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Uso de bioslidos para el establecimiento de especies leosas en medios Mediterrneos degradados

David Fuentes Delgado


Tesis Doctoral Octubre 2011

Sntesis

Sntesis La recurrencia y severidad de las perturbaciones que afectan a los ecosistemas forestales pueden superar ciertos umbrales, a partir de los cuales la recuperacin espontnea es improbable y se hace necesaria una intervencin. Numerosos estudios han destacado el papel de los residuos orgnicos en la recuperacin de los procesos biolgicos del suelo que permiten reestablecer cierto nivel de fertilidad a corto plazo, mejorar las caractersticas fsico-qumicas de los suelos degradados y recuperar la cubierta vegetal. La puesta en marcha de estos procesos incrementa la probabilidad de instalacin de especies forestales clave y de recuperacin de la estructura y funcin de estos ecosistemas. Los lodos de depuradora o bioslidos (subproductos generados durante el proceso de depuracin de las aguas residuales) presentan altos contenidos de materia orgnica y nutrientes que, a priori, les confieren un alto potencial para su utilizacin en la restauracin de zonas degradadas. Debido al espectacular incremento de la produccin de bioslidos durante las dos ltimas dcadas, su incorporacin en trabajos de restauracin supone, adems, una alternativa interesante para promover la diversificacin frente a otros destinos, principalmente su aplicacin agrcola. El uso de lodos de depuradora en plantaciones forestales se propone atenuar eventuales limitaciones hdricas y nutricionales a corto plazo, mejorando el establecimiento y crecimiento posterior de las plantas introducidas. La vegetacin forestal suele responder a la incorporacin de nutrientes procedentes de enmiendas orgnicas, con un mayor crecimiento y un mejor estado nutricional, aunque raramente permite un incremento de la tasa de supervivencia de las plantas introducidas. Diversos factores biticos y abiticos, incluyendo la dosis, el tipo de producto usado, y el modo de aplicacin, condicionan los efectos de las enmiendas

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orgnicas en suelo y plantas. En funcin de estos factores, el efecto sobre la vegetacin puede ser muy variable e incluso negativo. De manera general, el efecto deletreo de los bioslidos sobre las plantas introducidas se atribuye a procesos de competencia con la vegetacin natural, desequilibrios nutricionales y fitotoxicidad por acumulacin de sales solubles en la rizosfera. En zonas secas y semiridas, los efectos de la fertilizacin se pueden traducir, adems, en un aumento del estrs hdrico, que podra ser letal. No obstante, la informacin disponible sobre la interaccin entre fertilizacin orgnica y estrs hdrico es escasa, lo que dificulta un uso eficiente de estos productos en medios limitados por agua. Por otra parte, el uso de enmiendas orgnicas en la restauracin de zonas degradadas (as como su inclusin en otros mbitos forestales) puede implicar la entrada de metales pesados y otros contaminantes en suelos naturales, lo que podra entraar diversos riesgos ambientales. Gran parte de los estudios publicados sobre efectos de metales pesados en plantas se ha centrado en especies herbceas y de inters agrcola. Los escasos trabajos que se ocupan de especies leosas, han mostrado que stas son sensibles a la presencia de metales pesados. Existe una gran diversidad de respuestas de las plantas a los metales pesados a nivel intra e interespecfico. Actualmente disponemos de poca informacin acerca de la dinmica de los metales en medios forestales mediterrneos y de su potencial toxicidad sobre especies leosas tpicas de estos ambientes. Por todo ello, esta tesis doctoral tiene, como objetivo general, evaluar los efectos de la aplicacin de bioslidos sobre suelo y planta en repoblaciones forestales en medios mediterrneos, as como su viabilidad tcnica, y contribuir a optimizar el uso de estos productos en estos medios. Se pretende alcanzar este objetivo general a partir de los siguientes objetivos parciales:

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1) estudiar la viabilidad del uso de lodos concentrados en preparaciones puntuales del suelo mediante la evaluacin de su efecto en brinzales de Pinus halepensis y Quercus ilex introducidos en zonas degradadas. 2) identificar dosis adecuadas de aplicacin de dos tipos de lodos de depuradora (secos y compostados) en condiciones de campo, explorando los distintos factores que afectan a la respuesta de los brinzales de Pinus halepensis introducidos. 3) identificar los efectos a corto plazo de la aplicacin de bioslidos enriquecidos con metales pesados en la morfologa y la fisiologa de brinzales de Pinus halepensis bajo condiciones de clima semirido y sobre tres suelos representativos de un alto porcentaje de las zonas forestales de la Comunidad Valenciana. 4) determinar la sensibilidad de cuatro especies leosas mediterrneas a la presencia de metales pesados en la solucin del suelo, estimar la capacidad de bioacumulacin de cada especie, la distribucin del metal en las distintas fracciones, y la concentracin interna y externa a partir de la cual comienza a mostrar sntomas de toxicidad. Estos objetivos corresponden a los Captulos 2-5 de esta memoria. Adems, un objetivo derivado del segundo captulo es la estimacin del rea forestal susceptible de recibir fertilizacin orgnica en repoblaciones forestales en la provincia de Alicante. Esta aproximacin se basa en la elaboracin de un sistema de informacin geogrfica (SIG) con criterios bsicos obtenidos a partir de la bibliografa y de experiencias propias recogidas en su mayor parte en esta memoria. La hiptesis general de esta tesis doctoral es que el uso de distintos tipos de bioslidos en la restauracin forestal de zonas secas y semiridas mejora el establecimiento y desarrollo inicial de los brinzales introducidos, sin suponer riesgos medioambientales asociados a la acumulacin de metales pesados en planta. En el Captulo 2 de la memoria se parti de la hiptesis de que la

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aplicacin localizada de lodo de depuradora concentrado en el hoyo de plantacin mejorara el establecimiento de dos especies forestales arbreas (Pinus halepensis y Quercus ilex) mediante el aporte de nutrientes y la mejora de las condiciones hdricas del suelo, tanto inicialmente, debido al alto contenido en agua del lodo, como a medio plazo, por la mejora de las caractersticas fsicas del suelo. Adems, nuestra hiptesis es que la aplicacin resultaba econmicamente viable o, al menos, el coste de la misma era similar al de otras alternativas de gestin del bioslido. Los resultados obtenidos mostraron que la aplicacin de este tipo de lodo en trabajos de repoblacin mediante ahoyado plantea fuertes limitaciones tcnicas. La dificultad de mezcla del bioslido con el suelo provoc cambios fsicos en el hoyo de plantacin e increment en exceso los valores de salinidad, contribuyendo a acentuar el estrs hdrico estival. Los tratamientos que evitaban el contacto directo de las races con la zona de mezcla mejoraron notablemente la supervivencia y el estado hdrico de los brinzales durante el primer verano. Despus, la mortalidad prcticamente se estabiliz y el mayor crecimiento inicial de los pinos enmendados se mantuvo constante o increment en algunos tratamientos respecto a las plantas control, al menos en los 5 aos posteriores. El mejor estado nutricional de los brinzales y la mayor disponibilidad de nutrientes y materia orgnica en el hoyo de plantacin fueron responsables de los buenos resultados de crecimiento de Pinus halepensis a medio plazo, mientras que Quercus ilex no mostr efectos positivos de las enmiendas. Tras las dificultades de manejo del bioslido concentrado y las restricciones encontradas en el experimento anterior, se realiz una nueva plantacin en la que comparamos dos formas valorizadas del mismo bioslido: seco y compostado. La hiptesis de partida de lo que constituye el Captulo 3 de esta memoria establece que las dosis de enmiendas orgnicas normalmente utilizadas en otros sistemas productivos pueden causar efectos negativos en el establecimiento y crecimiento

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de

brinzales

utilizados

en

restauracin

forestal

de

zonas

degradadas

Mediterrneas con clima seco debido a la interaccin con factores biticos y abiticos. De manera similar al anterior experimento, se observ que el uso de bioslidos aument el crecimiento de los brinzales introducidos de P. halepensis, pero no su supervivencia. Los brinzales introducidos se mostraron sensibles al incremento de estrs especfico del sitio, como la ocurrencia de intensos perodos de sequa junto con el incremento de la salinidad y, probablemente, factores fsicos del suelo. Esto sugiere que las consideraciones tenidas en cuenta cuando se utiliza bioslidos en zonas secas y semiridas, pueden ser diferentes a las que se debe tener en zonas con estrs hdrico menos acusado. Adems, observamos que el uso de ambas enmiendas puede intensificar los efectos de la sequa mediante competencia subterrnea con la vegetacin natural e incluso, con dosis mayores de 30 Mg ha , reducir la disponibilidad de agua en el hoyo de plantacin. En este estudio encontramos que el uso de bioslidos compostados, con su capacidad para liberar sales y nutrientes de forma gradual, muestra ventajas cuando el bioslido se aplica en una sola ocasin, ya que sus efectos son ms prolongados que los de los bioslidos no compostados. Aun as, su aplicacin debe ir acompaada de una adecuada eleccin de la dosis y de una correcta preparacin del terreno para evitar episodios de mortalidad asociados a perodos de sequa intensa. La ausencia de efectos negativos especficos de los metales pesados contenidos en los bioslidos sobre las plantas en los experimentos en campo dio pie a preguntarnos sobre la viabilidad del uso de bioslidos con contenidos de metales pesados altos en restauracin. A inicios de 2003, el 10% de los lodos enviados a vertedero en la Comunidad Valenciana eran desechados por su excesivo contenido de Cu, Ni o Zn. Por lo tanto, la hiptesis de partida del Captulo 4 fue que la aplicacin de bioslidos enriquecidos con Cu, Ni y Zn no afecta negativamente al establecimiento de Pinus halepensis en condiciones semiridas,
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en los suelos forestales predominantes en la Comunidad Valenciana. As mismo, las reducidas tasas de traslocacin a la parte area de los metales ms abundantes en los lodos no supondra un riesgo de entrada de stos en la cadena trfica. En este caso, la aplicacin de bioslidos enriquecidos con niveles relativamente altos de Cu, Zn y Ni tuvo un efecto mnimo sobre el desarrollo inicial de los brinzales en nuestras condiciones experimentales, debido probablemente a una mayor limitacin hdrica que las presentes en los dos experimentos anteriores (de campo), a la rpida colonizacin en profundidad de los lismetros que pudo diluir los efectos del suelo fertilizado, y a un estado nutricional inicial ptimo de las plantas utilizadas. Los bioslidos enriquecidos incrementaron la concentracin de metales pesados en plantas, pero stos se mantuvieron siempre muy por debajo de niveles fitotxicos. Los brinzales que recibieron bioslidos sin adicin de metales pesados mostraron una leve reduccin de la concentracin de Cu y Zn en acculas, lo que repercuti negativamente en su estado fisiolgico durante el perodo seco. Este efecto se atenu con la incorporacin de metales. Los resultados sugieren que las limitaciones nutricionales de estos ambientes (suelos carbonatados, pH alto, clima semirido), incluyendo la baja disponibilidad de la mayora de micronutrientes, pueden ser parcialmente aliviadas mediante el uso de bioslidos con contenidos relativamente altos de ciertos metales pesados. El estudio tambin mostr que las variaciones debidas al sitio (tipo de suelo) tuvieron mayor peso en los cambios morfo-fisiolgicos de las plantas que los debidos a la aplicacin del bioslido, con o sin enriquecimiento en metales pesados. La acumulacin de metales pesados en el suelo como consecuencia de la aplicacin de bioslidos con elevado contenido de stos y por otras causas, as como el inters de utilizar especies leosas mediterrneas en la restauracin de zonas contaminadas, hace recomendable ampliar el conocimiento disponible sobre la respuesta de estas plantas a niveles anormalmente altos de metales pesados. La hiptesis de partida del Captulo 5 es que distintas especies forestales muestran

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diferente sensibilidad a la presencia de metales pesados en la solucin del suelo, y que su uso para la restauracin de zonas contaminadas con metales pesados ser dependiente de la estrategia de cada especie frente al metal. Las especies utilizadas en este estudio mostraron una contrastada sensibilidad a la presencia de Cu, Ni y Zn en la solucin del suelo. Pinus halepensis y Pistacia lentiscus toleraron mayores concentraciones internas de metal, antes de mostrar efectos sobre la morfologa de las plantas, que Juniperus oxycedrus y Rhamnus alaternus. Las dos primeras especies acumularon aproximadamente tres y cinco veces menos Zn y Ni, respectivamente, en la parte area (en relacin a su biomasa area total) que las dos ltimas, debido a su mayor capacidad de retencin de metales en la biomasa subterrnea. Esto se puede considerar una caracterstica interesante para su uso en trabajos de restauracin. Los resultados obtenidos proporcionan criterios para el uso de estas especies en la restauracin de reas contaminadas, ya que la seleccin de las especies apropiadas puede reducir el potencial de movilizacin de metales a las partes areas de las plantas reduciendo as el riesgo de entrada de metales pesados en la cadena alimenticia.

ndice
Captulo 1. Introduccin general La restauracin de la cubierta vegetal en zonas secas. Uso forestal de bioslidos.. Factores que condicionan el uso de enmiendas orgnicas. Efectos de la aplicacin de enmiendas orgnicas sobre las plantas... Sensibilidad de las plantas a metales pesados .. Contexto y cronologa del trabajo realizado. Objetivos..... Captulo 2. Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands .. Captulo 3. Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings 3 4 7 12 15 17 23

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Captulo 4. Response of Pinus halepensis Mill. seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils.. 71 Captulo 5. Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc.... 91 Captulo 6. Discusin general Efecto del bioslido sobre propiedades del suelo.. Efecto de los bioslidos sobre el estado nutricional y el crecimiento de los brinzales. Aplicacin de lodos y salinidad.. Aplicacin de lodos y balance hdrico... Aplicacin de lodos y competencia... Efecto de la presencia de metales pesados.. Aspectos prcticos sobre el uso forestal de bioslidos

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Conclusiones

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Referencias.. 139 Apndices Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin Datos adicionales no incluidos en las publicaciones presentadas. Estimacin del coste de la aplicacin de bioslidos en Zarra........... Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. Sistema de Informacin Geogrfica (SIG) para la aplicacin de bioslidos en repoblaciones forestales de la provincia de Alicante...

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Introduccin

Captulo 1

La restauracin de la cubierta vegetal en zonas secas Grandes extensiones de zonas secas y semiridas (drylands) se hallan sometidas a procesos de desertificacin que, si las presiones se mantienen, pueden conducir a una degradacin irreversible. Estos procesos son especialmente evidentes en la cuenca mediterrnea, donde la combinacin de perturbaciones naturales y un uso antrpico milenario ha dado como resultado un paisaje heterogneo en el que coexisten zonas en diferentes estados de alteracin (Aronson et al., 2005). Perturbaciones como los incendios forestales, la agricultura intensiva, el sobrepastoreo y las precipitaciones torrenciales, inciden de manera directa sobre la integridad y funcionamiento de la vegetacin y del suelo. Los cambios en el uso del suelo acaecidos en esta zona en las ltimas dcadas han provocado un aumento de la superficie ocupada por tierras de cultivo abandonadas. Estas tierras se encuentran en fases iniciales de la sucesin, y albergan comunidades vegetales que, con frecuencia, presentan un elevado riesgo de incendio (Baeza et al., 2007). Los suelos forestales de zonas secas y semiridas mediterrneas suelen ser poco profundos, pedregosos, discontinuos, de estructura pobre, y suelen presentar escaso contenido en materia orgnica y nutrientes (Vallejo y Alloza, 1998; Martnez-Mena et al., 2002; Sardans et al., 2004; Alguacil et al., 2009). La recurrencia y severidad de las perturbaciones que afectan a los suelos forestales, y los procesos degradativos que conllevan, influyen en su calidad y volumen (Bottner et al., 1995; Carreira et al., 1996; Martnez-Mena et al., 2002). Una vez superados ciertos umbrales de degradacin, el sistema pierde resiliencia o capacidad de autorregeneracin (Aronson et al., 1993; Vallejo y Alloza, 1998; Whisenant, 1999; Daz-Delgado et al. 2003), haciendo necesaria una intervencin que contribuya a su restauracin (Vallejo et al., 2000; Snchez-Maran et al. 2002). Para garantizar su viabilidad, las acciones de restauracin forestal han de estar basadas en un adecuado conocimiento de los requerimientos de cultivo de las especies introducidas, en la adecuacin de las tcnicas de implantacin y en la oportuna seleccin de especies (Vallejo et al., 2009). Aunque en ambientes secos y semiridos el agua es el recurso ms limitante para el establecimiento de las plantas (Di Castri et al., 1981), la limitacin nutricional tambin puede afectar a la instalacin y posterior desarrollo de la plantacin (Mamolos et al., 1995; Henkin et al., 1998; Valdecantos et al., 2011). La aplicacin de residuos orgnicos ricos en macro y micronutrientes puede ayudar a recuperar 3

Introduccin

la fertilidad de los suelos (Roldn et al., 1996; Walter et al., 2000), estimular la actividad microbiana (Banerjee et al., 1997; Pascual et al., 1998; Garca et al., 2000; Caravaca et al., 2002) y mejorar propiedades fsicas como la porosidad, la infiltracin y la estabilidad estructural (Albaladejo y Daz, 1990; Aggelides et al., 1999; Sort y Alcaiz, 1999; Rostagno et al., 2001). La mejora de estas propiedades puede contribuir a controlar los recursos edficos y sus flujos, disminuyendo la escorrenta superficial y la erosin (Ros et al., 2003), y facilitando el almacenamiento de agua disponible para la vegetacin (Querejeta et al., 1998). No obstante, el xito de esta prctica depende de diversos factores biticos y abiticos, como las caractersticas del suelo, las condiciones climticas despus de la aplicacin, los condicionantes tcnicos asociados a la propia aplicacin y el tipo de residuo orgnico utilizado (Pascual et al., 1999; Zagas et al., 2000; Jacobs y Timmer, 2005). Por otra parte, su empleo en zonas forestales presenta diferencias relevantes frente al uso en zonas agrcolas, que hay que tener en cuenta. Los terrenos forestales suelen ser ms distantes a ncleos de poblacin y de ms difcil acceso respecto a zonas agrcolas. Adems, la pretendida recuperacin de un ecosistema (proceso acumulativo) es normalmente incompatible con el aprovechamiento productivo de las explotaciones agrcolas. Las intervenciones recurrentes en zonas forestales no slo son costosas, sino que adems pueden comprometer la propia auto-organizacin del sistema, y por tanto conviene reducirlas al mnimo. En la mayora de casos, la intervencin se restringe a una nica actuacin inicial. Adems, si el objetivo principal de la restauracin es promover los procesos auto-organizativos del ecosistema, se debe tender a provocar el mnimo impacto (mnima destruccin de la cubierta vegetal, alteracin del suelo, etc.). Ello supone que prcticas frecuentes en medios agrcolas, como el labrado de toda la superficie o la aplicacin subterrnea en lneas, se ven muy limitadas cuando no excluidas de los medios forestales. Uso forestal de bioslidos Los lodos de depuradora o bioslidos (subproductos generados durante el proceso de depuracin de las aguas residuales), presentan altos contenidos de materia orgnica y nutrientes que, a priori, les confieren un alto potencial para su incorporacin en la restauracin de zonas degradadas. Debido al espectacular incremento en su produccin durante las dos ltimas dcadas, el uso de lodos en restauracin forestal supone una alternativa interesante para promover la 4

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diversificacin frente a su uso agrcola. Una descripcin ms detallada de los bioslidos, as como de la evolucin de su produccin, valorizacin y de aspectos legales relacionados con su aplicacin se encuentran en el Apndice 1. El reciclaje de residuos orgnicos mediante su incorporacin al suelo supone la opcin ms deseable desde el punto de vista ambiental (ver una descripcin de sus inconvenientes en el apartado Discusin). En Espaa, el uso agrcola absorbe actualmente gran parte de estos productos (67%). Sin embargo, la bsqueda de otras opciones sigue siendo recomendable con el objetivo de aprovechar las ventajas de la diversificacin y, en concreto, (1) atender a una posible reduccin de la demanda agrcola, (2) proporcionar alternativas frente a posibles restricciones en los usos actuales, (3) responder a la problemtica de regiones con escasa actividad agrcola, (4) contemplar casos en los que la aplicacin agrcola sea poco recomendable o mal aceptada, y (5) aprovechar los beneficios de un producto rico en materia orgnica y nutrientes all donde sea recomendable incrementar la fertilidad edfica.

Foto 1. Dos muestras de la diversidad de productos de alto contenido en materia orgnica generados en las estaciones depuradora de aguas residuales (EDAR). Lodo concentrado procedente de la (EDAR) de Pinedo (Valencia), en la imagen de la izquierda, y compost de lodo de la planta de compostaje de Aspe (Alicante) a la derecha.

Dentro del mbito de la restauracin forestal, el uso de residuos orgnicos depende de los objetivos de la actuacin y su adecuacin al problema. Existen numerosos condicionantes que hay que tener en cuenta a la hora de acudir a la aplicacin de bioslidos. Entre ellos se incluyen las caractersticas del medio fsico que se pretende restaurar (pendiente, profundidad de suelo), la dosis y el tipo de

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material orgnico que se pretende aplicar (concentrado, seco, compostado; Foto 1), las limitaciones legales (especialmente relativas a zonas inundables y niveles de metales pesados), tcnicas de preparacin y aplicacin (transporte al monte, maquinaria disponible y presupuesto asignado), y su aceptacin social. La utilizacin de lodos de depuradora en aplicaciones forestales se ha contemplado en otros pases desde hace tiempo, normalmente en plantaciones de carcter productivo (Brockway, 1983; Cole et al., 1986; Moffat et al., 1991; Henry et al., 1995; Marx et al., 1995), aunque tambin en contextos ms conservacionistas y con objetivos restauradores (Aguilar y Loftin, 1994; Rodgers y Anderson, 1995; Whitbread-Abrutat, 1997; White et al., 1997; Foto 2).

Foto 2. Aspecto de una zona de matorral en las cercanas de Marsella, restaurada mediante la creacin artificial de suelo al que se aadi lodos de depuradora (Marcel Cadillon, Socit du Canal de Provence, Aix-enProvence, 2001 com. pers.).

En Espaa se ha publicado cuantiosa bibliografa cientfica relacionada con la aplicacin de bioslidos en agricultura (Albiach et al., 2001; Gasc et al., 2007), en produccin viverstica (Ingelmo et al., 1998), y en sistemas silvopastorales y dehesas (Mosquera et al., 2001, Tarrasn et al., 2007). As mismo, se ha estudiado su utilizacin en repoblaciones forestales de carcter restaurador (Valdecantos et al., 2011), y en la restauracin de zonas ridas (Navas et al., 1999), zonas quemadas (Villar et al., 1998; Lozano-Cerezo et al., 1999) y canteras (Sort y Alcaiz, 1996, 1999; Jorba y Vallejo, 2010), por mencionar algunos ejemplos. Tambin se ha evaluado su impacto sobre la microfauna y actividad microbiana del suelo 6

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(Andrs, 1999). Sin embargo, en la mayora de casos, su aplicacin se ha restringido al mbito de la experimentacin. A ello ha contribuido la baja rentabilidad de los medios forestales Mediterrneos, la elevada demanda de las explotaciones agrcolas, y la existencia de alternativas viables y prejuicios sociales. Fuera del mbito experimental, las acciones de restauracin ms comunes que contemplan el uso de lodos han sido las relacionadas con la restauracin de canteras y minas (Alcaiz et al., 2007; Jorba y Vallejo, 2010). Estas actuaciones normalmente hacen uso de lodos de depuradora concentrados y deshidratados (ca. 80% humedad). Por el contrario, y pese a que esta forma de lodo es el producto bruto resultante de la depuracin, no es habitual su uso directo en zonas forestales degradadas. En estos ambientes, el lodo tiende a ser modificado previamente. El ahorro que podra suponer la ausencia de pasos intermedios de acondicionamiento del producto convierte al uso de lodos en restauracin forestal en una alternativa interesante y econmica frente a otros destinos. No obstante, sera necesario definir las posibilidades de uso en estas actuaciones de restauracin alternativas, como la repoblacin de zonas forestales degradadas, en base a sus efectos sobre las plantas introducidas y a las limitaciones tcnicas y logsticas. Factores que condicionan el uso de enmiendas orgnicas Los efectos de la aplicacin de enmiendas orgnicas sobre la morfologa y la supervivencia de las plantas en ambientes secos son muy variables en funcin de las caractersticas del medio fsico, el tipo de producto, la dosis y el tipo de aplicacin empleado. Adems, estos efectos pueden desaparecer rpidamente durante las primeras fases post-plantacin (Zagas et al., 2000; Valdecantos et al., 2011) o persistir en el tiempo (Querejeta et al., 2008) Estos condicionantes sern, en su conjunto, los que determinen los cambios fsico-qumicos que se producen en el suelo receptor, las tasas de descomposicin de la materia orgnica y su efecto final sobre la vegetacin. Los cambios mencionados pueden ser adaptados al objetivo de cada actuacin de restauracin concreta. En zonas muy degradadas, el objetivo puede ser una rpida recuperacin de los procesos microbiolgicos del suelo que permita reestablecer niveles de fertilidad a corto plazo y mantener una mnima cubierta vegetal que 7

Introduccin

proteja al suelo. En repoblaciones forestales el objetivo debe ir dirigido a atenuar limitaciones hdricas y nutricionales, mejorando el establecimiento y crecimiento posterior de las plantas introducidas, por lo que interesa un efecto, al menos, a medio plazo. En otros casos interesar incrementar rpidamente la cubierta vegetal, o modificar aspectos especficos del suelo, como el nivel de materia orgnica, drenaje, etc., o simplemente dotarlo de una proteccin en superficie que evite su degradacin hasta que sea colonizado nuevamente por vegetacin (mulch). La mineralizacin de la materia orgnica de los suelos enmendados est fuertemente influida por el grado de madurez del residuo orgnico utilizado y por la composicin textural del suelo (Pascual et al., 1998, 1999; Hernndez et al., 2002; Leifeld et al., 2002). La aplicacin de residuos frescos o poco maduros puede promover la reactivacin de los procesos biogeoqumicos a corto plazo, debido a la gran proporcin de compuestos solubles, fcilmente degradables, que generan una rpida respuesta microbiana (Pascual et al., 1999). Por el contrario, los residuos compostados aportan mayor cantidad de compuestos humificados, ms estables, y liberan los nutrientes ms lentamente. A su vez, el tipo de suelo condiciona el efecto de la enmienda sobre sus propiedades fsico-qumicas, as como la respuesta de los microorganismos y de las plantas. La aplicacin de enmiendas orgnicas en suelos con texturas gruesas es ms efectiva en la mejora de la capacidad de retencin hdrica (Khaleel et al., 1981) que la aplicacin en suelos con texturas finas, ya que tienden a mejorar propiedades del suelo como la porosidad y el drenaje (Aggelides et al., 2000). Las texturas finas confieren mayor proteccin fsica a la materia orgnica y a la biomasa microbiana mediante la sorcin del C orgnico en las partculas minerales y una mayor incorporacin dentro de los agregados del suelo, lo que provoca una menor actividad microbiana y descomposicin de materia orgnica (Hassink et al., 1993; Balesdent et al., 2000; Hernndez et al., 2002). Adems, estas variaciones en las tasas de mineralizacin dependen en gran medida del grado de incorporacin del residuo orgnico y de su posterior distribucin en el suelo. A menor tamao de partcula aplicada (o mayor grado de incorporacin al suelo), su descomposicin es ms rpida, ya que aumenta la superficie especfica que interacta con los microorganismos. Otras propiedades del suelo, tales como humedad, pH y temperatura, influyen en la dinmica de la materia orgnica en el

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suelo (Chodak et al., 2001) y, por lo tanto, en la respuesta de las plantas, as como en la biodisponibilidad de los metales pesados que contienen (ver ms adelante). El tipo de preparacin del suelo condiciona el grado de incorporacin del producto y la duracin del efecto sobre las plantas. La aplicacin puntual en hoyos de plantacin, escasamente mencionada en la bibliografa, supone que el brinzal introducido colonizar el suelo fuera del hoyo en un plazo relativamente breve, relativizando la influencia de los nutrientes disponibles en el propio hoyo. Por el contrario, una aplicacin ms extendida, de forma similar a la agrcola (areal o lineal), elimina este efecto borde por lo que su influencia sobre el desarrollo del sistema radicular puede ser ms prolongada (Roldn et al., 1996; Barber et al., 2005). En este sentido, hay que destacar que en un 54% de la superficie reforestada en la Comunidad Valenciana (perodo 1989-1997), sin contar las zonas acogidas al plan de forestacin de tierras agrarias, se utiliz el hoyo de plantacin (o banqueta) como mtodo de preparacin del terreno (Alloza, 2003). Esto supone que, del promedio de 1667 ha reforestadas anualmente, un total de 900 ha se realizaba mediante ahoyado mecnico o manual. Actualmente se incentiva el uso de preparaciones puntuales siempre que sea posible, por tratarse de mtodos menos agresivos con el medio, que permiten conservar la biodiversidad y tienen un menor impacto paisajstico (PATFCV, 2011). Algunos trabajos han apuntado diferencias importantes en el efecto de la aplicacin de enmiendas orgnicas asociadas a la distinta preparacin del terreno (Roldn et al., 1996), pero hasta el momento, no se ha explorado hasta qu punto resulta viable la adicin de stas, especialmente de bioslidos, cuando se realizan de manera puntual en los hoyos de plantacin, y qu condicionantes presenta. Todo esto hace difcil la generalizacin en el establecimiento de dosis adecuadas (Tabla 1). La dosis efectiva a la que la planta se ve sometida, y con ello sus efectos, depende de un gran nmero de variables (Fig. 1). De manera general, el empleo en trabajos de restauracin de dosis mayores a las comnmente utilizadas en agricultura se justifica, fundamentalmente, por la imposibilidad tcnica y econmica de aplicaciones peridicas que permitieran mantener el nivel de materia orgnica del suelo en valores aceptables. Por otro lado, en estos ecosistemas se requiere mucho tiempo para acumular de manera natural un nivel adecuado de materia orgnica que permita mantener niveles de fertilidad 9

Introduccin

aceptables. Esto es particularmente evidente en sistemas sometidos a perturbaciones que eliminan la cubierta vegetal y que, en muchos casos, siguen un proceso de lenta recuperacin (Vallejo et al., 1998).

