ENZIMAS

Las enzimas son protenas que catalizan las reacciones qumicas en los seres vivos. Catalizadores son sustancias que, sin consumirse en una reaccin, aumentan su velocidad (Figura 1). Las enzimas no hacen factibles las reacciones imposibles sino que, sencillamente, aceleran las que tendran lugar de manera espontnea (aqullas con un G<0). Gracias a ellas tienen lugar, en condiciones fisiolgicas, reacciones que, sin catalizador, requeriran condiciones extremas de presin, temperatura o de pH. Prcticamente todas las reacciones qumicas que tienen lugar en los seres vivos estn catalizadas por enzimas. La sustancia sobre la que acta la enzima se llama sustrato. El sustrato se une a una regin concreta de la enzima, denominada centro activo (Figura 1). El centro activo comprende: un sitio de unin, formado por los aminocidos que estn en contacto directo con el sustrato (Figura 1) un sitio cataltico, formado por los aminocidos directamente implicados en el mecanismo de la reaccin (Figura 1)

Las enzimas son catalizadores especficos: cada enzima cataliza un solo tipo de reaccin y, casi siempre, utiliza un nico sustrato. PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser protenas y actuar como catalizadores. Como protenas, poseen una conformacin natural ms estable y los cambios en esta conformacin suelen ir asociados a cambios en la actividad cataltica. Todas las enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos -COOH; amino NH2; hidroxilo -OH; tiol -SH; imidazol, etc.) tanto en sus extremos como en las cadenas laterales de sus aminocidos. En funcin del pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo (Figura 2). As, la pepsina gstrica tiene un pH ptimo de 2 y la tripsina pancretica lo tiene a pH 7,8. La mayora de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de unas pocas dcimas por encima o por debajo del pH ptimo pueden afectar drsticamente la actividad enzimtica. Por este motivo, los seres vivos han desarrollado sistemas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular. Los aumentos de temperatura aceleran las reacciones qumicas. Como regla general, un incremento de 10 C en la temperatura duplica la velocidad de la reaccin. Las reacciones catalizadas por enzimas tambin siguen esta pauta. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima. Por encima Enzimas Pgina 1 de 11

de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse (Figura 3). A veces, para que una enzima funcione se requiere la presencia de otras sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis: Los cofactores son iones inorgnicos (como, por ejemplo, el Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ etc.) imprescindibles para la actividad enzimtica. Se calcula que casi un tercio de las enzimas conocidas requieren, al menos, de un in metlico para su actividad (Figura 4). Cuando el cofactor es una molcula orgnica se suele llamar coenzima. Muchas de estas coenzimas se sintetizan a partir de vitaminas. A menudo, las coenzimas actan como aceptores temporales de un fragmento del sustrato (Figura 5). Cuando el in inorgnico o la coenzima se encuentran unidos covalentemente a la enzima se denominan grupos prostticos. La forma activa de una enzima se llama holoenzima. La parte proteica de una holoenzima se llama apoenzima (Figura 5), de forma que: apoenzima + cofactor/coenzima/grupo prosttico = holoenzima Las enzimas son catalizadores especficos. Sin embargo hay distintos grados de especificidad. Entre las enzimas poco especficas estn las proteasas digestivas como la quimotripsina, que rompe los enlaces amida de protenas y pptidos. La lactasa es una enzima muy especfica, y slo rompe el enlace -glucosdico de la lactosa o de compuestos muy similares. En general, una enzima no es absolutamente especfica y puede actuar sobre una serie ms o menos variada de sustratos semejantes. La enzima acta con mxima eficacia sobre el sustrato natural y con menor eficacia sobre los sustratos anlogos. As, para la sacarasa, la sacarosa es su sustrato natural, mientras que la maltosa y la isomaltosa son sustratos anlogos. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS Antiguamente, las enzimas reciban nombres particulares, asignados por su descubridor. Al ir aumentando el nmero de enzimas conocidas, se hizo necesaria una nomenclatura sistemtica que informara sobre la accin especfica de cada enzima y los sustratos sobre los que actuaba. El nombre de una enzima consta actualmente de 3 partes: el sustrato preferente + accin tpica + terminacin "asa". Un ejemplo sera la lactato deshidrogenasa, que convierte el lactato en piruvato. Como muchas enzimas catalizan reacciones reversibles, no hay una manera nica para fijar cul de los dos sentidos se utiliza para nombrar al enzima. As, la glucosa fosfato isomerasa tambin podra llamarse fructosa fosfato isomerasa. Cuando la accin tpica del enzima es la hidrlisis del sustrato, el segundo componente del nombre se omite y por ejemplo, la lactosa hidrolasa se llama simplemente lactasa. Adems de los nombres sistemticos, an persisten otros Enzimas Pgina 2 de 11

