Bacteriologia y Micologia

Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa
rea de Docencia: Salud Pblica
Programa de Prcticas por Competencias BACTERIOLOGA Y MICOLOGA I. IDENTIFICACIN DEL CURSO ORGANISMO ACADMICO: FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA Programa Educativo: Licenciatura de Mdico Veterinario Zootecnista Fecha: Aprobacin por los H.H. Consejos Acadmico y de Gobierno 02 de Julio 2010 rea de docencia: Salud Pblica Programa elaborado por:
M. en C. Pomposo Fernndez Rosas MVZ. Salvador Lagunas Bernab M. en C. Celene Salgado Miranda Dr. Martn Talavera Rojas M. en C. Luis Fernando Vega Castillo M. en C. Ada Elia Daz Gonzlez Borja
Fecha de elaboracin : 24-01-05 Fecha de revisin: 04/06/10
Clave
Horas de teora
Horas de prctica 32
Total de horas 96
Crditos
Tipo de Unidad de Aprendizaje CURSO
Carcter de la Unidad de Aprendizaje

OBLIGATORIA
Ncleo de formacin
SUSTANTIVA
Modalidad
L43725 Prerrequisitos
64
10
FLEXIBLE
(PRESENCIAL)
(Conocimientos Previos): Biologa celular, Bioqumica, Compresin de textos, principio bsicos del manejo de materiales, reactivos y equipo de laboratorio.
Unidad de Antecedente
Aprendizaje Unidad de Consecuente NINGUNA
Aprendizaje
NINGUNA Programas educativos en los que se imparte: Licenciatura de Mdico Veterinario Zootecnista
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica
PROGRAMA DE PRCTICAS DE LA UNIDAD DE APRENDIZAJE DE BACTERIOLOGA Y MICOLOGA No. PRCTICA

1
PRCTICA
Tinciones de rutina para bacterias y hongos
OBJETIVO
El alumno realizar las tinciones de rutina en el laboratorio de Bacteriologa y Micologa para la demostracin de algunas estructuras bacterianas y micticas, y comprender su utilidad El alumno realizar las diferentes tcnicas de siembra para el cultivo de bacterias y hongos in vitro, utilizando medio de cultivo segn su utilidad y describir la morfologa colonial El alumno aplicar los procedimientos generales para la coleccin, conservacin y envo de muestras clnicas al laboratorio para el diagnstico bacteriolgico y micolgico El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de las enterobacterias de mayor importancia en Medicina Veterinaria El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de los gneros Pasteurella, Mannheimia y Bordetella de mayor importancia en Medicina Veterinaria El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de los gneros Staphylococcus spp y Streptococcus spp de mayor importancia en Medicina Veterinaria El alumno describir las caractersticas de cultivo y morfolgicas ms relevantes de las micosis ms importantes del grupo de los dermatofitos de mayor importancia en Medicina Veterinaria El alumno determinara la susceptibilidad a los antimicrobianos empleados para Gram positivos y Gram negativos mediante la tcnica de Bauer-Kirby El alumno aplicar los conocimientos para la realizacin del diagnstico bacteriolgico y micolgico de muestras clnicas como son: observacin directa, aislamiento e identificacin de los microorganismos aislados en leche, heces y procesos pigenos
HORAS
2
Mtodos de inoculacin y sembrado de bacterias en medios de cultivo Toma, Conservacin y Envi de muestras para anlisis bacteriolgico y micolgico Aislamiento e identificacin de Enterobacterias
Aislamiento e identificacin de bacterias no entericas (bacterias que afectan el tracto respiratorio: Pasteurella, Mannheimia, Bordetella) Aislamiento e identificacin de bacterias Gram positivos (Cocos Gram positivos piogenos) Aislamiento e identificacin de agentes micticos
Determinacin de la sensibilidad in vitro a los antimicrobianos Procesamiento de muestras enviadas al laboratorio de Bacteriologa y Micologa (leche, heces y procesos pigenos)
INTRODUCCIN La bacteriologa es una rama de la biologa que estudia bacterias, levaduras y hongos. Como ciencia, tiene numerosas divisiones con fundamentos tcnicos comunes, pero cada parte es caracterstico, dado que hay diversos tipos de bacterias hallados en diferen tes habitats. Una de estas divisiones es la bacteriologa mdica que estudia aquellas bacterias, levaduras y hongos que perjudican la salud del hombre y de los animales, especialmente por su capacidad patgena. La importancia de las bacterias en la vida de las gentes y su medio ambiente no se reconoci inmediatamente, pero en 1893 Theobald Smith dijo En el estudio de las formas microscpicas conocidas como bacterias, tenemos lo que puede llamarse justamente el punto focal de las varias ramas de la ciencia biolgica. El desarrollo de la bacteriologa en los aos subsecuentes ha probado esta veracidad. Ha sido cierta particularmente en la relacin de las bacterias con la enfermedad, puesto que el concepto de enferm edad infecciosa, su prevencin y tratamiento se han desarrollado hasta la fecha. El desarrollo de la bacteriologa se ha debido a la curiosidad cientfica y a la energa de grandes hombres, auxiliados muchas veces por su firmeza en sostener lo que saban que era cierto, en contra de las refutaciones aparentes y el desdeo de sus compaeros. La historia de la bacteriologa es la de la evolucin del conocimiento de las causas de enfermedad. Este manual abarca aquellas especies bacterianas y micticas de importancia salud animal, tomando en cuenta las caracterstic as morfolgicas, fisiolgicas y patognicas de estos microorganismos. Teniendo lo bsico de las bacterias que son patgenas slo para los animales, las que son tanto para el hombre como para los animales. La ntima relacin existente entre el hombre y los animale s y el consumo de productos de origen animal exigen que toda la gente involucrada en la microbiologa mdica veterinaria se familiarice con los agentes infecciosos de los animales si desean comprender las enfermedades que producen.
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO INTRODUCCIN: La mayora de accidentes que ocurren en un laboratorio, son ocasionados principalmente por dos razones: la falta de conocimie nto acerca de la labor que se realiza dentro de l y a la negligencia para seguir las normas mnimas de seguridad. Es impo rtante tener en cuenta que las normas no son la respuesta nica en los laboratorios en donde se realiza actividades de docencia investigacin etc., pero es muy importante que esas normas sean aplicadas. Al realizar cualquier procedimiento en el laboratorio, involucra el exponerse a diferentes agentes infecciosos (bacterias y hongos) de manera directa al momento de manipular material contaminado, para disminuir este riesgo es importante la aplicacin de la bio seguridad. La bioseguridad es el comportamiento encaminado a lograr actitudes y conductas que disminuyen el riesgo del usuario en el laboratorio de tal manera que salvaguarda su salud. El conocimiento previo de normas y la aplicacin adecuada de buenas prcticas de trabajo en el laboratorio es un deber d e cada dicente en el cada prctica realizada. Estas normas son la base de un buen control de calidad del producto o trabajo que se e ste lleva en la elaboracin de cada prctica para cubrir los objetivos planteados. BUENAS PRCTICAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO: 1. Evitar pipetear con la boca. 2. Manejo de fluidos infecciosos con equipo de proteccin personal. 3. Uso obligatorio de equipo de proteccin personal (bata, guantes, mascarilla, careta facial y goggles). 4. Restringir el usos de agujas y jeringas y otros objetos punzo cortantes a fin de evitar el riesgo de inoculacin. 5. Limpiar y desinfectar superficies de trabajo antes, y despus de realizar cualquier procedimiento. 6. Retirarse anillos, pulseras, o cualquier otro accesorio que pueda entrar en contacto con las muestras o medios que se utilizan el laboratorio; colocar sus pertenencias en un lugar apropiado retirado del sitio de trabajo. 7. Lavado de manos antes y despus de cada sesin de trabajo con jabn y agua. 8. Manejo, tratamiento y disposicin adecuada de los RPBI 9. Todos los qumicos debern manejase con equipo de proteccin y dentro de una campana de extraccin. 10. En caso de un derrame de muestras biolgicas deber agregarse hipoclorito de sodio al 5% y dejar actuar por 30 min y posterio rmente limpiar. 11. Para la desinfeccin de las mesas se har con alcohol al 70% o benzal al 5%.