Figura 1. Esquema conceptual de las interacciones entre algunos de los factores implicados en la utilizacin de bioslidos en la restauracin forestal.

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Captulo 1

El uso de dosis elevadas suele estar asociado a la restauracin de zonas extremadamente degradadas, como canteras o minas a cielo abierto. En estos medios, el elevado nivel de degradacin justifica la reconstruccin total del ecosistema, incluyendo la formacin del suelo a partir de materiales muy pobres desde el punto de vista fsico, qumico y biolgico, que no son aptos para sustentar la vegetacin si no son previamente enmendados. En estos casos, la -1 aplicacin de elevadas dosis de bioslidos (hasta 400 Mg p.s. ha ) modifica propiedades del suelo como la densidad y la porosidad, aumenta la capacidad de retencin de agua (Cox y Whelan, 2000; Moreno-Pearanda et al., 2004; Williamson et al., 2009), e incrementa la estabilidad de agregados (Bastida et al., 2007), confiriendo mayor proteccin frente a la erosin (Sort y Alcaiz, 1996). Estudios a largo plazo indican que, atendiendo a la composicin, diversidad y riqueza especfica de zonas restauradas con dosis elevadas, las comunidades vegetales desarrolladas sobre stas pueden desviarse de los objetivos iniciales (Paschke et al., 2005; Sullivan et al., 2006). Un ejemplo de uso de dosis relativamente bajas se encuentra en la transformacin de ciertas masas forestales poco resilientes, degradadas o poco productivas, en dehesas aprovechables por el ganado o como zonas cortafuegos (Alcaiz et al., 2003; Tarrasn et al., 2007). En estas zonas, la aplicacin superficial de dosis -1 cercanas a 10 Mg de bioslidos ha permite acelerar el establecimiento de la vegetacin y controlar la erosin.
Tabla 1. Dosis de aplicacin de bioslidos recogidas en la bibliografa sobre restauracin y repoblacin de zonas degradadas. Se han excluido las referencias relacionadas con la restauracin de explotaciones mineras, obras lineales, y de zonas contaminadas (biorremediacin). Se resalta en negrita la o las dosis que mejor respondan al objetivo propuesto en cada estudio. Referencia Banerjee et al., 1997 Cogliastro et al., 2001 Estrela et al., 2009 Fernndez et al., 2007 Gasc et al., 2007 Tipo de Bioslido Digestin anaerbica -Compostado Compostado/ Secado trmico Seco Dosis (Mg p.s. ha-1) 0-50-100 (x2) 3,7-7,4-11,2 22 0-20-80 0-4-8-16-32-64Objetivo* Suelo Planta Planta Calidad de suelo Planta / Suelo en

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Introduccin

Referencia Hernndez et al., 2007 Kowaljow y Mazzarino, 2007 Labrecque y Teodorescu, 2001 Larcheveque et al., 2008, 2006 Larcheveque et al., 2009 Meyer et al. 2004, 2001 Navas et al., 1999 Paschke et al., 2005 Ros et al., 2003 Rostagno et al., 2001 Selivanovskaya et al., 2003 Sullivan et al., 2006 Tarrasn et al., 2007; Ojeda et al., 2003 Valdecantos et al., 2011 Walter y Calvo, 2009; Walter et al., 2000 White et al., 1997
*

Tipo de Bioslido Compostado Compostado Seco granulado Compostado Compostado Compostado Digestin anaerbica -Fresco/Compostado -Compostado -Compostado/ Digerido Secado/ Trmico Lquido/Seco Digestin anaerobia Fresco

Dosis (Mg p.s. ha-1) 128 40 aprox. 40 12,5 13,2-26,4 47-95 5-10-20-40-80 4-8-16-32 56-112-224 125 7-18-34-90 25-50-75-100150-175 2,5-5-10-21-30 10 10 40-80-120 22,5-45-90

Objetivo* macetas Calidad suelo Cobertura /Calidad de suelo Planta introducida Planta Vegetacin natural postincendio Control de erosin Biomasa, cobertura Biomasa, cobertura Calidad de suelo Planta, calidad del suelo Planta/Calidad suelo Biomasa, cobertura Planta Biomasa, cobertura / Calidad de suelo Restauracin suelo

Planta: planta introducida Calidad de suelo: actividad microbiana / aspectos fsico-qumicos Biomasa/cobertura: cobertura vegetal e incrementos de biomasa principalmente de vegetacin natural

Efectos de la aplicacin de enmiendas orgnicas sobre las plantas En trminos generales, la vegetacin forestal suele responder a la incorporacin de nutrientes provenientes de enmiendas orgnicas mejorando su estado 12

Captulo 1

nutricional (Binkley, 1993). As mismo, existen evidencias de que, tanto a nivel de hoja como de planta, la mejora del estado nutricional puede aumentar la eficiencia en el uso del agua (Linder y Rook, 1984; Radin y Eidenbock, 1984; Song et al., 2010). Gracias a estos mecanismos, las enmiendas orgnicas favorecen un incremento de la produccin, acelerando el desarrollo de una cubierta vegetal, incluso en sistemas con fuerte limitacin hdrica como los mediterrneos (Guerrero et al., 2001; Larcheveque et al., 2006; Tarrasn et al., 2007; Valdecantos et al., 2011). El rpido establecimiento de la cubierta vegetal resulta de vital importancia en zonas afectadas por perturbaciones, como los incendios forestales, que conlleven una exposicin prolongada del suelo a los agentes erosivos. Por ejemplo, se ha propuesto que una cobertura del suelo de un 30% permite minimizar la erosin despus de un incendio forestal (Aronson et al., 1993) o en taludes revegetados (De las Heras et al., 2010). Adems de afectar a la acumulacin de biomasa, la aplicacin de enmiendas orgnicas puede modificar la asignacin de sta a las diferentes partes de la planta. Con frecuencia, las enmiendas orgnicas provocan un mayor crecimiento de la parte area en relacin a la subterrnea (Valdecantos et al., 2011), de manera anloga a lo observado tras la aplicacin de fertilizantes inorgnicos (Poorter y Nagel, 2000). Valores elevados de la relacin biomasa area: biomasa subterrnea pueden suponer una desventaja en medios en los que el agua es limitante (Lloret et al., 1999), ya que pueden acarrear un aumento de la superficie transpirante respecto a la absorbente (Trubat et al., 2008; Hernndez et al., 2009). Por otra parte, la alteracin de la disponibilidad de recursos edficos puede promover cambios en la morfologa y la arquitectura radical (Green et al., 2005; Trubat et al., 2006; Valdecantos, 2011), lo que podra afectar a su capacidad para acceder a un mayor volumen de suelo y a horizontes edficos profundos, factores clave para la supervivencia de especies mediterrneas en zonas secas y semiridas (Cortina et al., 2004; Padilla et al., 2007). Tal como se ha apuntado anteriormente, a corto plazo, las concentraciones de N y P en tejidos foliares suele incrementar tras la aplicacin de bioslidos. Este incremento refleja, por un lado, que N y P son los nutrientes que con ms frecuencia limitan el crecimiento vegetal, incluso en medios mediterrneos (Moffat et al., 1991; Koerselman y Meuleman, 1996; Sardans et al., 2004; Valdecantos et al., 2006). Por otro lado, el aumento de la concentracin foliar de N y P no es sorprendente, dada la elevada concentracin de estos elementos en la 13

Introduccin

mayora de bioslidos (Tabla 1, en Apndice 1). La mineralizacin de nutrientes a partir de enmiendas orgnicas, ms lenta que en la mayora de fertilizantes inorgnicos, supone una ventaja en sistemas forestales, al aumentar la eficiencia de la fertilizacin (Pomares, 2001). De manera general, el mximo efecto de las aplicaciones de lodos sobre la morfologa de la planta introducida se obtiene tras la aplicacin de dosis -1 moderadas, cercanas a 25 Mg peso seco ha (Sheedy, 1997; Zagas et al., 2000; Labrecque y Teodorescu, 2001; Valdecantos et al., 2011; Tabla 3). Por ejemplo, en repoblaciones realizadas en matorrales dominados por Quercus coccifera L. del sur -1 de Francia, el empleo de compost de lodos de depuradora a dosis de 13-26 Mg ha provoc un aumento de la supervivencia y del crecimiento de Quercus ilex y Pinus pinea (Larchveque et al., 2006). Dosis mayores pueden producir daos en las hojas (Gasc et al., 2001, 2007), disminucin de la produccin (Escudero et al., 1997; Navas, 1999) e incluso reduccin de las poblaciones microbianas (Banerjee et al., 1997). La aplicacin de dosis altas de residuos orgnicos o el empleo de materiales no compostados o poco maduros puede provocar una elevada mineralizacin del N orgnico, y una excesiva acumulacin de N inorgnico (Hallett et al., 1999). Este exceso de N puede inducir desequilibrios nutricionales y marcadas deficiencias en determinados nutrientes menos presentes en los bioslidos o con tasas de mineralizacin ms lentas (Harrison et al., 1996), generando deficiencias secundarias. Otra consecuencia derivada de este tipo de aplicaciones, es la acumulacin de sales solubles en la rizosfera, bien por aplicacin directa con el bioslido o bien por la mineralizacin de la materia orgnica (Binkley, 1993; Rodgers y Anderson, 1995; Gasc et al., 2007). El efecto fitotxico asociado al efecto osmtico de las sales concentradas en la rizosfera se puede traducir, en zonas secas y clidas, en un aumento del estrs hdrico (van den Driessche et al., 2003; Jacobs et al., 2004), hasta el punto de comprometer la supervivencia de las plantas. No obstante, la informacin disponible sobre esta cuestin es escasa. A su vez, esta eutrofizacin puede favorecer la presencia de especies ruderales y nitrfilas, de ciclo vital corto (herbceas anuales, bianuales, etc.; Torbert y Johnson, 1993; Young et al., 1993; Ibez et al., 1994; Loftin y Aguilar, 1994; Cornelissen et al., 1996) presentes en estado de latencia en el banco de semillas del suelo o de origen exgeno, introducidas con la enmienda (especialmente en caso de enmiendas frescas no compostadas). Estas especies pueden llegar a competir 14

Captulo 1

por recursos edficos y por luz con las plantas introducidas, llegando a provocar el desplazamiento competitivo de especies perennes caractersticas de estadios avanzados de la sucesin (Cuevas et al., 2001). Tanto el exceso de salinidad como la competencia contribuyen a aumentar la mortalidad de los brinzales introducidos (Berry, 1977; Ramsey et al., 2003; van den Driessche et al., 2003). De hecho, en la mayora de casos, la aplicacin de enmiendas orgnicas en medios forestales tiene un efecto neutro o negativo sobre la supervivencia de las plantaciones forestales, especialmente cuando las enmiendas se aplican a dosis altas (Marx et al., 1995; Sheedy, 1997; Alonso et al., 2000; Zagas et al., 2000; Romn et al., 2003). Estos efectos son comunes y han sido bien documentados en cultivos agrcolas. En estos medios, se puede utilizar determinadas prcticas, como binas, desbroces y riegos, para reducir la competencia y atenuar el efecto fitotxico de los bioslidos, mitigando los efectos negativos de estas enmiendas. Pero la ausencia de carcter productivo y de beneficio econmico directo, junto a restricciones presupuestarias, impide el uso de estas tcnicas en muchas de las actuaciones de restauracin. Por lo tanto, se requieren estudios que permitan establecer los efectos de la aplicacin de enmiendas orgnicas sobre los brinzales introducidos y de su interaccin con los distintos factores biticos y abiticos, y con las tcnicas de manejo. Sensibilidad de las plantas a metales pesados El trmino metal pesado engloba a aquellos elementos cuya densidad es superior -3 a 5 g cm cuando estn en forma elemental, o cuyo nmero atmico es superior a 20 (excluyendo los metales alcalinos o alcalinotrreos; Kabata-Pendias y Pendias, 1992). Tienen un gran impacto ambiental debido a que se trata de elementos acumulativos en organismos y no biodegradables. La presencia, en un amplio rango de concentraciones, de estos elementos en bioslidos y residuos orgnicos, junto con algunos compuestos orgnicos, puede crear un ambiente txico para diferentes componentes de la comunidad en la zona de aplicacin, y en sistemas afectados por el lavado de dichos compuestos, como las aguas subterrneas (McGrath et al., 1995; uczkiewicz, 2006). El uso de bioslidos en la restauracin de zonas degradadas y en la formulacin de substratos de cultivo para la produccin de planta forestal representa la aparicin de nuevos escenarios de introduccin de contaminantes en suelos naturales (Smith, 1996; Knight et al., 1997; Adriano, 2001; Barrera et al., 2001; Ortiz y 15

Introduccin

Alcaiz, 2006). Estas vas de entrada se uniran a los residuos de zonas mineras o de tratamiento de minerales (Poschenrieder et al., 2001; Huttermann et al., 2004), as como a la contaminacin difusa en zonas urbanas e industriales (Al-Momani et al., 2002; Azimi et al., 2003; Walker et al., 2003; Padmavathiamma y Li, 2007). Los factores que influyen en la respuesta de la vegetacin a la exposicin a niveles elevados de metales pesados y en el riesgo de contaminacin de aguas subterrneas estn relacionados con las propiedades del suelo, especialmente con el pH (Smith, 2009). El pH condiciona la movilidad de los metales (Martnez y Motto, 2000), siendo por lo general, menor a valores crecientes de pH. Por ello, su persistencia en suelos bsicos es generalmente elevada y su disponibilidad, baja. La mayor parte de los suelos forestales de la Comunidad Valenciana presentan pH elevados y altos contenidos en CaCO3, aspectos ambos que contribuyen a mantener una reducida movilidad de los metales (Illera et al., 2000; Martnez y Motto, 2000). Otro factor que influye en la movilidad de los metales pesados es la adsorcin por ciertos componentes del suelo como los propios carbonatos, las partculas de arcilla, los xidos, y la materia orgnica, nativa o aadida (Alloway y Jackson, 1991; Walker et al., 2003; Rate et al., 2004; Snchez-Monedero et al., 2004). La escasez de precipitaciones y la baja humedad edfica tambin influyen en la movilidad y, por tanto, en la bioacumulacin de los metales pesados, aunque pocos trabajos han incidido en este aspecto (Pascual et al., 2004; Disante et al., 2011). Algunos metales pesados (Fe, Mn, Zn, Cu, Mo, Ni) son, por otra parte, micronutrientes esenciales (Marschner, 1995) presentes en los tejidos vegetales en muy bajas concentraciones e involucrados en numerosas funciones vitales como el transporte de electrones en la fotosntesis, la tolerancia al estrs, el crecimiento reproductivo, y la constitucin de paredes y membranas celulares. La mayora de estas funciones son debidas a su presencia en grupos proteicos y su papel como activadores de reacciones enzimticas (Marschner, 1995; Kyrkby y Rmheld, 2007). Sin embargo, la acumulacin de altas concentraciones de metales pesados en la solucin del suelo puede provocar diversos sntomas de toxicidad causados por un complejo conjunto de interacciones a nivel celular y molecular (Hall, 2002). Estos conllevan normalmente una disminucin en la acumulacin de biomasa vegetal (Kukkola et al., 2000), inhibicin del crecimiento radicular (Arduini et al., 1995; Hartley et al., 1999), disminucin de la absorcin de elementos esenciales e interferencias en su metabolismo (Kabata-Pendias y Pendias, 1992; Kukkola et al, 16

Captulo 1

2000) y modificacin de la morfologa y arquitectura de la raz (Schmidt, 1997; Krogmann et. al., 1998). Estas alteraciones pueden afectar a otros aspectos de la fisiologa de las plantas, como es la eficiencia en la captura y transporte de agua (Barcel y Poschenrieder, 1990; Kabata-Pendias, 1992; Disante et al., 2010), y con ello comprometer su capacidad para resistir condiciones de estrs. La mayora de estudios sobre efectos de metales pesados en plantas se ha centrado en especies herbceas y de inters agrcola. La vegetacin forestal es diferente no slo a nivel taxonmico, sino tambin en cuanto a sus estrategias morfofuncionales, por lo que los conocimientos obtenidos con especies de inters agrcola sobre los lmites de toxicidad, bioacumulacin, etc. son difcilmente extrapolables de una manera directa. Los trabajos disponibles sobre especies leosas han mostrado que stas son sensibles a la presencia de metales pesados (Arduini et al., 1995, 1996; Kukkola et al., 2000; Disante et al., 2010). Por otra parte, existe una gran diversidad de respuestas a los metales pesados a nivel intra e interespecfico (Woolhouse, 1983; Marschner, 1995). Actualmente disponemos relativamente de poca informacin acerca de la dinmica de los metales en medios forestales mediterrneos y de su potencial toxicidad sobre especies leosas tpicas de estos medios. Contexto y cronologa del trabajo realizado Los estudios experimentales incluidos en esta memoria comenzaron con el proyecto Tcnicas para mejorar las repoblaciones en suelos deficitarios en agua y/o nutrientes (1999-2001, 1FD97-1117-C05-03; FEDER-CICYT), concretamente dentro del subproyecto Aprovechamiento Forestal de Lodos de Depuradora. En l estaban implicados los centros de investigacin Fundacin CEAM (Centro de Estudios Ambientales del Mediterrneo), CIDE-CSIC-UV (Centro de Investigaciones sobre Desertificacin, Departamento de Degradacin y Conservacin de Suelos) y el Departamento de Ecologa de la Universidad de Alicante. Adems figuraban como Entes Promotores Observadores (EPO) la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales de la Comunidad Valenciana (EPSAR) y la empresa TRAGSA (Transformaciones Agrarias, S.A.). La investigacin contenida en esta memoria surge ante la necesidad de explorar posibilidades de diversificacin del uso de los lodos de depuradora, ms all de la aplicacin agrcola. Entre otras alternativas, se consider su uso en repoblaciones 17

Introduccin

forestales y su incorporacin como parte del sustrato de vivero para la produccin de plantas forestales (Saquete et al., 2006). Debido al hecho de que la mayora de trabajos de repoblacin y restauracin forestal que implican introduccin artificial de plantas se realizan con una preparacin del suelo mediante ahoyado puntual (o al menos, no areal), y como consecuencia del carcter conservador que han de tener estas actuaciones, se opt por dirigir los esfuerzos a conseguir una mejora de las condiciones edficas a nivel de hoyo de plantacin. Como ya se ha comentado anteriormente, a finales de la pasada dcada la capacidad de tratamiento de los lodos de depuradora en plantas procesadoras para su minimizacin y saneamiento era mucho menor que la actual, mientras que su generacin se iba incrementando de manera drstica. En los ltimos aos se ha observado una estabilizacin de la generacin de lodos y se han impulsado nuevas tecnologas para su reciclaje y eliminacin. Esto sustent la idea de aprovechar el valor fertilizante del lodo tal como es extrado de la lnea de deshidratacin de la depuradora, sin necesidad de tratamientos posteriores que pudieran encarecer el producto. El segundo captulo de la memoria surge a partir del establecimiento de un proyecto piloto en el trmino municipal de Zarra (Valencia) que tena como objetivos evaluar los costes de la aplicacin forestal de lodos, e identificar los problemas tcnicos y logsticos de este tipo de actuaciones (Foto 3). Las caractersticas de un proyecto piloto condicionaron el diseo experimental de este estudio. Cientficamente nos dio la oportunidad de evaluar los efectos de la aplicacin de dosis altas de bioslidos sobre el comportamiento en campo de brinzales de dos especies arbreas mediterrneas con estrategias ecolgicas contrastadas, Pinus halepensis Mill. y Quercus ilex L. Desf., e identificar algunos de los mecanismos que determinan la instalacin y desarrollo de los mismos.

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Captulo 1

Foto 3. Plantacin de Zarra tras 6 aos desde la aplicacin de bioslidos (arriba). Abajo, descarga y reparto de los lodos de depuradora concentrados durante la fase de plantacin.

El cuarto y quinto captulo de la tesis surgieron a partir de una nueva colaboracin entre la Fundacin CEAM, el Departamento de Ecologa de la Universidad de Alicante, el Departamento de Biologa Vegetal de la Universidad de Barcelona y la EPSAR. En el ao 2002 comenz el proyecto BIOMON (REN2000-0181-P4-03 Bioslidos en Montes Mediterrneos) con el objetivo de determinar en qu medida ciertos tipos de bioslidos, que se desechaban para su uso agrcola por el alto contenido de metales pesados, podan ser aprovechados para la fertilizacin orgnica de repoblaciones forestales de una manera segura y controlada. Los metales pesados que normalmente inutilizaban cerca de un 10 % de los lodos potencialmente utilizables en agricultura eran el Cu, Ni y Zn, todos procedentes de zonas con industrias especficas. Este objetivo tcnico nos permiti identificar niveles de fitotoxicidad en especies leosas Mediterrneas utilizadas habitualmente en la restauracin de reas degradadas. Para alcanzar este objetivo,

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Introduccin

se disearon dos experimentos en condiciones controladas. Por una parte, se utilizaron lismetros que permitan simular un hoyo de plantacin, y realizar un seguimiento detallado de los cambios morfolgicos y fisiolgicos de los brinzales durante un ao, incluyendo la evolucin del sistema radical (Foto 4). Por otra parte, en el vivero pblico de Quart de Poblet (Valencia) se llev a cabo un experimento en cultivo hidropnico con el que determinar la sensibilidad a Cu, Ni y Zn de diferentes especies leosas utilizadas en trabajos de repoblacin forestal y restauracin (Foto 5). El estudio con cultivos hidropnicos permiti evaluar la respuesta de plntulas a niveles crecientes de varios metales en condiciones controladas.

Foto 4. Vista en detalle (izquierda y derecha-abajo) y general (derecha-arriba) de los lismetros utilizados en el Captulo 4 de la memoria.

Finalmente, con la informacin extrada de las experiencias realizadas y las llevadas a cabo anteriormente por la Fundacin CEAM y el Departamento de Ecologa de la Universidad de Alicante, se solicit un nuevo proyecto para definir dosis ptimas de aplicacin de residuos orgnicos en repoblaciones forestales. En el marco del proyecto OLORES (Optimizacin de la Aplicacin de Lodos de Depuradora en la Restauracin Forestal en Medio Mediterrneo, MARM 607/2004/120

Captulo 1

4.4) se establecieron experimentos de campo (Foto 6) y vivero para profundizar en el estudio de los efectos de la aplicacin de lodos en el suelo y en la planta, as como sus interacciones. El proyecto se complet con la realizacin de un estudio a escala de la provincia de Alicante en el que, a partir de criterios extrados de la bibliografa, y de ste y anteriores proyectos, se llev a cabo la identificacin de zonas potencialmente aptas para la realizacin de trabajos de repoblacin que contemplaran la adicin de lodos de depuradora. Este estudio, recogido en un Sistema de Informacin Geogrfica (Apndice 4), tuvo en cuenta las depuradoras de la provincia, sus caractersticas, y el volumen de los lodos generados en cada una de ellas.

Foto 5. Detalle del cultivo hidropnico realizado en el vivero de Quart de Poblet (Valencia) y muestreo destructivo posterior (derecha-arriba).

A finales del ao 2006 se realizaron nuevas determinaciones en la zona experimental de Zarra, tanto en las plantas introducidas como en los hoyos de plantacin que he considerado oportuno incluir en la memoria para poder realizar 21

Introduccin

una mejor interpretacin de los resultados obtenidos. Para favorecer la coherencia en la estructura de la memoria, he incluido los nuevos datos, tablas y grficas en forma de apndice (Apndice 2). Dichas medidas formaron parte del proyecto que abarcaba adems la experiencia llevada a cabo en Enguera (Valencia), por lo que en su gran mayora los resultados para esta zona ya estn incluidos en el artculo cientfico correspondiente al Captulo 3 de la memoria.

Foto 6. Vista general de la parcela experimental en Enguera (izquierda y derecha-abajo) y de un individuo de P. halepensis durante el segundo ao de plantacin (derechaarriba).

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Captulo 1

Objetivos Esta tesis doctoral tiene, como objetivo general, evaluar los efectos de la aplicacin de bioslidos sobre suelo y planta en repoblaciones forestales en medios mediterrneos, as como su viabilidad tcnica, y contribuir a optimizar el uso de estos productos en estos medios. Se pretende alcanzar este objetivo general a partir de los siguientes objetivos parciales: 1) Estudiar la viabilidad del uso de lodos concentrados en preparaciones puntuales del suelo mediante la evaluacin de su efecto en brinzales de Pinus halepensis y Quercus ilex introducidos en zonas degradadas. 2) Identificar dosis adecuadas de aplicacin de dos tipos de lodos de depuradora (secos y compostados) en condiciones de campo, explorando los distintos factores que afectan a la respuesta de los brinzales de Pinus halepensis introducidos. 3) Identificar los efectos a corto plazo de la aplicacin de bioslidos enriquecidos con metales pesados en la morfologa y la fisiologa de brinzales de Pinus halepensis bajo condiciones de clima semirido y sobre suelos representativos de las zonas forestales de la Comunidad Valenciana. 4) Determinar la sensibilidad de cuatro especies leosas mediterrneas a la presencia de metales pesados en la solucin del suelo, estimar la capacidad de bioacumulacin de cada especie, la distribucin del metal en las distintas fracciones de biomasa, y la concentracin interna y externa a partir de la cual comienza a mostrar sntomas de toxicidad. Estos objetivos corresponden a los Captulos 2-5 de esta memoria. Adems, un objetivo derivado del tercer captulo es la estimacin del rea forestal susceptible de recibir fertilizacin orgnica en repoblaciones forestales en la provincia de Alicante. Esta aproximacin se basa en la elaboracin de un sistema de informacin geogrfica (SIG) con criterios bsicos obtenidos a partir de la bibliografa y de experiencias propias recogidas, en su mayor parte, en esta memoria.

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Seedling performance in sewage sludgeamended degraded Mediterranean woodlands


Efecto de la aplicacin de bioslidos en la repoblacin forestal con Pinus halepensis y Quercus ilex

David Fuentes, Alejandro Valdecantos, Jordi Cortina y V. Ramn Vallejo

Ecological Engineering 31: 281-291 (2007)

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

Abstract Biosolids have been widely used for land reclamation, but information on their use in restoration, i.e., on less degraded areas, is scarce. Biosolids may be used to restore forest ecosystems by fostering tree establishment in degraded shrublands. Detailed knowledge on the effects of biosolid application is needed to optimize such practice. We evaluated the effect of different rates (0, 7.5 and 14.5 kg dry weight per plant) and types of biosolid application on the performance of Pinus halepensis and Quercus ilex seedlings, and operational costs. Biosolids increased seedling mortality in both species, particularly when seedlings were planted in direct contact with them. Mortality mostly occurred during the first year, and was probably favored by soil shrinking and salinity. Foliar and needle nitrogen concentration increased with biosolid rate in the short term, but biosolids affected negatively (P. halepensis), or had no effect (Q. ilex) on phosphorus and potassium concentration. Biosolids had a positive effect on P. halepensis growth, and a negative effect on Q. ilex growth at the highest rate when seedlings were in contact with biosolids. Cost of this type of biosolid application approximately doubled plantation cost, but were similar or cheaper that landfill disposal of biosolids. The lowest application rate showed the best balance between seedling response and costs for P. halepensis, whereas biosolid use cannot be recommended for Q. ilex. Keywords: Pinus halepensis, Quercus ilex, restoration, salinity, seedling growth, mortality, sewage sludge.

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Captulo 2

Resumen Los bioslidos han sido normalmente utilizados para la recuperacin de zonas muy degradadas, pero se dispone de poca informacin sobre su uso en otras reas de la restauracin forestal. Su uso para la introduccin de especies arbreas en zonas de matorral degradado requiere un conocimiento ms detallado de sus efectos para optimizar esta prctica. Hemos evaluado el efecto de diferentes dosis (0, 7.5 y 14.5 kg de peso seco por planta) y tipos de aplicacin de bioslidos en el establecimiento y desarrollo posterior de brinzales de Pinus halepensis y Quercus ilex as como sus costes asociados. Los bioslidos incrementaron la mortalidad en ambas especies, particularmente cuando los brinzales fueron situados en la zona de mayor influencia del bioslido y principalmente durante el primer ao, como consecuencia del agrietamiento de la superficie del hoyo de plantacin y el incremento de la salinidad del suelo. A corto plazo, la concentracin foliar de nitrgeno increment con la dosis de bioslidos en ambas especies, disminuyendo las concentraciones de fsforo y potasio en P. halepensis. Los bioslidos tuvieron un efecto positivo en el crecimiento de P. halepensis con la aplicacin puntual de ambas dosis, y negativo en Q .ilex cuando se aplic la dosis alta y la planta estaba en contacto con ellos. El coste de este tipo de aplicacin de bioslidos prcticamente duplic el coste de plantacin, aunque fue similar o ms barato que su eliminacin en vertedero. La dosis ms baja mostr el mejor balance entre la respuesta de los brinzales y el coste para P. halepensis, mientras que el empleo de bioslidos mediante estas tcnicas no puede ser recomendado para Q. ilex. Palabras clave: Pinus halepensis, Quercus ilex, restauracin, salinidad, crecimiento, mortalidad, lodo de depuradora.