consagrados por el uso. As, la glucosa:ATP fosforiltransferasa se llama habitualmente glucoquinasa. Ante la necesidad de establecer una nomenclatura inequvoca para las enzimas, se cre una Comisin Enzimtica para establecer unas normas que permitan nombrar las enzimas. As, el nombre de cada enzima consiste en un cdigo alfanumrico, encabezado por las letras EC (de Enzyme Commission), seguido de cuatro nmeros separados por puntos. El primer nmero corresponde a cada una de las seis grandes clases o grupos en que se han dividido las enzimas, en funcin de su accin cataltica especfica (Figura 6): Clase 1: OXIDORREDUCTASAS. Catalizan las reacciones de oxidorreduccin, es decir, de transferencia de hidrgeno (H) o de electrones (e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin general: AH2 + B A + BH2 Ared + Box Aox + Bred Ejemplos son la succinato deshidrogenasa o la citocromo c oxidasa. Clase 2: TRANSFERASAS. Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin: A-B + C A + C-B Un ejemplo es la glucoquinasa, que cataliza la reaccin: glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato Clase 3: HIDROLASAS. Catalizan las reacciones de hidrlisis: A-B + H2O AH + B-OH Un ejemplo es la lactasa, que cataliza la reaccin: lactosa + agua glucosa + galactosa Clase 4: LIASAS. Catalizan reacciones de ruptura o unin qumica de sustratos: A-B A + B Un ejemplo es la acetacetato descarboxilasa, que cataliza la reaccin:

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cido acetactico CO2 + acetona Clase 5: ISOMERASAS. Catalizan la interconversin de ismeros: A B Un ejemplo es la fosfotriosa isomerasa que cataliza la reaccin: gliceraldehdo-3-fosfato dihidroxiacetona-fosfato Clase 6: LIGASAS. Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.): A + B + XTP A-B + XDP + Pi Un ejemplo es la piruvato carboxilasa, que cataliza la reaccin: piruvato + CO2 + ATP oxaloacetato + ADP + Pi El segundo nmero hace referencia a las distintas subclases dentro de cada clase, y el tercero y el cuarto se refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en la reaccin. Por ejemplo, la ATP:glucosa fosfotransferasa se define como EC 2.7.1.1. El nmero 2 nos indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el primer 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el segundo 1 indica que es la D-glucosa la que acepta el grupo fosfato. MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS En las reacciones espontneas, los productos finales tienen menos energa libre de Gibbs (G) que los reactivos. En otras palabras, en las reacciones espontneas se libera energa de Gibbs (G<0). Sin embargo, el comienzo de la reaccin requiere un aporte inicial de energa. Esta energa inicial que hay que suministrar a los reactivos para que la reaccin transcurra se llama energa de activacin (Ea). Cuanto menor sea la Ea, con ms facilidad se producir la reaccin. La accin de los catalizadores consiste, precisamente, en disminuir la Ea (Figura 7). Las enzimas son catalizadores especialmente eficaces, ya que disminuyen la Ea an ms que los catalizadores inorgnicos (Figura 7). Por ejemplo, el agua oxigenada (H2O2) se puede descomponer segn la reaccin H2O2 H2O + 1/2 O2 de tres formas: (1) sin catalizador, (2) con un catalizador inorgnico (platino), o (3) con una enzima especfica (la catalasa). Las respectivas Ea para cada proceso son de 18, 12 y 6 Kcal/mol. As, se puede calcular que el platino acelera la reaccin 20.000 veces, mientras que la catalasa la acelera 370.000 veces. Para que una reaccin qumica tenga lugar, las molculas reactantes deben chocar con una energa y una orientacin adecuadas. La actuacin del enzima permite que:

