"OBSERVANDO MI PROPIO ADN"

Resumen
Lo que pretendo con esta publicacin es que conozcamos en mayor profundidad el interior de las clulas, ms concretamente el ADN (cido desoxirribonuclico), presente en el ncleo de cada una de nuestras clulas.

Palabras clave
ADN (cido desoxirribonuclico) Bases nitrogenadas Nucletido Cromatina Cromosomas Genoma Diploide

1. INTRODUCCIN
Es mucha la importancia que tiene el ADN en nuestro cuerpo ya que es la "mquina" que nos permite ser quien somos, ser como somos y simplemente ser. Por ello hablar de sus descubridores, de su estructura, de su organizacin y de sus funciones. Tambin explicar una pequea prctica, muy sencilla, gracias a la cual podemos observar el ADN de las clulas de nuestra mucosa bucal. Finalizar comentando la importancia del Genoma Humano. 2.QU ES EL ADN? El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y tambin DNA, del ingls DeoxyriboNucleic Acid), es un tipo de cido nuclico, que forma parte de todas las clulas y contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los seres vivos. Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polinucletido formado por nucletidos unidos entre s. A su vez cada nucletido est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina (A), timina (T), citosina (C) o guanina(G) y un grupo fosfato . La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena es la que codifica la informacin gentica. En los organismos vivos, y por lo tanto en el ser humano, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno.

3.ESTRUCUTURA DEL ADN

El ADN posee varias estructuras: Estructura primaria: es la secuencia de nucletidos. Estructura secundaria: es la disposicin en el espacio de la estructura primaria. Es el modelo postulado por Watson y Crick (doble hlice), del que hablar posteriormente. Estructura terciaria: el ADN se une a protenas histnicas y no histnicas dando lugar a la aparicin de los

cromosomas.

4.WATSON Y CRICK. ESTRUCTURA SECUNDARIA

James Watson y Francis Crick, gracias a la colaboracin de Maurice Wilkins y Rosalind Franklin quienes les proporcionaron fotografas de ADN cristalizado capturadas mediante rayos X, descubrieron (28 de febrero de 1953) que los componentes del ADN se agrupaban siempre de la misma manera dando lugar a la estructura secundaria en la que las bases nitrogenadas se agrupaban en parejas (Adenina-Timina y Guanina-Citosina), unidas por molculas de azcar (desoxirribosa) y grupos de fosfato, estabilizandose esta estructura gracias a puentes de hidrgeno. Gracias a esto llegaron a las siguientes conclusiones:

El ADN es una doble hlice, de 2nm de dimetro, formada por dos cadenas de polinucletidos enrolladas alrededor de un eje imaginario en el que las bases nitrogenadas se encuentran en el interior unidas entre s (la adenina se empareja siempre con la timina mediante dos puentes de hidrgeno, mientras que la citosina se empareja siempre con la guanina). La estructura recuerda a una escalera de caracol en la que los peldaos son las bases nitrogenadas y los pasamanos las cadenas formadas por el azcar y el cido fosfrico. El enrollamiento de la cadena es dextrgiro, es decir, gira hacia la derecha. Las dos cadenas de polinucletidos son antiparalelas, es decir, estn orientadas en sentidos opuestos y adems son complementarias, o lo que es lo mismo, existe una correspondencia entre las bases nitrogenadas.

Watson y Crick ganaron el Premio Nobel de Medicina y Fisiologa en 1962, por sus descubrimientos acerca de la estructura molecular de los cidos nuclicos y su importancia para la transferencia de la informacin en la materia viva, 5. ORGANIZACIN DEL ADN El ADN se asocia a protenas formando la cromatina cuyo mximo grado de compactacin forma los cromosomas. El cromosoma ms estudiado es el metafsico (la metafase es una de las fases de la mitosis o divisin celular) y es del que mejor se conoce su estructura. Consta de dos cromtidas paralelas entre s unidas mediante una estructura llamada centrmero.

El centrmero divide al cromosoma en dos brazos que pueden ser del mismo o de diferente tamao En cada uno de los extremos del cada cromosoma existen unas estructuras llamadas telmeros que evitan que se pierda informacin gentica durante la replicacin (duplicacin del ADN).

cromtidas

constriccin satlite secundaria

El nmero de cromosomas es constante para todas las clulas del organismo, excepto para las clulas sexuales. En el ser humano todas las clulas (excepto las clulas sexuales que son haploides) son diploides, es decir, tienen dos parejas de cromosomas, uno heredado del padre y el otro de la madre y cuentan con un total de 46 cromosomas. Los cromosomas forman parejas de cromosomas homlogos (23 pares de cromosomas homlogos) conteniendo informacin gentica para los mismos caracteres (color de piel, de ojos...) Estos cromosomas constituyen lo que recibe el nombre de genoma, es decir, todo el material gentico contenido tanto en el ncleo como en las mitocondrias.