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Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

1. Introduction Forest soils in the Mediterranean basin have been intensively exploited for centuries (Naveh, 1982), resulting in a loss of soil organic matter and nutrients (Martnez-Mena et al., 2002). Under these conditions soils often show evidence of nutrient limitation, particularly for phosphorus and nitrogen (Rod et al., 1999; Sardans et al., 2006), and this may hamper vegetation recovery in degraded soils (Vallejo et al., 2000). Biosolids represent an easily accessible source of organic matter and nutrients and can be used to restore degraded ecosystems. Biosolid production has dramatically increased in the last decade due to more rigorous European Directives (Commission of the European Communities, 1991) on waste water quality. Sewage sludge reutilization has been recommended as the best practicable environmental option for the management of this organic residue (Hall, 1999). Agricultural activities currently absorb half of the biosolids produced in water treatment plants (USEPA, 1999; European Commission, 2000), but environmental risks may impose restrictions on its further use (European Commission, 2000). Biosolid applications for the reclamation of degraded areas (Sort and Alcaiz, 1996; Cogliastro et al., 2001; Wilden et al., 2001) and for the production of growth substrates (Hernndez-Apaolaza, 2005) represent novel scenarios for reutilization. Detailed information on the effects of biosolids on ecosystems is needed to maximize the benefits and minimize the environmental risks of biosolid use in ecological restoration. Recently, several studies have evaluated the effect of the application of biosolids and other organic amendments on the performance of planted Mediterranean species (Sort and Alcaiz, 1996; Caravaca et al., 2003; Alguacil et al., 2004; Larchevque et al., 2006; Fuentes et al., 2007). Most of these studies have focussed on the restoration of heavily degraded areas such as old-fields and mines. A quite different case is the restoration of degraded shrublands, which may partly retain the components and functions of an undamaged ecosystem (Cortina et al., 2006). In this latter case, restoration actions aim at establishing key components of the target ecosystem while preserving, and eventually taking advantage of, the remaining ecosystem functions (Harris and van Diggelen, 2006). Moreover, localized biosolid application (i.e., in the planting holes) may be a better option here than widespread biosolid application and soil incorporation. The application of high but spatially localized doses of biosolids may help to

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Captulo 2

minimize the surface area affected by plantation practices, thus minimizing the damages to the surrounding natural vegetation and reducing the risk of off-site contamination (Loch et al., 1995). Moreover, biosolid application at the planting hole prior to planting may help to reduce costs (Valdecantos et al., 2001) and improve social acceptance by avoiding offensive odors and insect proliferation. At present, scarce information is available on the application rates and types that could optimize the use of biosolids in the restoration of degraded Mediterranean shrublands. This is particularly true at the management scale, as few studies have taken into account the ecological, logistic and economic aspects of largescale biosolid application.

Pinus halepensis and Quercus ilex are two common western Mediterranean tree species that differ in their morphological and physiological traits (Pausas et al., 2004). They have been considered as early-successional and shade intolerant species the former and late-successional and shade tolerant the latter (Broncano et al., 1998). For sustainable reforestation actions in Mediterranean landscapes, pines and broad-leaved resprouting species (especially oaks) should be combined to take advantage of the complementary features of both species groups, i.e. the faster growth of pines and the high post-disturbance resilience of oaks (Pausas et al., 2004). Seedlings of Aleppo pine show better performance in a wider range of environmental conditions than Holm oak (Broncano et al., 1998), but oaks resprouting capacity provides higher resilience during the critical first years after planting. The implementation of pre and post-planting treatments in the artificial introduction of these species in degraded Mediterranean areas show different responses in survival and/or growth (Daz and Roldn, 2000; Bocio et al., 2004; Navarro et al., 2005; Larchevque et al., 2006).
Our hypothesis is that a localized application of this type of biosolid can improve seedling performance of two forest tree species (Pinus halepensis and Quercus ilex) planted on a degraded Mediterranean shrubland in an economically feasible way, as compared with other sewage sludge disposal routes. The aim of the present work is to evaluate the effect of biosolid in seedling survival and growth, especially focusing on the first summer after planting which is the period where most mortality is recorded under Mediterranean dry and semiarid conditions. Nutrient concentration in above-ground tissues, water status, biomass allocation and soil properties were considered to assess the ecological effects of this type of biosolid application on the target seedlings. 30

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

2. Materials and methods

2.1. Site
The study area is located in Zarra (Valencia, E Spain) at an altitude of 750 m above sea level (39 4' latitude, 1 7' longitude). Climate is dry-subhumid Mesomediterranean (406 mm and 12 C: mean annual rainfall and temperature, respectively). The soil is a highly Cambisol carbonated sandy-loam calcaric, developed from marlstone (Table 1). The site had been heavily grazed for decades, resulting in a low shrubland dominated by Rosmarinus officinalis, Cistus spp. and Ulex parviflorus, with isolated adult trees of Pinus halepensis and Quercus ilex and a low plant cover.

Table 1. Physicochemical composition of the soil (mean standard error of N=9) in the experimental area and of the sewage sludge used in the study (OM: organic matter; OC: organic carbon; EC: electrical conductivity; C/N: carbon/nitrogen ratio).

2.2. Biosolid application


In February 2000, a backhoe excavator dug planting holes of two different sizes along 1.46 hectares of gentle, southfacing slopes (0-20%). Regular holes (H) had a smaller surface than enlarged ones (L) (Table 2). As the experimental area was a part of a pilot project and heavy machinery was used, small differences in the size of the planting holes were observed. Anaerobically digested biosolids from a domestic waste water treatment plant (Pinedo I, Valencia) were applied and mixed with the soil at three rates: 0, 7.5 and 14.5 kg dry weight

Clay Lime Sand Dry matter OM* OC* pH (1:2.5) EC (1:5) Total N N-NO3N-NH4+ C/N CaCO3 P Olsen P total K total Ca (CaO) Mg Na Fe Cu Mn Zn Ni Pb Cd Cr Hg
*

% % % % % % dS m-1 % mg kg-1 mg kg-1 % mg kg-1 % % % % % mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1 mg kg-1

Sewage sludge 15 1 23 1 62 1 21.4 3.4 0.5 54.8 2.0 0.3 29.4 8.2 0.1 7.4 0.21 0.01 4.2 0.17 0.02 2.7 68 42 7 1644 11.7 0.4 10.7 53 2 8.1 1.6 4.9 0.19 11 0.76 0.11 30264 406 158 1036 47 182 3.3 267 1.8

Soil

Oxidable fractions Blank spaces: not determined

31

Captulo 2

(d.w.) per planting hole. In the enlarged holes (L) we only applied the highest dose, resulting in four different application treatments: H0, H7, H14 and L14. As planting density was 820 seedlings per hectare, the total amount of biosolid -1 applied was 0, 6 and 12 Mg d.w. ha in H0, H7, and H14 and L14, respectively. Doses were selected to optimize the economic and ecological viability of the application (Valdecantos et al., 2001). We controlled the time employed by the machinery in each operation (biosolid loading, transport and application) to assess economic viability of treatments. Therefore, treatments were patchy distributed along the pilot project whole area. Two different locations of the introduced seedling were assessed in relation to the planting hole and the biosolid applied: in the center (c) or in the periphery (p). In unamended holes seedlings were only planted in the center of the hole. For each combination of species, biosolid amount and location of the seedling we planted 75 seedlings (totalizing 1200 seedlings) of 1-year-old Pinus halepensis Mill. and Quercus ilex subsp. ballota Desf. grown in a nearby nursery in containers filled with peat and coconut fiber.

2.3. Soil characterization


We measured the surface area affected by soil preparation and we did a cross section through the soil of the planting hole to assess the vertical distribution of the biosolids in 9 holes per treatment, randomly selected, regardless of seedling location (Table 2). Soil salinity (0-30 cm depth) was monitored both in the unamended planting holes and in those receiving the highest dose (H14), by measuring the electrical conductivity (EC) of 1:5 (weight/volume) solution of soil and deionized water on four different dates during the first two years after planting. It was also measured in all treatments at the end of the experiment in 6 holes per treatment. Biosolid patches that remained in the planting holes and nearby soil were measured separately. Soil pH (0-30 cm depth) was determined from a 1:2.5 (w/v) solution of soil and deionized water, using the same soil samples.

2.4. Seedling performance


Survival and growth were recorded from February 2000 (at planting) to September 2004 on all plants. Root collar diameter and stem height were measured before and after summer during the first two years, and once in autumn afterwards.

32

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

Seedling water status and biomass accumulation were measured in July 2000, five months after planting, in five randomly selected plants per treatment. This evaluation was not performed in some treatments because of the initial low survival rates. However, we kept on measuring seedling performance in the H14 treatment with seedlings planted in the middle of the planting hole as a reference high mortality treatment. We measured predawn water potential using a pressure bomb (Scholander et al., 1965) on five seedlings per treatment, and then we harvested the seedlings. Roots colonizing the soil were separated from those confined in the original root plug, and the entire root system was carefully washed. We dried all biomass fractions at 65 C for 48 h and determined the dry weight. The aboveground fractions were digested in a heating block at 250 C with a mixture of sulfuric acid and hydrogen peroxide (1:1, v:v) (Jones and Case, 1990). Total N was measured using the Kjeldahl method. Phosphorus, K, Cu, Ni and Zn were measured by ICP-OES (Perkin Elmer Optima 4300 Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry). In October 2000, eight months after planting, we collected the needles and leaves from five randomly selected seedlings per treatment and analyzed foliar nutrient concentration as before. During the destructive sampling, we measured the distance between the root plug and the biosolid patches that remained in the planting holes.

2.5. Data analysis


Survival curves were analyzed for each species using a Log Rank test (Pyke and Thompson, 1986). We first analyzed the survival response to the seedling location in the planting hole (center vs. periphery), and with the location that released the highest survival rates, we then compared the treatment effect. Soil properties, seedling growth, biomass accumulation and nutrition and water status were analyzed by using a one-way ANOVA for one fixed factor (treatment) with four levels. Differences between levels were compared by applying Tukey's b test at 0.05 significance level when ANOVA showed a significant treatment effect. Data were log-transformed when needed to ensure homoscedasticity. Root collar diameter in P. halepensis was analyzed by means of the BrownForsythe statistic as homoscedasticity could not be achieved. Due to the lack of sufficient alive individuals after the first summer in some treatments (mainly in

33

Captulo 2

seedling planted in the center of the hole), we discarded the seedling Location factor in the latter morphology data analysis, keeping only the peripheral-planted and control seedlings. We used regression analysis to evaluate the degree of covariation between seedling performance and soil properties (EC and biosolid patches that remained in the planting holes). All statistical analyses were performed using the SPSS v.10.0 statistical package (SPSS Inc., Chicago, USA).

Table 2. Characteristics of the planting hole and biosolid distribution depending on the dose and type of biosolid application. Mean and standard error of N= 9 planting holes are shown for each treatment. Results of Tukeys test (P<0.05) are indicated by letters within the same column.
Treatments a H0 H7 H14 L14
a

Length (m) 0.75 0.06 bc 0.69 0.04 c 0.82 0.04 ab 1.10 0.06 a

Width (m) 0.53 0.04 bc 0.50 0.02 c 0.56 0.01 ab 0.60 0.01 a

Surface (m2) 0.39 0.07 bc 0.35 0.03 c 0.46 0.02 b 0.66 0.04 a

Biosolid layer Depth (cm) 8.4 1.0 a 12.8 2.1 a 9.2 1.2 a
b

Thicknessc (cm) 10.0 0.8 a 14.9 1.4 b 9.3 0.5 a

H0: control, H7: 7.5 kg d.w. planting hole-1, H14: 14.5 kg d.w. planting hole-1, L14: 14.5 kg d.w. planting hole-1 (enlarged holes). b vertically, from soil surface to sludge patches; c soil-sludge layer.

3. Results

3.1. Soil properties


The soil surface area affected by biosolid application was higher in L14 than in H14 and H7, but maintained the same hole depth (35.5 1.9, 36.3 1.8 and 36.0 2.5 cm, mean and standard error, respectively). The distribution of the biosolid in the planting hole ended up being quite heterogeneous and mainly concentrated in a 9-15 cm layer (Table 2). During the first summer after plantation, 64, 47 and 40% of the holes in the L14, H14 and H7 treatments, respectively, showed cracks in the soil surface, caused by the drying and shrinking of sewage sludge within the planting holes. After the 34

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

first summer, soil EC in treated soils ranged from 0.5 0.1 dS m in the upper soil -1 layer to 4.6 0.3 dS m in the 9-15 cm layer where most biosolid accumulated, -1 with the deepest soil layers showing intermediate values (1.4 0.1 dS m ). Electrical conductivity of biosolid aggregates increased during the first year -1 -1 reaching 4.8 0.3 dS m , and then decreased to 2.2 0.1 dS m after 20 months (Fig. 1), measured in the H14 treatment.
6 5 EC 1:5 (dS m )
-1

-1

Soil Sludge

4 3 2 1 0 0 20 40 60 80

Time (months since planting)

Figure 1. Electrical conductivity of the surface soil (0 to 30 cm depth) (triangles) and of the biosolid patches that remained in the planting hole (closed circles) in the H14 treatment for five years after planting. Data represent means and standard errors of N=10.

Soil EC reached a maximum value of 1.2 0.2 dS m during the second year, and remained almost constant thereafter. Five years after biosolid application, soil in -1 the H14 treatment showed higher EC (1.03 0.25 dS m ; F= 11.46, P< 0.001) than -1 soil in the control treatment (0.18 0.01 dS m ), but was not significantly -1 -1 different from H7 (0.56 0.15 dS m ) or L14 (0.69 0.15 dS m ). The initial value of soil pH was 8.2 0.1 and decreased to 7.8 0.1 after the first summer, remaining constant thereafter (data not shown).

-1

3.2. Seedling survival Pinus halepensis and Q. ilex seedlings showed lower survival rates when planted
in the center of the planting hole, as compared with the periphery location (2=19.40, df=1, P< 0.001 for P. halepensis and 2=30.01, df=1, P< 0.001 for Q. ilex) 35

Captulo 2

(Fig. 2). When seedlings were peripherally planted, biosolids negatively affected the survival of Q. ilex seedlings as compared to control seedlings (2=35.94, df=3, P< 0.001). Results in Pinus halepensis showed a significant treatment effect (2=13.41, df=3, P= 0.004), and the pairwise comparison between curves showed that the application of 7.5 kg per hole (H7) did not affect the survival of P. halepensis as compared with control seedlings (2=0.28 P=0.59). However, H7 enhanced seedling survival rate as compared with L14 and H14 (P=0.028, P=0.078, respectively). In both species, seedling mortality took place mainly during the first summer, with minor seedling death afterwards.
Quercus ilex Pinus halepensis

1,0 Survival rate 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 0

L14 H14 H7 H0

Peripheral Central

10 20 30 40 50 Time (months since planting)

10 20 30 40 50 Time (months since planting)

Figure 2. Survival rates of Quercus ilex (left) and Pinus halepensis (right) treated with different doses of biosolid and soil preparation and planted at two different locations, in the center and in the periphery of the planting hole. H0: control, H7: 7.5 kg d.w. planting hole-1, H14: 14.5 kg d.w. planting hole-1, L14: 14.5 kg d.w. planting hole-1 (enlarged holes). Data represent cumulative survival and standard error.

One year after planting, seedling survival was negatively related to soil EC in Pinus halepensis. Soil EC in the holes, where live seedlings were present, was 0.64 -1 -1 0.21 dS m in P. halepensis and 0.60 0.16 dS m in Q. ilex, whereas soil EC in -1 -1 the holes where seedlings were dead was 1.34 0.17 dS m and 1.45 0.47 dS m in P. halepensis (P=0.02) and Q. ilex (P=0.29), respectively. Five years after planting we found a negative relationship between soil EC and overall survival (including both seedling location, central and peripheral, in the planting hole) for both species (Fig. 3). Crack-associated mortality increases ranged from 4-62 % in P. halepensis and 36

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

from 0-25 % in Q. ilex (calculated as the difference in mortality between seedlings in planting holes presenting cracks, and in those that did not). Cracking mainly affected seedlings located in the middle of the planting hole and, especially, in point treatments (H).
H0 H7 H14 L14

80 Survival (%) 60 40

R = 0.98 P= 0.02

R = 0.98 P= 0.04

20 0 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2 Soil EC (dS m-1)

Figure 3. Relationship between soil electrical conductivity and seedling survival of Pinus halepensis (open symbols) and Quercus ilex (closed symbols) five years after planting. Survival percentage in each treatment includes central and peripheral location of seedlings. Soil EC was obtained from the complete homogenisation of the soil in the planting hole (0-30 cm depth). H0: control, H7: 7.5 kg d.w. planting hole-1, H14: 14.5 kg d.w. planting hole-1, L14: 14.5 kg d.w. planting hole-1 (enlarged holes). Data of soil EC represent means and standard errors of N=6. Data were adjusted to quadratic equations.

3.3. Seedling growth


Stem height growth of P. halepensis seedlings receiving biosolids significantly increased as compared with control seedlings (Fig. 4). This difference vanished for L14 treatment after five years. Root collar diameter showed a similar pattern, but only H14 seedlings were significantly bigger than control seedlings after five years. The H14 treatment showed higher relative height and diameter increment (22 and 23%, respectively) as compared with control seedlings. Aboveground growth of Q. ilex was very low, and was not affected by biosolid application. During the first five months after planting, the biosolid application did not significantly affect shoot biomass accumulation in Q. ilex (Table 3). However, fine 37

Captulo 2

root biomass, length of roots colonizing the soil (fine roots) and rooting depth were significant and negatively affected by the highest dose, when seedlings were located in the center of the planting hole. We found a negative relationship between the root fraction and the distance of the root plug to the biosolid 2 patches (R =0.40, P=0.01, N=15). As compared with control seedlings, Pinus halepensis seedlings increased aboveground biomass up to 80% with the higher dose when they were planted in the peripheral location. In this species, we found 2 no effect of biosolid proximity on root biomass accumulation (R =0.11, P=0.17, N=14). Shoot:Root (S:R) index showed no significant effect of treatments, but S:R tended to increase in H7p and H14p treatments in both species.

Table 3. Morphological traits of Q. ilex and P. halepensis seedlings measured during a destructive sampling in July 2000 (5 months after planting). Mean and standard error of N= 4-5 seedlings, and results of one-way ANOVA are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (*) and 0.01 (**) significance levels. Results of a Tukeys b test (P<0.05) are indicated by letters within the same column for each species.
Shoot (g) Root (g) 3.1 0.4 3.1 0.5 2.4 0.2 2.9 0.5 0.63 1.2 0.2 1.2 0.1 1.4 0.2 1.3 0.1 0.38 Fine root (g) 0.16 0.03a 0.19 0.07ab 0.12 0.06ab 0.03 0.01b 3.38* 0.41 0.08 0.30 0.07 0.39 0.10 0.29 0.03 0.74 Shoot:Root 0.66 0.06 0.73 0.08 0.86 0.12 0.63 0.09 1.17 1.53 0.41 1.80 0.12 1.86 0.26 1.57 0.16 0.71 D (cm) b 18 4a 14 3ab 9 2ab 5 3b 3.89** 14 4 18 5 18 3 15 6 0.23 L (cm) b 7 1 ab 12 2 a 8 1 ab 61b 4.34** 25 9 26 6 25 8 37 6 0.7

Q. ilex

H0 H7p H14pa H14c


a

2.0 0.2 2.2 0.4 2.0 0.3 1.7 0.3 0.30 1.5 0.2a 2.2 0.1ab 2.7 0.5b 2.0 0.2ab 2.65*

F P. halepensis
H0 H7p H14p H14c

F
a b

p and c indicate peripheral or central location of the seedlings in the planting hole.
D, maximum rooting depth and L, maximum lateral root elongation

38

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

120 100 Height (cm) 80 60 40 20 0 0


* * **

* *

b b ab a

Root collar diameter (mm)

L14 H14 H7 H0

P. halepensis Q. ilex

30
* *

25 20 15 10 5 0 0
* ** * * *

b ab a a

10 20 30 40 50 Time (months since planting)

60

10 20 30 40 50 Time (months since planting)

60

Figure 4. Stem height (left) and root collar diameter (right) in Pinus halepensis and Quercus ilex seedlings, as affected by different application rates of biosolid and soil preparation. Only seedlings planted in the periphery of the planting hole are shown. Symbols represent mean and standard errors of all alive individuals. See Figure 2 for treatment explanation. Asterisks denote significant differences for a given sampling date (P<0.05). Results of a Tukeys b test (P<0.05) are indicated by letters in the last sampling date.

3.4. Water status and nutrient concentration


During summer, the highest biosolid dose decreased the predawn water potential in Q. ilex seedlings planted in a central location, as compared with control plants (Table 4). We found a positive relationship between w and the biomass of fine roots colonizing the soil in Q. ilex, but not in P. halepensis (Fig. 5). Water potential tended to increase in P. halepensis seedlings planted at the periphery of the planting hole as compared to control seedlings, but differences were not statistically significant. No differences in water potential were found in either of the two species after summer. With biosolid application, P. halepensis needle N concentration increased in July when seedlings were planted in a peripheral location, as compared with control seedlings (Table 4). In contrast, P and K concentrations were significantly higher in control plants than in plants amended with biosolids; in the case of K, this is true only in plants amended with the highest dose and planted peripherally. Foliar N concentration in Q. ilex was significantly higher only in seedlings amended with the highest dose and placed in the center of the planting hole. Foliar K and P concentrations showed no significant treatment effect in this species. Only P. halepensis seedlings amended with the highest biosolid dose 39

Captulo 2

maintained the differences in N concentration after summer. No differences in P and K concentrations were found for either of the two species after summer. Foliar concentrations of Cu, Zn and Ni were low in both species at both sampling dates; in two cases they were below those of the control seedlings (Zn in July and Cu in October, in pine and oaks, respectively) (Table 4).
Table 4. Nutrient status and predawn water potential (w) of Q. ilex and P. halepensis seedlings measured during a destructive sampling in July 2000 (5 months after planting) and in October 2000 (8 months after planting). Mean and standard error of N= 4-5 seedlings, and results of one-way ANOVA are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (*) and 0.01 (**) significance levels. Results of a Tukeys b test (P<0.05) are indicated by letters within the same column for each species.

Quercus ilex
H0 July N (%) P (%) K (%) Cu (mg kg ) Ni (mg kg ) Zn (mg kg )
-1 -1 -1

H7p 1.1 0.2ab 0.06 0.01 0.35 0.06 1.1 0.1 8.0 1.2 -3.8 1.1ab 1.0 0.1 0.06 0.01 0.28 0.03 2.1 0.4ab 12.3 1.0 -3.7 0.9

H14pa 1.2 0.1ab 0.07 0.01 0.47 0.04 1.3 0.2 0.37 0.32 10.3 1.9 -5.5 1.1ab 1.2 0.1 0.06 0.01 0.26 0.05 1.1 0.1b 6.3 1.0 -2.9 0.8

H14ca 1.4 0.2b 0.07 0.01 0.52 0.06 1.3 0.2 14.6 4.6 -6.8 0.4b nd nd nd nd nd nd nd

F
3.71* 0.78 2.12 2.13 1. 06 3.44* 2.45 0.03 0.41 3.92* 1.98 0.39

0.8 0.1a 0.06 0.00 0.35 0.01 1.8 0.3 9.9 0.6 -3.2 0.6a 0.9 0.1 0.06 0.01 0.30 0.01
-1

w (Mpa)
October N (%) P (%) K (%) Cu (mg kg ) Ni (mg kg ) Zn (mg kg )
-1 -1

2.5 0.4a 10.0 0.6 -3.5 0.3

w (Mpa)
a

p and c indicate peripheral or central location of the seedlings in the planting hole. nd: not determined - below detection limit (<0.05)

40

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

Table 4 (Cont.)

Pinus halepensis
H0 July N (%) P (%) K (%) Cu (mg kg-1) Ni (mg kg-1) Zn (mg kg-1) 1.0 0.0a 0.12 0.01a 0.50 0.03a 3.4 0.3 28.5 2.2a -2.9 0.4 1.0 0.1a 0.09 0.01 0.32 0.03 3.97 0.2 0.7 0.7 21.6 4.1 -1.4 0.3 H7p 1.6 0.0b 0.08 0.00b 0.41 0.04ab 3.2 0.7 20.3 1.9b -2.1 0.1 1.2 0.1ab 0.07 0.01 0.33 0.03 5.7 1.0 0.3 0.1 16.8 2.0 -1.4 0.3 H14pa 1.4 0.1b 0.09 0.01b 0.38 0.01b 4.8 1.2 0.38 0.30 21.0 1.7b -2.2 0.6 1.3 0.1b 0.07 0.01 0.35 0.02 7.3 1.5 19.9 2.6 -0.9 0.3 H14ca 1.3 0.1ab 0.08 0.00b 0.42 0.03ab 3.0 0.2 0.18 0.13 18.4 1.4b -3.1 0.5 nd nd nd nd nd nd nd

F
8.18** 12.06** 3.37* 1.44 6.07** 1.44 3.8* 1.84 0.42 2.05 0.74 0.74

w (Mpa)
October N (%) P (%) K (%) Cu (mg kg-1) Ni (mg kg-1) Zn (mg kg- )
1

w (Mpa)
a

p and c indicate peripheral or central location of the seedlings in the planting hole. nd: not determined - below detection limit (<0.05)

3.5. Economic estimation


It took an average of 40 seconds to dig each hole with the backhoe excavator. Taking into account biosolid loading and transport from the storage area (20-150 m from the planting holes), biosolid application, and mixing with the soil, the -1 entire operation took on average 119 to 138 seconds hole . Considering the cost of the machinery and personnel, biosolid application increased plantation costs by 77- 89%, as compared with control plots.

4. Discussion The application of anaerobically stabilized biosolids in the planting hole at the application rates used in this study had negative effects on seedling survival. 41

Captulo 2

These were associated with soil cracking and salinity increase during the first year while differences were maintained thereafter. The viscous consistency of the biosolid resulted in a heterogeneous incorporation and a patchy distribution within the planting hole. At the beginning of the dry period, the rapid desiccation of these biosolid patches generates cavities within the planting hole, followed by surface cracks near the seedling root collar that may negatively affect soil water storage (Bandyopadhyay et al., 2003), root contact with the soil, and thus seedling establishment. The use of fresh biosolids as a soil amendment results in a high availability of soluble organic compounds with the potential to reactivate microbial activity and biochemical cycles in degraded soils faster than composted amendments (Pascual et al., 1999). But mineralization rates are usually higher in biosolids than in composted organic residues, mainly during the first year (Henry and Cole, 1997; Sort and Alcaiz, 1999; Snchez-Monedero et al., 2004), and especially in sandy soils (Hernndez et al., 2002). Low summer precipitation, 40% below the historical average (Ninyerola et al., 2005) may have favored salt concentration and intensified the negative effects of soil salinity. Seedling survival decreases related to increased salinity after biosolid application have been reported in other studies in dry Mediterranean areas (Ingelmo et al., 1998). Scarce information is currently available on the tolerance of Q. ilex and P. halepensis seedlings to soil salinity and its interaction with drought stress. Quercus species have been described as very sensitive to salinity (Thorton, 1988; Alaoui-Soss, 1998), while conifers have been defined as sensitive (Moorhead and Ruter, 2002; Jacobs et al., 2004) or tolerant (Fostad and Pedersen, 2000) to soil salinity, depending on the size of the root stock and the methods used to determine tolerance (Jacobs and Timmer, 2005). During the first growing period, seedlings planted in the center of the planting hole showed symptoms of salt toxicity (desiccation of leaf margins and needle tips, reduced leaf size and early fall of nursery-grown leaves). These symptoms were more evident for Q. ilex. Moreover, the negative relationship between fine root accumulation in soil and the distance to biosolid patches found in Q. ilex seedlings suggests that root growth may have been negatively affected by soil salinity. Root growth inhibition is a common response to salinity, especially under dry conditions (Rodgers and Anderson, 1995; Jacobs et al., 2004), and it presents two different phases, one caused by the osmotic effect due to the salt 42

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

accumulation outside the roots, and the other caused by internal injury when plants exceed the ability of the cells to compartmentalize salts in the vacuole (Munns, 2002). The decrease in water potential in Q. ilex seedlings, especially in those amended with the highest dose of biosolids and planted in the center of the planting hole, provides further support to the hypothesis that increased water stress resulting from higher osmotic potential may be the major driver for increased mortality in seedlings exposed to an increase of salinity levels in the rooting medium (Alonso et al., 2000; Jacobs et al., 2004; skarsson et al., 2006). It is worth noting that the water potential of the amended seedlings became similar to or lower than that of the unamended ones after the first September rains.
0 -2
Quercus ilex Pinus halepensis

w (MPa)

-4 -6
R2=0.57 H14c H14p H7p H0

R =0.11

-8 0,0 0,1 0,2 0,3

0,4

0,0

0,2

0,4

0,6

Root biomass colonising soil (g)

Root biomass colonising soil (g)

Figure 5. Relationship between the root biomass colonizing the planting hole and the predawn water potential of Quercus ilex (left) and Pinus halepensis (right) seedlings, unamended (H0) and treated with low (H7) and high (H14) doses of anaerobically stabilized sewage sludge applied at the planting hole. Seedlings were planted at two different locations, in the center (c) and in the periphery (p) of the planting hole. Data were adjusted to quadratic regression (w=-7.23+25.4x28.9x2; F=11.13, P<0.000) for Q. ilex, but were not significant for P. halepensis (F=1.8, P=0.19).