NORMAS DISCIPLINARIAS 1. No se permitir el ingreso al laboratorio, a todo alumno que llegue despus de 15 min. 2. el acceso al laboratorio es exclusivamente con bata blanca y limpia, por lo que no se permitir la permanencia en la sesin prctica de los alumnos que no porten su bata. 3. Se prohibe fumar, comer, beber o realizar cualquier otra actividad que no est relacionada con la prctica correspondiente 4. Ningn dicente podr salir o entrar sin previa autorizacin del profesor. 5. Las comunicaciones verbales sern de manera ordenada y en voz baja. 6. Evitar lo ms posible el estar circulando en el laboratorio durante la sesin prctica 7. En caso de accidentes (quemadura, salpicadura y heridas) avisar inmediatamente al profesor. 8. Colocar los desechos en el contenerlo correspondiente 9. No verter cualquier sustancia en la superficie de la mesa, suelo o tarjas. MANEJO ADECUADO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICO INFECCIOSOS. Sangre: Cogulos, aplicadores de madera e hisopos, se sumergiran en una solucin de hipoclorito de sodio al 5%, posteriormente sern colocados en bolsas de plstico para su eliminacin e incineracin. Materia fecal: Al trmino de la prctica se colocara en una solucin de hipoclorito de sodio al 5%, posteriormente sern colocados en bolsas de plstico para su eliminacin e incineracin. Material de vidrio: tubos, portaobjetos, cubreobjetos, varillas de vidrio, cajas de Petri, matraces y frascos de diferentes capacidades, sern depositados en contenedores con agua jabonosa adicionada con hipoclorito al 5%, en esta solucin permanecern por tres horas antes de su lavado y secado. Nota: Material como papel, aplicadores de madera, algodn y similares que hayan estado en contacto con material infeccioso, debern ser rociados con hipoclorito al 5%, y posteriormente colocarlos en bolsas de plstico para ser incinerados. DESINFECTANTES Es importante conocer las diferentes soluciones desinfectantes, como el cloro, que se utiliza para mantener limpio y desinfectado el laboratorio, materiales, equipos, as como su preparacin en las concentraciones que se necesiten.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Al inicio y al final de cada prctica el dicente debe lavarse las manos y colocarse alcohol al 70% o benzal al 5% Las superficies de trabajo deben ser limpiadas y suministrar con un pao una solucin de hipoclorito de sodio al 5% esperar 3 minutos e iniciar a trabajar. ADVERTENCIA: nunca usar fenol, por que es una solucin custica, por lo que no se recomienda su empleo sobre la piel, por su efecto irritativo y acumulativo en la piel. PREPARACIN DE SOLUCIONES Solucin de alcohol al 70% Alcohol al 95% .. 70 ml Agua destilada 30 ml Hipoclorito de sodio al 5% Hipoclorito comercial 5ml Agua destilada 95 ml CUESTIONARIO. 1. Qu es la bioseguridad? 2. Cul es el objetivo (s) de la bioseguridad? 3. Cuales son los tipos de riesgos que existen en un laboratorio? 4. En que se basa la clasificacin de los agentes biolgicos y mencione los grupos y niveles de riesgo? 5. Menciona cuales son las vas de entrada de los agentes biolgicos al cuerpo? 6. Como podemos disminuir los riesgos biolgicos. 7. Menciona 5 buenas practicas de trabajo 8. Menciona 5 normas disciplinarias de un laboratorio? 9. Qu desinfectantes podemos usar en la piel? 10. Menciona la toxicidad del fenol en el organismo. GLOSARIO DE TERMINOS: Accidente: Suceso eventual o accin de que involuntariamente resulta dao para las personas o las cosas. Desinfectante: Sustancia que destruye los microorganismos presentes, a excepcin de las esporas bacterianas Precaucin: Accin para evitar o previenir los inconvenientes, dificultades o daos que pueden temerse durante el procedimiento.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Investigacin: Actividad que tiene por fin ampliar el conocimiento, sin perseguir, en principio, ninguna aplicacin prctica.
PRACTICA NO. 1 TINCIONES DE RUTINA PARA BACTERIAS Y HONGOS UNIDAD DE COMPETENCIA 1: Conocer e identificar la morfologa bacteriana y fungal, as como sus principios metablicos, genticos y taxonmicos. INTRODUCCIN: En el diagnstico microbiolgico, la visualizacin del agente patgeno o su efecto en el material biolgico remitido al laboratorio de diagnstico constituye el primer paso hacia su identificacin. Esto puede realizarse mediante el examen directo de una preparacin hmeda o bien de un frotis fijo teido con colorantes especficos. La observacin de microorganismos vivos con o sin motilidad utilizando preparaciones hmedas es fcil de realizar y requieren de un mnimo de material. En una preparacin hmeda se pueden observar diferentes tipos de movimiento, como son: El movimiento browiniano de partculas pequeas debido al bombardeo por molculas del medio lquido. El movimiento de microcorrientes debido frecuentemente el calor generado por el foco microscpico. Movimiento flagelar o real de las bacterias cuyas caractersticas pueden variar en los diversos microorganismos. Para los estudios bacteriolgicos y micolgicos adems se han ensayado y propuesto gran variedad de mtodos de tincin, los que apoyan en proporcionar contraste entre el microorganismo y el medio que la rodea, permitiendo llevar a cabo la diferenciacin entre los distintos tipos morfolgicos; adems permite el estudio de estructuras u organelos propios de la clula bacteriana y mictica. Dentro de las tinciones importantes para bacterias y hongos son las siguientes: TINCIN DE GRAM: En 1884 un mdico Dans, Christian Gram, desarroll un mtodo de tincin que lleva su nombre y que es de enorme utilidad en cualquier laboratorio de bacteriologa. La tcnica, adems de revelar detalles referentes a la forma y agrupacin bacteriana como cualq uier otra tcnica de tincin, permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Durante el proceso de tincin, tanto las bacterias Gram positivas como las Gram negativas toman el colorante primario. Sin embargo al aplicar el agente decolorante, la pared de las bacterias Gram positivas sufre una deshidratacin que impide la salida de colorante. En el caso de las bacterias Gram negativas, el agente decolorante destruye la integridad de la membrana externa, incrementando as su permeabilidad, lo cual permite la salida del colorante primario. Al aplicar el colorante de contraste, este no puede penetrar fcilmente en las bacterias Gram positivas debido a la deshidratacin de su pared; adems de que estas bacterias quedaron previamente teidas con el colorante primario. Por el contrario, las bacterias Gram negativas se tien fcilmente con el colorante de contraste. El resultado final es que las bacterias Gram positivas se tien de violeta o azul y las Gram negativas de rojo. La tincin de Gram es aplicada en forma universal como primer paso en la identificacin de las bacterias. Desafortunadamente existen algunos grupos bacterianos en los cuales la tincin de Gram no es de utilidad taxonmica, por ejemplo: Las espiroquetas, micoplasmas, micobacterias, clamidias y rickettsias. TINCIN PARA BACTERIAS ACIDO-ALCOHOL RESISTENTES: Uno de los mtodos de tincin ms comnmente usados para demostrar la cido-alcohol resistencia es el mtodo de Ziehl-Neelsen. En este mtodo la penetracin del colorante primario se facilita debido a que ste se encuentra disuelto en fenol y a que es aplicado en presencia de calor. Una vez que el colorante penetra a la clula bacteriana, este se combina con las mismas estructuras con las que se combina en cualquier otra bacteria y adems reacciona con cidos miclicos libres, lo cual hace que la pared celular se vuelva an ms h idrofbica. Con la tincin de Ziehl-Neelsen tanto las bacterias cido-alcohol resistente como las no cido-alcohol resistente se tien con el colorante primario. Sin embargo, al aplicar el agente decolorante, compuesto por una mezcla de alcohol-cido, este no solubiliza los lpidos de la pared de las bacterias cido-alcohol resistentes, y por lo tanto no se decoloran. Las bacterias no cido-alcohol resistentes se decoloran fcilmente, por lo que se vuelve a teir al aplicar el colorante de contraste. El grupo de bacterias cido-alcohol resistentes est representado principalmente por el gnero Mycobacterium. Algunas especies de este gnero juegan un papel muy importante como agentes etiolgicos de la tuberculosis y otras enfermedades crnicas granulomatosas tanto en el hombre como en los animales. TINCIN PARA ESPORAS: La espora bacteriana es una estructura altamente deshidratada y rgida, que es formada por algunos gneros bacterianos. Los gneros bacterianos de inters en medicina veterinaria que son capaces de esporular son Bacillus y Clostridium. Estos responden de manera diferente al efecto que las condiciones ambientales que tienen sobre la formacin de la espora.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Las esporas son estructuras ovales o esfricas que pueden encontrarse tanto intracelularmente, como fuera de la bacteria (clula vegetativa). Por su localizacin dentro de la clula pueden ser centrales, subterminales o terminales y presentan adems vari acin en su tamao. Estas caractersticas son de utilidad taxonmica para la identificacin de algunas especies de los gneros capaces de esporular. Se preparan 2 frotis fijos a partir del cultivo, uno de los frotis ser teido con la tincin de Gram y el otro con la tinci n de Schaeffer y Fulton. Recuerda que con la tincin de Gram las esporas se observan como cuerpos refringentes sin teir, mientras que con el mtodo de Schaeffer y Fulton las esporas se observan de color verde y las formas vegetativas se ven rojas. TINCIN LACTOFENOL AZUL DE ALGODN: Este es un mtodo utilizado rutinariamente para la realizacin de preparaciones microscpicas de hongos filamentosos con el fin de determinar sus estructuras morfolgicas y por lo consiguiente su identificacin. Cada uno de los constituyentes del colorante lactofenol azul de algodn cumple una funcin determinada. El fenol utilizado sirve como fungicida, la glicerina permite tener una preparacin semipermanente, al azul de algodn tie e l exterior de la pared de los hongos y el cido-alcohol lctico acta como agente aclarante. OBJETIVOS: GENERAL: El dicente realizar las tinciones de rutina en el laboratorio de Bacteriologa y Micologa para la demostracin de algunas estructuras bacterianas y micticas, y comprender su utilidad. PARTICULARES: 1. Conocer la diferencia entre una preparacin hmeda y un frotis fijo, as como su utilidad diagnstica. 2. Conocer los principios y procedimientos de las tinciones ms utilizadas para la observacin de bacterias y hongos, y sus estructuras. 3. Realizar la tincin de Gram, para observar morfologa, tamao, agrupacin y afinidad tintorial de bacterias y levaduras. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM. TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 2 Horas (una sesin) MATERIAL:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica GENERAL: Portaobjetos, cubreobjetos, lpiz graso, asas bacteriolgicas graduadas, papel secante, aceite de inmersin, mechero, tren de tincin de Gram, tincin de lactofenol azul de algodn, solucin desinfectante, KOH al 3%, Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X) Equipo de trabajo: Vaselina o plastilina 1 cultivo en agar de E. coli 1 cultivo en agar de Staphylococcus spp 1 cultivo en agar de una levadura 1 cultivo en agar de Aspergillus spp
