Introduccin

Como sabemos las secuencias de ADN se mantienen igual de generacin en generacin sin sufrir mayores cambios, pero de igual forma estas pueden sufrir reordenamientos, provocando alteraciones particulares en la expresin del genoma como en el nivel de expresin de los genes. Este reordenamiento de la informacin se denomina recombinacin gentica y constituye el proceso biolgico en donde dos segmentos de cidos nucleicos interaccionan fsicamente entre si y dan lugar a un cambio en la informacin gentica.

Dentro de la recombinacin gentica podemos encontrarnos con tres tipos especficos: La recombinacin homloga del ADN: general y que trataremos a fondo. La recombinacin especfica de sitio: que se diferencia de la homologa en que en esta solo interviene una secuencia especfica de ADN. La transposicin de ADN: que se diferencia de la especfica de sitio en que la secuencia especfica tiene la capacidad de trasladarse dentro del cromosoma.

La recombinacin homloga del ADN

La recombinacin homloga es un proceso mediante el cual diferentes molculas de ADN intercambian su informacin. Esta solo ocurre entre secuencias idnticas o casi idnticas. Este fenmeno ocurre durante la primera meiosis en donde se alinean los cromosomas homlogos e intercambian material gentico. Especficamente ocurre en la profase y durante la etapa de Paquiteno las cromtidas hermanas se encuentran unidas por sus centrmeros formando ttradas o bivalentes, en donde se forman los ndulos de recombinacin y se lleva a cabo el entrecruzamiento de los cromosomas y el intercambio de informacin. Luego en Diploteno los cromosomas homlogos comienzan a separarse pero no por completo ya que quedaran unidos por las zonas en donde hubo intercambio de material, zonas que se denominas quiasmas, y que marcaran la ltima etapa de la recombinacin. Se han descrito tres funciones principales de la recombinacin homologa del ADN, ellas son: - La reparacin del ADN, un ejemplo de ello es la reparacin de horquillas de replicacin que han sido bloqueadas. - Mantener unidas fsicamente a las cromtidas, ya que durante las meiosis es fundamental que al momento de su disgregacin ocurra de manera ordenada. - Diversidad gentica de informacin, por el intercambio de material gentico

Segn el Review la recombinacin del ADN interviene en : La integracin del genoma de los virus En los cromosomas de las clulas. La replicacin de algunos bacterifagos. Diversidad de la respuesta inmunitaria de los vertebrados Cambio de sexo en la levaduras Origen de la variacin antignica de patgenos unicelulares como la Neisseria gonorrhoeae.

El Modelo de Holliday.
Para entender la recombinacin homologa es necesario comprender el modelo de holliday. Este fue propuesto en 1964 por Robin Holliday, en donde propuso que la recombinacin homologa es un proceso de rotura y unin en donde se producan dos intermediarios moleculares nuevos: El heteroduplex, que es un segmento de ADN de dos cadenas, donde cada cadena procede de una molcula distinta de ADN. Y la unin de Holliday, que es una estructura en forma de cruz, resultante del entrecruzamiento de las dos cadenas de ADN que se intercambiaron en el proceso de invasin. Esta estructura mantiene unidos los cromosomas homlogos, por lo que debe deshacerse para la correcta disyuncin de estos. A partir de los dos intermediarios mencionados, podemos decir que existen dos nuevas funciones celulares: la invasin e intercambio de cadenas, y la actividad resolvasa, encargada de deshacer las estructuras de Holliday. Este modelo era bastante sencillo, ya que el corte se inicia en una cadena sencilla de cada cromtida homologa. Luego las cadenas migran y se anclan en la cadena homologa contraria., se entrecruzan las cadenas y forman una unin de Holliday. La unin de Holliday se mueve a lo largo del ADN a travs de la rotura y formacin de puentes de hidrogeno entre los pares de bases de las cadenas homologas.

A continuacin se forma la estructura de holliday, en donde una de las molculas de ADN da una vuelta de 180 para dar espacio a las protenas encargadas de su resolucin. Dependiendo de donde se realice el corte en la estructura de holliday, tendremos o no recombinacin gentica.

