario I. Patologa: control y prevencin en roedores

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Duracin del ciclo

Acta como vector

Cuadro 7-14. Caractersticas de los artrpodos de rata y ratn

Hospedador Duracin del ciclo

Base del pelo del dorso

Psorergates simplex Myocoptes musculinus Notoedres muris

Ratn Ratn Rata

Sin datos 14 das 19-21 das

Cuadro 7-15. Algunas caractersticas diferenciales de los caros

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20 mg/kg, IM dos veces/da

5-8 mg/Kg SC una vez/da

166-517 mg/l (agua de bebida)

2-10 mg/100 g peso PO 10-25 mg/Kg, IM 2 veces/da durante 5-7 das

30 mg/Kg dos veces/da, IM durante 5-7 das 50 mg/kg, IM o SC dos veces/da

4 mg/Kg IM una vez/da 5-8 mg/Kg , SC una vez/da

Peni. G + procaina 42,000 a 84,000 UI/kg SC o IM, diferentes das de tratamiento

900-1350 mg/l (agua de bebida)

100 mg/kg, Sc IM 2 veces/da