METODOLOGA: PREPARACIONES HUMEDAS: 1. Deposite ya sea una capa delgada de vaselina alrededor del borde del cubreobjetos o un pedazo pequeo de plastilina en las 4 esquinas del cubreobjetos, SIN TOCAR las caras del mismo con los dedos. 2. En el centro del cubreobjetos preparado con vaselina plastilina, coloque con el asa microbiolgica varias gotas del cultivo bacteriano y del semen (un cubreobjetos por muestra) 3. Tome una laminilla y colquela sobre el cubreobjetos, presionando suavemente. 4. Invierta la preparacin y obsrvala al microscopio con los objetivos de 40X y 100X si se utiliz vaselina, o con el de 10X en el caso de haberse utilizado plastilina. PREPARACIN DE LOS FROTIS FIJOS PARA TINCIONES: 1. Realice un frotis fijo de cada uno de los cultivos proporcionados. 2. Utilice laminillas limpias y marcadas para su identificacin, con el lpiz graso marque el rea donde se va a colocar la muestra. 3. La tcnica para realizar el frotis bacteriano es variable dependiendo si el cultivo se encuentra en medio slido o lquido. A) Cultivo en liqudo: Con un asa bacteriolgica previamente flameada, se coloca una pequea gota de cultivo que se va a teir en un portaobjetos limpio. B) Cultivo en medio slido: Se coloca una gota de agua destilada en el portaobjetos, se recolecta una colonia de medio solido y se mezcla, realizando un extendido uniforme. 4. Extienda la gota sobre la laminilla formando una capa fina. Debe evitarse preparar un frotis demasiado grueso. 5. Deje secar las laminillas a temperatura ambiente.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 6. Cuando se haya secado el frotis pasa la laminilla 3 veces por la llama del mechero con la capa del frotis ha cia arriba, no aplicar calor en forma excesiva ya que estropeara la morfologa normal y la estructura de los microorganismos que se van a teir. REALIZACIN DE LA TINCIN DE GRAM: Procedimiento (modificacin de Hucker para tincin de bacterias y levaduras): 1. Preparar frotis fijos a partir de cada uno de los cultivos bacterianos 2. Agregar sobre la preparacin cristal violeta durante 30 segundos. 3. Lavar con agua destilada 4. Aadir lugol durante 30 segundos. 5. Lavar con agua destilada 6. Decolorar con alcohol-cetona por 5 a 10 segundos. 7. Lavar 8. Agregar safranina durante 30 segundos. 9. Lavar, secar y observar al microscopio con aceite de inmersin y con el objetivo de 100X REALIZACIN DE LA PRUEBA DE KOH AL 3%: Para ratificar los resultados de la tincin de Gram se utiliza la prueba de KOH al 3%. Esta prueba consiste en colocar sobre una laminilla una gota de KOH AL 3%, despus recolectar con el asa muestra de las colonias bacterianas en estudio, mezclar con la gota de KOH, con movimientos giratorios durante 1 a 3 minutos. Interpretacin: Si al separar el asa de la mezcla se forma una hebra viscosa, la prueba es positiva e indica que se trata de bacterias Gram negativas. Si al separar el asa no se forma hebra, la prueba es negativa, e indica que las bacterias son Gram positivas REALIZACIN DE LA TINCIN DE LACTOFENOL AZUL DE ALGODN: 1. Sobre un portaobjetos limpio coloque una gota de lactofenol azul de algodn. 2. Con el asa en forma de L tome una pequea cantidad de la colonia y colquela sobre la gota del colorante. 3. Coloque un cubreobjetos sobre la preparacin, la cual puede ser ligeramente calentada (esto ayuda a extender el hongo en toda la preparacin y a remover las burbujas) 4. Observe al microscopio con el objetivo seco fuerte (40 X). RESULTADOS:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el dicente, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN: Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. De que color se tien las bacterias Gram positivas y por qu?. 2. De que color se tien las bacterias Gram negativas y por qu?. 3. Que es un frotis? 4. Con que finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetos? 5. Cul es la razn de teir las muestras bacterianas? 6. Porque es necesario emplear aceite de inmersin para la observacin de los microorganismos. 7. Que funcin tiene el Yodo en la tincin de Gram? 8. Menciona tres bacterias que tien Gram positivas y escribe la enfermedad que causa cada una de ellas 9. Menciona tres bacterias que tien Gram negativas y escribe la enfermedad que causa cada una de ellas. 10. Para que sirve la tincin de Ziehl-Neelsen?.
PRACTICA 2: METODOS DE INOCULACIN Y SEMBRADO DE BACTERIAS EN MEDIOS DE CULTIVO UNIDAD DE COMPETENCIA 1: Conocer e identificar la morfologa bacteriana y fungal, as como sus principios metablicos, genticos y taxonmicos. INTRODUCCIN: Para realizar el estudio de las bacterias es necesario recuperarlas del hbitat natural donde se encuentran y hacer que prolifere en medios artificiales que proporcionen sus requerimientos nutricionales. A este procedimiento se le conoce como cultivo bacteriano in vitro. Las bacterias para su metabolismo necesitan: donadores y aceptores de hidrgeno, fuentes de carbono, fuentes de N y minerales. Adems del uso de un medio nutritivamente adecuado para el cultivo bacteriano, es necesario considerar factores ambientales tales como la temperatura, pH, humedad relativa y atmsfera de incubacin. Los mtodos de siembra de bacterias en medios de cultivo estn directamente relacionados con la consistencia de los mismos. Estos pueden ser lquidos (pruebas bioqumicas y medios de enriquecimiento), semislidos (pruebas de motilidad de cepas), slidos (pruebas bioqumicas, conservacin de cepas, pruebas de susceptibilidad a quimio-teraputicos o realizar aislamientos en cultivo puro). MEDIOS SLIDOS PARA CONSERVACIN DE CEPAS: En este caso el medio es envasado en tubos y se permite su solidificacin de tal manera que se logre una superficie (fig. 1). El uso de tubos con tapn de baquelita prolonga el tiempo de deshidratacin del medio.
Fig. 1 MEDIOS SLIDOS PARA PRUEBAS DE SUSCEPTIBILIDAD A QUIMIOTERAPUTICOS: En este caso el medio es envasado en cajas de Petr y la inoculacin se hace por medio de estrias continuas en toda la superficie por medio del asa o por medio de un hisopo (fig. 2).
Fig. 2
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica MEDIOS SLIDOS PARA EL AISLAMIENTO EN CULTIVO PURO: En este caso los medios se envasan en cajas de Petr, y el objetivo es obtener el crecimiento aislando colonias bacterianas, es decir, colonias pura, libres de otros grmenes contaminantes, con el fin de estudiar e identificar a una especie bacteriana. La inoculacin se realiza con el asa como se ilustra en la fig. 3.
(FIG. 3.) El estudio de la morfologa de las colonias es de gran importancia debido a que gracias a sta puede iniciarse una identifica cin preeliminar de los microorganismos aislados. Las colonias bacterianas presentan caractersticas morfolgicas muy variadas, mismas que son constantes para cada especie de bacterias en idnticas condiciones de cultivo. Estas caractersticas pueden modificarse cuando factores tales como la humedad relativa, medio de cultivo, temperatura, atmsfera de incubacin varan. La descripcin de las colonias bacterianas debe realizarse cuando stas se encuentran separadas unas de otras en el medio de cultivo, tomando en cuenta las siguientes caractersticas: tamao, color, superficie, borde, opacidad, elevacin, estructura interna. Las caractersticas de la superficie, borde, opacidad, elevacin y estructura interna, estn sujetas a la interpretacin del observador. Para describirlas es necesario el uso de un microscopio estereoscpico, por lo que su valor descriptivo es menos relevante. De acuerdo a estos criterios, las colonias pueden clasificarse de la siguiente forma: Superficie: Lisas, Rugosas. Estructura interna: Mucoide, Granular, Filamentosa. Opacidad: Translcidas, Opacas, Brillantes. Borde: Enteras, Onduladas, Lobuladas, Erizadas, Filamentosas. Elevacin: Umbilicales, Difusas, Planas, Convexas.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Otro dato til en la identificacin preeliminar de colonias bacterianas es la produccin de hemolisinas. Estas se ponen de manifiesto en medios de cultivo adicionados con sangre, tales como el agar sangre y el caldo sangre. En el agar sangre la produccin de hemolisinas conduce a la formacin de un halo de lisis de eritrocitos alrededor de las colonias. Si dicho halo es transparente se interpreta como hemlisis completa (hemolisis ) mientras que si el halo es de color gris verdoso se trata entonces de hemlisis incompleta (hemolisis ). Al hacer la identificacin de las colonias bacterianas aisladas no siempre ser necesario detallar todas las caractersticas morfolgicas mencionadas; generalmente se toman en cuenta aquellas que son relevantes. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno realizar las diferentes tcnicas de siembra para el cultivo de bacterias y hongos in vitro, utilizando medio de cultivo segn su utilidad y describir la morfologa colonial. PARTICULARES: 1. Conocer la importancia del cultivo de bacterias y hongos in vitro. 2. Enunciara las condiciones necesarias para el cultivo in vitro de las bacterias y hongos. 3. Enunciara los medios de cultivo bsico, enriquecimiento, diferencial, selectivo y de transporte. 4. Realizar las tcnicas de siembra en medios de cultivo lquidos semislidos y slidos. 5. Observar las reacciones metablicas de bacterias y hongos en algunos medios diferenciales. 6. Analizar la utilidad diagnstica de la morfologa colonial bacteriana y fungal y la describir con base en las siguientes caractersticas: tamao, color de la colonia, pigmentacin de medio, estructura interna, borde y hemlisis. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 4 Horas (dos sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). SECCIN: 1 cultivo en agar de E. coli 1 cultivo en agar de Staphylococcus spp 1 cultivo en agar de una levadura
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 1 cultivo en agar de Aspergillus spp Medio Agar sangre Medio MacConkey Medio Verde Brillante Medio Agar Sal y manitol Medio Agar Sabouraud Medio TSI Medio SIM Caldo Rojo de Fenol Caldo nutritivo
METODOLOGA: PROCESO DE INOCULACIN Y SIEMBRA EN PLACA: 1. Desinfectar la mesa de trabajo. 2. Seleccionar una colonia del medio que contiene un cultivo puro, sosteniendo la placa a una distancia no mayor de 20 cm. del mechero. 3. Esterilizar el asa y dejarla enfriar en el agar. 4. Tomar nicamente la colonia seleccionada 5. Descargar el asa en uno de los extremos de la placa (ver esquema anexo). 6. Realizar la siembra con la misma asa. 7. Esterilizar el asa y dejarla enfriar, 8. Cerrar la caja y rotularla con el nmero o nombre de muestra, nmero de equipo y fecha. 9. Incubar placas a 37 C por 24 horas. 10. Transcurridas las 24 hrs., observa cuidadosamente el crecimiento en las cajas de Petr, sin abrirlas. 11. Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes caractersticas 12. Identificar y mencionar las formas y caractersticas de las colonias, utiliza el esquema anexo. 13. Guarda las cajas en el refrigerador, hasta la prxima clase (OPCIONAL). PROCESO DE INOCULACIN Y SIEMBRAN EN TUBO (Medio slido): 1. Destapar el tubo y flamear la parte superior. 2. Esterilizar el asa recta y enfriarla. 3. Tomar una colonia del medio que contiene el cultivo puro con el asa recta estril.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 4. Siembre en los tubos con agar inclinado de acuerdo al mtodo que se utilice de siembra, a una distancia aproximada de 20 cm. del mechero. 5. Rotular los tubos de la misma manera que las placas. 6. Incubar placas a 37 C por 24 horas. 7. Transcurridas las 24 hrs., observa cuidadosamente el crecimiento en los tubos, sin abrirlos, y anotar lo observado. 8. Guarda las cajas en el refrigerador, hasta la prxima clase. PROCESO DE INOCULACIN EN TUBO (Medio lquido): a. Seleccionar una colonia del medio a una distancia aproximada de 20 cm. del mechero b. Esterilizar el asa recta y enfriarla c. Destapar el tubo y flamear la parte superior. d. Introducir el asa con el inculo a sembrar, agitar el asa hasta que la muestra sea homognea. e. Esterilizar el asa y dejarla enfriar f. Flamear el tubo y taparlo. g. Rotular los tubos de la misma manera que las placas. h. Desinfectar la mesa de trabajo i. Incubar tubos a 37 C por 24 horas. j. Transcurridas las 24 hrs., observa cuidadosamente el crecimiento en los tubos, sin abrirlos, y anota lo observado. k. Guarda los tubos en el refrigerador, hasta la prxima clase (OPCIONAL). RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que se relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Porque se debe trabajar cerca del mechero? 2. Qu es un cultivo puro?