The fast lateral root growth of P. halepensis seedlings shortly after planting may have alleviated the negative effect of increased salinity. Jacobs et al. (2003) observed injures in elongating root tips of Pseudotsuga menziesii in a highly fertilized soil layer, whereas roots proliferated in a more superficial layer that was less affected by salt accumulation. In our study, the negative effect of salinity was probably reduced by decreasing the biosolid dose and avoiding a 43

Captulo 2

direct early contact between the seedling and the biosolid (H7p treatment). Increased seedling mortality after biosolid application has frequently been attributed to higher competition with adventitious vegetation (Berry, 1977; Marx et al., 1995). In our study, the density of adventitious vegetation colonizing the planting hole was low during the first year, and mainly appeared during the second year (data not shown). By that time survival had stabilized, so competition from these plants was probably not a major driver of seedling mortality. We must take into account, however, that the pre-existing vegetation may have responded rapidly to biosolid application and soil disturbance by fostering root growth within the planting hole. Other studies have found significant belowground responses of Mediterranean vegetation to localized inorganic fertilizers (Valdecantos et al., 2006) and biosolid applications (Valdecantos, 2001). A positive growth response of P. halepensis to organic amendments has been observed under Mediterranean climatic conditions (Roldn et al., 1996; Zagas et al., 2000; Valdecantos, 2001), and it has commonly been attributed to enhanced nutrient status. Biosolids rapidly increased the foliar N concentration of P. halepensis and Q. ilex by 43 and 54%, respectively. This probably favored the increase in aboveground biomass accumulation in amended P. halepensis, and the subsequent dilution of P and K. Koerselman and Meuleman (1996) determined that N:P ratios above 16 and below 14 may indicate P and N limitation, respectively. After the growing period, unamended plants of Pinus halepensis were strongly limited by N as the N:P ratio was 8.3 in front of the amended seedlings, that ranged between 15.5 (H14) and 19.8 (H7), and remained roughly constant after summer. This N limitation caused a lower growth rate in control seedlings, increasing the needle concentration of P (and K) as compared to reference values (Valdecantos et al., 2006). On the contrary, the increase in N concentration of amended seedlings of Quercus ilex did not enhance plant growth since control plants showed relatively balanced N:P ratios (13.4 and 15.5 in July and October, respectively) in front of amended seedlings that increased up to 20. Usually, Q. ilex shows a low response to organic amendment applications (Alonso et al., 2000; Valdecantos, 2001; Larchevque et al., 2006). Differences between P. halepensis and Q. ilex may be related to the contrasting strategies of both species. Pioneer species, such as P. halepensis in the study area, tend to keep foliar concentrations of the most limiting nutrient at relatively constant

44

Seedling performance in sewage sludge-amended degraded Mediterranean woodlands

levels when its availability increases, using the extra nutrient inputs for increasing growth (Bazzaz, 1979). In contrast, late-successional species, like Q. ilex have a conservative resource-use strategy (Valladares et al., 2000), presenting low growth rates, and may allocate supplemental nutrient inputs to belowground storage organs (Rapp et al., 1999; Valdecantos, 2001). But in any case these adaptation strategies could be strongly dependent on environmental conditions (Broncano et al., 1998; Sardans and Peuelas, 2004). Nevertheless, the higher N uptake of amended plants could unbalance the N:P ratio, since we expected a higher response of foliar P concentration with the amendments (Daz and Roldn, 2000; Sardans and Peuelas, 2004, Sardans et al., 2006). Dry sites with highly carbonated soils could promote soil P immobilization (Smith, 1996; Tunesi et al., 1999; Rapp et al., 1999) and a subsequent decreased uptake by seedlings even after artificial P enrichment (Aerts and Chapin, 2000). Other factors could have immobilized a high amount of the total P added, such as the previous chemical treatment of the sewage sludge (Krogstad et al., 2005). The low heavy metal concentration found in aboveground tissues of treated seedlings (some of them lower than that found in control seedlings) confirmed the dilution effect caused by the increase in aboveground biomass, and probably the low seedling uptake and bioaccumulation of these elements in highly carbonated and alkaline soils on dry sites (Fuentes et al., 2007). In our study, we purposely employed field machinery commonly used in forest practices so we could evaluate the logistic and economic aspects of biosolid application. The extra costs of applying biosolids were somewhat higher than those incurred for landfill disposal in the H7 treatment (+14%), but are lower than landfill disposal in the other treatments (-35%). We must take into account that the machinery used was not specifically designed to apply biosolids on rough terrain; thus, application costs could be substantially reduced by using selfloading spreaders. Thus, on-site logistic and economic factors do not seem to limit the use of this type of biosolids in degraded Mediterranean woodlands. 5. Conclusions The use of high doses of anaerobically digested biosolids, calculated to combine economic and ecological feasibility, showed a negative effect on seedling survival, particularly at the highest doses. The higher mortality related to soil cracking 45

Captulo 2

may be avoided by affordable improvements in the application techniques that optimize the soil-biosolid mixing operation or by increasing biosolid quality (i.e., lower initial water content). Nevertheless, application rates should be decreased to avoid excessive salt accumulation near the seedling rhizosphere, which should not come into direct contact with the biosolid patches; this is especially true in the case of Q. ilex whose rooting strategy (depth vs. lateral growth) may increase its limitations for colonizing non-amended soil. On the other hand, using application doses below the ones we assessed may improve seedling survival but increase operational costs compromising the global viability. Our findings of improved nutrient status and growth in P. halepensis seedlings, together with balanced economic costs, suggest that biosolids can be used to improve the establishment of this species in degraded shrublands. In contrast, Q. ilex showed a negative response to biosolid application, so the use of this technique for the establishment of Q .ilex cannot be recommended under the conditions of the present study. Further studies must be carried out to establish optimal application rates and distances so that seedlings do not sustain either phytotoxic effects or additional drought stress from the decreased water availability produced by salt concentration in the seedling rhizosphere. Acknowledgements We thank Guillermo Casanova for his assistance in field and Miriam Gobbi for her comments on an earlier draft. We also thank J. Scheiding for language revising of the final version of the text. Support provided by Fernando Llavador (EPSAR, Generalitat Valenciana) and the TRAGSA staff, is appreciated. This research has been funded by the Spanish Ministry of Science and Technology (1FD97-1117-C05-03) and the Spanish Ministry of Environment (BIOMET exp. 608/2006/1-4.4). Fundacin CEAM is funded by Generalitat Valenciana and Fundacin Bancaja.

46

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings
Optimizacin de dosis de bioslidos aplicadas a repoblaciones forestales de Pinus halepensis

David Fuentes, Alejandro Valdecantos, Joan Llovet, Jordi Cortina y V. Ramn Vallejo

Ecological Engineering 36: 1213-1221 (2010)

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

Abstract Planting woody vegetation is frequently a first step towards the restoration of degraded drylands. Seedling establishment on unfertile soils may be favoured by applying organic amendments such as biosolids. But the outcome of such a practice is strongly dependent on the type of amendment and the application rate used. High application rates may have deleterious effects on plant performance and compromise plantation success. Thus amendment type and dose should be carefully selected to optimise benefits and minimize risks. In this study, we evaluated the effect of two organic amendments (composted and air-dried -1 sewage sludge) applied at 5 doses (0, 15, 30, 45 and 60 Mg ha ) on soil properties and on the performance of one-year-old Pinus halepensis seedlings planted in a dry Mediterranean degraded area. Soil organic matter, electrical conductivity and nutrient availability increased with the application rate, but the magnitude of this increase depended on the type of amendment and the time. Organic amendments improved N and P status and promoted seedling growth. Nevertheless, at the higher application rates they showed a negative impact on seedling survival one and three years after application. Drought effects intensified by root competition with extant vegetation and reduced water availability within the planting hole were the main causes attributed to the higher mortality. Low to moderate doses showed the best combination of seedling survival and growth and can thus be recommended to promote the establishment of Pinus halepensis in dry Mediterranean areas. Keywords: restoration, compost, salinity, drought, mortality.

49

Captulo 3

Resumen La plantacin de especies leosas se considera un primer paso hacia la restauracin de zonas secas degradadas. El establecimiento de brinzales en suelos poco frtiles puede verse favorecido por la aplicacin de enmiendas orgnicas como los bioslidos. El resultado de esta prctica es fuertemente dependiente del tipo de enmienda y de la dosis de aplicacin empleada. Dosis altas pueden tener un efecto deletreo sobre el establecimiento de los brinzales, comprometiendo as el xito de la plantacin. Por lo tanto, el tipo de enmienda y la dosis deben de ser cuidadosamente escogidas para optimizar los beneficios y minimizar los riesgos de su aplicacin. En este estudio, hemos evaluado el efecto de dos enmiendas orgnicas (lodo seco y compostado) aplicado a 5 dosis distintas (0, 15, 30, 45 y 60 -1 Mg ha ) sobre las propiedades del suelo y sobre la morfologa y estado nutricional de brinzales de Pinus halepensis plantados en una zona seca y degradada en clima Mediterrneo. Los valores de materia orgnica, conductividad elctrica y disponibilidad de nutrientes incrementaron con la dosis de aplicacin, pero la magnitud de este incremento dependi del tipo de enmienda y el tiempo transcurrido. Las enmiendas orgnicas mejoraron la concentracin de N y P y promovieron el crecimiento de los brinzales. Sin embargo, las dosis altas mostraron un efecto negativo en la supervivencia tras el primer y tercer ao desde la plantacin. El efecto de la sequa, intensificado por la competencia radicular con la vegetacin natural y una reduccin en la disponibilidad de agua en el hoyo de plantacin, fueron las principales causas del incremento de mortalidad en los hoyos fertilizados. Dosis bajas o moderadas mostraron la mejor combinacin de supervivencia y crecimiento, por lo que pueden ser recomendadas para promover el establecimiento de Pinus halepensis en zonas secas Mediterrneas. Palabras claves: restauracin, compost, salinidad, sequa, mortalidad.

50

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

1. Introduction The wastewater depuration process generates a by-product rich in organic matter and nutrients (Henry and Cole, 1997; Marx et al., 1995). Its reutilization has been recommended as the best practicable environmental option (Hall, 1999). Moreover, as the generation rate of biosolids has steadily increased worldwide, the identification of new disposal routes can be of interest to wastewater companies and managers (USEPA, 1999). In drylands, use of organic amendments may improve soil conditions and promote ecosystem recovery (Querejeta et al., 2000; Tarrasn et al., 2007). Dryland forests and rangelands often show low plant cover due to intense historical use (Yaalon, 1997). In these areas, human intervention may be needed to deter further degradation and foster succession. The reintroduction of key woody species is commonly the first step towards their restoration (Vallejo et al., 2000), but seedling survival and growth is often poor because of adverse climate and soil conditions (Pausas et al., 2004). Nutrient limitation affects seedling ability to root (Oliet et al., 2009; Trubat et al., 2008) and may compromise its performance (Valdecantos et al., 2006). Nutrient-rich organic amendments can improve soil physical and chemical properties, increasing water holding capacity and nutrient availability, and promoting seedling establishment (Pascual et al., 1999; Querejeta et al., 1998; Roldn et al., 1996). Protocols for the application of nutrient-rich organic amendments for dryland restoration differ from those used in agriculture and land reclamation. In restoration, the use of organic amendments may be justified as a kick-off treatment to improve early growth in planted seedlings, and should be restricted in time (e.g., one single application before planting) and space (application not widespread, but confined to planting holes or lines). In this way, most of the restoration actions in drylands of the Mediterranean Basin include the introduction of key species in planting holes, but there is little information on the application of increasing doses and different types of biosolids taking into account these constraints (Caravaca et al., 2003; Larchevque et al., 2006, 2008; Pascual et al., 1999). Unintended effects of this practice, such as the disturbance of soil surface and extant vegetation, and the establishment of ruderal and alien plant species, could be minimised by optimizing the type and doses, as well as the techniques used in their application. But the net effect of this practice is highly 51

Captulo 3

dependent on other biotic and abiotic factors such as soil characteristics, climatic conditions and operational constraints (Jacobs and Timmer, 2005; Pascual et al., 1999; Zagas et al., 2000). Reduction of water availability (Brockway, 1983), unbalanced nutrition (Harrison et al., 1996), and competition with standing vegetation (Berry, 1979; Cogliastro et al., 2001), have been identified as probable sources of stress for seedlings receiving organic amendments. Thus, detailed information on the interplay between organic amendments, climate, soils and introduced plants is needed to maximize the benefits and minimize the risks of their application. The objectives of this study are: (1) to identify the optimum application rates of two types of organic amendments (composted and air-dried sewage sludge) for the establishment of Pinus halepensis Mill. (Aleppo pine) seedlings in degraded Mediterranean dry areas and (2) to explore the main factors affecting seedling response to organic amendments. Our hypothesis is that the doses employed in agroforestry systems (Cheng et al., 2007; Dolgen et al., 2004; USEPA, 1995) may have deleterious effects on seedling performance in forest restoration, given the constraints to the use of organic amendments discussed above. 2. Materials and Methods

2.1. Study site and experimental design


The study area is located in Enguera (Valencia, E Spain) under dry sub-humid Mediterranean climate (mean annual temperature 12.7C, mean annual precipitation 479 mm). The site has burned twice in the last 25 years (the latest in 1999), resulting in a shrubland dominated by Quercus coccifera, Cistus sp. and Rosmarinus officinalis, and a few isolated trees of Pinus pinaster and P. halepensis surviving or regenerating from the previous forest. Soils are sandy loam (62 % sand, 17 % clay and 21 % silt) and alkaline (pH=7.95 0.05) with high carbonate content (62 2 %) developed from limestone and marl (Cambisols). In February 2003, a backhoe excavator dug 40x40x40 cm holes along 0.5 ha of gentle slopes (015 %). The mean soil depth after soil preparation across the study site was 33.5 1.6 cm (mean and standard error of 13 profiles in planting holes).

52

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

Composted sewage sludge (hereafter Compost) from a composting plant in Aspe (Alicante) and air-dried anaerobically digested sewage sludge (hereafter Dry sludge) (Table 1) from a domestic wastewater treatment plant in Ayora (Valencia) were applied and mixed with the soil in the planting holes at four rates corresponding to 15, 30, 45 and 60 -1 Mg dry weight ha (243 to 945 g d.w and 240 to 960 g d.w. of dry sludge and compost per planting hole, respectively). Additional unamended planting holes acted as controls. Treatments were randomly distributed along the plot. At these application rates, soil organic matter at the 0-30 cm depth increased in a range of 0.15-0.70 % depending on the specific treatment.

Table 1. Physico-chemical properties of the organic amendments used in this study. Compost1,2 Moisture (%) Total OM (%) OC (%) pH (1:10) EC (1:10, dS m-1) C/N Total N (%) Total P (%) K (%) Ca (%) Mg (%) Na (%) Fe (ppm) Mn (ppm) Cd (ppm) Cr (ppm) Cu (ppm) Pb (ppm) Zn (ppm) Ni (ppm) Hg (ppm) 40 62.6 29.1 6.3 5.54 10.0 2.98 0.67 0.49 3.98 0.49 0.76 32.0 213 3 43 169 231 504 17 1 Dry sludge2 10 38.3 22.2 6.7 4.58 4.3 3.50 1.57 0.21 n.d. n.d. n.d. 2.4 70 <2 25 131 54 480 16 < 0.75

Soon after site preparation (one week later), we planted thirty 1-year-old Pinus halepensis seedlings per amendment type and dose. Pinus halepensis is one of the 1 Straw and sawdust as bulking agents. most important tree species in the 2 Total heavy metal concentration Mediterranean Basin, covering more than OM: organic matter; OC: organic carbon 2 25000 km and dominating forest formations in semiarid and dry sub-humid areas (Quezel, 2000). Seedlings were produced in a public forest nursery (La Hunde, Valencia), 10 km from the study 3 area. They were grown in 350 cm forest containers filled with peat and cocopeat (1:1, v/v). No pre- and post-planting treatment was performed in the plot.

2.2. Plant performance


Seedling survival and growth (shoot height and basal diameter) were measured 2, 5, 7, 10, 20, 27 and 45 months after planting. Pine basal area per hectare was

53

Captulo 3

estimated by summing the basal areas of each individual seedling and assuming -1 an initial planting density of 800 seedlings ha . In November 2006, we harvested current year needles from 5 seedlings per biosolid type and dose (except for the higher doses of compost where n=3). Needles were digested in a heating block at 250C with a mixture of concentrated sulphuric acid and 30 % hydrogen peroxide (1:1, v:v) (Jones and Case, 1990). Total N was measured using semi-micro Kjeldahl distillation (Tecator Kjeltec Auto 1030 Analyzer, Hogana, Sweden). Phosphorus, K, Cu and Zn were analysed by ICP-OES (Perkin Elmer Optima 4300 Inductively Coupled PlasmaOptical Emission Spectrometry, Perkin Elmer Corp., Norwalk, CT, USA).

2.3. Soil properties


We monitored soil water content during the first year after planting by using Time Domain Reflectometry (TDR Tektronik 1502C Cable Tester), with one th vertical set of probes (0 to 20 cm depth), twice during summer drought (July 25 th rd and August 4 ) and after two late summer storms (August 23 and September th 11 ) in 10 planting holes per biosolid type and dose. We calculated gravimetric water content using the Topp equation (Topp and Davis, 1985) and the bulk soil 3 density values. We used a 162 cm volumetric bore auger to estimate bulk density of the fine earth (< 2 mm diameter). Soil water retention curves (drying path) were obtained for soils amended with Dry sludge using a dewpoint hygrometer (WP4, Decagon Devices, Inc., Pullman, WA). Parameters for the mathematical representation of the water retention curve, using a power law model, are shown in Table 3. Ten soil samples (0-25 cm) per treatment (except for 45 Mg ha ) were taken in July 2003 to measure soil organic matter (OM), electrical conductivity (EC) and pH. Soil EC was determined from extracts of a saturated soil-paste (Rhoades, 1982) and measured by a conductivity meter (Crison C-525, Crison Instruments, Barcelona, Spain). Soil organic matter content was determined by the Walkley and Black method (Nelson and Sommers, 1996). After the first autumn rains, we + collected new soil samples and measured NH4 and potentially mineralizable nitrogen (PMN). We estimated PMN on samples subjected to anaerobic + conditions for one week (Keeney, 1982) as the increase in NH4 concentration during the incubation (difference between final and initial concentration). N+ NH4 was determined by the indophenol-blue method (Keeney and Nelson, 1982). 54
-1

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

Potentially mineralizable N estimated in this way has been related to plant response to fertilization (Powers, 1980). In November 2006, a new set of soil samples was collected from the planting holes (10 replicated planting holes per amendment type and dose, except for 45 -1 Mg ha ). We estimate bulk density (as described above) and we determined the pH, electrical conductivity, organic matter (as described above), total nitrogen (TruSpec CN analyser), and available phosphorous (Olsen and Sommers, 1982). To estimate aggregate stability, we gently sieved the samples to obtain the soil fraction between 2 mm and 0.2 mm and used a probe-type sonifier (Sonifier I Ultrasonic Cell Disruptor Model 250; Branson Ultrasonic SA, USA) to calculate the percentage of aggregates larger than 0.2 mm remaining after exposure to 10 watts of power for 10 seconds in an aqueous medium (modified from Cerd, 1996). Finally, we determined potential belowground interference from extant vegetation by determining fine root density in 10 planting holes per biosolid type and dose. Soil samples from the 0-20 cm depth were collected during the second summer (2004) after planting and at the end of the experiment (November 2006).

2.4. Statistical analysis


Soil properties, seedling growth and nutritional status were first analyzed separately for each type of amendment using one-way analysis of variance with Dose (D) as a fixed factor. Then, we used a two-way univariant analysis of variance with type of amendment (TA) and Dose as fixed factors. Control seedlings were excluded from the latter analyses to avoid missing cells. Pairwise comparisons were performed with the Student-Newman-Keuls test (SNK) at the 0.05 significance level when ANOVA revealed significant treatment effects. Data transformations were carried out when necessary to ensure the validity of the assumptions of normality, linearity, and homoscedasticity. We evaluated the effects of amendment type and dose on 1st year and 3rd year seedling survival by non-parametric log-rank test (Fox, 1993). The same type of analyses was used to evaluate the effect of application dose on seedling survival separately for each amendment type. We used linear and quadratic regressions to assess the relationship between soil properties and seedling survival and Pearsons r to assess the degree of 55

Captulo 3

covariation between soil variables at the end of the experiment. All statistical analyses were performed using the SPSS v.13.0 statistical package (SPSS Inc., Chicago, USA).

3. Results

3.1. Effect of organic amendments on soil


Organic matter content was higher in soils amended with compost than in those receiving dry sludge after the first summer. Soil OM increased with dose (Table 2 and Fig. 1), but only the highest doses differed from the rest. The results were similar when unamended soils were included in the analyses. The trend was similar three years after planting, but the differences were no longer significant. During the first summer, soil EC was significantly higher when soils were -1 amended with dry sludge as compared to compost. The application of 60 Mg ha of organic amendments increased EC above the levels measured at 15 and 30 Mg -1 ha application rates. Soils receiving dry sludge at any dose showed higher EC -1 than control soils, whereas only soils receiving 60 Mg ha of compost differed from unamended soils.
Table 2. F values and significance of the analysis of variance on soil properties after one (2003) and three (2006) summers in the field to evaluate the effect of amendment type (AT) and dose (D). OM
2003 2006 2003

EC
2006

PMN
2003 2006 2003

N
2006 2003

P
2006

FD FAT FATxD Fcompost Fsludge


* ** ***

9.5 8.1** 0.3 8.6*** 5.4**

***

0.9 2.7 1.6 1.7 2.1

30.5 17.8*** 8.2*** 7.8*** 38.9***

***

0.53 1.59 1.94 2.96* 2.51

22.7 14.4*** 4.3* 7.8*** 17.6***

***

nd nd nd nd nd

nd nd nd nd nd

1.1 0.5 4.3* 4.6** 1.9

nd nd nd nd nd

3.5* 7.7** 0.3 8.9*** 1.8

, ,

significant at P<0.050, P<0.010, and P<0.001, respectively

Three years after planting, differences in soil EC between soils amended with dry -1 sludge were not significant, whereas soils that received 30 and 60 Mg ha of compost still had higher EC than control soils. Soil pH ranged between 7.72 and 56

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

7.95 one year after planting and 7.65-7.96 three years later. Organic amendments had no significant effect on this variable (data not shown).

Compost 10 8 OM (%) 6
a

Dry sludge (a)


b

2003 2006
a a

2003 2006
b a a ab

(b)

4 2 0 (c) 2003 2006


AB A a a a a B b b B

1.2 EC (dSm ) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 200 PMN (mg kg )
-1
-1

2003 2006
b

(d)

(e)

(f)

150
b a a a a

100
a

50 0 0 15 30 Dose (Mg ha-1) 60 0 15 30 Dose (Mg ha-1) 60

Figure 1. Soil organic matter (OM), electrical conductivity (EC) and potentially mineralizable nitrogen (PMN) in the planting holes amended with compost (a, c, e) and dry sludge (b, d, f) at different application rates during the first summer after planting, and three years later (except for PMN). Data represent means SE (N=9-10 soil samples). Results of a post-hoc SNK test (P < 0.05) for each amendment type are indicated by different letters

57

Captulo 3

The potentially mineralizable N of soils amended with dry sludge was higher than PMN in compost-amended soils after the first summer. There was a -1 substantial increase in PMN when amendments were applied at 60 Mg ha rate, but we found no significant effect of the amendments when applied at lower doses. Average soil EC and PMN were strongly and positively correlated 2 (R =0.995, P<0.001, N=7).
0,4 0,3
a

P (mg kg-1)

Three years after planting, soil N concentration showed no differences between type of amendment or doses but there was a significant interaction. Within each type of amendment, the N concentration in soils -1 receiving 60 Mg ha of compost was higher than that of soils amended with the lowest doses (Fig. 2). Soil phosphorus availability three years after planting was higher when the amendment was applied as compost as compared to dry sludge (Fig. 2). Dose had a significant effect on soil available P when both amendment types were analysed together and when compost was analyzed separately, but not when soils received dry sludge.

Compost Dry sludge Control a

b ab

N (% )

0,2 0,1 0,0 60


Compost Dry sludge Control bc c

40

20
a

0 0 15 30 -1 Dose (Mg ha ) 60

Figure 2. Total N (left) and available P (right) in the soil of the planting holes amended with Compost and Dry sludge at different application rates three years after planting. Data represent means SE (n=9-10). When significant differences were detected by oneway ANOVA, the results of an SNK test (P < 0.05) are indicated by letters within each type of amendment.

58

Table 3. Soil moisture in the planting holes amended with Compost, Dry sludge or unamended during the peak th th of summer drought and after a late summer storm (August 4 and September 11 ). The characteristic moisture curve was estimated only for dry sludge and control treatments. The resulting s values are given. When significant differences were detected by one-way ANOVA, the results of an SNK test (P<0.05) are indicated by letters within each type of amendment. (1) 2 Dose Soil Moisture (%) a b R Soil Moisture (%) s (MPa) (1) s (MPa)
(after rain) Compost -1.24 0.17a -2.42 0.33b -4.61 0.64c -6.39 0.95c 23.0 6.03 6.71 0.08 0.08
** *** ***

(Mg ha ) D.sludge 22.6 0.4a 20.9 0.5b 20.3 0.5b 22.9 0.5a 2.84 22.9 0.7 20.5 0.5 21.0 0.9 -0.02 0.00a -0.09 0.01b -0.11 0.01c -0.18 0.02d 70.1
***

-1

(during drought) D.sludge -109 -136 -310 -337 5.1 0.2 5.6 0.4 5.2 0.3 5.5 0.4 0.67 0.78 3.70 0.006

Compost

-2,7 -2,44 -2,63 -2,41

0,991

***

15

5.3 0.2

0,998 0,990 0,990

*** *** ***

30

4.9 0.2

60

5.3 0.2

1-way

0.59

2-way

FD

FAT

FDxAT

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

(1) A power law model was used to fit the relationship between and soil moisture. * * ** P<0.05, P<0.01, P<0.001

59

Captulo 3

Dose, but not amendment type, had a negative effect on volumetric soil moisture content of intermediate doses after a rainfall event as compared with the highest dose (Table 3). The characteristic moisture curve for soils amended with dry sludge also showed a gradual decrease in water availability with increasing doses. Three years after biosolid application no significant differences between treatments were found with respect to aggregate stability, which ranged between -3 -3 50 4 % and 57 5 %, or bulk density, between 0.8 0.1 gcm and 0.9 0.1 gcm . Nevertheless, the organic matter content in soil continued to be positively correlated with the soil N concentration for soils receiving both amendment types (Pearsons r=0.823, p<0.001 for Compost and r=0.682, p<0.001 for Dry sludge), and EC in soil (r=0.701, p<0.001 and r=0.515, p<0.001). A negative relationship was found only with bulk density (r=-0.699, p<0.001) in compost amended soils.

3.2. Seedling nutrient status


Three years after planting, we found no effect of amendment type and dose on N, P or K concentration in needles (Table 4). When both types of amendments were -1 analysed separately, the application of 30 Mg ha of dry sludge significantly increased needle N concentration as compared with control seedlings. In contrast, P concentration was higher for any dose of amendment as compared with control seedlings. At said point of time, needle concentrations of K, Cu and Zn showed no differences with those found in control seedlings.

3.3. Seedling survival


Seedling survival ranged from 79-30 % to 52-10 % at the end of the first and third summer, respectively (Fig. 3). Amendment dose, but not amendment type, had a 2 significant effect on this variable on both sampling dates ( =18.89, P<0.001 and 2 =18.40, P<0.001, for the first and third year, respectively). Thus, at the end of the first summer in the field, seedling survival was reduced by 30 % and 50 % -1 when amendments were applied at 45 and 60 Mg ha in compost and dry sludge, 2 2 respectively ( =7.16, P=0.007 and =18.57, P<0.001) as compared with the 30 Mg

60

Table 4. Needle nutrient status of Pinus halepensis seedlings 40 months after planting. Mean and standard error of N= 45 seedlings per treatment and results of a one-way ANOVA (with D as the only factor) and a 2-way ANOVA (with TA and D as factors) are also included. When significant differences were detected by one-way ANOVA, the results of an SNK test (P<0.05) are indicated by letters within each type of amendment. Asterisks denote differences at P<0.050 (*) and P<0.010 (**) significance levels.
P (%) Compost 0.090.01 a 0.150.01 b 0.160.02 b 0.160.03 b 3.98* 0.1 3.8 0.2 0.7 0.04 0.6 16.4** 0.4 0.2 0.190.03 b 0.260.06 0.280.03 0.180.04 b 0.310.02 0.300.03 0.180.01 b 0.300.02 0.270.01 3.60.2 3.70.4 3.60.1 0.1 1.3 0.1 1.3 0.280.04 3.50.7 3.60.2 4.10.6 3.00.4 0.6 Dry sludge Compost K (%) Cu (mg kg-1) Zn (mg kg-1)

N (%)

Compost

Dry sludge

Dry sludge Compost Dry sludge Compost Dry sludge 24.43.9 33.92.2 27.84.9 31.26.6 1.3 1.6 0.01 1.1 32.62.7 35.63.9 25.10.4 2.5

1.120.12 a

15

1.400.07

1.510.11 ab

30

1.640.23

1.810.08 b

60

1.680.14

1.550.31 ab

1-way

3.17

3.49*

2-ways FD

0.31

FAT

0.15

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

FDxAT

1.85

61

Captulo 3
-1

ha treatment which maintained higher survival rates. At this date, seedling survival was not related to the application rate but negatively related to the soil 2 EC (R =0.785, P=0.003, N=7). After three years, the effect of the compost and dry 2 sludge application rate on survival was still significant ( =5.85, P=0.016 and 2 =13.89, P=0.001, respectively) and it was negatively related by linear and quadratic functions to the doses applied. In this case no relationship was found between survival and soil EC.

