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C. Gallardo, D.L. Mrquez, J. Almagro, L. Cern, A. Cruz, F. Codes, D. Lpez, A. Alves, N. Perea, R. Gmez, J. Moreno, M. Fontiveros e I. Pla.
Departamento de Microbiologa, Facultad de Ciencias Universidad de Mlaga 29071
Introduccin
Solea senegalensis
Introduccin
Vibrio harveyi
y 24 h adicionales a 37 C
Introduccin
Introduccin
Introduccin
Procedimiento experimental
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma Efecto de extractos de macroalgas
Introduccin
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Metodologa
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Metodologa
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Muestra problema
Muestra control
Metodologa
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Resultados
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Discusin
Co-cultivo de Dyctiota dichotoma
Descenso del 85,47% en el nmero de vibrios en el co-cultivo frente al descenso del 30% registrado en el control Incorporacin al medio de cultivo de vibrios exgenos algunos de los cuales podran corresponder a V. alginolticus
Introduccin
Efecto de extractos de macroalgas
Corallina officinalis
Jania rubens
Halopteris filicina
Ulva rigida
Cladophora dalmtica
Cystoseira tamariscifolia
Osmundea pinnatifida
Metodologa
Efecto de extractos de macroalgas
Metodologa
Efecto de extractos de macroalgas
Resultados
Efecto de extractos de macroalgas
Extractos hidrofbicos
Extractos hidroflicos
Discusin
Efecto de extractos de macroalgas
De acuerdo con los resultados obtenidos en este trabajo, ninguno de las especies analizadas presenta compuestos con actividad antimicrobiana frente a V. harveyi
La actividad antibacteriana se encuentre enmascarada por la presencia de algunos compuestos inhibidores en los extractos
Introduccin
Metodologa
Metodologa
Sembrado de V.harveyi en csped
Realizacin de perforaciones (tcnica well-in agar)
Metodologa
Metodologa
Chlorella lisada
Chlorella intacta
Resultados
Los resultados obtenidos fueron negativos en ambos tratamientos
Chlorella no sonicada
Chlorella sonicada
Discusin
La cepa de Chlorella empleada no produce sustancias antimicrobianas frente a V. harveyi Es posible que ejerza su accin beneficiosa a travs de otros mecanismos
Introduccin
Coppodos
Rotferos
Artmias
Metodologa
Metodologa
Exoesqueletos limpios
Metodologa
Exoesqueletos limpios
Desmineralizacin
Incubacin en HCl 1N durante 2 horas
Metodologa
Exoesqueletos limpios
Desmineralizacin
Incubacin en HCl 1N durante 2 horas
Lavado con dH2O y filtrado
Desproteinizacin
Incubacin en NaOH 15% a 65C durante 3 horas
Metodologa
Exoesqueletos limpios
Desmineralizacin
Incubacin en HCl 1N durante 2 horas
Lavado con dH2O y filtrado
Desproteinizacin
Incubacin en NaOH 15% a 65C durante 3 horas
Lavado con dH2O y filtrado
Quitina purificada
Metodologa
Quitina purificada
Metodologa
Preparacin del medio base de acuerdo con
Furukawa et al. (1978)
Componente Concentracin Tabla 2. Componentes del agar para la quitina Sulfato amnico 1 g/L Dihidrofosfato potsico 0,2 g/L Monohidrofosfato potsico 1,6 g/L Sulfato magnsico heptahidratado 0,2 g/L Cloruro sdico 0,1 g/L Sulfato de hierro heptahidratado 0,01 g/L Cloruro clcico dihidratado 0,02 g/L Peptonas 15 g/L
Metodologa
0,3 g de quitina en 10 mL de medio base
Metodologa
0,3 g de quitina en 10 mL de medio base
Sonicacin
A 10 m de longitud, dos ciclos a 50 Hzs y un ciclo a 85 Hzs
Metodologa
0,3 g de quitina en 10 mL de medio base
Sonicacin
A 10 m de longitud, dos ciclos a 50 Hzs y un ciclo a 85 Hzs
Adicin del agar 1,5 % p/v
Esterilizacin en autoclave
121 C durante 15 min
Metodologa
0,3 g de quitina en 10 mL de medio base
Sonicacin
A 10 m de longitud, dos ciclos a 50 Hzs y un ciclo a 85 Hzs
Adicin del agar 1,5 % p/v
Esterilizacin en autoclave
121 C durante 15 min
Resultados
Placa a 0 h
Placa a 72 h
Discusin
La confirmacin de la capacidad quitinasa de la cepa de V. harveyi aislada puede ser determinante a la hora de prevenir futuras reapariciones de la enfermedad
Introduccin
De acuerdo con la FAO/WHO:
Un organismo probitico es un microorganismo vivo que cuando es suministrado en cantidades adecuadas confiere un beneficio sobre la salud en el husped
Metodologa
Se emplearon ocho cepas potencialmente probiticas
DCF 12.2.14/3 DCF 12.1.14/3 DCF 12.10.14/3
DCF 12.4.14/3
DCF 12.9 P12.14/2 P15.14/3
Metodologa
Caldo de cultivo
Cultivo primario
Resultados
Los resultados obtenidos fueron positivos
Resultados
Dimetro (cm)
Discusin
El empleo de probiticos ofrece una alternativa adecuada para el control de patgenos en instalaciones acucolas
La cepa DCF 12.10 se postula como la ms prometedora Son necesarios estudios adicionales para contrastar la utilidad in vivo No es posible desechar la posible utilidad como organismos probiticos de aquellas cepas que no han dado lugar a halos de inhibicin
Conclusiones
La actividad hemolisina no es un marcador adecuado para la identificacin de las cepas virulentas de V. harveyi El empleo de Dictyota dichotoma en piscifactoras se postula como una estrategia eficiente para combatir a V. harveyi
Ninguna de los extractos de las macroalgas presenta compuestos con actividad antibitica frente a V. harveyi bajo las condiciones empleadas
Chlorella no produce compuestos bioactivos frente a V. harveyi
Los organismos quitinosos son potenciales reservorios de V. harveyi Las cepas probiticas DCF 12.2.14/3, DCF 12.4.14/3, DCF 12.9 y DCF 12.10.14/3 ofrecen enormes posibilidades para prevenir los brotes de V. harveyi