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 3. Qu estudios podemos realizar aislando un microorganismo? 4. Qu sucede si tomamos una colonia con el asa caliente? ANEXOS:
PRACTICA 3 TOMA, CONSERVACIN Y ENVIO DE MUESTRAS PARA ANLISIS BACTERIOLGICO Y MICLOGICO UNIDAD DE COMPETENCIA III: Explicar la importancia del control de las bacterias y hongos en las diversas reas de la medicina veterinaria en las que se ven relacionados, as como la coleccin, envo y procesamiento de muestras para diagnstico INTRODUCCIN: La bacteriologa y micologa diagnstica es el estudio de las muestras tomadas a partir de pacientes de los cuales se sospecha de una infeccin que involucre a estos agentes. El laboratorio puede apoyar al clnico de la siguiente manera: Confirmando el diagnstico presuntivo. Sugiriendo la quimioterapia de la enfermedad. Colaborando en el conocimiento epidemiolgico de las enfermedades. Permitiendo la elaboracin de autobacterinas. Los resultados del examen bacteriolgico y micolgico, as con la rapidez con que stos sean obtenidos, no dependen slo de los mtodos de laboratorio empleados, sino tambin de la forma en que sean colectadas y enviadas las muestras clnicas. Dichos resultados pueden verse influenciados por la presencia de microorganismos que son parte de la microflora normal, por la migracin bacteriana posmortem o por la aplicacin de antimicrobianos antes del envo de la muestra. El clnico debe tener en mente estos factores para realizar la interpretacin de los resultados emitidos por el laboratorio. 1. COLECCIN Y ENVIO DE MUESTRAS: A continuacin se mencionan algunas normas generales: Tomar la muestra del sitio ms representativo del problema, de preferencia en la etapa aguda de la enfermedad. Las muestras obtenidas a partir de animales muertos debern tomarse dentro de las primeras 3 horas de ocurrida la muerte o el sacrificio. Las muestras deben colectarse bajo estrictas condiciones de antisepsia. Tanto el material de coleccin como el recipiente en el que la muestra sea transportada debern ser estriles. Este ltimo preferentemente debe tener un tapn de rosca. Los especimenes colectados no deben entrar en contacto con desinfectantes. Las muestras deben identificarse con los siguientes datos: especie, raza, edad, sexo, arete o nombre del animal, as como direccin telfono y nombre del propietario del animal (etiqueta de identificacin). Una vez colectadas las muestras deben enviarse dentro de las siguientes 24 horas al laboratorio en condiciones de refrigeracin.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Cuando sea necesario el uso de hisopos para la coleccin de las muestras hay peligro de desecacin, por ello deben enviarse e n medios de transporte (Stuart, Carry-Blair, etc.) que ayudan a la preservacin de la bacteria pero no a la multiplicacin. Debe anexarse una historia clnica pertinente que incluya la hora de la muerte del animal, nmero de animales afectados, si e l animal del que provienen la muestra fue tratado con antimicrobianos, cules y durante cunto tiempo y un diagnstico presuntivo con base en signos clnicos y epidemiolgicos. Es importante hacer notar que el manejo de las muestras clnicas deben realizarse con precaucin debido a que algunos agentes involucrados en las enfermedades infecciosas de animales constituyen un riesgo de zoonosis para la salud del clnico y del bacterilogo. Los problemas ms frecuentes para la identificacin bacteriana y micolgica en el laboratorio son: Envi de muestras no representativas de la lesin en cuestin. Toma de muestras sin antisepsia. Envi de muestras en condiciones inadecuadas. Falta de historia clnica completa y de un diagnstico presuntivo. Por lo anterior, es indispensable que el clnico tenga un conocimiento sobre la correcta obtencin y envo de muestras al laboratorio.
OBJETIVOS: GENERAL: El alumno aplicar los procedimientos generales para la coleccin, conservacin y envo de muestras clnicas al laboratorio p ara el diagnstico bacteriolgico y micolgico. PARTICULARES: Describir el material necesario para colectar muestras o especimenes sospechosos de microorganismos aerobios y anaerobios Analizar las condiciones ambientales adecuadas para tomar una muestra representativa de un proceso infeccioso, as como de agua y alimento Describir como se conservan y se envan las muestras al laboratorio Conocer los datos importantes para realizar una historia clnica pertinente, orientada al diagnstico bacteriolgico y micolgico Colectar una muestra clnica aplicando los conocimientos de coleccin y envi de muestras LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad, siempre y cuando se decida trabajar con animales de laboratorio. OPCIONAL: Se puede optar por ir a una explotacin animal y a nivel de campo realizar el ejercicio de tomo y envi de muestras TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 2 Horas (una sesin)
MATERIAL: GRUPO: Una nevera con refrigerantes Torundas de alcohol al 70% Torundas de yodo al 2% POR EQUIPO: Material para sujecin del animal Medio de transporte Stuart Hisopos estriles Frascos tipo Gerber estriles Bolsa de plstico nuevas. Estuche de diseccines POR PERSONA: Equipo de proteccin personal (dependiendo si se decide realizar en laboratorio o explotacin pecuaria) METODOLOGA: 1. Obtener muestras de exudado, leche, sangre, heces, orina, rgano y pelos de animales que presenten problemas clnicos, as co mo de agua y alimento si amerita. 2. Recopilar los datos ms importantes para realizar la historia clnica 3. Conservar y enviar las muestras al laboratorio de diagnstico para su anlisis bacteriolgico o micolgico. RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica.
ANEXOS: RECOMENDACIONES PARA LA TOMA Y ENVIO DE MUESTRAS DE ACUERDO A CONDICIONES PATOLOGICAS ESPECFICAS. CONDICIN TIPO DE MUESTRA Y CANTIDAD FORMA DE OBSERVACIONES PATOLOGICA RECOMENDADA COLECCIN Y ENVO ABORTOS FETO COMPLETO O CONTENIDO FRASCOS, BOLSAS DE EL FETO Y LOS RGANOS PLSTICO, HISOPOS, PUEDEN ENVIARSE EN ABOMASAL (1 ml) CONGELACIN, CUANDO SE PULMON, BAZO, HGADO, RION JERINGAS. SOSPECHA DE CLAMIDIASIS FETAL (6 m por lado) ENVIAR HGADO EN MEDIO DE PLACENTA Y PLACENTOMAS. TRANSPORTE ESPECIAL. SECRECIN VAGINAL (1 ml) ALIMENTO EN CASO DE LECHE (15 ml) AFLATOXICOSIS. ALIMENTO (100 g) ABSCESOS, JERINGA, HISOPO, EN CASO DE GRANULOMAS EXUDADO PURULENTO (1 ml) GRANULOMAS Y ABSCESO COMPLETO. FRASCO, BOLSA DE SOSPECHOSOS DE EXUDADOS PLSTICO TUBERCULOSIS DEBEN BIOPSIA EXTREMARSE PRECAUCIONES. ARTRITIS JERINGA, HISOPO, DESINFECTARSE PIEL ANTES DE LQUIDO SINOVIAL (1 ml) BOLSA DE PLASTICO LA ARTROCENTESIS. ARTICULACIN COMPLETA CLOSTRIDIASIS RPIDAMENTE AL MSCULO NECRTICO (6 cm por FRASCO, BOLSA DE ENVIAR INVASIVAS PLSTICO LABORATORIO EN ATMSFERA lado) (MIOSITIS ANAEROBIA, EN ESTE CASO NO TEJIDO SUBCUTNEO EDEMATOSO NECRTICAS, ES RECOMENDABLE (6 cm por lado) HEPATITIS REFRIGERACIN. HGADO (6 cm por lado) NECRTICA) ENTEROTOXEMIA INTESTINO Y RGANOS AFECTADOS SEGMENTO LIGADO ENVIAR EN REFRIGERACIN. DE INTESTINO EN FRASCO. DERMATOMICOSIS PELOS Y ESCAMAS FRASCOS, SOBRES NO ES NECESARIO QUE LOS DE PAPEL NUEVOS, RECIPIENTES ESTN ESTRILES. PORTAOBJETOS LAS MUESTRAS DEBEN TOMARSE
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica DE LA PERIFERIA DE LA LESIN. EN GRANDES ESPECIES TOMAR LAS HECES DIRECTAMENTE DEL RECTO Y EN PEQUEAS ESPECIES CON HISOPOS. EN CASO SOSPECHOSO DE PARATUBERCULOSIS ENVIAR RASPADO Y MUCOSA INTESTINAL. SI SE SOSPECHA DE Campylobacter, Leptospira O Mycoplasma, LAS MUESTRAS DEBEN ENVIARSE DENTRO DE LAS SIGUIENTES 3 HORAS DE SU COLECCIN EN REFRIGERACIN. LAS MUESTRAS DEBEN ENVIARSE DENTRO DE LAS SIGUIENTES 2 HORAS DE SU COLECCIN. LAVAR Y DESINFECTAR EL PEZN PREVIO A LA OBTENCIN DE LA MUESTRA, CUIDAR DE NO TOCAR LA PIEL CON EL FRASCO, SLO EL CHORRO DE LECHE TENDR CONTACTO CON EL FRASCO. SI SE SOSPECHE DE MICOPLASMOSIS O CLAMIDIASIS, LAS MUESTRAS DEBEN ENVIARSE DENTRO DE LAS SIGUIENTES 4 HORAS A SU COLECCIN.