3.4. Seedling growth


We found no effect of amendment type and application rate on stem height when both amendments were analysed together (FTA=0.17, P=0.68 and FD=1.56, P=0.21). Similar results were obtained for root collar diameter (data not shown). In contrast, stem height was enhanced by organic amendments applied at any dose in the first year after planting when both amendment types were analysed separately (F=4.2, P=0.004 and F=5.5, P= 0.001 for compost and dry sludge, respectively) (Fig. 4). After the second summer, the lowest doses of dry sludge maintained their positive effect on seedling growth, as did the compost applied at -1 30 Mg ha (F=3.1, P=0.021 and F=4.19, P=0.008 respectively). Higher doses of compost and dry sludge had either no effect or a negative effect on seedling growth. The strong droughts of 2005 and 2006 resulted in the attenuation of seedling growth and a substantial decrease in seedling survival. As a result, basal area decreased during the last two years of the experiment, especially in the 2 -1 compost treatments with reductions to 1.21 and 1.41 m ha in the 15 and 30 Mg -1 ha treatments, respectively. In contrast, the equivalent doses of dry sludge 2 -1 reached 3.75 and 2.72 m ha , respectively (Fig. 4). The highest dose resulted in similar basal area values for both amendment types, and remained lower than the control treatment.

3.5. Colonization of the planting hole by extant vegetation


Root density in the planting holes during the second summer was enhanced with increasing amendment dose (FD=4.19, P=0.021) but no differences were found between amendment type (FAT=0.10, P=0.753). Soils receiving dry sludge at any dose showed higher root density than control soils, whereas only soils receiving -1 -1 60 Mg ha of compost differed from unamended soils. Application of 60 Mg ha -3 of dry sludge showed the highest root density (7.6 1.3 mg cm ) while control

62

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings
-3

holes showed the lowest (1.6 0.2 mg cm ). After three years only marginal differences remained in soils amended with dry sludge between control and 60 -1 Mg ha treatments (F=2.49, P=0.070). Soil EC and root density in the planting holes had a significant and positive relationship in the soils that received dry 2 2 sludge (R =0.015, P=0.77 and R =0.887, P<0.001 for compost and dry sludge, respectively).

100 R2=0.657 ns 80 Survival (%) 60 40 20 0 0 15 30 Dose (Mg ha-1) 45 R2=0.965 P= 0.002

2003 2006

R2=0.653 ns

2003 2006

R2=0.939 P= 0.042

60

15

30 Dose (Mg ha )
-1

45

60

Figure 3. Changes in the survival of Pinus halepensis seedlings at increasing doses of compost (left) and dry sludge (right). Data correspond to data recorded seven months (open circles) and 45 months after planting (closed circles), and were adjusted to linear and quadratic equations.

4. Discussion

4.1. Effect of organic amendments on soil


Only the highest dose of organic amendments increased soil OM significantly. This effect vanished three years later. These results agree with the ones obtained by Larchveque et al. (2006) with composted sewage sludge under Mediterranean field conditions. The differences in OM mineralization kinetics between compost and dry sludge treated soils were supported by the differences in PMN and EC observed after the first summer in the amended soils. Treatments with low application rates showed no differences with the control soil, suggesting that at low application rates most of the labile organic compounds may have been

63

Captulo 3

50 Stem height (cm) 40 30 20 10 0

C
Basal area (m2 ha-1) 3 2 1 0
Fe

0 15 30 45 60

0 15 30 45 60

3 3 3 4 4 5 5 6 6 3 3 3 6 4 4 5 5 6 6 6 b-0 Jul-0 ec-0 ay-0 ct-0 ar-0 ug-0 an-0 un-0 ov-0 eb-0 Jul-0 ec-0 ay-0 ct-0 ar-0 ug-0 an-0 un-0 ov-0 J J N F D M O M A D M O M A J J N

Figure 4. Seedling average stem height (A, B) and total basal area (C, D) of Pinus halepensis seedlings amended with increasing doses of Compost (A, C) and Dry sludge (B, D) applied in the planting hole. Stem height data represent means SE. The distribution of monthly precipitation between April and July during the 2003 to 2006 growing seasons is showed in the upper graphs.

oxidised below detection levels 28 weeks after planting. The organic fractions of less stabilized organic amendments mineralized faster than those previously composted (Hernndez et al., 2002; Pascual, 1999), which caused an initial increase in nutrient availability and soil EC in the dry sludge amended soils. -1 Likewise, despite the higher amount of P (2-6 g P seedling and 4-15 g P seedling 1 -1 for compost and dry sludge, respectively) and N (7-29 g N seedling and 9-33 g -1 N seedling for compost and dry sludge, respectively) supplied to the soil with the dry sludge, the compost-treated soils showed a higher availability of both elements three years after the application. At this date, the significant relationship with soil N and EC also suggests that the recalcitrant organic matter added with the biosolids was still in a phase of slow mineralization (Pascual et al., 1999), especially in the compost application. 64

pp (mm)

0 20 40 60 80 100

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

The relationship between OM concentration and other soil properties (total N and EC) at the end of the experiment suggests that, in the medium term, biochemical properties were more sensitive than physical properties to the organic amendments. At this date, the amendments slightly affected soil aggregate stability and bulk density. It has been demonstrated that increases in soil OM enhance water holding capacity (Querejeta et al., 2000). However, in our study, increasing the biosolid application rate had no effect on soil moisture in the planting holes, especially during the first drought period after plantation. Amendment concentration (i.e. dose and degree of incorporation), amendment type, and soil and climate properties control the effect of organic amendments on soil physical improvement (Caravaca et al., 2003; Querejeta et al., 2000), which is commonly reported to occur when amendments are applied at higher doses than those used in our study (Bastida et al., 2007; Cox et al., 2001; Navas et al., 1998; Sort and Alcaiz, 1996). Moreover, the increase in soil fertility in amended soils promoted root colonization of planted P. halepensis and extant vegetation, probably increasing transpiration losses. Belowground interference in drylands can be much stronger than aboveground (Prez-Devesa et al., 2008) and, indeed, Mediterranean vegetation strongly responds to localized nutrient enrichment by increasing root proliferation (Valdecantos et al., 2006).

4.2. Effects of organic amendments on seedling survival


The survival of P. halepensis was negatively related to soil salinity during the first summer. Phytotoxicity was unlikely because common symptoms, such as necrotic needles and abnormal needle colours, were not evident and seedling morphology was not negatively affected by the organic amendments during the growing period. It must be noted that EC values correspond to discrete measurements and may not reflect transient peaks in salinity. Fertilization under warm, dry weather has often been associated with higher seedling mortality, due to aggravated seedling stress, mainly as a result of the osmotic effect of salts (Rose and Ketchum, 2002; van den Driessche et al., 2003) or weed competition (Ramsey et al., 2003). Soluble salts released during OM mineralization may accumulate in the rizosphere (Jacobs and Timmer, 2005; Jacobs et al., 2004) particularly as leaching is absent and evaporative demand high during long periods of time (Bastida et al., 2007). Indeed, site preparation by digging holes favoured the physical microenvironment of the planting spots for spontaneous root colonization. 65

Captulo 3

Therefore, the synergistic effect of soil drying by water uptake from roots of either pine seedling and natural vegetation and the increase in soluble salts after -1 the application of 60 Mg ha of dry sludge during the first summer drastically decreased soil water potential and seedling survival. During the first year after planting, the root plug is mostly confined to the soil surface and thus it may be particularly sensitive to planting hole conditions. These conditions may extend in time in areas where root progress is hampered by the proximity of impenetrable bedrocks and soil horizons (Ganatsas and Spanos, 2005). Increased nutrient availability in the surface soil and relatively benign years after planting may also have favoured root confinement in the upper soil horizons. This may explain the unusual mortality rates recorded after the second summer when the April-July accumulated rainfall in 2005 and 2006 was much lower than the first two years and below the historical records (213, 286, 63 and 126 mm in 2003, 2004, 2005 and 2006, respectively as compared with the 133 mm of the historical series). It has been proposed that when rainfall falls below the historical records the competition between natural and planted vegetation may release a peak in mortality percentages (Maestre et al., 2002). In fact, Navarro Cerrillo et al. (2005) reported an increase of seedling survival of holm oak after weed management probably due to both higher resource availability and improved seedling microenvironment. In addition, we observed that, at the end of the second dry year, salt release in the dry sludge treatments seemed to be exhausted and -1 mortality stabilised while compost treatments above 15 Mg ha maintained higher EC values than control soils, contributing to the drop in survival in the 30 -1 Mg ha of compost. Probably the higher seedling size in this treatment indicated a higher water demand, which could enhance seedling stress when the dry period began (winter 2004-2005). Similar effects were obtained by Roldn et al. (1996) after an unusually dry spring in plots afforested with Pinus halepensis and amended with USR in manual planting holes.

4.3. Effect of organic amendments on seedling nutrient status and growth


Organic amendments commonly produce positive effects on P. halepensis growth (Querejeta et al., 2000; Valdecantos, 2001), especially in relation to increases in available soil P (Roldn et al., 1996; Valdecantos et al., 2006) and, to a lesser extent, increases in soil N (Fuentes et al., 2007). Soil N and available P in unamended soil of the area show low values but similar to those found in the literature (Sardans et al., 2008; Zornoza et al., 2007) which may be sufficient to 66

Fine-tuning of sewage sludge application to promote the establishment of Pinus halepensis seedlings

sustain the establishment of P. halepensis seedlings (Valdecantos et al., 2006). Increased root colonization of amended soils, poor nutrient status of control plants and low soil P availability (Larchveque et al., 2006; Valdecantos et al., 2006) also suggested that, in addition to water availability, nutrients were limiting plant performance on the study site. During the first two years after planting the lowest dose of dry sludge had -1 similar effects on seedling growth than 30 Mg ha of compost, reinforcing the different effects on soil shown by the amendments concerning to the lower maturity of dry sludge and higher N and P initial concentration. Higher needle N concentrations in the present study were positively related to growth, but showed negative or no relationship with survival, indicating that the increase in N supply rate did not ameliorate plant stress or was outbalanced by adverse osmotic effects. Needle P concentration did not differ between doses; thus, the -1 lowest dose of biosolid (15 Mg ha ) was enough to optimize P status in seedlings. However, we found a high P needle concentration in treated seedlings after two consecutive dry growing periods, suggesting a high temporal P availability in soil probably due to a combined effect of OM and moisture regime on Pinsolubilisation in calcareous soils, as described by Braschi et al. (2003), with a strong negative relationship between P availability and accumulated rainfall after fertilization. 5. Conclusion The use of organic refuses in the restoration of degraded areas proved effective in increasing seedling growth and basal area in planted P. halepensis seedlings, but not in increasing their survival. Considerations to take into account when biosolids are employed in dry or semiarid environments are different from those needed for less stressful sites. Introduced seedlings seem to be sensitive to increases in site-specific stress factors such as, in our conditions, the occurrence of intense drought periods together with the increment in soil EC and probably soil physical constraints. This implies a higher risk for the seedlings when the soil dries out, especially if they have not been able to colonize the soil beyond the planting hole. The use of amendments can intensify drought effects through root competition with extant vegetation and reduced water availability within the -1 planting hole with doses higher than 30 Mg ha . Nevertheless, we found that the

67

Captulo 3

use of composted amendments, with their gradual release of salts and nutrients into the soil, has a clear advantage in restoration actions restricted to a single initial application because their effects last longer than non-composted ones; this application must, however, be accompanied not only by a careful selection of adequate doses but also by site preparation to prevent mortality episodes after intense drought periods. Acknowledgements We thank Jaime Baeza, Carles Rosell and Valeria Bortolotti for their assistance in field and laboratory, and Karen Disante for her comments on an earlier draft. We also thank J. Scheiding for language revising of the final version of the text. This research has been funded by the Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino (OLORES PROJECT 174/2004/3 and BIOMET PROJECT 608/2006/1-4.4) and Ministerio de Educacin y Ciencia (project GRACCIE; Programa Consolider-Ingenio 2010). Fundacin CEAM is funded by Generalitat Valenciana and Fundacin Bancaja.

68

Response of Pinus halepensis Mill. seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils
Respuesta de brinzales de Pinus halepensis Mill. a la aplicacin de bioslidos enriquecidos con Cu, Ni y Zn en tres suelos forestales Mediterrneos

David Fuentes, Karen B. Disante, Alejandro Valdecantos, Jordi Cortina y V. Ramn Vallejo

Environmental Pollution 145 : 316-323 (2007)

Captulo 4

Abstract We investigated the response of Pinus halepensis seedlings to the application of biosolids enriched with Cu, Ni and Zn on three Mediterranean forest soils under semiarid conditions. One-year-old seedlings were planted in lysimeters on soils developed from marl, limestone and sandstone which were left unamended, amended with biosolids, or amended with biosolids enriched in Cu, Ni and Zn. Enriched biosolids increased plant heavy metal concentration, but always below phytotoxic levels. Seedlings receiving unenriched biosolids showed a weak reduction in Cu and Zn concentration in needles, negatively affecting physiological status during drought. This effect was alleviated by the application of enriched sludge. Sewage sludge with relatively high levels of Cu, Zn and Ni had minor effects on plant performance on our experimental conditions. Results suggest that micronutrient limitations in these soils may be alleviated by the application of biosolids with a higher Cu, Zn and Ni content than those established by current regulations.

Keywords: Pinus halepensis, biosolids, heavy metals, photosynthesis.

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

Resumen En este estudio investigamos la respuesta de brinzales de Pinus halepensis a la aplicacin de bioslidos enriquecidos con Cu, Ni y Zn en tres suelos forestales Mediterrneos bajo condiciones semiridas. Los brinzales de una savia se plantaron en lismetros con suelos desarrollados sobre margas, calizas y areniscas, en los cuales se aplicaron bioslidos, bioslidos enriquecidos con Cu, Ni y Zn, o se dejaron como suelos control no enmendados. Los bioslidos enriquecidos incrementaron la concentracin de metales pesados en planta, pero siempre por debajo de niveles fitotxicos. Los brinzales que recibieron bioslidos sin adicin de metales pesados mostraron una leve reduccin de la concentracin de Cu y Zn en acculas, lo cual repercuti negativamente en su estado fisiolgico durante el perodo seco. Este efecto se atenu con la aplicacin del bioslido enriquecido. La aplicacin de lodos de depuradora enriquecidos con niveles relativamente altos de Cu, Zn y Ni tuvo un efecto mnimo sobre el desarrollo de los brinzales en nuestras condiciones experimentales. Los resultados sugieren que las limitaciones micronutricionales de estos suelos pueden ser aliviadas mediante la aplicacin de bioslidos con mayores contenidos en Cu, Zn y Ni que los que establece la legislacin actual.

Palabras clave: Pinus halepensis, bioslidos, metales pesados, fotosntesis.

72

Captulo 4

1. Introduction Forest soils in the Mediterranean basin have been intensively exploited (Naveh, 1982), resulting in the loss of soil organic matter and nutrients (Vallejo et al., 2000). Decreases in soil fertility may constraint spontaneous vegetation recovery once human pressure is released (Vallejo et al., 1998), and the same would apply to restoration actions (Serrasolses et al., 2004). Thus, increases in soil fertility may be needed to foster ecosystem recovery. Biosolids represent an easily accessible source of organic matter and nutrients that can be used to restore degraded ecosystems. Sewage sludge reutilization has been recommended as the best practicable environmental option (Hall, 1999) for the management of this organic residue, in spite of the fact that environmental risks may impose restrictions on its use (European Commission, 2000). Detailed information on the effects of biosolids on ecosystems is needed to maximize the benefits and minimize the environmental risks of biosolid use in ecological restoration. Biosolids contain variable amounts of heavy metals which could compromise plant growth. Woody species can be very sensitive to moderate concentrations of heavy metals. These elements may reduce biomass accumulation in tree seedlings (Kukkola et al., 2000), inhibit root growth (Arduini et al., 1995; Hartley et al., 1999), decrease the availability of essential elements (Kabata-Pendias, 1992), and modify root morphology and architecture, compromising root capacity to explore soils (Arduini et al., 1994). The excess or deficiency of essential metals may also inhibit protein and enzyme function, and thus impair photosynthetic electron transport at the reaction centers (Cakmak, 2000; Maksymiec, 1997). Heavy metals may indirectly affect seedling performance by reducing plant ability to access and transport soil resources, particularly water (Barcel and Poschenrieder, 1990). However, most studies on the effects of heavy metals on tree seedlings have been performed under laboratory and greenhouse conditions, and extrapolations to field conditions are difficult. For example, dryland soils are frequently carbonated (Fuller, 1977) and heavy metal availability greatly reduced (Brallier et al., 1996; Illera et al., 2000). Periodic soil drying and low moisture availability may also affect heavy metal availability (Pascual et al., 2004). Despite the urgent need for a knowledge-based biosolid application, there is little information on the effect of heavy metal contaminated biosolids on Mediterranean woody plants. This paper

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

focuses on the short-term effect of biosolids enriched with Cu, Ni and Zn on the morphology and physiology of Pinus halepensis seedlings planted under semiarid Mediterranean conditions. Pinus halepensis is one of the most widespread tree species in the Mediterranean basin, and indeed one of the few species that can thrive under semiarid conditions. The experiment was performed on three contrasted soil types, representing common forest soils in the Mediterranean basin.
Table 1. Basic physical-chemical properties of the three top soils used in the experiment, and total soil concentration of Zn, Cu and Ni (extracted with aqua regia) in control soils (C), soils amended with biosolid (SS), and soils amended with biosolid enriched with heavy metals (SSM) (Toribio and Romany, 2006). Soil Treatment Sand Silt Clay CEC CaCO3 pH (H2O) TOC Cu Control SS SSM Ni Control SS SSM Zn Control SS SSM % % % cmol+ kg-1 % % mg kg-1 Marl 40 40 20 3.8 51 8.4 2.8 1.6 3.3 24.0 6.3 6.5 12.0 13.0 17.0 66.0 Limestone 23 34 43 10 15 8.4 2.4 12.0 14.0 44.0 29.0 30.0 35.0 52.0 56.0 122.0 Sandstone 43 40 17 3.9 4 5.9 0.4 7.0 8.0 31.0 16.0 18.0 20.0 10.0 14.0 64.0

mg kg-1

mg kg-1

2. Materials and methods 2.1. Experimental design The experiment was carried out in Alicante (E Spain), under semiarid conditions (mean annual rainfall 310 mm, mean annual temperature 17.5 C). We selected three soil types common in the Mediterranean basin. We used a Regosol derived from marl with high carbonate content, loamy texture and high pH (8.4); a 74

Captulo 4

Rendzic Leptosol derived from limestone, decarbonated brown-red earth with clayey texture and pH 8.4, and a Typic Haploxerept, loamy soil developed from red sandstone, with slightly acidic pH (5.9) and lower OM content than the previous two soils (Table 1). The two basic soils were collected from Ayora (Valencia), and the soil developed from sandstone was collected from Sierra de Espadn (Castelln). For clarity we will refer to them according to their dominant lithology, i.e., Marl, Limestone and Sandstone soils, respectively. The top 50 cm layer of each soil was collected and homogenized by sieving through a 2 cm mesh. We used each soil type either unamended (Control), mixed with a biosolid from a domestic water treatment plant, or mixed with a heavy metal-enriched biosolid (Table 2). We artificially increased the heavy metal content of the biosolid by adding a heavy metal solution to a fresh, anaerobically stabilized biosolid rather than using a biosolid from waters contaminated in origin. In this way, we prioritized control on the heavy metal content of the biosolid. The heavy metal solution contained ZnSO4, CuSO4 and NiSO4 to attain a concentration that was well above the level permitted in European and Spanish regulations (Council -1 Directive 86/278/EEC) for agricultural application of biosolids (1750 mg Cu kg , -1 -1 400 mg Ni kg and 4000 mg Zn kg , dry weight of biosolid; Table 2). We selected Cu, Ni and Zn because they frequently limit the agricultural application of biosolids in the Region of Valencia. Unaltered and enriched biosolids were allowed to slowly dry down to 40% moisture content, and then were thoroughly mixed with the soil. We filled fifteen 38 x 38 x 70 cm lysimeters per soil type with, from bottom to top, a 10 cm layer of limestone gravel, a 20 cm layer of unamended soil, and a 30 cm layer of either unamended soil, a homogeneous mixture of soil with dried biosolid, or a mixture of soil with dried biosolid that was previously enriched in heavy metals (a total of 45 lysimeters, 5 replications per treatment). The biosolid application rate corresponded to 60 Mg ha (850 g d.w per lysimeter). Previous studies have shown this to be an adequate dose for woody seedlings (Berry, 1977; Roldn, 1996). In February 2003 we planted one 1-year-old Pinus halepensis seedling per lysimeter. Seedlings came from a public nursery (Sta. Faz, Alicante; Spain), 10 km from the area were the lysimeters were located. They 3 were grown on 350 cm forest containers filled with peat and cocopeat. At the time of planting, current year needles had not yet flushed. The lysimeters were
-1

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

rainfed, except for two waterings applied at planting, and in late summer (25 mm each). 2.2. Soil measurements We monitored soil volumetric water content by Time Domain Reflectometry (TDR Tektronik 1502C Cable Tester) with one vertical set of probes (0 to 20 cm depth), and two horizontal sets of probes, at 20 cm and 35 cm depth, respectively. By the end of the experiment, soil salinity (0-30 depth) was estimated from the electrical conductivity of extracts from a saturated soil-paste (Rhoades, 1982), and soil pH (0-30 depth) was determined from a 1:2.5 (w/v) solution of soil and deionized water. For further details of soil analyzes see Toribio and Romany (2006). 2.3. Evaluation of seedling performance

Table 2. Biosolid properties before and after the application of a solution enriched with Cu, Ni and Zn. pH Moisture C N P K Ca Mg Fe Cd Cu Ni Pb Zn Hg Cr % % % %P %K % Ca % Mg mg kg-1 mg kg mg kg mg kg mg kg mg kg
-1 -1 -1 -1 -1

7.4 63 32 2.0 1.2 0.5 15 0.5 10 668 Unenriched <0.4 101 16 34 395 2.6 53 Enriched <0.4 2098 666 34 5377 2.6 53

mg kg-1 mg kg-1

We evaluated seedling performance by measuring seedling morphology, biomass allocation, gas exchange, chlorophyll fluorescence and concentration of heavy metals in current-year stem and roots. A Li-Cor 6400 portable closed photosynthesis system (Li-Cor Inc. Nebraska, US) was used to measure photosynthetic rate (A) and transpiration (E). Gas exchange measurements were conducted once in May and twice in August, before and after watering, in all seedlings. Sampled needles were scanned to estimate needle surface area (see below). A portable fluorometer PAM-2001 (Walz, Effeltrich, Germany) was used to measure photochemical yield (PSII) on the same dates.

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Captulo 4

In October 2003 we harvested all seedlings and carefully washed the root system. We separated aboveground tissues grown during the experiment (hereafter 'new shoots') from those grown in the nursery. Roots colonizing the soil were separated from those confined in the original root plug. The needles of the new shoots and the roots colonizing the soil were digitized by scanning on an A3 flatbed scanner (HP Deskscan) fitted with a transparency adaptor at 300 dpi, using an 8-bit grayscale. We analyzed the images with specific software (WinRhizo, Regent Instruments, Qubec, Canada) to obtain needle and root surface area and length. 2.4. Heavy metal concentration in plant tissues All biomass fractions were oven dried at 65 C for two days and the dry weight determined. Specific root length was calculated in the new roots colonizing the soil, as the ratio between root length and root biomass, and specific needle weight was calculated in the new shoots as the ratio between needle biomass and needle surface area. The current year tissues were digested in a heating block at 250C with a mixture of sulfuric acid and hydrogen peroxide (1:1, v:v) (Jones and Case, 1990). Digests were analyzed for Cu, Ni and Zn by ICP-OES (Perkin Elmer Optima 4300 Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry). Olea europaea leaf standard reference materials (BCR: CRM 062, Commission of the European Communities Bureaus of Reference, Brussels) were digested and analyzed for quality control. 2.5. Statistical analysis We used analysis of variance (soil type and biosolid amendment as fixed factors, with three levels each) to evaluate treatment effects on seedling performance. When results showed a significant treatment effect, we used Tukeys HDS test to establish pairwise comparisons between levels of each factor. We used regression analysis to evaluate the degree of covariation between dry weight and heavy metal concentration in new roots. All analyses were performed by using SPSS 10.0 (SPSS Inc., 1999).

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

3. Results 3.1 Soil properties After eight months, soil EC was higher in amended soils than in control soils 1 (F=53.49 p<0.001). Anyway, EC was always 2 dS m , hence no strong osmotic effect should be expected. Heavy metal enrichment had no effect on soil salinity. Treatments did not affect soil pH in any soil type (F=2.20 p=0.139) (Table 3). Soil moisture was highest on Limestone and lowest on Sandstone, according to expected water holding capacity differences related to soil texture. We found no overall effect of biosolid amendment on soil moisture content. A significant Soil x Treatment interaction reflected that biosolid application significantly increased soil moisture at the 20 cm depth in Limestone soils immediately after watering (F=7.99 p=0.06) and seven days later (F=7.99 p=0.006) (Figure 1). One month later, soil moisture content was still higher, but differences were marginally significant (F=3.01 p=0.09). 3.2. Bioaccumulation of heavy metals No effect was found of soil type on Cu and Ni concentration in new shoots, but seedlings planted on Limestone showed higher Zn concentration in this biomass fraction. New shoots concentration of Cu and Zn increased in seedlings amended with enriched biosolid (Table 4). Significant increases ranged from more than 100% (Cu in seedlings planted on Marl) to less than 20% (Zn in seedlings planted on Limestone).
Volumetric Water Content (%)
20 15 10 5 0
8 8 8 9 9 9 9 9 8 8 8 9 9 9 9 9 8 8 8 9 9 9 9 9 11/ 18/ 25/ 1/ 8/ 15/ 22/ 29/ 11/ 18/ 25/ 1/ 8/ 15/ 22/ 29/ 11/ 18/ 25/ 1/ 8/ 15/ 22/ 29/ Sampling date

Marl

**

Limestone
*

Sandstone

Figure 1. Changes in volumetric water content in the three soil types: amended with biosolid (triangles), biosolid enriched with heavy metals (white circles) and unamended soil (black circles), at 20 cm depth. An experimental watering was applied on August 26th. Means and standard errors of n=5. Significances of ANOVA are explained in the text (*p<0.1, **p<0.01).

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Captulo 4

Table 3. Soil electrical conductivity in a saturated paste (EC) and pH eight months after planting on three Mediterranean forest soils with no amendment (C), amended with biosolid (SS), and amended with biosolid enriched with metals (SSM). Means and standard errors of n=5 replicates are shown. Different letters within a single row indicate significant differences (p<0.05).
Soil Marl Limestone Sandstone C 0.79 0.03a 0.88 0.06a 0.64 0.04a EC (dS m-1) SS 1.79 0.20b 2.07 0.19b 1.42 0.12b SSM 1.94 0.16b 2.03 0.19b 1.87 1.15b C 8.1 0.0a 8.0 0.0a 7.2 0.2a pH SS 7.9 0.1a 7.7 0.2a 7.1 0.1a SSM 7.9 0.0a 7.9 0.0a 7.1 0.2a

Interestingly, the unenriched biosolid application resulted in a trend towards lower Cu and Zn concentrations in this fraction, which was apparently compensated by the incorporation of heavy metals in biosolid. We found no significant effect of the treatments on Ni concentration in new shoots. Ni concentrations were low, particularly in control seedlings planted on Marl, where -1 they were close to the detection limit (0.05 mg kg ). Cu, Zn and Ni concentrations in the current year tissues were substantially higher in roots than in needles, particularly in seedlings receiving enriched biosolid. The heavy metal concentration in both the new roots of seedlings planted on control soils and the soils amended with unenriched biosolid was similar. Increases in the heavy metal concentration in the new roots of seedlings amended with enriched biosolid ranged from less than 100% (Zn on Sandstone) to a 17-fold increase in the Cu concentration of plants growing on Marl. The increased Ni concentration in roots of seedlings amended with enriched biosolid was significant only on Marl. 3.3. Seedling physiology and morphology Physiological status was strongly influenced by soil type. Seedlings planted on Marl performed better than those planted on Limestone or Sandstone during the peak of summer, as reflected by the higher net photosynthesis rate and photochemical yield (Figure 2). During the period of maximum drought, unenriched biosolid had a marginal negative effect on net photosynthesis (F=2.87, p=0.074). This effect disappeared in plants amended with biosolid enriched in heavy metals. Similarly, quantum yield was consistently higher in seedlings amended with enriched biosolid than in those amended with unenriched biosolid

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

Table 4. Cu, Ni and Zn concentration in current year tissues of Pinus halepensis seedlings eight months after planting on three Mediterranean forest soils with no amendment (C), amended with biosolid (SS) or amended with biosolid enriched with heavy metals (SSM). Means, standard errors of n=4-5 replicates and results of a two-way ANOVA are shown. Asterisks indicate significant differences at p<0.005 (**) or p<0.05 (*) (Tukey's test, p<0.05). Treatment Marl C SS SSM Lime-stone C SS SSM Sand-stone C SS SSM Soil Cu (mg kg-1) Shoot Root 1.0 0.1 1.6 0.2 2.2 0.2 1.4 0.2 1.3 0.2 2.0 0.1 2.0 0.3 0.9 0.1 2.6 0.3 1.5 0.4 7.8 0.8 25.8 3.2 3.3 0.6 10.2 4.2 30.0 6.9 4.6 1.2 3.7 1.2 18.4 2.1 42.38** 0.82 3.26* Ni (mg kg-1) Shoot Root 0.05 0.01 0.05 0.01 0.05 0.01 0.66 0.53 0.27 0.16 0.05 0.01 0.70 0.31 0.57 0.24 0.75 0.22 0.64 5.14 0.64 0.3 0.1 0.8 0.2 5.1 0.5 1.1 0.4 5.8 3.7 4.4 2.3 2.8 1.3 6.9 1.2 9.5 0.6 5.98* 16.51** 1.72 Zn (mg kg-1) Shoot Root 13.3 1.6 14.8 1.8 20.9 1.2 20.3 2.2 17.1 3.7 23.8 1.6 18.2 1.5 14.7 0.9 23.5 2.1 11.39** 3.36* 0.62 39.5 7.4 44.4 11.3 86.0 6.2 40.0 4.6 47.1 8.3 73.2 17.2 47.3 8.4 32.9 11.9 65.3 6.2 10.57** 0.48 0.99

2-way ANOVA Treat- 19.31** ment Soil 1.38 type TxS 4.66**

and control seedlings (F=6.283, p=0.010). Response to watering was highly dependent on soil type. Net photosynthesis rate and quantum yield increased in seedlings planted on Sandstone after irrigation; thus, by the second sampling date, photosynthesis rate and quantum yield were higher in these seedlings than in those planted on Marl. Seedlings planted on Limestone showed no changes in physiological status 5 days after watering. We found no significant effect of soil type or treatment on seedling physiological status in April, when growing conditions were optimum (data not shown), or after the August watering. We found a significant effect of soil type on total biomass accumulation, and a marginal effect of soil type on root collar diameter (Table 5). Seedlings growing on soils developed from Marl grew faster than seedlings planted on Limestone or Sandstone, and showed higher potential for soil colonization. Biomass allocation belowground was also higher in seedlings growing on Marl than in those planted

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Captulo 4

on other soil types, as reflected by a higher root weight ratio (RWR). Seedlings planted on Marl showed higher specific root length.
Drought 1,5 A (mmol CO2 m-2 s-1) Post-watering

1,0

0,5

0,0 0,6 0,4 0,2 0,0


Marl Limestone Sandstone Marl LimestoneSandstone

We found no significant effect of enriched or unenriched biosolid, on aboveground total biomass and morphology. The significant Soil x Treatment interaction in root biomass accumulation reflected the opposite effect of amendments on seedlings planted on Limestone (increased biomass in amended seedlings) and Marl (decreased biomass in amended seedlings).