En este caso, el corte realizado en la posicin numero 1 da como resultado dos cadenas dobles que cuentan con un par de alelos de cada padre, como estaba inicialmente. Una regin heteroduplex, en donde cada cadena procede de distintas molculas de ADN, y una regin crossover en donde encontramos un par de alelos del otro padre. Por lo tanto se ha producido intercambio de alelos y variacin gentica.

En el caso que el corte se realice en la posicin numero 2, solo se traspasa una seccin pequea de ADN que va a formar un heteroduplex, pero ambos alelos se encuentran en la misma posicin que antes, por lo tanto no se produjo variacin gentica.

Via RecBCD. En el modelo original de Holliday se postulaba que el intercambio de cadenas comenzaba con el corte de una sola cadena de ADN. Pero desde 1983 gracias a J. Szostak, T. Orr-Weaver, R. Roth-stein y F. Stahl, se admite que la recombinacin comienza con la rotura de las dos cadenas de una molcula de ADN. La protena encargada de iniciar la recombinacin en bacterias es la nucleasa RecBCD, que es un heterotrimero compuesto por 3 subunidades recA, recB y recC. La actividad de este trmero esta regulada por una secuencia de ocho pares de bases presente en el cromosoma bacteriano llamado Chi. El trmero accede al ADN a travs de un extremo libre de la doble cadena. Avanza abriendola, y degradando el ADN, pero al llegar a la secuencia Chi, sufre un cambio conformacional y pierde la subunidad RecD lo que provoca que cese de degradarse el ADN en direccin 3 a 5, generando asi una cadena sencilla. Sobre esta cadena actua la protena RecA que se encarga de buscar la homologia entre las dos secuencias de ADN. RecA se une al ADN construyendo filamentos multimericos helicoidales. Esta Posee dos sitios de unin, uno con la cadena sencilla y otro con la cadena de doble hlice invadida. Entonces en una reaccin de intercambio de cadenas in Vitro, la protena forma el nucleofilamento y se extiende hasta la regin contigua de doble cadena. Aparta la otra cadena y forma un heteroduplice. Una vez que las uniones de Holliday se han formado, la RecA se disocia, y la maquinaria de replicacin llena los huecos que quedan. Para resolver estas estructuras de holliday tenemos las siguientes protenas involucradas: La RuvA que es un tetramero que se une a la estructura de holliday haciendo que esta adopte una forma simtrica y plana La RuvB que acta como helicasa separando las dos cadenas de ADN Y la RuvC que corta y religa las cadenas en el momento de la resolucin En este caso, como se forman dos estructuras de holliday, hay 4 opciones de resolucin de estas, y solo 2 proporcionaran entrecruzamiento de alelos.

Si ambos cortes de realizan vertical u horizontalmente, no se produce intercambio de alelos, pero si la estructura se resuelve con cortes alternados (vertical y horizontal) se produce intercambio de alelos y por lo tanto variacin genetica.

Perspectivas futuras.

En el ao 2002 nos quedaba por identificar en clulas eucariotas: Endonucleasas y exonucleasas que participan en la iniciacin. Helicasas que faciliten el desplazamiento del heteroduplice. Topoisomerasas que eliminen la superhelicidad del proceso. Las polimerasas que rellenen los huecos de ADN. En el 2007 Mario R. Capecchi, Martin J. Evans y Oliver Smithies ganaron el premio nobel de fisiologia o medicina por su investigacion: principles for introducing specific gene modifications in mice by the use of embryonic stem cells . Descubrieron como usar la recombinacin homologa para introducir modificaciones genticas en ratones usando stem cells. En el 2009 investigadores reportaron resultados de un ensayo de terapia de cncer que explota las deficiencias en recombinacin homologa en ciertos tipos de cncer. La droga llamada olaparib, un inhibidor de PARP1 mostr el encogimiento o detencin de tumores de mama, ovario y cncer de prstata causados por mutaciones en el gen BRCA1 o BRCA2. Estos genes son necesarios en la reparacin del ADN en la recombinacin homologa. Cuando uno de estos genes esta ausente, otro tipo de reparacin del ADN llamada reparacin por escisin de bases compensa la falta de reparacin de ADN por recombinacin homologa. Sin embargo, cuando la protena PARP1 (necesaria en la reparacin por escisin de bases) es inhibida, el ADN no se repara y las clulas mueren.