6.FUNCIONES DEL ADN

Las funciones biolgicas del ADN son: Almacenamiento de informacin gentica. Codificacin de protenas gracias a la transcripcin y traduccin. La secuencia de nucletidos a lo largo de una hebra de ADN se transcribe a un ARN mensajero (ARNm) y esta secuencia a su vez se traduce a una protena que un organismo es capaz de sintetizar o "expresar" en uno o varios momentos de su vida, usando la informacin de dicha secuencia. Autoduplicacin o replicacin del ADN. Mediante este proceso se obtienen rplicas o copias idnticas de una molcula de ADN, para asegurar la transmisin de la informacin a las clulas hijas durante la divisin celular. 1.PROYECTO GENOMA HUMANO Y SU IMPORTANCIA PARA EL SER HUMANO El genoma humano es el material gentico contenido en las clulas del hombre, es la secuencia de ADN contenida en 23 pares de cromosomas presentes en el ncleo de cada clula humana diploide

Cada persona tiene su propio genoma, el cual guarda una gran similitud (99,8%) con todos los de su propia especie y tan solo se diferencia de la del chimpanc en algo ms del 1%. Esa informacin, que se encuentra almacenada en todas y cada una de sus clulas y que le define e identifica como ser nico e independiente, es lo que conocemos como su patrimonio gentico o genoma. El genoma humano, ese gran libro de la vida que contiene las instrucciones que determinan las caractersticas fsicas y en parte psicolgicas e intelectuales del individuo, ha sido recientemente descifrado en ms del 99% de su totalidad, gracias al esfuerzo de un consorcio pblico internacional (Proyecto Genoma Humano) y una empresa privada (Celera). Pero, habr que esperar algunos aos ms, hasta disponer de la informacin completa del genoma. Con este proyecto se pretende conseguir interpretar y comprender la informacin, saber la localizacin y relevancia de cada uno de los genes as como sus implicaciones en el diagnstico de las enfermedades y en la teraputica personalizada de cada individuo. En este sentido, la secuenciacin del genoma abre una nueva avenida en el conocimiento y fundadas expectativas de inters en el rea socio-sanitaria. Pero quedan todava importantes cuestiones por resolver antes de que estas expectativas sean una realidad. Los conocimientos requeridos para el avance del conocimiento sobre el genoma humano requieren al menos tres etapas consecutivas: El genoma es el soporte de un potencial desarrollo fsico del individuo y su manifestacin definitiva viene tambin definida por los factores ambientales que modulan la expresin del genoma de cada persona. En la actualidad los expertos estn de acuerdo en que ms de 6.000 enfermedades tiene un origen claramente hereditario y de ellas, tan solo en un 3% de los casos se ha podido llegar a identificar el gen responsable de la misma. Enfermedades como el Parkinson, Alzheimer, hemofilia, Sndrome de Down, multitud de patologas cardiacas, etc. podran beneficiarse directamente de los avances en el conocimiento del genoma pero, las aplicaciones diagnsticas y teraputicas podran incrementarse por un factor importante, considerando que la manipulacin gentica de clulas puede ser utilizada tambin de forma indirecta con fines teraputicos, modificando o modulando la expresin gnica de clulas normales, por ejemplo con el fin de potenciar la respuestas del sistema inmunitario, como es el caso de las vacunas. Esto abre tambin nuevas expectativas en el diagnstico y tratamiento de enfermedades adquiridas, como son el cncer, las enfermedades infecciosas, etc. En este contexto, surge la terapia gnica como una parte especializada de este conocimiento que pretende estudiar y evaluar la posibilidad de reparar, sustituir o silenciar parte del repertorio gentico de las clulas, con fines teraputicos Debemos insistir en que el genoma humano es uno de los ms valiosos patrimonios del ser humano y, por tanto, su informacin gentica debe ser considerada como un patrimonio indiscutible de la humanidad. 8. EXTRACCIN DE ADN A continuacin explicar dos maneras diferentes para extraer ADN. En la primera de ellas se extraer el ADN de clulas de la mucosa bucal y en la ltima el de clulas vegetales de un modo ms sencillo y al alcance de todos.