PSII (relative units)

Figure 2. Net photosynthesis (A) and photochemical yield (PSII) in Pinus halepensis seedlings amended with biosolid (light grey), biosolid enriched with heavy metals (dark grey) or unamended (black bars). Measurements were performed on August 11th during the peak of summer drought. Means, standard errors of n=4-5.

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82
Diameter (mm) RWR Shoot 5.0 0.2 5.2 0.1 5.2 0.2 4.6 0.3 4.9 0.3 4.8 0.1 5.1 0.2 5.0 0.2 5.1 0.1 6.9 0.8 4.1 0.4 6.8 0.7 7.0 0.8 4.1 0.4 4.3 0.3 7.3 0.2 5.0 0.1 0.64 0.01 0.59 0.03 0.60 0.01 0.58 0.02 7.1 0.4 8.1 0.8 4.4 0.2 5.3 0.4 0.61 0.02 0.64 0.01 8.1 0.5 5.2 0.2 0.63 0.01 8.5 0.9 5.6 0.4 0.64 0.01 9.5 0.7 6.6 0.4 0.67 0.01 Root 18.3 1.0 18.7 1.3 20.8 1.2 14.6 1.6 15.3 1.7 14.1 1.1 14.1 1.1 14.6 2.0 17.7 1.3 5.3 0.1 5.1 0.1 4.8 0.2 5.4 0.2 4.8 0.2 5.0 0.2 4.8 0.3 5.3 0.2 4.6 0.2 Biomass (g d.w.) Specific Root Length -1 (cm mg ) Specific Needle Wt. (mg cm-2) 0.64 1.65 0.35 0.33 2.96 0.19 0.34 5.49* 0.63 0.86 16.36** 2.66* 0.38 11.30** 1.43 1.71 6.47** 1.24 2.30 0.88 1.98

Table 5. Morphology of Pinus halepensis seedlings grown for eight months on three Mediterranean forest soils with no amendment (C), amended with biosolid (SS) or amended with biosolid enriched with heavy metals (SSM). The root weight ratio (RWR) was calculated as the ratio between total root dry weight of the plant and total plant weight. Means, standard errors of n=4-5 replicates and results of a two-way ANOVA are shown. Asterisks indicate significant differences at p<0.005 (**) and p<0.05 (*) (Tukey's test).

Soil

Treatment

Height (cm)

Marl

17.5 0.6

SS

16.3 0.9

SSM

15.9 0.5

Limestone C SS

16.8 0.7 16.7 1.0

SSM

17.1 0.9

Sandstone C SS

16.1 0.8 15.6 0.6

SSM

15.6 0.8

2-way ANOVA (F values)

Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

Treat-ment Soil type TxS

Captulo 4

Biomass of roots colonizing the soil was negatively affected by the application of biosolid enriched in heavy metals on Marl, but not on the other soil types (Figure 3). The negative relationship found between the EC in soils developed from Marl 2 and the amount of roots colonizing the soil (r =0.639, p=0.001, n=14) suggests that root growth was inhibited by salinity, perhaps by transient peaks in EC not detected in the regular soil measurements. On the contrary, we found a positive but weak relationship between salinity and fine root accumulation in Limestone 2 (r =0.323, p=0.02, n=15).
Table 6. Significance of the relationship between heavy metal concentration in new roots and the residuals of the relationship between the biomass of roots colonizing the soil and the electrical conductivity of soil extracts (EC). Soil Marl Limestone r2 p r2 p Cu 0.069 0.41 0.042 0.483 Ni 0.252 0.096 0.002 0.866 Zn 0.447 0.017 0.011 0.706

4. Discussion Information on heavy metal contents in Pinus halepensis is scarce. To our knowledge, critical levels for Cu, Zn and Ni have not been established for seedlings of this species. Adequate levels of these elements in plants range from 3 -1 -1 -1 to 6 mg Cu kg , 27 to 150 mg Zn kg and 0.1 to 6 mg Ni kg (Boardman et al., 1997; Kabata-Pendias, 1992; Rademacher, 2001). Cu and Zn concentrations in needles of unamended seedlings and seedlings amended with unenriched biosolid (except for those planted on Sandstone) can be considered deficient (Boardman et al., 1997; Kabata-Pendias, 1992), or critical (Marschner, 1995), and they were well below the toxicity levels suggested by Kabata-Pendias (1992) and Marschner -1 -1 (1995) (20-30 mg Cu kg and 100-300 mg Zn kg ). Ni concentrations in shoots were always very low, and did not show significant responses to the addition of enriched or unenriched biosolid. This is in agreement with the lack of change in total Ni concentration in amended soils (Table 1). Application of enriched biosolids increased foliar concentrations of Cu and Zn, but still the values were at the lower limit of deficiency, and toxicity was unlikely. The form in which the heavy metals were applied (i.e, as soluble salts; Kiekens et 83

Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

al., 1984; Oudeh, 2002), may have contributed to these increases. Soil pH increased in Sandstone soils throughout the course of the experiment, probably due to atmospheric inputs that are relatively high in this area (Carratal, 1993; Sanz et al., 2002). Thus, our results may be valid for slightly-to-highly carbonated soils, but not for acidic soils.

Root biomass colonizing soil (g)

5
a

4 3 2 1 0

ab b

Marl

Limestone Sandstone

Figure 3. Biomass of roots colonizing the three soil types as affected by the application of biosolids (light grey), biosolids enriched with heavy metals (dark grey), or unamended (black). Data represent means SE (n =4-5). Results of a Tukey test (p< 0.05) are indicated by letters

Soil pH has been described as the main factor controlling heavy metal solubility in soils (Martinez and Motto, 2000; Rieuwerts, 1998). Cu, Ni and Zn concentration in plants on unamended soils suggest that bioavailability was higher on Sandstone than on Limestone and Marl. Differences in pH, clay and carbonate content may be responsible for these results (Garca-Rizo et al., 1999; Martnez and Motto, 2000; Rodrguez-Rubio et al., 2003). But the increase in Cu and Zn concentration in roots of seedlings amended with polluted biosolids was lower in those planted on Sandstone than in those planted on more carbonated soils. Decreases in the heavy metal concentration in seedlings after organic matter application have been associated with sorption onto organic compounds and inorganic fractions (Pascual et al., 2004; Rate et al., 2004; Snchez-Monedero et al., 2004). Results suggest that the sewage sludge matrix buffered the release of sludge-borne metals, or caused a reduction in the availability of weaker-bound

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Captulo 4

indigenous heavy metals in sandstone soil (Merrington et al., 2003; Smith, 1996). The decrease in heavy metal concentration in seedlings amended with unenriched biosolids, particularly in those planted on Sandstone, provides further support to this hypothesis. In pines, heavy metal transport to shoots is commonly low (Bargagly, 1998; Fuentes et al., 2003; Kukkola et al., 2000). In the present experiment, heavy metal concentration in roots was substantially higher than in shoots. Several mechanisms may explain this, including immobilization of metals at the cell wallplasma membrane interface, and selective transport (Kabata-Pendias 1992; Reichman, 2002). As a result, heavy metal concentration in needles was relatively low even for seedlings amended with enriched biosolid. Seedling ecophysiological status was slightly improved during the driest period by heavy metal application, as reflected by the significant increase in photochemical efficiency in needles of seedlings amended with enriched biosolids as compared to those receiving unenriched biosolids. Cu and Zn deficiency affects metabolic processes like photosynthesis and respiration (Adams et al., 2000; Cakmak, 2000). Cu interacts with PSII electron transport either directly, by participating in the electron transfer as a constituent of an electron carrier, or indirectly, by controlling the membrane protein composition within the PSII complex (Mysliwa-Kurdziel et al., 2004). Thus, our results suggest that biosolids enriched in heavy metals at the levels used in this study may have a weak positive effect on plant ecophysiology by releasing micronutrient limitation. This result is consistent with a general trend towards increased Cu, Ni and Zn concentrations in the needles of seedlings amended with enriched biosolids as compared to those receiving unenriched biosolids, and agree with the higher Cu, Ni and Zn leaching found by Toribio and Romany (2006) in the soils amended with enriched biosolids. The low response to biosolid application on biomass accumulation and allocation and plant growth, was somewhat unexpected as Pinus halepensis usually increases growth when amended with biosolids at doses similar to the ones used in the present experiment (Zagas et al., 2000). However, most of the experiments with Pinus halepensis have been performed under dry-to-subhumid climatic conditions. Under the semiarid conditions of the present experiment, low water availability probably increased the concentration of soluble salts, counterbalancing the

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Response of Pinus halepensis seedlings to biosolids enriched with Cu, Ni and Zn in three Mediterranean forest soils

positive effects resulting from organic matter and nutrient inputs. The negative relationship found between the biomass of roots colonizing the soil and soil salinity in soils developed from Marl supports this hypothesis. Heavy metal addition had no effect on biomass accumulation and allocation. This is in agreement with the relatively low heavy metal concentration found in needles, and further supports the idea that no toxicity levels were reached in any of the three soils tested (Table 4). However, at this point we cannot ascertain whether the negative effect of Zn and Ni on the biomass of fine roots colonizing the soil was a result of incipient phytotoxicity, or a shift in biomass allocation patterns (i.e., reduced biomass allocation belowground) as a consequence of the released micronutrient limitation (Chapin, 1987). It is worth noting that in the current experiment biosolids were thoroughly mixed with the soil. This is s not feasible in regular field plantations, and may have affected the outcomes of the experiment (Fuentes et al., 2002). 5. Conclusions Biosolids that may be rejected for agricultural uses due to excess Cu, Ni and Zn, did not show toxicity effects on the Pinus halepensis seedlings planted under the conditions of this study. Toxicity by Cu, Ni and Zn seems unlikely at the application rates presented in our study. Biosolid application in ecological restoration differs from that in agricultural crops and land reclamation. In the former, biosolid use may be justified as a kick-off treatment to improve early growth in planted seedlings, and it must be restricted in time (e.g., one single application before planting), and space (application not widespread, but confined in planting holes or lines) to prevent undesirable effects of excessive disturbance. Thus, biosolid application in ecological restoration may have a lower environmental impact than its use in agriculture. Furthermore, in soils where low micronutrient availability is likely (weakly-to-highly carbonated soils, high pH, semiarid climate), the use of biosolids enriched in Cu, Ni and Zn may help to attenuate micronutrient limitations, improving seedling ecophysiological status. Biosolid enriched in Cu, Ni and Zn may affect ecosystems at other levels, and thus, our results can not be directly transferred to managers. But they indicated that plant performance may not be impaired by the application of enriched biosolids within the range of conditions and application rates tested in the present experiment.

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Captulo 4

Acknowledgments We thank Juanjo Torrecillas and Valeria Bortolotti for assistance in field and lab. Support provided by Fernando Llavador (EPSAR, Generalitat Valenciana) and the Rincn de Len water treatment plant staff, is appreciated. This research is funded by the Spanish Ministry of Science and Technology (BIOMON Project REN REN2000-0181P4-03). CEAM is funded by Generalitat Valenciana and Fundacin Bancaja.

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Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc


Sensibilidad de especies leosas mediterrneas a Cu Ni y Zn.

David Fuentes, Karen B. Disante, Alejandro Valdecantos, Jordi Cortina y V. Ramn Vallejo

Chemosphere 66: 412420 (2007)

Captulo 5

Abstract The restoration of heavy metal contaminated areas requires information on the response of native plant species to these contaminants. The sensitivity of most Mediterranean woody species to heavy metals has not been established, and little is known about phytotoxic thresholds and environmental risks. We have evaluated the response of four plant species commonly used in ecological restoration, Pinus halepensis, Pistacia lentiscus, Juniperus oxycedrus, and Rhamnus alaternus, grown in nutrient solutions containing a range of copper, nickel and zinc concentrations. Seedlings of these species were exposed to 0.048, 1 and 4 M of Cu; 0, 25 and 50 M of Ni; and 0.073, 25 and 100 M of Zn in a hydroponic silica sand culture for 12 weeks. For all four species, the heavy metal concentration increased in plants as the solution concentration increased and was always higher in roots than in shoots. Pinus halepensis and P. lentiscus showed a higher capacity to accumulate metals in roots than J. oxycedrus and R. alaternus, while the allocation to shoots was considerably higher in the latter two. Intermediate heavy-metal doses enhanced biomass accumulation, whereas the highest doses resulted in reductions in biomass. Decreases in shoot biomass -1 occurred at internal concentrations ranging from 25-128 g g of Zn, and 1.7-4.1 -1 g g of Cu. Nickel phytoxicity could not be established within the range of doses used. Rhamnus alaternus and J. oxycedrus showed higher sensitivity to Cu and Zn than P. halepensis and, especially, P. lentiscus. Contrasted responses to heavy metals must be taken into account when using Mediterranean woody species for the restoration of heavy metal contaminated sites. Keywords: Phytotoxicity; Heavy metals; Restoration; Mediterranean seedlings.

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Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

Resumen La restauracin de zonas contaminadas con metales pesados requiere informacin previa sobre la respuesta de las planas autctonas a estos contaminantes. La sensibilidad de la mayora de especies leosas mediterrneas a metales pesados no ha sido establecida y se sabe poco acerca de los umbrales fitotxicos y los riesgos medioambientales. En este estudio hemos evaluado la respuesta de cuatro especies comnmente usadas en restauracin ecolgica, Pinus halepensis, Pistacia lentiscus, Juniperus oxycedrus, and Rhamnus alaternus, creciendo en una solucin nutritiva que contena diversas concentraciones de cobre, niquel y zinc. Los brinzales fueron sometidos a 0.048, 1 y 4 M de Cu; 0, 25 y 50 M de Ni; y 0.073, 25 y 100 M de Zn en cultivo hidropnico sobre arena de slice durante 12 semanas. La concentracin de metales pesados en plantas aument en las cuatro especies a medida que increment su concentracin en la solucin nutritiva, y siempre fue mayor en races que en hojas. Pinus halepensis y P. lentiscus mostraron mayor capacidad de acumulacin de metales en races que J. oxycedrus y R. alaternus, mientras que la asignacin a la parte area fue mayor en las dos ltimas. Dosis intermedias de metales pesados mejoraron la acumulacin de biomasa mientras que las dosis mayores produjeron una reduccin de esta variable. Los descensos en biomasa -1 area se observaron a concentraciones internas de 25-128 g g de Zn, y 1.7-4.1 -1 g g de Cu. La fitotoxicidad del Ni no pudo establecerse dentro del rango de dosis utilizadas. Rhamnus alaternus y J. oxycedrus mostraron mayor sensibilidad a Cu y Zn que P. halepensis y, especialmente, P. lentiscus. Estas respuestas contrastadas a la presencia de metales pesados deben de ser consideradas para el empleo de especies leosas mediterrneas en la restauracin de zonas contaminadas con metales pesados. Palabras clave: Mediterrnea. Fitotoxicidad; Metales pesados; Restauracin; Planta

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Captulo 5

1. Introduction Small amounts of heavy metals are present in most natural soils, but human activity has increased their presence to exceptionally high levels on many polluted sites (Adriano, 2001). Restoration of heavy metal contaminated areas must take into account both phytotoxicity and the risk of incorporating heavy metals into food chains. The main sources of heavy-metal pollution in natural soils are waste products from mining and ore-processing operations (Httermann et al., 2004), diffuse pollution in industrial and urban areas (Azimi et al., 2003) and biosolid land applications (Smith, 1996). Agricultural activities currently absorb half of the biosolids produced in water treatment plants (USEPA, 1999; European Comission, 2000). Biosolid applications for the reclamation of degraded areas and for the production of growth substrates represent novel scenarios of heavy metal incorporation into natural soils. Studies on the effects of heavy metals on plant performance have traditionally focused on grasses and agricultural species (Berti and Jacobs, 1996; Cobb et al., 2000). Comparatively scant information is available on the response of many of the woody species commonly used in ecological restoration. This is particularly true for Mediterranean woody species. Woody species can be very sensitive to moderate concentrations of heavy metals (Balsberg Phlsson, 1989). Heavy metals can reduce biomass accumulation in tree seedlings (Kukkola et al., 2000), inhibit root growth (Arduini et al., 1995; Hartley et al., 1999), decrease the availability of essential elements (Kabata-Pendias and Pendias, 1992), and modify root morphology and architecture, thus compromising root capacity to explore soils (Arduini et al., 1994; Schmidt, 1997). Heavy metals can also affect seedling performance indirectly by reducing the ability of the plant to access and transport soil resources, particularly water (Barcel and Poschenrieder, 1990), which could compromise the plant's capacity to withstand adverse climatic conditions. We have carried out an experiment to assess the sensitivity of four Mediterranean woody species, Pinus halepensis Mill., Juniperus oxycedrus L., Pistacia lentiscus L. and Rhamnus alaternus L., when grown in nutrient solutions containing a range of Cu, Ni and Zn concentrations, by defining both the internal plant tissue concentration and the external concentration at which seedling decline begins. These four species are classified as potential natural vegetation in

93

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

arid and semi-arid Mediterranean areas (Cortina et al., 2005), and they are currently being used in restoration activities on unpolluted sites.

2. Materials and methods

2.1. Plant growing conditions


Our experimental design included 4 species, 3 heavy metals, 3 heavy metal application doses, and 15 replicates in a complete factorial design. Seeds of Pinus halepensis Mill., Pistacia lentiscus L., Juniperus oxycedrus L., and Rhamnus alaternus L. from local provenances were germinated in separate 200 mL containers filled with washed silica sand. Two weeks after emergence (once cotyledons opened), the containers were watered on alternate days with a nutrient solution containing 170 M NH4NO3, 42 M KH2PO4, 88 M KNO3, 3.1 M MgSO47H2O, 0.27 M Fe-EDTA, 0.19 M H3BO3, 0.14 M Mn-EDTA, 0.073 M Zn-EDTA, 0.047 M Cu-EDTA, 0.0004 M (NH4)6Mo7O24 to saturation, and allowed to drain freely. The pH of the nutrient solution was 5.5 and the electrical -1 conductivity 55 S cm . This pH value was selected to maintain high heavy metal availability levels in the nutrient solution. Most Mediterranean soils show pH values above this level, but the species used here can be found in soils with pH ranging from 6 to 8.5. We added water-soluble sulfate salts of Cu, Ni and Zn to this solution to obtain concentrations of 0.073, 25 and 100 M of Zn, 0.047, 1 and 4 M of Cu, and 0, 25 and 50 M of Ni. Each metal and dose was applied separately to a different set of seedlings. Similar doses have evidenced strong effects on woody plant performance in hydroponic cultures (Arduini et al., 1995; Miller and Cumming, 2000; Reichman, 2002), and these solutions can be considered to range from normal to contaminated soil, depending on the extraction method used (Kabata-Pendias and Pendias, 1992; Baker and Senft, 1995; Adriano, 2001). They can be found in sludged areas (Knight et al., 1997; Walker et al., 2003), near mining zones (Poschenrieder et al., 2001), or on restoration sites where biosolid application is used, i.e., in reforestation amendments or artificially created quarry soils (Barrera et al., 2001; Ortiz and Alcaiz, 2006). Arduini et al. (1994, 1995) suggested that heavy metal accumulation in the upper forest soil layers, even at relatively low concentrations, could impair the natural regeneration of forest species. Our

94

Captulo 5

seedlings were kept in a glasshouse for three months at a 20-25 C ambient temperature and a 14-h photoperiod.

2.2. Seedling response


At the end of the growing period we harvested all the seedlings, separated shoots from roots, and carefully washed the root system with distilled water. Rooting systems from 10 seedlings per species, metal and dose were randomly selected and digitized by scanning on a flatbed scanner fitted with a transparency adapter. The images were analyzed with specific software (WinRhizo, Regent Instruments, Qubec, Canada) to assess root length and average root diameter. Finally, we dried all biomass fractions at 65 C for 48h, and determined the dry weight of all the seedlings. Specific root length was calculated as the ratio between total length and root biomass. Biomass fractions from 5 seedlings per species, heavy metal and dose were later digested in a heating block at 250 C with a mixture of sulfuric acid (96%) and hydrogen peroxide (30%) (1:1, v:v) (Jones and Case, 1990). Digests were then analyzed for Cu, Ni and Zn by ICP-OES (Perkin Elmer Optima 4300 Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry). Olea europaea leaf standard reference materials (BCR: CRM 062, Commission of the European Communities Bureaus of Reference, Brussels) were digested and analyzed for quality control.

2.3. Heavy metal translocation to shoots


We calculated the percentage of heavy metal translocation to shoots as the ratio between the heavy metal content in shoots divided by the total metal content in the whole seedling.

2.4. Phytotoxicity estimation


We evaluated the phytotoxic effects of heavy metal accumulation by estimating both the tissue concentration corresponding to the onset of the decrease in dry matter accumulation (phytotoxic threshold; PT) for each heavy metal, and the tissue concentration resulting in a 10% reduction of the estimated maximum shoot and root biomass accumulation (PT10) (Alloway, 1995; Reichman, 2002). These parameters were estimated by fitting the response curves to peak models using SigmaPlot 7.0 SPSS Inc. The model providing the best fit was used for these

95

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

calculations. When no model could be adjusted, we assumed the absence of measurable phytotoxic effects under the assessed experimental conditions.

2.5. Data analysis


We evaluated the effect of each heavy metal on plant traits by applying one-way ANOVA for one fixed factor with three levels (doses). Levels within each factor were compared by applying Tukey's test at a 0.05 significance level when ANOVA showed a significant treatment effect. Data were transformed when needed to ensure homoscedasticity. All statistical analyses were carried out with the SPSS v.10.0 statistical package (SPSS Inc., Chicago, USA).

3. Results

3.1. Heavy metal bioaccumulation


Shoot Cu accumulation was below 7 g g in all species (Table 1). The effect of Cu addition on shoot Cu concentration was significant in J. oxycedrus and P. lentiscus, but not in P. halepensis and R. alaternus. Nickel and Zn concentration in shoots increased in all species in response to Ni and Zn application, especially at the highest application rates. Rhamnus alaternus showed higher heavy metal concentration in shoots than the other species tested, except for Zn in seedlings treated with 25 M Zn. Heavy metal concentration in roots was higher than in shoots in all species. Heavy metal concentration in roots increased in response to heavy metal application in the nutrient solution, but the significance of these differences depended on the species and the heavy metal used. Pinus halepensis showed the highest heavy metal accumulation in roots, except for the Ni concentration in seedlings with the lowest Ni application rate.
-1

R. alaternus showed the highest capacity for heavy metal transport to shoots, ranging from 23 to 47% of the total plant accumulation (Table 2). Pistacia lentiscus and P. halepensis showed the lowest rates of metal transport to shoots, whereas J. oxycedrus showed intermediate values. All three heavy metals showed similar behavior patterns but different mobility within the seedlings. Except for R

96

Table 1. Copper, nickel and zinc concentration in seedlings of four Mediterranean woody species exposed to different doses of these elements for three months. Means and standard errors of n=4-5 plants and results of one-way ANOVA for each heavy metal, species and biomass fraction are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (one) and 0.01 (two) levels. Results of Tukeys test (P<0.05) are indicated by letters within the same column and heavy metal.
P. halepensis Root Cu concentration (g g ) 7.7 2.0 a
a a b
-1

J. oxycedrus Shoot Root Shoot Root Shoot

P. lentiscus

R. alaternus Root

Dose (M)

Shoot

Cu 37.0 8.0 b 71.0 5.0 c 32.6 ** Ni concentration (g g ) 0.9 0.2 a 68 20 b 137 28 b 65.2 ** 10.4** 24.9 * 14 3 b 569 97 c 11 2 b 135 **
-1 -1

0.047 1.2 0.2 4.0 0.9 2.66


<0.05 a

1.0 0.2 a 122 16 b 216 44 b 16.8 ** 0.8 0.5 a 350 23 b 10 2 b


<0.05 a

3.0 1.0 2.0 0.4 ab 3.6 0.5 b 8.9 ** 79.6 ** 0.9 0.4 a 322 70 b 446 42 b 15.7 ** 135 21 b 96 7

33 5

0.9 0.4 a

17 2

2.5 0.2 4.1 1.2 6.8 2.0 2.20 0.2 0.2 a 18 4 b 33 4 c 30.2 **

91 a 18 2
b

1.7 0.4 ab

3.9 0.9 b

51 10 c 35.6 ** 0.1 0.1 a 71 13 b 130 31 b 158 **

6.73 *

Ni 12 1 b

0.1 0.0 a

25

30

50

61

139 **

Zn concentration (g g ) 28 12 a 236 35 b 240 26 b 31.9** 3444 686 c 122 ** 96.5 ** 81 7 a 721 67 b 33 10 a 88 18 a 52 a 19 4 b 182 20 c 51.5 ** 64 3
a

Zn

0.073

10 4

53 a 330 56 b 2753 330 c 240 ** 45 16 b 531 83 c 48.9 **

55 13 a 351 174 b 2016 331 c 24.4 **

25

22 5

100

272 53 c

2405 368 c

42.8 **

Captulo 5

97

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

alaternus, the increased uptake and accumulation of Cu and Zn in the root system was coupled with a decreased translocation of Cu and Zn to the shoot, although few differences were found between the two higher doses applied. Copper translocation in R. alaternus decreased only with the application of 4 M Cu, while in the case of Zn, this value did not decrease, even at the highest dose. In all cases, metal transport rates were highest for Zn, followed by Cu and Ni, except for R. alaternus which showed similar values for the three heavy metals. 3.2. Biomass accumulation and root morphology
The effect of heavy metal application on biomass accumulation showed a positive trend at intermediate application rates, particularly for Cu and Zn, and a negative trend at the highest doses, mainly for Zn (Figure 1). Application of 4 M Cu in the nutrient solution decreased P. halepensis shoot and root biomass by 27% and 33% respectively, as compared with the 1 M Cu dose. In J. oxycedrus, the shoot biomass of seedlings exposed to 1 M Cu was significantly higher than that found in seedlings receiving the lowest dose and it decreased at 4 M Cu. Pistacia lentiscus and R. alaternus were not significantly affected by Cu application. Exposure to 100 M Zn reduced shoot and root biomass (by ca. 35% and 24%, respectively) in all species, as compared with exposure to 25 M Zn.

Root (g seedling ) Shoot (g seedling )

0,4 Cu 0,3 0,2 0,1 0,0


a aa a b ab ab a b a a a a a a a a a b a a a a a a a a a a

-1

Ni
b a b a a

b a

Zn

a a a a a a ab a b a b a a b 0.073 M 25 M 100 M ab

-1

0,1
a a a

a ab b a a a a a a a a a 0 M 25 M 50 M

0,2 0,3 J.o.

a b

a a a 0.048 M 1 M 4 M

P.h.

P.l.

R.a.

J.o.

P.h.

P.l.

R.a.

J.o.

P.h.

P.l.

R.a.

Figure 1. Biomass accumulation of Juniperus oxycedrus (J.o.), Pinus halepensis (P.h.), Pistacia lentiscus (P.l.), and Rhamnus alaternus (R.a.) seedlings exposed to different doses of Cu (left), Ni (center) and Zn (right) for three months in hydroponic culture. Means and standard errors of n=14-15 replicated seedlings are shown. Results of Tukeys tests (P<0.05) for a given heavy metal, biomass fraction and species are indicated by letters.

98

Captulo 5

Juniperus oxycedrus showed the highest reductions in shoot (50%) and root (33%)
biomass as the Zn dose increased from 25 to 100 M. This effect was marginally significant both in P. lentiscus roots and in R. alaternus roots and shoots. When Ni was applied at 50 M, it reduced shoot biomass in P. halepensis seedlings by 20% and caused a significant increase in R. alaternus root biomass. Root length in J. oxycedrus seedlings treated with Zn and in P. halepensis seedlings treated with the three heavy metals evaluated in this study, increased at intermediate application rates, and decreased at the highest rates, as compared with the maximum root length achieved (Table 3). Copper application resulted in a gradual increase in root length in J. oxycedrus. In contrast, R. alaternus seedlings responded to Zn application by decreasing root length at the highest application dose. Pistacia lentiscus showed increased root length after application of the three metals, but this effect was only significant when applied at 25 M Ni. Specific root length (SRL) showed very limited response to heavy metal application. Only P. halepensis showed a significant decrease in this variable when exposed to 50 M Ni.