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los reactivos (sustratos) se unan a su centro activo con una orientacin ptima para que se produzca la reaccin se modifiquen las propiedades qumicas del sustrato unido al centro activo, debilitando los enlaces existentes y facilitando la formacin de otros nuevos

Por ejemplo, la lisozima es una enzima capaz de romper la molcula de peptidoglicano de la pared celular bacteriana. Su centro activo es una larga hendidura capaz de acomodar a seis monmeros de azcar de la mocula de peptidoglicano. La unin del sustrato al centro activo de la lisozima debilita el enlace glucosdico ms cercano a los aminocidos catalticos, facilitando la adicin de una molcula de agua y la posterior hidrlisis de la molcula (Figura 8). Hay dos modelos sobre la forma en que el sustrato se une al centro activo de una enzima: El modelo llave-cerradura supone que la estructura del sustrato y la del centro activo son complementarias, de la misma forma que una llave encaja en una cerradura. Este modelo es vlido en muchos casos, pero no siempre es correcto (Figura 9). En otros casos, el centro activo adopta la conformacin idnea slo en presencia del sustrato. Este es el modelo del ajuste inducido. Sera algo as como un cascanueces, que se adapta al entorno de la nuez (Figura 9).

MODULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA Una enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su actividad est modulada por cambios en el pH o en la temperatura. Su velocidad depende de las concentraciones de sus sustratos y de sus cofactores. La presencia de los productos finales tambin puede hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido. Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de una enzima: son los inhibidores. Se pueden distinguir varios tipos de inhibidores, en funcin de su forma de actuacin: Inhibidores competitivos: son molculas con una estructura similar a la del sustrato que se unen al centro activo de la enzima e impiden que sta acte sobre el sustrato (Figura 10). Inhibidores no competitivos: se unen a la enzima por un lugar distinto del centro activo y esta unin provoca un cambio de conformacin que modifica el centro activo de forma que el sustrato ya no puede unirse (Figura 10). Inhibidores incompetitivos. se unen al complejo enzima-sustrato e impiden que se complete la reaccin (Figura 10).

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa (Figura 11). Las formas R y T se encuentran en equilibrio R T. Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un

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modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin de la enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos. Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la actividad enzimtica son los moduladores negativos. Si estos moduladores actan en lugares distintos del centro activo se llaman inhibidores alostricos (Figura 11). Otras enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el AMP (Figura 12). Tambin se da el caso inverso, en el que una enzima muy activa se desactiva al liberar algn grupo qumico. En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo (catabolismo), la forma fosforilada es ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas biosintticas (anabolismo) ocurre lo contrario. Algunas enzimas no se sintetizan como tales, sino como protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas protenas se llaman proenzimas o zimgenos. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos (Figura 13). El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades de la enzima activa. Muchas enzimas digestivas se secretan en forma de zimgenos y en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. Si estas enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal. Algunas enzimas tienen distinta estructura molecular aunque su funcin biolgica sea la misma. Son las llamadas isozimas o isoenzimas. Estas diferencias de estructura se traducen en ligeros cambios en sus propiedades, de forma que cada isozima se adapta perfectamente a la funcin que debe realizar. As, segn el tipo de tejido, del compartimento celular donde acta o del momento concreto del desarrollo del individuo, ciertas isoenzimas son ms adecuadas que otras. Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa presenta isozimas distintas en msculo y corazn (Figura 14), la malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria y algunos enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de las mismas enzimas en el adulto. INTRODUCCIN A LA CINTICA ENZIMTICA Los principios generales de las reacciones qumicas se aplican tambin a las reacciones enzimticas. En una reaccin qumica que tiene lugar sin variacin del volumen del sistema, la velocidad de reaccin (v) es igual a la variacin de la concentracin de los productos por unidad de tiempo (Figura 15). As, en la reaccin sacarosa + agua glucosa + fructosa, la velocidad de hidrlisis de la sacarosa es, en todo momento, proporcional a la concentracin de sacarosa. Dicho matemticamente,