DIARREAS
INTESTINO HECES (1 g) N. LINFATICOS MESENTERICOS, VESCULA BILIAR. ALIMENTO (100 g) Y AGUA (100 ml)
SEGMENTO LIGADO DEL INTESTINO EN FRASCO. GUANTES DE PALPACIN. FRASCOS, BOLSAS, HISOPOS.
INFECCIONES GENITALES
INFECCIONES URINARIAS
EXUDADOS (1 ml) LAVADOS PREPUCIALES O VAGINALES (10 ml) RGANOS: TESTICULOS, EPIDIDIMO, TERO, ETC. (COMPLETOS O 6 cm POR LADO) ORINA (6 ml) RION (6 cm POR LADO)
HISOPOS, JERINGAS, FRASCOS O BOLSAS DE PLASTICO.
CATTER, JERINGA, FRASCO, BOLSA DE PLSTICO.
MASTITIS
FRASCOS, BOLSA DE LECHE (15 ml) GLNDULA MAMARIA (6 cm POR PLASTICO LADO)
NEUMONAS
LAVADO TRAQUEOBRONQUIAL (5 ml) JERINGAS, FRASCOS, BOLSAS DE PLSTICO PULMN (6 cm POR LADO) NDULOS LINFATICOS MEDIASTINICOS
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica OTITIS MEDIA EXUDADO (1 ml) AGUDA O CRNICA PROBLEMAS NERVIOSOS HISOPOS, JERINGAS LIMPIAR EL CANAL EXTERNO CON UN ANTISPTICO Y TOMAR LA MUESTRA EN EL ODO MEDIO. BOLSAS DE EL LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO PLSTICO, FRASCOS, DEBE SER PROCESADO DE JERINGA, HISOPOS. INMEDIATOS SI EL ANIMAL TIENE MAS DE 3 HORAS DE MUERTO DEBE ENVIARSE MDULA SEA.
SEPTICEMIAS
ENCFALO (COMPLETO O 6 cm por lado) EXUDADOS (1 ml) LIQUIDOS CEFALORRAQUIDEO (2 ml) JERINGAS, FRASCOS, SANGRE (10 ml) BAZO, HGADO, PULMN, N. BOLSAS DE PLASTICO LINFATICOS. RIONES, CEREBRO (6 cm POR LADO) MDULA SEA (UNA COSTILLA)
PRACTICA 4 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE ENTEROBACTERIAS UNIDAD DE COMPETENCIA IV: Identificar los principales agentes bacterianos Gram negativos de importancia veterinaria. INTRODUCCION: Como indica el nombre de la familia Enterobacteriaceae, muchos miembros de este grupo son naturales del tracto gastrointestinal. Antes del advenimiento de los antibiticos, quimioteraputicos e inmunodepresores, los miembros de este grupo estaban limitados a causar enfermedades de los tractos gastrointestinal y urinario. Hoy las enterobacterias se pueden recuperar en infecciones de virtua lmente todos los sitios anatmicos. Las enterobacterias se eliminan en las heces y contaminan el medio externo donde pueden permanecer viables por mucho tiempo, en condiciones favorables, por lo cual estos grmenes son indicadores del grado de contaminacin fecal de los alimentos y d el agua. Algunos microorganismos intestinales como E. coli son parte de la flora normal producen enfermedades de manera accidental en tanto que otros como Salmonella son patgenos para el hombre y los animales domsticos de manera regular. Las enterobacterias se eliminan en las heces y contaminan el medio externo donde pueden permanecer viables por mucho tiempo en condiciones favorables, por lo cual estos grmenes son indicadores del grao de contaminacin fecal de los alimentos y del agua Todas las enterobacterias son bacilos Gram negativos, sin agrupacin definida. Ninguna enterobacteria forma esporas. Son aerobias o anaerobias facultativas. Este grupo es amplio y frecuentemente de publican cambios en su clasificacin taxonmica. La E. coli causa diarrea y enteritis en distintas especies animales, adems puede actuar como un patgeno oportunista de procesos miscelneos como mastitis, onfalitis, infecciones de vas urinarias y respiratorias. Adems existen serotipos enteropatgenos que se asocian a la produccin de diarreas en cerdos, bovinos, caprinos y equinos; y serotipos asociados a septicemia en bovinos y aves. El Citrobacter freundii es un patgeno oportunista que se asocia a infecciones miscelneas como las descritas para E. coli. Se puede aislar de mamferos, aves, reptiles y anfibios. La Salmonella enteritidis causa diarreas, septicemia y aborto en distintas especies animales. La Salmonella cholerasuis causa septicemia y neumona en cerdos. La Salmonella gallinarum causa la tifoidea aviar. La Salmonella arizonae se aisla frecuentemente de reptiles clnicamente sanos y bajo ciertas condiciones causa problemas digestivos, tegumentarios y sistmicos en estos animales. El Proteus mirabilis y Proteus vulgaris son patgenos oportunistas ampliamente distribuidos en la naturaleza.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica El Enterobacter aerogenes se asocia a mastitis bovina, se comporta como patgenos oportunista. La Serratia marcescens causa mastitis en bovinos. La Klebsiella pneumoniae acta como oportunista en vas respiratorias y en tracto genital principalmente; es causa comn de mastitis aguda en bovinos y metritis, cervicitis y abortos en yeguas. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de las enterobacterias de mayor importancia en Medicina Veterinaria. PARTICULARES: 1. Realizar la tincin de Gram en las diferentes cepas de trabajo para conocer su morfologa microscpica, afinidad tintorial y agrupacin. 2. Conocer y utilizar los medios ms utilizados para el cultivo in vitro de las enterobacterias as como sus requerimientos atmosfricos. 3. Mencionar las principales especies de cada gnero bacteriano 4. Realizar las pruebas bioqumicas mnimas necesarias para la identificacin de las enterobacterias. 5. Utilizar las tablas de identificacin para confirmar el gnero y la especie de cada microorganismo. 6. Mencionar los principales procesos patolgicos en los que se presentan las enterobacterias. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 4 Horas (dos sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, portaobjetos, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X), tiras de papel filtro. SECCIN: 1 cultivo en agar de E. coli 1 cultivo en agar de Salmonella tiphymurium 1 cultivo en agar de Enterobacter cloacae 1 cultivo en agar de Citrobacter freundii 1 cultivo en agar de Proteus vulgaris o Proteus mirabilis
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 1 cultivo en agar de Pseudomona aeroginosa POR EQUIPO: Agar Sangre Agares selectivos diferenciales: MacConkey, Verde Brillante, XLD, Salmonella-Shigella, Bismuto sulfito. Agar de Triple Hierro y Azcar (TSI) Medio Sim Citrato de Simmons Urea Lisina Descarboxilasa Agar de Fenilalanina Base de rojo de Fenol con Lactosa, glucosa, manitol y maltosa. Medio MIO. Reactivo de Cloruro ferrico. Reactivo de Oxidasa Reactivo de Indol Tren de tincin de Gram Reactivo de KOH al 3% METODOLOGA: 1. Inocule y siembre en cada medio de cultivo, la cepa bacteriana asignada por equipo 2. Realice la tincin de Gram y compruebe con la prueba de KOH al 3% 3. Realice la prueba de Oxidasa, utilizando el papel filtro. 4. Siembre las bioqumicas con la cepa bacteriana asignada por equipo 5. Incube los medios de cultivo y las pruebas bioqumicas a 37 C por 24 horas, concluya la identificacin del microorganismo con base en la tabla de pruebas bioqumicas 6. Observe la morfologa colonia y las reacciones que se observan en cada medio de cultivo. RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS):
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prct icas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que se relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Menciona las principales enterobacterias de importancia Medicina Veterinaria? 2. Cules son las enfermedades que produce y que especie afecta las enterobacterias que mencionaste anteriormente? 3. Qu medios de cultivo y pruebas complementarias necesitaras para confirmar el gnero y especie de las enterobacterias antes mencionadas?