3.3. Phytotoxicity levels


A significant peak model could be fitted to 13 of the 24 combinations of species, biomass fractions and heavy metals. Log Normal and Gaussian distribution functions were used in all cases. The amount of variability in biomass accumulation explained by these functions ranged from 32 to 65%. Juniperus oxycedrus and R. alaternus were very sensitive to Cu, as they showed reductions -1 in shoot biomass when Cu concentration was above 1.75 and 4.1 g g , -1 respectively (Table 4). Critical Cu concentration in roots ranged from 13 g g in R. alaternus to 165 g g-1 in P. halepensis. Critical Zn concentrations in shoots -1 -1 ranged from 25 g g in J. oxycedrus to 128 g g in P. halepensis (Figure 2). In roots, Juniperus oxycedrus was more sensitive to Zn than the others species; it showed the lowest PT and PT10 values. The critical Zn concentration was similar -1 in P. halepensis, P. lentiscus and R. alaternus (between 512 and 650 g g ), but PT10 values suggested that R. alaternus was more sensitive to increases in Zn root concentration than the other two species. Nickel application showed a -1 significant phytotoxicity threshold only in P. halepensis roots (495 g g ).

99

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

Table 2. Percentage of Cu, Ni and Zn translocated to shoots of four Mediterranean woody species exposed to different doses of these elements for three months. Means, standard errors of n=4-5 plants and results of one-way ANOVA are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (one) and 0.01 (two) levels. Results of Tukeys test (P<0.05) are indicated by letters within the same column and heavy metal. Translocation to shoots (%) Dose (M) Cu 0.047 1 4

J. oxycedrus
19.0 5.4 a 9.3 1.9 ab 8.2 2.3 a 4.41* 5.2 1.9 6.8 2.2 2.64 46.0 14.5 a 17.6 4.4 b 13.5 3.9 b 14.83**

P. halepensis
9.4 3.8 a 0.7 0.2 b 1.8 0.6 b 11.40* 3.8 0.4 2.7 1.0 2.56 33.1 6.2 a 11.8 1.4 b 6.2 1.5 b 38.50**

P. lentiscus
12.6 2.9 a 3.0 0.6 b 4.2 1.2 b 4.50* 3.8 0.9 4.4 1.1 0.17 17.7 8.0 13.5 5.4 10.0 2.0 0.56

R. alaternus
40.2 9.9 ab 46.9 7.8 a 23.5 6.2 b 4.26* 44.1 17.5 30.3 6.3 2.48 31.2 17.5 24.8 12.8 40.9 8.3 2.60

F
Ni 0
a

25 50

F
Zn 0.073 25 100

4. Discussion Copper, nickel and zinc toxicity has been studied in several woody species (Balsberg Phlsson, 1989; Miller and Cumming, 2000; Reichman et al., 2001), but to our knowledge, it has not previously been studied in the species evaluated in the present experiment. Cu and Zn concentrations in seedling shoots exposed to the lowest heavy-metal doses could be considered either deficient (Kabata-Pendias and Pendias, 1992) or critical (Marschner, 1995) in vascular plants, but little information is available on the optimal concentration for the species studied (Boardman et al., 1997). The maximum heavy metal concentration recorded in seedlings exposed to high doses was similar to that found in other works with woody species both in hydroponic cultures (Arduini et al., 1995; Reichman et al., 2001) and in pot trials with forest

100

Table 3. Root length (L) and specific root length (SRL) of four Mediterranean woody species exposed to different doses of Cu, Ni and Zn for three months. Means, standard errors of n=8-10 replicates and results of one-way ANOVA are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (one) and 0.01 (two) levels. Results of Tukeys test (P<0.05) for each heavy metal are indicated by letters within the same column. P. halepensis
-1

J. oxycedrus SRL (m g )
19.0 1.2 20.0 1.4 18.9 1.3 0.23 19.0 1.2 16.0 1.0 16.9 0.6 2.74 19.0 1.2 17.5 1.3 19.0 1.5 0.34 29.4** 222 25 a 410 15 b 21.5 1.2 17.4 1.5 2.77 251 14 a 19.8 0.9 5.99* 6.81** 229 22 a 15.8 0.9 b 329 19 b 16.8 0.4 ab 631 72 b 564 80 ab 4.16* 357 53 517 61 488 68 1.93 251 14 a 19.8 0.9 a 357 53 a 10.9** 1.21 2.57 0.22 50 6 46 3 52 5 0.39 50 6 41 3 44 4 1.01 269 23 a 21.1 1.0 569 121 56 6 384 21 b 19.3 0.4 495 50 51 7 251 14 a 19.8 0.9 357 53 50 6 115 25 122 25 97 24 0.28 115 25 90 24 111 24 0.30 115 25 a 114 15 a 57 6 b 5.39*

P. lentiscus
-1

R. alaternus
-1

Dose (M) L (cm) SRL (m g ) L (cm) SRL (m g )

L (cm)

L (cm)

SRL (m g )
44 5 57 8 57 10 0.64 44 5 42 5 29 4 2.71 44 5 37 3 42 4 0.71

-1

Cu

0.048

137 12 a

178 24 ab

208 17 b

3.99*

Ni

137 12

25

154 23

50

157 13

0.45

Zn

0.073

137 12 a

25

217 30 b

100

142 12 a

5.91*

Captulo 5

101

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

soil (Kukkola et al., 2000), but it was low when compared with the maxima found in native grass species used in restoration (Paschke et al., 2000; Gonnelli et al., 2001; Paschke and Redente, 2002).

R. alaternus shoots exposed to a 100 M Zn heavy metal concentration exceeded


the values considered to be phytotoxic (Balsberg Phlsson, 1989; Kabata-Pendias -1 and Pendias, 1992). The value attained by these seedlings (531 83 g g Zn) was -1 higher than the tolerable concentration for livestock grazing (300-500 g g Zn; Chaney, 1989). Heavy metal accumulation was always higher in roots than in shoots, especially in P. lentiscus and P. halepensis, which showed a lower heavy-metal translocation ability than J. oxycedrus and R. alaternus. The specific response mechanisms of these species to heavy metal are still unknown. Decreased metal uptake at the plasma membrane level by either deposition on cell wall components or chelate secretion is the most common mechanism of plant adaptation to metal toxicity (Briat and Lebrun, 1999). Nevertheless, it has been suggested that neither the heavy metal accumulation ability nor the distribution of heavy metals within the plant is consistently correlated with plant tolerance (Reichman et al., 2001; Greger, 2004). Heavy metal application caused a decrease in root uptake efficiency (estimated as the heavy metal concentration ratio between root and nutrient solution) in all species, probably due to an excess of heavy metal concentration per unit of root absorption area and the subsequent saturation in the root tissues (Greger, 2004). Uptake and translocation were also dependent on the type of metal. Usually, Cu transport to aboveground fractions is restricted (Arduini et al., 1996), and in our study, with the exception of R. alaternus, root systems were effective barriers to metal translocation. The higher Zn uptake and transport observed in all species, as compared with Cu and Ni, have been observed elsewhere (Kabata-Pendias and Pendias, 1992; Chojnacka et al., 2005). Overall growth in the four species was low when the lowest metal doses were applied, probably due to weak Cu and Zn deficiencies (see above). Intermediate doses of heavy metals probably improved the nutritional status and thus promoted biomass accumulation. This effect has been observed in other studies (Paschke et al., 2000; Paschke and Redente, 2002; Reichman, 2002) and could reflect a typical dose- response behaviour of essential

102

Captulo 5

Shoot biomass (g seedling )

-1

0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00 0

J. oxycedrus

0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05

P. halepensis

100

200

300

0,00 400 0 100 [Zn] in shoot (g g-1) 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00

200

300

Root biomass (g seedling )

-1

0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 0,00 0 1000 2000 3000

2000

4000

6000

[Zn] in root (g g-1)

Shoot biomass (g seedling-1)

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0

P. lentiscus

0,15 0,10 0,05 0,00

R. alaternus

0 Root biomass (g seedling-1) 0,20 0,15 0,10

50

100

150

200

0 200 [Zn] in shoot (g g-1)

250

400

600

800

0,08 0,06 0,04 0,02

0,05 0,00 0 1000 2000 3000

0,00 4000 0 1000 2000 3000

[Zn] in root (g g-1)

Figure 2. Relationships between Zn concentration and biomass accumulation in shoots and roots of four Mediterranean woody species. Each point represents one seedling treated with either 0.073, 25 or 100 M Zn. No function could be adjusted to the observed data in R. alaternus shoots (see Table 4). Dotted lines represent the confidence intervals (95%). Note different X and Y scales.

103

Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

heavy metals in plants (Shaw et al., 2004). Growth stimulation at low levels of toxic elements may also reflect behavioral plasticity to chemical stress (KabataPendias and Pendias, 1992; Arduini et al., 1994). The complexity of the edaphic medium still makes it difficult to generalize on reliable toxic concentrations in different soils (Poschenrieder and Barcel, 2004). Soil pH, organic matter, CEC and texture, among others, determine the solubility and speciation of heavy metals in the soil and, thus, their availability to plants (Alloway, 1995).
Table 4. Models describing the relationship between heavy metal concentration in shoots and roots, and biomass accumulation for four Mediterranean woody species. PT corresponds to heavy metal concentration in shoots and roots at the onset of the decrease in dry matter production, and PT10 corresponds to the tissue concentration resulting in a 10% reduction in the estimated maximum biomass (n=14-15). Only significant models are shown. Asterisks denote significant differences at the 0.05 (one) and 0.01 (two) levels.
Biomass fraction Shoot Metal Species R2 Model PTa 1.7 4.1 25 128 37 25 165 13 495 107 512 650 549 PT10a 2.0 5.3 65 206 70 54 190 16 756 628 1462 1705 724

Cu J. oxycedrus

0.551* y =0.16+0.113*exp(-0.5*(ln(x/1.53)/0.23)^2) 0.480* y =0.063*exp(-0.5*(ln(x/4.06)/0.59)^2) 0.563** y =0.19*exp(-0.5*(ln(x/25.03)/2.27)^2) 0.585** y =0.35*exp(-0.5*(ln(x/36.57)/1.42)^2) 0.368* y =0.11*exp(-0.5*(ln(x/25.38)/1.63)^2) 0.512* y =0.47*exp(-0.5*(ln(x/12.63)/0.38)^2) 0.392* y =0.18*exp(-0.5*((x-493.3)/571.2)^2) 0.323* y =0.11*exp(-0.5*(ln(x/107.1)/3.65)^2) 0.630** y =0.19*exp(-0.5*(ln(x/511.1)/2.19)^2) 0.377* y =0.1344*exp(-0.5*(ln(x/650.5)/2.11)^2) 0.394* y =0.050/(1+((x-549.56)/523.9)^2)
-1

R. alaternus
Zn J. oxycedrus

P. halepensis 0.572* y =0.22*exp(-0.5*((x-127.74)/169.52)^2) P. lentiscus


Root Cu J. oxycedrus

P. halepensis 0.652** y =0.24*exp(-0.5*((x-165.7)/105.5)^1.11) R. alaternus


Ni P. halepensis Zn J. oxycedrus

P. halepensis P. lentiscus R. alaternus


a

Values for phytotoxicity thresholds are in g g

Whether or not a critical soil solution is reached in a contaminated soil will depend heavily on these soil conditions. It is known that seedlings may respond 104

Captulo 5

to heavy metal enrichment differently in hydroponic cultures than in field experiments (Stoltz and Greger, 2002), but soilless experiments permit the isolation of particular factors to establish phytotoxicity thresholds (Schmidt, 1997; Reichman, 2002). It has been suggested that critical concentrations should be defined on the basis of the heavy metal concentration in tissue (Davis and Beckett, 1978; Poschenrieder and Barcel, 2004), rather than on heavy metal availability in soils. We have used fitted models to establish these critical concentrations, but our results must be interpreted carefully, since they show considerable variation. Under our experimental conditions, critical Zn root and shoot concentrations were similar to those found in other studies on phytotoxicity in woody plants. Hartley et al. (1999) found ca. 40% reductions in root and shoot biomass in Scots pine seedlings exposed to heavy metals for 3 months, when root and shoot Zn -1 concentrations were 750 and 300 g g , respectively. Shoot biomass in the seedlings of three Australian species decreased for foliar concentrations ranging -1 from 70 to 370 g g Zn (Reichman et al., 2001), showing root concentrations similar to those found in roots of P. halepensis and P. lentiscus in the present experiment. Root sensitivity to Zn, as estimated by PT10, decreased in the following order: J. oxycedrus > R. alaternus > P. halepensis > P. lentiscus, whereas the ranking for shoots was J. oxycedrus > P. lentiscus > P. halepensis (the relationship was not significant for R. alaternus).

Pinus halepensis was the only species sensitive to Ni application. Nickel concentration in roots was similar to values measured in Pinus sylvestris
seedlings exposed to 85-170 M Ni (Ahonen-Jonnarth and Finlay, 2001). In both cases the effect of Ni application on seedling biomass was similar: reduction in the aboveground biomass and increase in the root:shoot ratio. Seedlings exposed to intermediate dose of Ni showed higher root growth than seedlings given the lowest application rate. Nickel can be regarded as essential for plant growth (Gerends et al., 1999); the positive effects of Ni application have been attributed to enhanced permeability across the plasmalemma, leading to a free flow of nutrients (Kukkola et al., 2000; Ahonen-Jonnarth et al., 2004). As we found no negative responses to Ni application, we were unable to define phytotoxicity levels for this element.

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Sensitivity of Mediterranean woody seedlings to copper, nickel and zinc

The concentrations of Zn and Ni required to inhibit root growth are usually higher than for Cu (Woolhouse, 1983), which has been described as the most toxic heavy metal found in soil solutions (Baker et al., 1994). Reductions in root and shoot biomass accumulation began at relatively low Cu levels and reached PT10 values with low internal Cu increments. The shoot and root Cu concentrations found by Kukkola et al. (2000) in Scots pine grown for three months in Cu and Ni enriched mineral soils, were similar to those found in P. halepensis seedlings exposed to 4 M Cu in our experiment. With the same external supplies, Arduini et al. (1996) found both much higher Cu concentrations in the roots of Pinus and Fraxinus seedlings grown in hydroponic culture and more evident effects on root length and root biomass than those found in the current experiment. Root sensitivity to Cu, as estimated by PT10 values, was R. alaternus > J. oxycedrus > P. halepensis > P. lentiscus, whereas the ranking for shoots was J. oxycedrus > R. alaternus > P. halepensis P. lentiscus. In contrast with other works, root biomass was more sensitive than root length to heavy metals (Denny and Wilkins, 1987). It should be taken into account that in our experiment the seedlings were grown in 15-cm-deep sand-filled containers and that this could affect root morphology in different ways than in other culture mediums. The decreases in specific root length detected in P. halepensis and R. alaternus after Ni and Zn application point to increases in root lignification, as reported in other studies (Arduini et al., 1995; Kukkola et al., 2000). The low severity of this effect, as well as the weak changes in root average diameter (data not shown), could result from using entire root systems in our analysis, rather than only lateral or apical roots which may be more sensitive to heavy metals (Arduini et al., 1995; Greger, 2004). Other works have shown inhibition of root elongation in tree species subjected to doses of Cu and Zn similar to those used here (Arduini et al., 1994; Reichman et al., 2001). This has been related to damages in the plasmamembrane (Woolhouse, 1983) affecting root elongation and promoting cell wall lignification (Marschner, 1995). The species tested showed contrasted sensitivity to Cu, Ni and Zn. Pinus halepensis and Pistacia lentiscus tolerated higher internal metal concentrations before showing negative effects on plant performance, as compared to Juniperus oxycedrus and Rhamnus alaternus. Moreover, Pistacia lentiscus and Pinus halepensis can accumulate almost three and five times less Zn and Ni, respectively, in aboveground parts for a given amount of aboveground biomass 106

Captulo 5

than Juniperus oxycedrus and Rhamnus alaternus, as a result of the formers' enhanced capacity for metal retention in roots. These results provide criteria for the use of these species for the restoration of contaminated areas, since they also reduce the potential risks of heavy metals entering food chains.

Acknowledgements We thank Maribel Snchez and Juan Jos Torrecillas for their assistance in the field and laboratory, Mark W. Paschke for his comments on an earlier draft and J. Scheiding for language revision of the final version of the text. This research has been funded by the Spanish Ministry of Science and Technology (BIOMON project, REN2000-0181P4-03). Fundacin CEAM is funded by Generalitat Valenciana and Fundacin Bancaja.

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Discusin

Captulo 6

Efecto del bioslido sobre propiedades del suelo El tipo de bioslido empleado tuvo una fuerte influencia sobre las propiedades del suelo receptor y la respuesta de la planta introducida, tanto a corto como a largo plazo. Inicialmente, los efectos de la aplicacin del lodo concentrado (parcela de Zarra) estuvieron fuertemente condicionados por el alto contenido de humedad y la consistencia viscosa tpica de este bioslido. Debido a ello, su distribucin dentro del hoyo de plantacin fue muy heterognea, disponindose en una o pocas bandas horizontales escasamente mezcladas con el suelo y localizadas principalmente entre 9 y 15 cm (Foto 1, izquierda). Nuestra hiptesis inicial fue que el agua contenida en los bioslidos difundira lentamente hacia el suelo, comportndose como una fuente temporal de agua para las plantas, principalmente durante el perodo estival. Sin embargo, la rpida deshidratacin del bioslido, unida a la mencionada heterogeneidad de la mezcla suelo-bioslido, provoc una reduccin drstica de su volumen, dando lugar a la formacin de grietas superficiales en ocasiones excesivamente cercanas al brinzal (Foto 1, derecha).

Foto 1. Distribucin heterognea del lodo concentrado en un hoyo de plantacin en la parcela experimental de Zarra dos meses despus de su aplicacin (izquierda). Desmoronamiento de parte del hoyo de plantacin por el efecto de la prdida de volumen del lodo a inicios de verano (derecha).

Estas grietas pudieron afectar al almacenamiento de agua en el suelo (Bandyopadhyay et al., 2003), a la tasa de evaporacin, al contacto entre la raz y el suelo y, en definitiva, al establecimiento del brinzal. La solucin de este problema es relativamente sencilla, ya que una plantacin distanciada en el tiempo de la aplicacin del bioslido permitira la desecacin 111

Discusin

gradual del bioslido, evitando la exposicin al aire de races y suelo. Otras medidas para solucionar los problemas mencionados, como es la incorporacin del lodo al suelo mediante el uso de maquinaria agrcola o la aplicacin de riegos de emergencia, resultaran menos viables por condicionantes tcnicos, logsticos, econmicos y sociales que se comentan ms adelante. Por el contrario, la aplicacin del compost y lodo seco (repoblacin de Enguera), salvando las diferencias en la dosis aplicada, no present mayores dificultades tcnicas, incluso en zonas de peor acceso. Cabe recordar que esta ltima aplicacin se llev a cabo mediante acopios puntuales, reparto manual de la dosis correspondiente en cada hoyo e incorporacin con azada en el momento de la plantacin. Una de las principales consecuencias del aumento del contenido de materia orgnica (MO) en el suelo ampliamente reconocida es la mejora sus propiedades fsicas (Fuller, 1991; Daz et al., 1994; Rostagno et al., 2001). Con frecuencia, el incremento del contenido de MO permite un aumento de la capacidad de infiltracin y retencin de agua a corto y medio plazo (Khaleel et al., 1981). Las dosis de enmiendas orgnicas que modifican de manera ms evidente las propiedades del suelo suelen ser mayores que las empleadas en la repoblacin de Enguera, y menores o similares a las utilizadas en Zarra (Navas et al., 1998; Sort y Alcaniz, 1999; Cox et al., 2001; Querejeta et al., 2001; Romn et al., 2003; Bastida et al., 2007), si bien es cierto que estos cambios sobre las propiedades del suelo son muy variables en funcin del modo de aplicacin, el perfil de suelo afectado y el posterior desarrollo de la vegetacin. Por ejemplo, la aplicacin superficial de 120 -1 Mg ha de lodo anaerobio no modific el contenido de MO de los primeros 15 cm -1 de suelo al cabo de un ao (Walter et al., 2000), y aplicaciones de 90 Mg ha nicamente alcanzaron a modificar propiedades fsicas de los 3 primeros centmetros de suelo (Holz et al., 2000; Rostagno et al., 2001). Sin embargo, 17 aos -1 despus de la aplicacin de 72 Mg ha de RSU en los primeros 20 cm de suelo se multiplic por 2 la concentracin de C orgnico total respecto al suelo no -1 enmendado, y a partir de 36 Mg ha mantuvo valores de las fracciones de C soluble y microbiano por encima del suelo control (Bastida et al., 2007). Por otro -1 lado, dosis de 10 Mg ha aplicada en superficie fueron suficientes para mantener mayor cantidad de C total en los 15 primeros cm de suelo 12 aos despus de su aplicacin (Sullivan et al., 2006). En nuestro caso, tras aplicar 60 Mg p.s. ha de lodo y compost en la repoblacin de Enguera el incremento de MO en el suelo observado durante el primer ao 112
-1

Captulo 6

desapareci 3 aos despus, aunque su efecto en otras propiedades del suelo continu siendo significativo tras este perodo, de manera anloga a lo observado en otras experiencias realizadas en la cuenca Mediterrnea (Martnez et al., 2003; Larchevque et al., 2006). A pesar de los problemas iniciales en la homogeneizacin del lodo en la repoblacin de Zarra, su mezcla con el suelo fue prcticamente completa a medio plazo (7 aos), momento en el cual todava mostraba valores de MO notablemente mayores a los del suelo control (Tabla 1 en Apndice 2). En ambos estudios se observ una relacin negativa significativa entre la concentracin de MO y la densidad aparente del suelo superficial (0-20 cm) a medio-largo plazo, especialmente evidente en la zona que recibi un rango 2 2 de dosis ms amplio (Enguera R =0,391, P<0,001; Zarra R =0,593, P<0,001; Fig. 1F en Apndice 2). Este descenso de la densidad aparente del suelo tras la aplicacin de enmiendas orgnicas se debe, fundamentalmente, a la dilucin que se produce entre el material orgnico aadido, poco denso, y la fraccin mineral del suelo (Khaleel et al., 1981; Haynes y Naidu, 1998; Bastida et al., 2007). Esto genera, adems, un incremento de la porosidad del suelo y una modificacin del tamao y forma de los poros que permite una mayor capacidad de retencin de agua (Pagliai et al., 1993; Marinari et al., 2000). No obstante, en funcin de la composicin textural del suelo este efecto no siempre supone una mayor disponibilidad de agua para la planta en suelos relativamente secos, ya que la adicin de MO normalmente aumenta el volumen de poros de pequeo dimetro, con lo que aumenta el volumen de agua retenida a tensiones elevadas, inaccesible para las plantas (Gupta et al., 1977; Aggelides et al., 2000). A pesar de que el efecto hdrico de la aplicacin de bioslidos suele ser ms efectivo a corto plazo, la menor supervivencia de las plantas en algunos tratamientos con bioslidos parece indicar que el incremento de MO en el suelo no supuso, en este caso, una ventaja en la disponibilidad de agua durante el primer perodo estival. Es posible que este efecto quedara contrarrestado por variaciones en otras propiedades del suelo (ver ms adelante), o no fuera lo suficientemente intenso para compensar la mayor demanda transpirativa de los brinzales fertilizados (Meyer et al., 2001; Kowaljow et al., 2010). La incorporacin de MO al suelo da lugar a un incremento de la estabilidad de los agregados del suelo. Casi inmediatamente despus de la adicin de enmiendas orgnicas incrementa la actividad de los microorganismos del suelo que utilizan fuentes de C fcilmente degradables para producir compuestos capaces de unir las 113

Discusin

partculas del suelo (Haynes et al., 1998; Caravaca et al., 2002; Roldn et al., 2003). A pesar de las altas dosis de bioslidos empleadas en Zarra, ni en esta localidad ni en Enguera observamos cambios a medio plazo en la estabilidad de agregados asociados a los tratamientos, aunque s se puso de manifiesto una relacin positiva 2 entre esta variable y la concentracin de MO en el suelo (R = 0,185, P<0,001 y 2 R =0,256, P<0,001, en Zarra y Enguera, respectivamente; Fig. 1E, Apndice 2). Por un lado, la escasa incorporacin del bioslido en la experiencia de Zarra pudo influir negativamente en el efecto cementante que la MO ejerce sobre los agregados del suelo. Por otra parte, esta misma heterogeneidad probablemente aument la variabilidad de las medidas y redujo el poder estadstico de los anlisis. Aunque los cambios en la estabilidad de los agregados pueden atenuarse con relativa rapidez (Sort y Alcaiz, 1999), su persistencia depender del posterior desarrollo de una cubierta vegetal que favorezca una mayor actividad rizosfrica y mantenga la actividad de los microorganismos del suelo (Pascual et al., 1999). Pascual et al. (1997) determinaron, en condiciones de laboratorio, que incrementos de un 1,5% de la concentracin de MO del suelo permitan aumentar la actividad biolgica en suelos semiridos durante al menos un ao. Aunque los datos obtenidos en condiciones de laboratorio pueden diferir de las condiciones ms dinmicas y oscilantes que se dan en el campo (Debosz et al., 2002), otros trabajos con un criterio similar (incremento del porcentaje de C entre 0,5 y 1%) y realizados en condiciones naturales han mostrado resultados anlogos (Caravaca et al., 2002), y sugieren que este valor representa un umbral superior a partir del cual la respuesta de numerosas variables es menos evidente (Selivanovskaya et al., 2006; Bastida et al., 2007). Las dosis mayores empleadas en Enguera, aplicadas en un hoyo de plantacin convencional de 40 x 40 x 40 cm, suponen un incremento estimado del contenido de MO de 0,4% y 0,7%, para el lodo y el compost, respectivamente; aunque cabe tener en cuenta que una reduccin de 10 cm en la profundidad de mezcla incrementara estos porcentajes hasta 0,6% y 1%, respectivamente. En los hoyos de la experiencia de Zarra, el incremento de MO en los 20 cm superiores del suelo fue de un 3,7% respecto al suelo no enmendado. Seis y tres aos despus del comienzo de las experiencias en Zarra y Enguera, respectivamente, la aplicacin de bioslido nicamente tuvo un efecto significativo sobre la actividad microbiana del suelo en los hoyos de Zarra que recibieron dosis ms altas (Tabla 1 en Apndice 2). An as, la MO incorporada en el suelo en ambas zonas continu mostrando en estas fechas una fuerte 2 correlacin con la actividad biolgica del suelo (R = 0,645, P<0,001), lo que sugiere 114

Captulo 6

que la ausencia de un efecto significativo de los tratamientos sobre las propiedades del suelo era debida a la reducida magnitud del efecto y bajo poder del anlisis (Fig. 1D en Apndice 2). Las propiedades qumicas y biolgicas del suelo suelen ser ms sensibles a la adicin de residuos orgnicos que las propiedades fsicas, y su efecto se mantiene durante ms tiempo (Sort y Alcaiz, 1999; Caravaca et al., 2003; Bastida et al., 2007). Adems, ambos grupos de propiedades no solo estn influidas por la cantidad sino tambin por el tipo de enmienda orgnica que se utilice. La tasa de mineralizacin inicial de la MO procedente del lodo aplicado en Enguera fue notablemente mayor que la de la MO procedente del compost. Esta diferencia probablemente estuvo relacionada con el rpido consumo de las fracciones ms lbiles de MO soluble presentes en el lodo como consecuencia de un menor grado de maduracin respecto a la materia orgnica del compost (Pascual et al., 1999; Hernndez et al., 2002; Snchez-Monedero et al., 2004). Los valores del nitrgeno potencialmente mineralizable (NPM) y conductividad elctrica (CE) durante el primer ao fueron un fiel reflejo de ello. Esta diferencia supondra una ventaja inicial para las plantas que recibieron el lodo, ya que se veran beneficiadas por la activacin de la actividad microbiana del suelo y el incremento de la disponibilidad de nutrientes. El incremento de la concentracin foliar observado en estas plantas parece confirmar este punto. La diferencia entre lodo y compost se invirti tras el tercer ao: los suelos que haban recibido lodo no se diferenciaron de los suelos no enmendados, mientras que los suelos que haban recibido compost continuaron mostrando diferencias apreciables en CE y una mayor disponibilidad de nutrientes que los control. Estos resultados confirmaron que, incluso despus de tres aos, parte de la MO aadida con los lodos se encontraba en fase de lenta mineralizacin (Pascual et al., 1999), y contribua de manera notable a modificar propiedades del suelo como el N total o la CE, especialmente en el caso del compost. Las altas dosis empleadas en Zarra, las caractersticas iniciales del producto y, probablemente, el alto porcentaje de arena del suelo, favorecieron la rpida mineralizacin de MO y el incremento de CE durante el ao posterior a la plantacin. Adems, la baja precipitacin registrada ese ao, por debajo del 40% de la serie histrica (Ninyerola et al., 2005), y la presencia de un horizonte petroclcico poco profundo pudieron favorecer una insuficiente lixiviacin que redujese la concentracin de sales acumuladas en los hoyos de plantacin 115