v=

-d S =kS dt

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donde [S] es la concentracin de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la constante de proporcionalidad. Se dice que sta es una reaccin de primer orden, ya que la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato (Figura 15). Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende directamente de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin) o bien del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (como en una reaccin de dimerizacin) (Figura 15): v = k [S1] [S2] v = k [S]2 En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato (Figura 15): v = k0 La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad de la enzima. La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar la enzima. La medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos (Figura 16). Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin. Para evitar esta complicacin se procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura 16). De esta forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento. Adems, en estas condiciones no es necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan pequea que la reaccin inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad. Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin del sustrato sobre la actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso de catlisis enzimtica. En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron esta teora y propusieron una ecuacin de velocidad que rige la accin enzimtica. Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Para cada una de las curvas de avance de reaccin as obtenidas se calcula la v0 (la pendiente de la curva de avance a tiempo cero). Posteriormente, se

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representa la velocidad inicial frente a la concentracin inicial de sustrato (v0 frente a [S]0). Se observa que cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden con respecto al sustrato(Figura 16). A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, es decir, todos los centros activos estn ocupados, y un incremento en [S]0 no se traduce en un incremento de la velocidad(Figura 16). En este punto, la reaccin es de orden cero con respecto al sustrato, y la velocidad es mxima (Vmax). La relacin entre la velocidad inicial (v0) y la concentracin de sustrato ([S]) est descrita por el modelo cintico de Michaelis-Menten. Propusieron que las reacciones catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas (Figura 17). En la primera etapa se forma el complejo enzima-sustrato y en la segunda, el complejo se convierte en producto, liberando el enzima libre: k1 k3

EL + S ES E + P k2 En este modelo, k1, k2 y k3 son la constantes cinticas individuales de cada etapa o constantes microscpicas de velocidad, de forma que: v1= k1 [EL] [S]; v2= k2 [ES] y v3=k3 [ES]. Se puede distinguir entre enzima libre (EL) y enzima unida al sustrato (ES), de forma que la concentracin total de enzima, [ET], (que es constante a lo largo de la reaccin) es: [ET] = [EL] + [ES]. Como [EL] = [ET] - [ES], resulta que: v1= k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] Este modelo cintico adopta la hiptesis del estado estacionario (Figura 17), segn la cual la velocidad de formacin del complejo enzima-sustrato (k1) es comparable a la de su disociacin (k2+ k3). En estas condiciones, [ES] es pequea y constante a lo largo de la reaccin, o dicho matemticamente: d ES =0 dt Como [ES] es constante, la velocidad de formacin de los productos es uniforme (v=v3=k3 [ES]=constante). Adems, se cumple que v1=v2+v3 (o sea, que la velocidad con que se forma ES es igual a la velocidad con que se destruye: k1[S] [ET] - k1 [S] [ES] = k2 [ES] + k3 [ES] Despejando [ES], queda que:
k1 ET S ET S = k2 +k3 +k1 S k2 +k3 + S k1

ES =

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En el estado estacionario, la velocidad de formacin del producto es:

v = v 3 = k 3 [ES] = k 3 [E T ] [S] k2 + k3 + [S] k1

k2 +k3 La expresin k1 se sustituye por una nueva constante, KM, que se conoce como la constante de Michaelis-Menten, de forma que la ecuacin de la velocidad de la reaccin queda (Figura 17): v= k3 ET S KM+ S

Para cualquier reaccin enzimtica, [ET], k3 y KM son constantes. Vamos a considerar dos casos extremos (Figura 18). En primer lugar, a bajas concentraciones de sustrato ([S] << KM) la ecuacin de velocidad se reduce a:
v k3 ET KM S