PRACTICA 5: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS NO ENTERICAS (BACTERIAS QUE AFECTAN EL TRACTO RESPIRATORIO: Pasteurella, Mannheimia, Bordetella) UNIDAD DE COMPETENCIA IV: Identificar los principales agentes bacterianos Gram negativos de importancia veterinaria. INTRODUCCIN: Las pasterelas son facultativas, inmviles y poseen cpsula. No forman esporas. Son oxidasa positiva. Habitantes normales de las mucosas de las vas respiratorias altas y del tracto digestivo de animales y hombre. Generalmente se presentan como invasores secundarios produciendo infecciones del tracto respiratorio, mastitis y ocasionalmente septicemicas. La Pasteurella multocida y Mannheimia haemolytica se asocian al proceso multietiolgico denominado fiebre de embarque de los bovinos. La Pasteurella multocida se asocia a procesos neumnicos en bovinos y cerdos. Es uno de los agentes etiolgicos de la rinitis atrfica del cerdo (junto con B. bronchiseptica) y el agente etiolgico del clera aviar. La Mannheimia haemolytica se asocia a procesos neumnicos en ovinos y caprinos, a septicemias en corderos y a problemas de mastitis en ovinos. La Pasteurella pneumotropica es causa de neumonas y abscesos en cuyos, ratas y hamsters. La Pasteurella gallinarum es parte de la microflora normal de la cavidad nasal de pollos y pavos y se comporta como oportunista en problemas respiratorios. La Bordetella bronchiseptica son microorganismos aerobios estrictos, pueden presentar motilidad y generalmente producen cpsulas. No forman esporas. Es una bacteria del epitelio ciliado del tracto respiratorio de diferentes especies animales. Ocasiona la rinitis atrfica del cerdo en asociacin con P. multocida. Tambin se ha aislado a partir de neumonas en roedores, gatos, equinos y perros. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de los gneros Pasteurella, Mannheimia y Bordetella de mayor importancia en Medicina Veterinaria. PARTICULARES: Realizar la tincin de Gram en las diferentes cepas de trabajo para conocer su morfologa microscpica, afinidad tintorial y agrupacin.
Conocer y utilizar los medios ms utilizados para el cultivo in vitro de los gneros Pasteurella, Mannheimia y Bordetella as como sus
requerimientos atmosfricos. Mencionar las principales especies de cada gnero bacteriano Realizar las pruebas bioqumicas mnimas necesarias para la identificacin. Utilizar las tablas de identificacin para confirmar el gnero y la especie de cada microorganismo. Mencionar los principales procesos patolgicos en los que se presentan los gneros Pasteurella, Mannheimia y Bordetella.
LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 4 Horas (dos sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, portaobjetos, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X), tiras de papel filtro. SECCIN: 1 cultivo en agar de Pasteurella multocida 1 cultivo en agar de Mannheimia haemolytica 1 cultivo en agar de Bordetella Bronchiseptica POR EQUIPO: Agar Sangre Agar MacConkey. Agar de Triple Hierro y Azcar (TSI) Medio Sim Urea Base de rojo de Fenol con Lactosa, glucosa, manitol y maltosa. Medio MIO. Reactivo de Oxidasa Reactivo de Indol Tren de tincin de Gram
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Reactivo de KOH al 3% METODOLOGA: 7. Inocule y siembre en cada medio de cultivo, la cepa bacteriana asignada por equipo 8. Realice la tincin de Gram y compruebe con la prueba de KOH al 3% 9. Realice la prueba de Oxidasa, utilizando el papel filtro. 10. Siembre las bioqumicas con la cepa bacteriana asignada por equipo 11. Incube los medios de cultivo y las pruebas bioqumicas a 37 C por 24 horas, concluya la identificacin del microorganismo con base en la tabla de pruebas bioqumicas 12. Observe la morfologa colonia y las reacciones que se observan en cada medio de cultivo. RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Menciona las principales diferencial morfolgica de entre la enterobacterias y bacterias Gram negativas que afectan el tract o respiratorio? 2. Qu medios de cultivo y pruebas complementarias necesitaras para confirmar el gnero y especie de los agentes bacterianos antes mencionados?
PRACTICA 6: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS (COCOS GRAM POSITIVOS PIOGENOS) UNIDAD DE COMPETENCIA V: Identificar los principales agentes bacterianos Gram positivos de importancia veterinaria. INTRODUCCIN: Los estafilococos son microorganismos facultativos, inmviles, generalmente no poseen cpsula y no formas esporas. Algunas cepas producen pigmento cuando se cultivan a 37 C en medios enriquecidos. Son catalasa positiva. Los estiafilococos son microorganismos ubicuos que con frecuencia pueden ser comensales de la piel y mucosas de los animales. Son organismos esfricos que se agrupan en racimos, aunque algunas clulas pueden encontrarse solas, en pares o en cadenas muy cortas. Son fuertemente Gram positivos. El Staphylococcus aureus produce una gran variedad de infecciones supurativas en heridas, endometritis, cistitis, piodermas en corderos, perros, gatos y en aves se produce tambin en abscesos. El Staphylococcus hycus, se asocia a la entidad clnica especfica del cerdo conocida como epidermitis exudativa. El Staphylococcus intermedius se asocia a piodermas, otitis, conjuntivitis, osteomielitis y rara vez mastitis en perros. El Staphylococccus saprophyticus es un patgeno oportunista. Los estreptococos son microorganismos facultativos, generalmente inmviles, algunas especies poseen cpsula y no formas esporas. Con excepcin de algunas especies de los grupos B y D, no producen pigmento. Son catalasa negativo. Los estrepto cocos son parsitos de las mucosas de los animales y el hombre. Dadas las condiciones apropiadas, pueden convertirse en grmenes oportunistas, asocindose a una gran variedad de procesos pigenos. Las colonias de los estreptococos a las 24 hrs de incubacin a 37 C en aerobiosis son de 1 a 2 mm de dimetro, circulares convexas, grisceas o translucidas en forma de gotas de roco. La mayora de las cepas patgenas producen hemlisis o , lo cual se ve incrementado cuando se cultivan en atmsfera con 10% de CO 2. Son organismos esfricos u ovoides que se agrupan en cadenas cuando son cultivados en medios lquidos. Son Gram positivos.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica El Streptococcus zooepidemicus y Str. equisimilis producen cervicitis, metritis, abortos, poliartritis y mastitis en equinos; tambin producen procesos pigenos en bovinos y cerdos. El Streptococcus zooepidemicus y Str. equi producen la gurma o papera de los potros. El Streptococcus zooepidemicus, Str. faecalis y Str. faecium se involucran en diferentes procesos patolgicos de las aves. El Streptococcus agalactiae, Str. disgalactiae y Str. uberis son importantes agentes etiolgicos de mastitis bovina. El Streptococcus canis es agente etiolgico de diferentes procesos purulentos en perros. El Streptococcus suis es el agente etiolgico de la linfadenitis estreptococcica del cerdo.
OBJETIVOS: GENERAL: El alumno describir las caractersticas de cultivo, morfolgicas y bioqumicas ms relevantes de los gneros Staphylococcus spp y Streptococcus spp de mayor importancia en Medicina Veterinaria. PARTICULARES: Realizar la tincin de Gram en las diferentes cepas de trabajo para conocer su morfologa microscpica, afinidad tintorial y agrupacin. Conocer y utilizar los medios ms utilizados para el cultivo in vitro de los gneros Staphylococcus spp y Streptococcus spp as como sus requerimientos atmosfricos. Mencionar las principales especies de cada gnero bacteriano Realizar las pruebas bioqumicas mnimas necesarias para la identificacin. Utilizar las tablas de identificacin para confirmar el gnero y la especie de cada microorganismo. Mencionar los principales procesos patolgicos en los que se presentan los gneros Staphylococcus spp y Streptococcus spp. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 4 Horas (dos sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, portaobjetos, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X). SECCIN:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 1 cultivo en agar de Staphylococcus aureus 1 cultivo en agar de Staphylococcus epidermidis 1 cultivo en agar de Streptococcus agalactiae 1 cultivo en agar de Streptococcus disgalactiae 1 cultivo en agar de Steptococcus hemolitico 1 cultivo en agar de Enterococcus faecalis POR EQUIPO: 1. Plasma de Conejo. 2. Agar sangre. 3. Medio selectivo (Staphylococcus): Agar sal y manitol, Agar staphylococcus 110 Agar Chapman stone. 4. Agar sangre con azida de sodio 5. Agar MacConkey 6. Agua Oxigenada (reactivo de catalasa). 7. Agar de Triple Hierro y Azcar (TSI) 8. Urea 9. Base de rojo de Fenol con Lactosa, glucosa, manitol, trehalosa, sorbitol y maltosa. 10. Medio MR-VP. 11. Tren de tincin de Gram 12. Reactivo de KOH al 3% METODOLOGA: Inocule y siembre en cada medio de cultivo, la cepa bacteriana asignada por equipo Realice la tincin de Gram y compruebe con la prueba de KOH al 3% Realice la prueba de catalasa, y se realizara la prueba de coagulasa en portaobjetos. Siembre las bioqumicas con la cepa bacteriana asignada por equipo Incube los medios de cultivo y las pruebas bioqumicas a 37 C por 24 horas, concluya la identificacin del microorganismo con base en la tabla de pruebas bioqumicas Observe la morfologa colonia y las reacciones que se observan en cada medio de cultivo. RESULTADOS:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Menciona las principales diferencial morfolgica de entre las bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas? 2. Cules son los las diferencias mas caractersticas entre Staphylococcus y Streptococcus? 3. Qu medios de cultivo y pruebas complementarias necesitaras para confirmar el gnero y especie de los agentes bacterianos antes mencionados? PRACTICA 7 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE AGENTES MICOTICOS UNIDAD DE COMPETENCIA VII: Identificar los principales agentes micticos de importancia veterinaria. INTRODUCCIN: Los dermatofitos forman un grupo de hongos relacionados taxonmicamente, que muestran afinidad por tejidos queratinizados tales como piel, pelo, plumas, uas, y cuernos. Dentro de este grupo de hongos se incluyen tres gneros: Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton, de los cuales nicamente los dos ltimos tienen importancia en Medicina Veterinaria. La mayora de los dermatofitos son habitantes del suelo. Algunas especies que se han adaptado al husped son parsitos de los animales. Las infecciones por dermatofitos se conocen como dermatofitosis y se caracterizan por producir lesiones superficiales. En los animales domsticos no existe diferencia clnica notoria en cuanto a tipo y forma de las lesiones. Estas son generalmente circulares, con descamacin, alopecia y prurito, con o sin formacin de costras. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno describir las caractersticas de cultivo y morfolgicas ms relevantes de las micosis ms importantes del grupo de los dermatofitos de mayor importancia en Medicina Veterinaria.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica PARTICULARES: Realizar la tincin de Lactofenol azul de Algodn en las diferentes muestras de trabajo para conocer su morfologa microscp ica. Conocer y utilizar los medios ms utilizados para el cultivo in vitro, as como sus requerimientos atmosfricos. Mencionar las principales especies de cada gnero micotico Utilizar las tablas de identificacin para confirmar el gnero y la especie de cada microorganismo. Mencionar los principales procesos patolgicos en los que se presentan los gneros pertenecientes al grupo de los dermatofitos. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 4 Horas (dos sesiones, separadas por una semana una de otra) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, portaobjetos, cubreobjetos, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 30 C (temperatura constante). Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X), Hojas y mangos de Bistur, pinzas sin dientes de uso clnico. POR EQUIPO: Agar sangre. Medio selectivo: Agar sabouread, agar para hongos o agar tripticasa de soya. Agar MacConkey Base de rojo de Fenol con Lactosa, glucosa, manitol, trehalosa, sorbitol y maltosa. Tren de tincin lactofenol azul de algodn METODOLOGA: PREPARACIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA: La muestra ha utilizar para el aislamiento e identificacin micologica debe ser caracterstica, y debe ser tomada bajo las debidas medidas de bioseguridad exigidas para este genero y del tamao adecuado, y procesarse inmediatamente. PROCEDIMIENTO: 1. Con un Hisopo estril se toma la muestra y se siembra en una caja de Agar Sabouread o agar para hongos y sembrar en forma de cultivo puro a 30 C por lo mnimo 24 hrs.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 2. Sembrado en el microcultivo: Dentro de una caja petr estril agregar entre 2 a 4 ml de agua destilada esteril. Colocar un soporte y poner un portaobjetos con un cuadro de Agar Sabouread o Agar para hongos de aproximadamente 1 cm2. Con el asa tomar la muestra y sembrar por picadura en cada lado del agar, posteriormente colocar el cubreobjetos, tapar la ca ja e incubar de 25 a 30 C de entre 24 a 120 hrs aprox. Una vez observado crecimiento se procede a la realizacin del frotis. 3. Preparacin del frotis. Introduce un algodn impregnado con formol al 10 % en la caja y djalo actuar durante 30 minutos con el fin de inactivar al h ongo. En un portaobjetos coloca dos gotas separadas de lactofenol azul de algodn. Con las pinzas toma cada uno de los cubreobjetos y colcalos sobre cada una de las gotas del colorante. Obsrvese las preparaciones en el microscopio de campo claro con los objetivos 10 X y 40 X Observa las estructuras fungales y sus caractersticas morfolgicas.