8.1- Extraccin de ADN de clulas animales

- Objetivo En esta prctica realizaremos la extraccin del ADN de clulas humanas procedentes de la superficie de la mucosa bucal. De esta manera podemos aplicar de manera directa los conocimientos tericos adquiridos, poniendo de manifiesto la estructura fibrilar del ADN y el extraordinario grado de empaquetamiento que ste tiene en el ncleo celular. -Material necesario: -Agua mineral

-Detergente tipo lavavajillas -Alcohol absoluto muy fro -Sal comn (NaCl) -Cucharillas de plstico -Vasos de precipitados de 50ml -Pipeta o pipetas Pasteur -Palillos o varillas de vidrio -Portas -Colorante bsico (hematoxilina) -Fundamento El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario romper las clulas para separar el ncleo, romper ste para liberar el ADN, separarlo de las protenas y precipitarlo para extraerlo de la solucin. Aparecer como un agregado de fibras blanquecinas que se adhieren a la varilla de vidrio o al palillo. Por ltimo, se puede conservar en alcohol o bien situarlo sobre un porta, teirlo con un colorante bsico y observarlo al microscopio. -Procedimiento 1. Preparar un tubo de ensayo con alcohol absoluto (tambin vale etlico de 96) por cada alumno y poner a enfriar lo mximo que sea posible, por ejemplo en bao de agua con hielo, mientras se realizan los pasos siguientes. 2.Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enrgicamente durante al menos medio minuto para arrastrar el mayor nmero posible de clulas de descamacin de la mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado saliva para eliminar la accin de los enzimas contenidos en ella). 3.Mientras tanto poner una pequea cantidad de agua destilada (o mineral) en el mismo vaso, unos 20ml, y aadimos dos pizcas de sal comn y un par de gotas de detergente lavavajillas, removiendo suavemente para disolver estos componentes evitando la formacin de espuma. 4.Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solucin anterior y remover con la cucharilla suavemente durante varios minutos para que acten la sal y el detergente, evitando la formacin de espuma. 5.A continuacin, aadir la solucin suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol muy fro dejndola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado, ms denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formar un sobrenadante por encima de la fase acuosa en la que se encuentra el ADN en disolucin provocando que ste precipite. 5.Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua formando una masa blanquecina que asciende lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. 6.Recoger el ADN utilizando un palillo, una varilla de vidrio o una pipeta Pasteur. Para ello se introduce en la interfase y se gira con suavidad mientras se extrae lentamente. 7.Se puede depositar una pequea cantidad sobre un porta y teir 3 minutos con un colorante bsico; luego observar al microscopio.

8.2- Extracin de ADN de clulas vegetales.

Puesto que el mtodo explicado en el apartado anterior puede no sea posible desarrollarlo en un centro de enseanza por falta de material (reactivos...), indicar un mtodo que se puede realizar perfectamente en un IES, facultad o incluso en casa. La principal diferencia con el anterior es que en este caso el ADN es de origen vegetal y no humano. En este caso la extraccin de ADN de una muestra celular (cebolla, ajo, tomate.) se basa en el hecho de que los iones salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y posterior extraccin de la clula. - Materiales

S Una muestra vegetal (cebolla) S Agua destilada o mineral S Sal de mesa S Bicarbonato sdico S Detergente lquido o champ S Alcohol isoamlico a 0C S Colador S Vaso S Tubo de ensayo S Varilla fina - Realizacin 1.Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un bao de hielo triturado: -120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. -1,5 g de sal de mesa. -5 g de bicarbonato sdico. -5 ml de detergente lquido o champ. 2.Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos. 3.Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas a la accin del detergente. 4.Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms fino posible 5.Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir 10 ml de alcohol isoamlico enfriado a 0C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre el tampn. 6.Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. Lo que se ha hecho ha sido lisar (romper) las clulas vegetales mediante un detergente, vaciar su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas.Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se fraccionan en cadenas ms pequeas y separadas de l por accin del detergente. Finalmente se extrae el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para usando el alcohol isoamlico (probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele haber en una cocina). El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que, entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se unan al ADN.

9.CONCLUSIN
Desde mi punto de vista pienso que ha quedado bastante claro qu es el ADN, cul es su importancia y cmo el desarrollo de la ciencia ha permitido llevar a cabo el Proyecto del Genoma Humano, y todo lo que ste implica. La realizacin de la prctica explicada en el apartado 8 permite, a todos aquellos que la realicen, ver de una manera directa su propio ADN, por lo que si se realiza en un IES se consolida de manera prctica los conocimientos adquiridos en el mbito de los cidos nuclicos y ms concretamente del ADN.

10.BIBLIOGRAFA
Pginas Webs: -www.wikipedia.org -www.explora.cl -www.fai.unne.edu.ar -www.bioapuntes.cl -www.recursos.cnice.mec.es/biosfera Libros: -Inciarte, M.(2003) "Biologa XXI". Madrid: McGraw-Hill. -Alberts,B.(2QQ4)"B/olog/a Molecular de la Clula". Barcelona: Omega.