Como los trminos entre parntesis son constantes, pueden englobarse en una nueva constante, kobs, de forma que la expresin queda reducida a:

v kobs S , con lo cual la reaccin se comporta como una de primer orden cuando la [S] es pequea (Figura 18). En segundo lugar, a altas concentraciones de sustrato ([S] >> KM), la ecuacin se reduce a:

v k3 ET ,
En estas condiciones (alta [S]), la velocidad de reaccin es independiente de la concentracin del sustrato, y por tanto, la reaccin es de orden cero con respecto al sustrato (Figura 18). Adems, tanto k3 como [ET] son constantes, de manera que podemos definir la velocidad mxima de la reaccin (Vmax) como: Vmax = k3 [ET] Se puede introducir la expresin de la velocidad mxima en la ecuacin general de la velocidad, de forma que:

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v = Vmax

S KM+ S

que es la forma ms conocida de la ecuacin de Michaelis-Menten (Figura 18). La constante de Michaelis-Menten (KM) es un parmetro cintico importante pr mltiples razones: 1.- KM es la concentracin de un sustrato para la cual la velocidad de reaccin es la mitad de la velocidad mxima. En efecto, si KM = [S], la ecuacin de MichaelisMenten se reduce a: V v = max 2 2.- El valor de KM caracteriza la interaccin de la enzima con un sustrato dado. KM se puede determinar sin necesidad de purificar la enzima, y da idea de la afinidad de la enzima por el sustrato. A menor KM, mayor afinidad de la enzima por el sustrato, y a mayor KM, menor afinidad. Este hecho tiene fcil explicacin si k2 +k3 k1 , y por tanto, da idea de la tenemos en cuenta que KM se define como estabilidad del complejo ES. Las reacciones 2 y 3 destruyen el complejo ES, mientras que la reaccin 1 lo forma. As, si KM es grande, el complejo ES es inestable pues predomina la tendencia a destruirlo (poca afinidad hacia el sustrato), y si KM es pequea, el complejo ES es estable, ya que predomina la tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el sustrato).

3.-La KM del sustrato natural es menor que la de los sustratos anlogos. Si dos sustratos de una misma enzima tienen distinta KM, el que presente mayor KM tiene menor afinidad por la enzima, y la reaccin transcurre siempre a menor velocidad que con el sustrato de menor KM, salvo a concentraciones saturantes de sustrato (Figura 21). 4.- Los valores de KM de muchas enzimas son prximos a los de la concentracin fisiolgica de sus sustratos, de forma que pequeas variaciones en la [S] pueden suponer grandes cambios en la velocidad de toda una ruta metablica. Otro parmetro cintico importante a la hora de explicar el comportamiento de una enzima es el llamado nmero de recambio (Kcat):
K cat = Vmax [ET ]

El nmero de recambio del enzima indica el nmero de reacciones elementales que realiza cada enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo. Por ltimo, hay que destacar que algunas enzimas no obedecen la ecuacin de Michaelis-Menten. Se dice que su cintica no es Michaeliana. Esto ocurre con las

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enzimas alostricas, cuya grfica v frente a [S] no es una hiprbola, sino una sigmoide (Figura 19). En la cintica sigmoidea, pequeas variaciones en la [S] en una zona crtica (cercana a la KM) se traduce en grandes variaciones en la velocidad de reaccin. CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UNA ENZIMA

A partir de los datos experimentales (Figura 20), se representa la velocidad inicial de la reaccin frente a la concentracin de sustrato (v vs. [S]). La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v frente a [S]) es una hiprbola (Figuras 20 y 21). El valor asinttico al que tiende la velocidad inicial es Vmax. A partir de Vmax se determina Vmax/2 y se interpola en la grfica experimental para obtener el valor de KM (Figura 21). Sin embargo, para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin doble recproca (1/v frente a 1/[S]), ya que es una lnea recta (Figuras 22): 1 = 1 KM+ S = KM 1 + 1 v Vmax S Vmax S Vmax Esta representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-Burk (Figura 22). Es una recta en la cual: - La pendiente es KM/Vmax - La abscisa en el origen (1/v=0) es -1/KM - La ordenada en el origen (1/[S]=0) es 1/Vmax De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los valores de KM y Vmax de una enzima para diversos sustratos (Figura 23).

ACTIVIDAD ENZIMTICA

Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto. Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat). La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).

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