a) b) c) d)
INTERPRETACIN DE RESULTADOS: La identificacin se lleva a cabo mediante la observacin de las colonias fungales y la preparacin de frotis hmedos a parti r de estas o a partir de microcultivos con el fin de determinar la morfologa microscpica. 1. Identificacin en medio de cultivo: Las cajas de estos medios deben ser revisadas peridicamente hasta por 190-200 hrs a 30 C y observar la textura, tamao y pigmento de la superficie y base de las colonias desarrolladas. La mayora de los dermatofitos producen colonias con micelio de aspecto algodonoso o polvoso. 2. Tincin de Azul de Algdon: Los dermatofitos producen dos tipos de aleuriosporas; las macroaleuriosporas (multicelulares, septadas) y las microaleuriosporas (unicelulares, no septadas) la morfologa caracterstica de dichas estructuras permite la identificacin de cada una de las especies. El Epidermophyton produce abundantes macroaleuriosporas de pared gruesa y lisas, en forma de raqueta y no produce microaleuriosporas. El Trichophyton produce pocas macroaleuriosporas con forma alargada (forma de basto), de pared lisa y delgada, y produce abundantes microaleuriosporas. El Microsporum produce abundantes macroaleuriosporas en forma de huso, con pared gruesa y spera (a menudo descritas como ornamentadas) y produce pocas microaleuriosporas. Otras estructuras microscpicas que ocasionalmente son tiles para la ide ntificacin de los dermatofitos son la presencia de hifas espirales o en forma de peine (hifas pectinadas); la presencia de clamidosporas terminales; de artrosporas, etc.
RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prct icas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que se relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Menciona las principales diferencial morfolgica de entre las bacterias y los hongos microscpicos? 2. Qu diferencia hay entre la tincin de Gram y la diferencia de la tincin Lactofenol azul de algodn? 3. Qu medidas de bioseguirdad realizarias para manejar y trabajar en enfermedades micoticas? ANEXOS:
PRACTICA 8 DETERMINACIN DE LA SENSIBILIDAD in vitro A LOS ANTIMICROBIANOS UNIDAD DE COMPETENCIA VIII: Identificar los mecanismos de accin y resistencia de los antimicrobianos utilizados en medicina veterinaria INTRODUCCIN: En la actualidad se encuentra una gran cantidad de antibiticos en el mercado, algunos solamente son especficos para determi nadas bacterias, otros nicamente las inhiben y otros actan solo sobre las Gram positivas. Debido al abuso de los antibiticos, las bacterias han adquirido resistencia a ellos, de ah que cuando se presenta un pacien te resistente a ellos, de ah que cuando se presenta un paciente en el que no surten efectos los antibiticos, se debe considerar que el microorganismo que lo esta infectando se ha hecho resistente. En la seleccin del antibitico ms adecuado para el tratamiento de una infeccin bacteriana se deben tomar en cuenta diversos factores que dependen tanto del tipo de antibitico elegido y de su efecto sobre el agente causal que se aslo del proceso infeccioso. Se han propuesto diversos para medir in vitro la susceptibilidad bacteriana a los antibiticos, de los cuales el ms popular es el llamado sensibilidad con discos. Las pruebas de susceptibilidad bacteriana por el mtodo de difusin en Agar son pruebas cualitativas en las que se utilizan d iscos de papel filtro impregnado con concentraciones conocidas de los diferentes antibiticos. Estos discos se colocan sobre la superficie de las cajas de Agar previamente inoculadas con la cepa problema. Despus de la incubacin se observan halos de inhibicin de desarrollo bacteriano alrededor de los discos con antibiticos a los cuales el microorganismo es susceptible. Por el contrario, si la bacteria es resistente hay crecimiento alrededor del disco. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno determinara la susceptibilidad a los antimicrobianos empleados para Gram positivos y Gram negativos mediante la tcnica de Bauer-Kirby. LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 4 Horas (dos sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, pinzas sin dientes de uso clnico, Comps de calibracin, Vernier, regla o platilla diseada para este propsito, hisopos estriles, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). SECCIN: 1 cultivo en agar de E. coli 1 cultivo en agar de Staphylococcus spp Medio Agar Muller-Hinton Caldo Muller-Hinton Multidiscos de 12 antibiticos para bacterias Gram positivos (Sanofi Diagnostics Pasteur, S. A.) Multidiscos de 12 antibiticos para bacterias Gram negativos (Sanofi Diagnostic Pasteur, S. A.) METODOLOGA: PREPARACIN Y ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA: Preparar el medio de Agar de Mueller-Hinton de acuerdo a las instrucciones del fabricante, el pH final a temperatura ambiente deber estar entre 7.2 y 7.4, este medio favorece el crecimiento de casi todos los microorganismos para los que son ms importantes las pruebas de susceptibilidad. Tomar con una asa bacteriolgica de 4 o 5 colonias aisladas del mismo tipo morfolgico e inocular en 4 o 5 ml de Caldo MuellerHinton, se incuba a 35 C hasta que aparece una turbidez ligera (generalmente 2 a 5 horas), la turbidez se ajusta con soluci n salina estril o caldo estril hasta tener una densidad comparable, con un estndar de sulfato de bario [El estndar se prepara mezclando 0.5 ml de BaCl 2 0.048 M (1.175 % peso/volumen de BaCl22H20) con 99.5 ml de H2SO4 al 1% v/v (0.36N)]. La suspensin ajustada del inculo no debe permanecer ms de 15 a 20 minutos antes de proceder a sembrarla en la caja de Petr. PROCEDIMIENTO: 1. Para inocular el Agar se utiliza un hisopo estril de algodn, el cual se humedece con la suspensin, se quita el exceso de c aldo presionado y girando el hisopo sobre la pared interna del tubo, por arriba del nivel del caldo, se estra el medio en tres direcciones sobre la totalidad de la superficie de Agar, para obtener un inculo uniforme, se efecta un ultimo barrido del hisopo sobre el reb orde de la caja de Petr y el Agar. Cuando el inculo ha secado (de 3 a 5 minutos) se procede a colocar los discos.
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica 2. Los discos se toman con pinza estril y se colocan en el medio en un tiempo menor de 15 minutos despus de haber inoculado la placa, los discos debern presionarse ligeramente para asegurar un contacto con la superficie, deber prevenirse una sobreposicin de las zonas de inhibicin con la distribucin adecuada de los discos y con un lmite no menor de 15 mm de los bordes de la placa. 3. Despus de 15 minutos de haber colocado los discos, invertir la caja de Petr e incubar a 35 C. El tiempo de incubacin es de 18 a 24 horas. INTERPRETACIN: La medicin de los halos de inhibicin se hace con comps de calibracin, Vernier, regla o platilla diseada para este propsito, por el fondo de la caja la cual se ilumina con luz reflejada. El punto final de todos los sistemas de lectura ser hasta la completa inhibicin del crecimiento determinada visualmente, ignorando colonias tenues o muy pequeas que pueden ser observadas con minuciosidad (Ver nexos). RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte d e prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica. CUESTIONARIO: 1. Que otros medios de cultivo se pueden utilizar para preparar el inculo? 2. Como sabremos que el tubo con el inculo ya esta listo para ser sembrado? 3. Que otros medios de cultivo se pueden utilizar en lugar de Mueller-Hinton? ANEXOS:
ANTIBITICO
CONCENTRACIN (MICROGRAMOS/ML)
AMIKACINA AMPICILINA ENTEROBACTERIACEAE Staphylococcus spp. ENTEROCOCO OTROS ESTREPT. CARBENICILINA ENTEROBACTERIACEAE Pseudomona CEFALOTINA CEFOTAXIMA CEFTAZIDIMA CETRIAXONA CEFUROXIMA CLORANFENICOL DICLOXACILINA ESTAFILOCOCOS ENOXACIMA ERITROMICINA GENTAMICINA NETILMICINA NITROFURANTOINA PEFLOXACINA
30 10
DIMETRO DEL HALO DE INHIBICIN EN mm Resistente Intermedio Sensible (MENOR O (ENTRE) (MAYOR IGUAL) O IGUAL) 14 15-16 17 11 28 16 21 12-13 14 29 17 30 23 17 18 23 18 21 18 18 13 18 18 15 15 17 23
22-29 18-22 14-16 15-17 15-22 15-17 14-20 15-17 13-17 11-12 15-17 14-17 13-14 13-14 15-16 15-22
100 17 13 14 14 14 13 14 12 10 14 13 12 12 14 14
30 30 30 30 30 30 1 10 15 10 30 300 5
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica PENICILINA ESTAFILOCOCOS N. GONORREAE ENTEROCOCOS OTROS ESTREPT. TETRACICLINA TRIMETROPRIMSULFAMETOXAZOL 10 U 28 19 14 19 14 10 29 20 20 19 16
30 25
15-18 11-15
PRACTICA 9 PROCESAMIENTO DE MUESTRA ENVIADAS AL LABORATORIO DE BACTERIOLOGA Y MICOLOGA (LECHE, HECES Y PROCESOS PIOGENOS) UNIDADES DE COMPETENCIA QUE SE RELACIONAN CON LA PRCTICA: UNIDAD DE COMPETENCIA I, III, IV, V, VI, VIII INTRODUCCIN: Un adecuado diagnstico y tratamiento de las diversas enfermedades producidas por bacterias y hongos, generalmente requiere de la deteccin e identificacin del agente etiolgico. Esto se logra en el laboratorio a travs del examen microscpico, aislamien to e identificacin del agente y la prueba de susceptibilidad bacteriana a los antimicrobianos. Una vez que la muestra han sido debidamente registradas e identificadas, lo ideal es que sean trabajadas de inmediato, pero cuando esto no sea posible ser necesario mantenerlas en refrigeracin hasta que puedan ser procesadas. Sin embargo, es conveniente considerar que existen muestras que deben ser trabajadas de inmediato ya que el proceso de refrigeracin no puede lograr que se conservan sin presentar alteraciones y multiplicaciones bacterianas, aunque sea a ritmo ms lento, por ejemplo: orina, semen, agua, material fecal y leche. OBJETIVOS: GENERAL: El alumno aplicar los conocimientos para la realizacin del diagnstico bacteriolgico y micolgico de muestras clnicas como son: observacin directa, aislamiento e identificacin de los microorganismos aislados en leche, heces y procesos piogenos. PARTICULARES: Establecer conforme a los lineamientos de conservacin y envo de muestras al laboratorio para decidir si la muestra es acep tada o rechazada para su anlisis. Conocer los datos importantes de una historia clnica pertinente, para orientar el diagnstico bacteriolgico y micolgico. Realizar la observacin directa y cultivo a partir de las muestras antes mencionadas. Realizar la identificacin de los microorganismos aislados a partir de las muestras antes mencionadas. Emitir el diagnstico bacteriolgico o micolgico de las muestras analizadas.
Realizara la sensibilidad in vitro a los antimicrobianos de los microorganismos de importancia aislados

LUGAR DE REALIZACIN: Laboratorio de prcticas de la FMVZ-UAEM, bajo el apoyo del Departamento de Prcticas de la Facultad TIEMPO DESTINADO A LA PRCTICA: 8 Horas (cuatro sesiones) MATERIAL: GENERAL: Asas bacteriolgicas graduadas, asas bacteriolgicas rectas, portaobjetos, papel secante, solucin desinfectante, marcador permanente, Mechero, Estufa Bacteriolgica a 37 C (temperatura constante). Microscopio ptico binocular de campo claro (con objetivos de 4X, 10X, 40X, 100X), tiras de papel filtro. POR EQUIPO: Agar Sangre Agares selectivos: MacConkey, Sal y manitol, Agar dextrosa y papa Agar de Triple Hierro y Azcar (TSI) Medio Sim Citrato de Simmons Urea Lisina Descarboxilasa Agar de Fenilalanina Base de rojo de Fenol con Lactosa, glucosa, manitol y maltosa. Medio MIO. Reactivo de Cloruro ferrico. Reactivo de Oxidasa Reactivo de Indol Tren de tincin de Gram Reactivo de KOH al 3% METODOLOGA: LECHE:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica La siguiente metodologa es la sugerida por el Consejo Nacional de la Mastitis de los Estados Unidos de Amrica, en su publicacin procedimientos de diagnstico de la mastitis bovina a) b) c) d) Las muestras refrigeradas deben ser calentadas a 25 C durante 15 minutos con el fin de liberar los microorganismos atrapados en la grasa de la leche. La muestra debe agitarse vigorosamente para homogenizarla. Inmediatamente proceda a realizar dos frotis fijo, teir con Gram, obsrvalos y anota los resultados. Inocula 3 asadas de la muestra (son necesarias por los menos 0.025 ml) en la caja de agar sangre, agar MacConkey, agar Sal y Manitol y a partir de este inculo realiza la primera estra y completa la tcnica para aislamiento en cultivo puro. Incuba 24 horas a 37 C, en algunos casos ser necesario incubar hasta 48 hrs. De las colonias aisladas describe nmeros relativos y morfologa macroscpica. Realiza un frotis a partir de las colonias representativas del aislamiento y describe forma, agrupacin y reaccin al Gram. Realiza las pruebas de identificacin necesarias para determinar gnero y especie. Realizar un antibiograma y determinado la sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos aislados. Emite un resultado definitivo y de acuerdo a este sealando los comentarios y/o recomendaciones tiles para el clnico.
e) f) g) h) i)
HECES: a) Realiza un frotis fijo a partir de la muestra y teir con Gram, obsrvarlo y anotar los resultados. NOTA: Debido a que las heces contiene una microflora normal abundante el valor diagnstico del frotis tiene un valor relativo sa lvo algunas excepciones importantes. b) Inocular una asada de la muestra en la caja de agar sangre, agar MacConkey, agar Sal y Manitol y realizar la tcnica para aislamiento en cultivo puro. Incuba a 37 C durante 24 horas. c) Inocular aproximadamente 0.500 grs de la muestra en el tubo con caldo selenito. Incuba a 37 C durante 6-18 hrs y subcultivar en el medio de verde brillante con la tcnica para aislamiento en cultivo puro. Incuba a 37 C durante 24 hrs. d) Observar el desarrollo bacteriano en los medios de verde brillante y MacConkey y describir nmeros relativos y morfologa de las colonias aisladas. e) Realizar un frotis fijo a partir de las colonias representativas del aislamiento, teir con Gram y describir agrupacin y reaccin tintorial. f) Realizar las pruebas bioqumicas necesarias para determinar el gnero y especie del microorganismo aislado. g) Realizar un antibiograma y determinado la sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos aislados. h) Emitir un resultado definitivo y de acuerdo con este, sealar los comentarios y/o recomendaciones tiles para el clnico. PROCESOS PIOGENOS:
Universidad Autnoma del Estado de Mxico Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Programa de Practicas de la Unidad de Aprendizaje: Bacteriologa y Micologa rea de Docencia: Salud Pblica a) Con uno de los hisopos siembra en el 1er. cuadrante de la caja de Agar y realizar un frotis directo a partir de la muestra. Teir con Gram, obsrvar y anota forma, agrupacin, reaccin tintorial y nmeros realtivos. b) Con el asa, se siembra para aislamiento en cultivo puro en la caja de agar sangre, agar MacConkey, agar Sal y Manitol. c) Incubar los medios a 37 C durante 24 hrs. d) De las colonias aisladas en el agar sangre describir nmero relativos y morfologa macroscpica. e) Realizar las pruebas de identificacin necesarias para determinar gnero y especie de las colonias que desarrollaron en agar sangre. f) Realizar un antibiograma y determinado la sensibilidad antimicrobiana de los microorganismos aislados. g) Emitir un resultado definitivo de acuerdo a esta seala los comentarios y/o recomendaciones tiles para el clnico. RESULTADOS: Con la informacin obtenida durante la prctica y la posterior investigacin que tendr que realizar el alumno, entregara un reporte de prctica tal como lo solicite el docente. EVALUACIN (CRITERIOS): Cada docente establecer los criterios de evaluacin para otorgar una calificacin durante la prctica y del reporte de prcticas, con la finalidad medir el grado de adquisicin de conocimientos, habilidades, aptitudes/valores de las unidades de competencia que s e relacionen con la prctica.
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rea de Docencia: Salud Pblica

Fecha de elaboracin : 24-01-05 Fecha de revisin: 04/06/10

Tipo de Unidad de Aprendizaje CURSO

Carcter de la Unidad de Aprendizaje

Aprendizaje Unidad de Consecuente NINGUNA

PROGRAMA DE PRCTICAS DE LA UNIDAD DE APRENDIZAJE DE BACTERIOLOGA Y MICOLOGA No. PRCTICA

HISOPOS, JERINGAS, FRASCOS O BOLSAS DE PLASTICO.

CATTER, JERINGA, FRASCO, BOLSA DE PLSTICO.

Realizara la sensibilidad in vitro a los antimicrobianos de los microorganismos de importancia aislados

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