Discusin

(Albaladejo, 1994). La mineralizacin de la MO del lodo remanente, poco mezclado con el suelo, permiti la liberacin lenta de sales solubles al suelo rizosfrico que mantuvo un nivel de CE relativamente elevado durante los 60 meses posteriores a la aplicacin (Fig. 1 Cap. 1). Los cambios drsticos en la salinidad del suelo pueden llegar a causar inhibicin de enzimas como las fosfatasas y las -glucosidasas, as como la inhibicin de la formacin de NO3 y el incremento de la concentracin de + NH4 hasta niveles que podran llegar a ser fitotxicos (Garca y Hernndez, 1996; Cubera et al., 2009). Tambin pueden afectar negativamente a la formacin de races micorrcicas, ms asociadas a ambientes de baja fertilidad (Rincn et al., 2006), y disminuir el potencial osmtico de la solucin del suelo (Hu y Schmidhalter, 2005). Tras seis aos, la CE del suelo se estabiliz en un rango de valores aceptable, y la concentracin de N total y P disponible continu siendo alta y proporcional a las dosis de aplicacin. Ambas variables, junto con la CE, mostraron un alto grado de correlacin positiva con la MO total (Tabla 1 y Figs. 1A, 1B y 1C en Apndice 2). La alta disponibilidad de nutrientes, especialmente de P, observada en ambas parcelas a corto y medio plazo, coincide con otras experiencias en ambientes mediterrneos secos y semiridos en las que se evalu los efectos de la adicin de enmiendas orgnicas (Martnez et al., 2003; Barber et al., 2005; Sullivan et al., 2006; Larchevque et al., 2010; Valdecantos, datos no publicados). Un bajo contenido de agua en el suelo hace disminuir las tasas de mineralizacin de MO (Pascual et al., 2004, Sardans et al., 2004) por lo que puede reducir la cantidad de iones disponibles y, por tanto, disminuir las tasas de absorcin por las races (Bowen, 1984; Sardans et al., 2004). Sin embargo, a pesar de sufrir varios aos muy secos durante el perodo de estudio, la respuesta de las plantas en el campo fue muy positiva desde el punto de vista de la nutricin de P. Normalmente, la movilidad de los compuestos de P en el suelo es baja (Sommers y Sutton, 1980) e influenciada en gran medida por el pH, el contenido en carbonatos y la actividad 2+ de los iones Ca (Tunesi et al., 1999). Braschi et al. (2003) observaron un efecto positivo en la disponibilidad de P en suelos calcreos tras la adicin de MO ya que la aplicacin de sta redujo la insolubilizacin del P. Adems observaron que la magnitud del efecto se acentuaba sobre suelos ms secos. Otros experimentos en campo con fuertes limitaciones hdricas mostraron igualmente el efecto positivo de la adicin de MO sobre la disponibilidad de P (Daz y Roldn, 2000; Larchevque et al., 2010). 116

Captulo 6

Efecto de los bioslidos sobre el estado nutricional y el crecimiento de los brinzales La aplicacin de bioslidos tuvo, de manera general, un efecto positivo sobre el crecimiento de los brinzales de Pinus halepensis. Esta respuesta coincide con la observada en otros estudios realizados en clima Mediterrneo con diversos residuos orgnicos (Roldn et al., 1996; Zagas et al., 2000; Valdecantos et al., 2011), y suele asociarse con el incremento del agua, P y, en menor medida, N disponibles (Roldn et al., 1996; Querejeta et al., 2001; Sardans et al., 2004; Barber et al., 2005). En condiciones de campo, los brinzales de P. halepensis fertilizados mantuvieron un mayor crecimiento que las plantas control, tanto a corto como a medio plazo. El rango de dosis y tipos de bioslidos empleados, as como la variacin de las condiciones ambientales entre las zonas experimentales explicaran en parte la gran variabilidad de resultados respecto a las plantas control (entre un 15%, mnima diferencia en Zarra, y un 114%, mxima en Enguera; Fig. 2, en Apndice 2). Por el contrario, prcticamente ninguna de las variables morfolgicas medidas en P. halepensis plantados en lismetros en tres tipos de suelos forestales distintos, pero bajo condiciones climticas semiridas, result modificada por la aplicacin de bioslidos (Captulo 4), en claro contraste con las diferencias generadas por los diferentes tipos de suelo sobre la morfologa de las plantas. Los brinzales de Q. ilex en Zarra no respondieron a los tratamientos, o lo hicieron negativamente. Esta diferencia de respuesta entre especies a la disponibilidad de recursos es habitual. Pinus halepensis, y en general las especies de estadios ms tempranos de la sucesin, se considera una especie ms plstica que Q. ilex, propia de etapas sucesionales ms avanzadas, y es capaz de modificar en mayor medida sus rasgos morfolgicos y fisiolgicos en respuesta a la presencia de recursos (Broncano et al., 1998; Valdecantos et al., 2011) o a la presencia de algn tipo de estrs (Cuesta et al., 2010), priorizando la acumulacin de C para el crecimiento areo (Sanz- Prez et al., 2009). Ambas parcelas experimentales, Zarra y Enguera, muestran propiedades edficas similares, con suelos de escasa profundidad, pH bsico y elevado contenido de carbonatos, lo que suele provocar la precipitacin e inmovilizacin de macro y micronutrientes (Marschner, 1995; Braschi et al., 2003). Algunas de las variables evaluadas en la parcela de Enguera, como la colonizacin de los hoyos de plantacin, el estado nutricional de los brinzales o la disponibilidad de P en el 117

Discusin

suelo, sugieren que, junto con el agua, los nutrientes tambin limitan el desarrollo de la vegetacin en estas zonas (Sardans et al., 2004; Barber et al., 2005; Larchevque et al., 2006; Valdecantos et al., 2006). La mejora nutricional de las plantas puede afectar positivamente a procesos fisiolgicos que controlan su respuesta al estrs hdrico, mejorando en ltimo trmino su eficiencia en el uso del agua (Fife y Nambiar, 1997; Fernndez et al., 2006; Querejeta et al., 2008). No obstante, la fertilizacin tambin puede tener efectos negativos sobre la planta cuando coincide con estrs hdrico, principalmente por el desequilibrio de biomasa hacia la parte area (Ewers et al., 2000; Hernndez et al., 2009), el desequilibrio nutricional (Harvey y van den Driessche, 1999), y el shock osmtico (van den Driessche et al., 2003). El fuerte incremento inicial de N foliar en los brinzales de pino fertilizados en Zarra permiti un mayor desarrollo de biomasa respecto a las plantas control que pudo ser la causa de la dilucin del resto de macro y micro nutrientes analizados. Otras causas comunes del descenso en la concentracin de ciertos nutrientes tras la fertilizacin son la toxicidad, la inhibicin del desarrollo de micorrizas (Garca et al., 1996; Rincn et al., 2006), y el aumento de la salinidad (Hu y Schmidhalter, 2005). En nuestro caso, el anlisis de los diagramas de vectores de la plantacin de Zarra indic una respuesta clara del N foliar de los pinos a la adicin de los bioslidos, lo cual sugiere que el sitio era deficiente en N para esta especie (Fig. 3a en Apndice 2). El consiguiente aumento de biomasa provoc la dilucin de P y K foliar, lo que parece indicar que ambos nutrientes estaran mostrando menores tasas de absorcin por las plantas o distinta disponibilidad en el suelo (ms probable en el K, ya que se aportan cantidades relativamente bajas con el lodo). La presencia de un exceso de N puede llegar a crear antagonismo con la absorcin de P, creando una deficiencia inducida en la planta. Cabe tener en cuenta, no obstante, que en este caso las concentraciones no descendieron por debajo de valores de referencia en plantas de la misma zona (Valdecantos et al., 2006), ni disminuy el peso medio de las hojas. En octubre, tras las primeras lluvias, se atenuaron las diferencias de concentracin foliar de N y P entre plantas fertilizadas y plantas control, situndose en el caso del N prcticamente en una situacin de consumo de lujo, a medio camino entre valores de deficiencia y toxicidad (Weetman, 1989). A medio plazo (6 aos), el efecto de los tratamientos sobre el contenido foliar de N de los brinzales desapareci, pero se mantuvieron niveles de P foliar notablemente mayores que en las plantas control (Fig. 4A y 4C 118

Captulo 6

en Apndice 2). Resulta ms infrecuente encontrar un aumento de la concentracin foliar de K debido a su baja concentracin en los bioslidos, asociada a su prdida por lavado durante el acondicionamiento final del lodo, aunque una mayor concentracin de este elemento puede influir de manera positiva a la resistencia al estrs hdrico en plantas fertilizadas (Marschner, 1995; Harvey y van den Driessche, 1999). En el caso de la repoblacin de Enguera, los pinos presentaban una fuerte limitacin del crecimiento asociada a la deficiente nutricin con P, mientras que la disponibilidad de N y K fue suficiente para permitir un incremento del crecimiento sin disminucin de la concentracin de estos elementos en hoja (Fig. 3B en Apndice 2). Tras los tres primeros aos, la tendencia fue similar a la encontrada en Zarra, aunque en este caso el incremento de N foliar en plantas que haban recibido la dosis intermedia de lodo seco vs. plantas no enmendadas mantuvo su significacin estadstica (Figs. 4B y 4D en Apndice 2). La concentracin de P foliar de plantas enmendadas tambin present niveles muy superiores al de las plantas control, a pesar de la intensa sequa sufrida durante los dos ltimos aos. Al contrario que lo observado en las experiencias llevadas a cabo en el campo, los brinzales de P. halepensis plantados en los lismetros apenas mostraron efectos en ninguna de las variables morfo-fisiolgicas analizadas, a pesar de recibir la misma -1 cantidad de N que la aplicada con la dosis de 30 Mg ha empleada en Enguera y aplicada en un horizonte de suelo de profundidad similar. De hecho, la aplicacin de lodos tuvo un efecto apreciable sobre las propiedades del suelo y el estado nutricional de las plantas. As, la CE de los suelos enmendados fue superior a la CE de los suelos control ocho meses despus de la aplicacin. Toribio y Romany (2006), utilizando estos mismos suelos y sometindolos a lixiviacin forzada, observaron incrementos drsticos en la CE durante las primeras semanas y en el C orgnico acumulado durante todo el perodo, en lixiviados procedentes de los tres tipos de suelos enmendados. En nuestro caso, el efecto de la enmienda sobre la humedad del suelo fue relativamente modesto: slo un aumento puntual tras el riego de verano sobre suelo arcilloso con lodo (calizas). Como respuesta a estos cambios, las plantas enmendadas mostraron en algunos casos una mayor concentracin de P en races y hojas (datos no mostrados) y, una mayor asimilacin de microelementos. Pero estas modificaciones de las propiedades edficas y del estado fisiolgico resultaron insuficientes para afectar al 119

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crecimiento de las plantas. Por una parte, el experimento en lismetros tuvo lugar bajo condiciones ms secas que los experimentos de campo. Como ya se ha comentado anteriormente, bajo condiciones de sequa la tasa de descomposicin de la MO y de mineralizacin de nutrientes es menor, y la movilidad y disponibilidad de ciertos nutrientes podra verse reducida. Por ello, la respuesta morfolgica a la fertilizacin de brinzales en zonas sometidas a sequa es, con frecuencia, pobre (Brockley, 1988; van den Driessche et al., 2003; Valdecantos et al., unpub). Por otra parte, el rpido desarrollo en profundidad de las races, colonizando suelo no fertilizado, y especialmente un estado nutricional ptimo de las plantas no enmendadas (1,8% N, 0,13% P y 0,7% K foliar en el muestreo destructivo final), pudieron influir en la baja respuesta de las mismas al tratamiento. Cabe tener en cuenta que la respuesta a la aplicacin de enmiendas orgnicas suele no ser lineal (Martnez et al., 2003; Larchevque et al., 2010). As, en nuestras experiencias de campo, desde la dosis de aplicacin ms baja de lodo o -1 compost ( 30 Mg ha de lodo seco en Enguera) se alcanzaba a medio plazo las mximas concentraciones foliares de nutrientes. La mayor mortalidad de los brinzales enmendados sugiere que el incremento de nutrientes en las plantas introducidas no les confiri una mayor resistencia al estrs hdrico o sta fue insuficiente frente otros factores externos. Sin embargo, la mejora nutricional en las plantas de P. halepensis en las parcelas de campo estuvo relacionada con un mayor crecimiento y, de manera anloga a lo observado en otros trabajos (Querejeta et al., 2001; Barber et al., 2005), esta aceleracin inicial del crecimiento se mantuvo o incluso se increment a corto y medio plazo (Fig. 4 en Captulos 2 y 3). Incluso a dosis bajas de bioslidos en el -1 hoyo de plantacin (10 Mg ha ) el efecto positivo sobre el crecimiento de los brinzales puede durar hasta 10 aos (Valdecantos com.pers). Aplicacin de lodos y salinidad La aplicacin de bioslidos en experimentos de campo, con frecuencia provoca una disminucin de la supervivencia y, en algunos casos, del crecimiento de los brinzales. Esta disminucin es proporcional a la dosis empleada y resulta particularmente evidente durante el primer verano. A qu es debido este impacto negativo de los bioslidos? Probablemente a una combinacin de factores, especialmente el exceso de sales y la competencia subterrnea con vegetacin ya establecida. Aunque no fue generalizado, algunos brinzales, principalmente de Q. 120

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ilex, presentaron sntomas de toxicidad por sales, como desecacin de los mrgenes de las hojas y puntas de las acculas, tamao de hoja reducido y cada temprana de las hojas crecidas en el vivero. Estos sntomas se suelen presentar cuando se excede la capacidad de las clulas para compartimentalizar sales en vacuolas y stas se acumulan en el citoplasma o en la pared celular (Munns, 2002). Gasc et al. (2007), en un experimento en condiciones controladas, observaron estos sntomas en Olea europaea al aplicar dosis de bioslidos por encima de 32 -1 Mg ha . El aumento de mortalidad por fitotoxicidad derivada de la presencia de lodos ha sido descrito en otras especies leosas mediterrneas plantadas en el campo (Ingelmo et al., 1998). Una posible causa de fitotoxicidad tras la aplicacin + de lodo en Zarra pudo ser la acumulacin de NH4 , resultado de la rpida descomposicin del lodo (junto con posibles procesos de inhibicin de la nitrificacin)(Epstein et al., 1976). Este hecho pudo afectar negativamente al crecimiento inicial de races, que resulta bsico para resistir el estrs hdrico estival y permitir el establecimiento del brinzal. Por ejemplo, Cubera et al. (2009) mostraron una menor profundidad de enraizamiento y un menor desarrollo de biomasa de Q. ilex, especialmente de races finas, en presencia de concentraciones + moderadas de NH4 , incluso cuando ste se encontraba distribuido de una manera heterognea en el suelo. En nuestro caso, la inhibicin del crecimiento de la raz de Q. ilex en Zarra estuvo relacionada con la proximidad al lodo. Como resultado, la colonizacin del hoyo de plantacin por nuevas races fue escasa, lo que contribuy a generar un fuerte estrs hdrico al inicio del verano, causando la muerte de la mayor parte de los brinzales en algunos tratamientos. En general, la salinidad y la humedad edfica son determinantes crticos de la distribucin de las especies (Chapman, 1974), pero, sorprendentemente, no hay mucha informacin disponible acerca de la tolerancia de especies mediterrneas a la salinidad o a su interaccin con el estrs hdrico. El gnero Quercus se ha descrito como muy sensible a la salinidad (Trotn et al., 1988; Alaoui-Soss et al., 1998), mientras que las conferas son sensibles (Moorhead y Ruter, 2002; Jacobs et al., 2004) o tolerantes (Fostad y Pedersen, 2000), dependiendo del tamao de las plantas, el desarrollo ontognico y los mtodos utilizados para determinar esta tolerancia (Jacobs y Timmer, 2005). Aunque las dos especies utilizadas en Zarra aparentemente coinciden en su grado de tolerancia a la salinidad, las contrastadas estrategias de enraizamiento pudieron marcar diferencias durante los perodos secos posteriores a la fertilizacin (Larchevque et al., 2009). La expansin lateral 121

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de las races de P. halepensis durante la primavera hacia zonas sin fertilizar probablemente alivi el efecto negativo observado en Q. ilex. Esta especie nicamente increment la colonizacin del suelo respecto al control, cuando la dosis de lodo fue mnima (H7) y se evit el contacto directo entre la raz del brinzal y el bioslido (plantacin lateral). Esta disposicin se tradujo en un descenso notable de la mortalidad. Jacobs et al. (2003) observaron inhibicin del crecimiento radicular de Pseudotsuga menziesii en zonas del suelo que haban sido fertilizadas, lo que favoreci una mayor proliferacin de las races hacia zonas menos afectadas por la fertilizacin. Experiencias realizadas en reas geogrficas prximas mostraron que una preparacin intensa de suelo favorece la supervivencia y crecimiento de brinzales fertilizados con RSU (Roldn et al., 1996), al promover el rpido desarrollo en profundidad de las races y el acceso a zonas ms hmedas, factor clave para la supervivencia de plntulas en zonas Mediterrneas (Padilla et al., 2009). La inhibicin del crecimiento es una respuesta comn a la salinidad edfica que suele estar ms asociada con el estrs hdrico que con un efecto especfico de las sales (Munns, 2002; Jacobs et al., 2004). En los dos estudios de campo incluidos en la memoria, la mayor parte de las plantas fertilizadas mostraron efectos positivos de la aplicacin de lodos sobre el crecimiento primaveral, con excepcin de un pequeo porcentaje de brinzales en Zarra. La mayor parte de la mortalidad registrada en ambas repoblaciones comenz a inicios del perodo seco estival. La fertilizacin de plantas en zonas secas y clidas puede provocar mayor mortalidad asociada a un aumento del estrs hdrico por el efecto osmtico de las sales concentradas en la rizosfera (Brockley, 1988; Alonso et al., 2002; Rose y Ketchum, 2002; van den Driessche et al., 2003; Jacobs et al., 2004; Oskarsson et al., 2006). Al llegar a un cierto umbral inferior de humedad edfica, el aumento de la concentracin salina en el medio disminuye el potencial osmtico de la solucin de suelo, reduciendo la disponibilidad hdrica para el brinzal (Fig. 5 en Apndice 2). La coincidencia con un primer verano muy seco en Zarra, probablemente acentu este efecto, ya que, en esta parcela, el suelo de las plantas muertas present prcticamente el doble de CE que el de las plantas vivas. A pesar de utilizar dosis muy inferiores y relativamente comunes en la repoblacin de Enguera y, adems, coincidir con un primer ao relativamente hmedo, el incremento en la salinidad en los hoyos de plantacin tambin afect negativamente a la supervivencia de los brinzales durante el primer verano 122

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(R =0,785; P=0,003). En este caso las plantas no mostraron ningn sntoma externo de exceso de sales solubles y se asumi que, al utilizar lodos compostados, se evitaba gran parte de los patgenos presentes en el lodo fresco (Dumontet et al., 1999), as como los posibles excesos de amonio. Al presentar un patrn de mortalidad idntico entre tratamientos con compost y con lodo, descartamos la fitotoxicidad de los bioslidos empleados o la presencia de otros patgenos como principales factores de mortalidad en esta zona. Es interesante destacar que la distribucin espacial de los lodos en el suelo puede modificar su impacto sobre la planta. Por ejemplo, en un experimento propio con dosis de 0, 15, 25 y 50% del volumen de contenedores de 6 litros ocupado por lodo concentrado, intentamos simular la distribucin espacial del lodo en los hoyos de Zarra. Para ello, dispusimos el lodo de manera homognea (mezclado con el suelo), y heterognea (en porciones de suelo y lodo no mezcladas). Los contenedores fueron luego sometidos a riegos frecuentes en vivero. nicamente se registr mortalidad de P. halepensis con la mayor dosis de lodo mezclado con el suelo (Fuentes et al., 2002), mientras que ninguna planta muri cuando la mezcla lodo-suelo fue heterognea, incluso cuando los valores de CE fueron iguales o mayores a los encontrados en Zarra y Enguera. Por otra parte, la mxima dosis de aplicacin en estas macetas supuso multiplicar por 7 la empleada en Zarra, y entre 25 y 100 veces las de Enguera. Esto refuerza la idea de que el rgimen de humedad es un factor clave en el funcionamiento del suelo enmendado, al controlar el potencial osmtico de la solucin del suelo y, por tanto, la respuesta de la planta en zonas secas. Aplicacin de lodos y balance hdrico Otro efecto comn de la fertilizacin en zonas secas es el aumento de la transpiracin de las plantas fertilizadas. La adicin de nutrientes en ambientes limitados provoca cambios en la asignacin de asimilados ms importantes que el riego (Poorter y Angel, 2000) y puede afectar a la morfologa de los brinzales y su respuesta en campo (Purtolas et al., 2003; Villar-Salvador et al., 2004; Trubat et al., 2008), a la capacidad para transportar agua desde las races (Trubat et al., 2006), y a la relacin entre la biomasa radicular y area de los plantones (Valdecantos et al., 2011). El descenso de este cociente a causa de la fertilizacin puede hacer que la planta sea ms vulnerable a la sequa (Ewers et al., 2000; Hernndez et al., 2009), al aumentar la superficie transpirante respecto a la absorbente, y es un efecto 123

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comn tras la aplicacin de fertilizantes en especies mediterrneas (Hernndez et al., 2009; Valdecantos et al., 2011). Durante el primer ao ya se observ una menor humedad en los hoyos de los tratamientos con plantas ms grandes (plantas que -1 recibieron 15-30 Mg ha de lodos), probablemente debido a un mayor consumo y a la dificultad de extraer agua de horizontes ms profundos por la presencia de un horizonte petroclcico. Tras un tercer ao especialmente seco (la precipitacin estival descendi un 50% respecto a la media de la serie histrica), se produjo un incremento notable de mortalidad en la combinacin de plantas ms grandes y -1 suelos con valores de CE significativamente mayores que los control (30 Mg ha de compost). La presencia de un suelo superficial, el incremento de nutrientes en el suelo fertilizado y dos primeros aos relativamente benignos en precipitaciones, pudieron facilitar el confinamiento de las races de pino carrasco en los horizontes superiores (Valdecantos et al. 2011). Roldn et al. (1996) observaron este efecto tras una primavera inusualmente seca en parcelas aforestadas con P. halepensis y enmendadas con RSU en hoyos de plantacin realizados manualmente. As mismo, Ramsey et al. (2003) atribuyeron el incremento de mortalidad en plantaciones fertilizadas de Pinus palustris Mill. al desarrollo de races en horizontes superficiales, ricos en nutrientes, que fueron incapaces de explorar horizontes ms hmedos. Se han observado efectos parecidos, aunque no deletreos, en aplicaciones sobre vegetacin natural. Larchevque et al. (2006) -1 aplicaron 50 y 100 Mg ha de compost de lodo en la superficie del suelo de un coscojar del Sur de Francia logrando una mejora de la fertilidad de las capas orgnicas superficiales y del suelo mineral. Sin embargo, durante un evento de fuerte sequa las plantas de las reas fertilizadas sufrieron mayor defoliacin que las no fertilizadas. Otros trabajos en zonas secas y semiridas con aplicacin de dosis de MO en forma de RSU superiores a las usadas en Enguera o Zarra, no presentaron efectos negativos sobre la vegetacin introducida (Caravaca et al., 2002, 2003; Romn et al., 2003). Aplicacin de lodos y competencia El rpido incremento de recursos en el suelo tambin puede afectar a la vegetacin natural o introducida mediante procesos de competencia inter o intraespecfica (Ramsey et al., 2003; Sardans et al., 2004; Querejeta et al., 2008). La competencia subterrnea puede ser mucho ms importante que la area en zonas 124

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secas y semiridas Mediterrneas (Prez-Devesa et al., 2008), donde la vegetacin natural responde al incremento localizado de nutrientes en el suelo con una fuerte proliferacin de races (Valdecantos et al., 2006). La densidad de races en el perfil superficial de los suelos de Enguera se multiplic por 5 al aplicar la dosis ms alta de lodo seco, a pesar de que apenas se encontraron nuevas plntulas establecidas en los hoyos de plantacin. Experimentos de control de vegetacin espontnea en zonas fertilizadas muestran que, a pesar de desbrozar alrededor de las plantas introducidas, la vegetacin natural contina compitiendo por los nutrientes y el agua cuando existen perodos de dficit hdrico (Rose y Ketchum, 2002). Estos procesos de competencia pueden contrarrestar el efecto hdrico positivo tras la aplicacin de MO al suelo, e incluso agravar el estrs hdrico de las plantas introducidas, ya que el incipiente sistema radicular queda confinado en el volumen del hoyo de plantacin y es particularmente vulnerable a la escasez de agua durante los perodos secos. Este efecto puede extenderse en el tiempo, de existir una alta resistencia a la penetracin de las races en profundidad, o en las paredes del hoyo de plantacin (Serrada, 1993; Rodgers y Anderson, 1995; Roldn et al., 1996; Querejeta et al., 2001; Ganatsas y Spanos, 2005). Por otro lado, la fitotoxicidad por compuestos orgnicos apenas ha sido evaluada, por lo que se desconoce la influencia que pudo tener. Si bien la concentracin inicial de compuestos como los LAS y nonilfenoles en los lodos fue elevada en el experimento de lismetros, e incluso se detect la presencia de pequeas cantidades de dioxinas, la degradacin de estos compuestos en suelos forestales mediterrneos es relativamente rpida (Gmez-Rico et al., 2008), y probablemente suponen un riesgo bajo para las plantas. Efecto de la presencia de metales pesados En ninguna de las plantaciones realizadas, tanto en condiciones de campo como en los lismetros, se produjeron cambios notables en la concentracin foliar de los metales pesados analizados, a pesar del amplio rango de dosis y de los distintos tipos de suelo empleados. En cualquier caso, las mayores concentraciones alcanzadas de Cu y Zn, tanto para P. halepensis como para Q. ilex (slo en Zarra), aleja a las plantas de valores que podran ser considerados como deficientes (Kabata-Pendias y Pendias, 1992; Boardman et al., 1997; Rademacher, 2001), as como de valores que generalmente son considerados fitotxicos (BarlsbergPahlsson, 1989; Kabata-Pendias y Pendias, 1992; Marschner, 1995). 125

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nicamente observamos concentraciones elevadas de metales pesados en la experiencia llevada a cabo en cultivo hidropnico, donde algunas de las concentraciones utilizadas en la solucin del suelo se podran equiparar a la de ambientes contaminados (Kabata-Pendias y Pendias, 1992; Baker y Senft, 1995; Adriano, 2001). Las mximas concentraciones foliares alcanzadas en esta experiencia se pueden considerar altas en algunos casos, aunque similares a las encontradas en otros trabajos de cultivo sin suelo (Arduini et al., 1995; Reichman et al., 2001) o en macetas con suelo forestal (Kukkola et al., 2000), pero notablemente inferiores a las mximas encontradas en herbceas nativas usadas en restauracin (Paschke et al., 2000; Gonnelli et al., 2001; Paschke y Redente, 2002). El nico valor que excedi valores potencialmente dainos para el consumo -1 animal (300500 ug g Zn; Chaney, 1989) fue la concentracin foliar de Zn en Rhamnus alaternus, especie que adems de ser especialmente sensible a Cu y Zn present unos coeficientes de transferencia notablemente mayores que los de Juniperus oxycedrus, y muy superiores a los de P. halepensis y Pistacia lentiscus. Descartando las formas de fitorremediacin cuyo objetivo concreto es la mxima acumulacin de metales en la biomasa area (Saxena et al., 1999; Carpena et al., 2007), las especies empleadas en la restauracin de zonas afectadas por metales pesados requieren coeficientes de transferencia bajos, que impidan la acumulacin en la biomasa area de elementos potencialmente txicos que puedan pasar a la cadena trfica (Walter et al., 2007, Poschenrieder et al., 2001). Adems, P. halepensis y P. lentiscus toleraron una mayor concentracin interna de metales que R. alaternus y J. oxycedrus antes de comenzar a mostrar efectos negativos en su crecimiento, lo que les confiere mayor aptitud para su uso en restauracin. Otros estudios en condiciones similares han mostrado la idoneidad del gnero Pinus para ser usado en zonas afectadas por metales pesados, as como la mayor sensibilidad de Rhamnus alaternus o la poca aptitud de otras especies como Tetraclinis articulata (Arduini et al., 1994; Disante et al., 2010; Tapia et al., 2011). Es conocido que las plantas pueden responder a la presencia de metales pesados de manera diferente si se exponen a ellos en cultivos hidropnicos o en condiciones de campo (Stoltz y Greger, 2002). La ventaja de los primeros es que permiten aislar factores particulares para establecer umbrales de fitotoxicidad (Schmidt, 1997; Reichman et al., 2002). La complejidad del medio edfico hace difcil la identificacin de concentraciones txicas comunes a diferentes tipos de suelos (Poschenrieder y Barcel, 2004). El pH, el contenido de MO y carbonatos, la 126

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capacidad de intercambio catinico y la textura, entre otras variables, determinan la solubilidad y la especiacin de los metales pesados en el suelo y, por tanto, su disponibilidad para las plantas (Alloway,1995; Brallier et al., 1996). En este sentido, los suelos forestales en una amplia franja de la regin Mediterrnea suelen ser bsicos y carbonatados por lo que, adems de presentar concentraciones bajas de micronutrientes y metales pesados, su movilidad es reducida (Alloway, 1995; Illera et al., 2000; Martnez y Motto, 2000). Por ejemplo, entre los suelos ensayados, el menor pH del suelo desarrollado sobre rodeno y la ausencia de carbonatos favorecieron una mayor concentracin foliar de Cu, Ni y Zn que la observada sobre suelo margoso, muy carbonatado, y suelo calizo, ms arcilloso. Ambas propiedades han sido relacionadas con una baja movilidad de estos elementos (Garca-Rizo et al., 1999; Martnez y Motto, 2000; Rodrguez-Rubio et al., 2003). Sin embargo, tras la aplicacin de bioslidos se produjo un descenso de la concentracin de estos elementos respecto a las plantas control. Este efecto tambin se observ en Zarra, donde a pesar de las elevadas dosis de lodo empleadas, los brinzales de P. halepensis y Q. ilex mostraron una reduccin de la concentracin foliar de Zn y Cu a los pocos meses de la plantacin. Tras la aplicacin del lodo en el suelo, suele incrementar la disponibilidad de metales debido a la descomposicin rpida de la MO soluble y a compuestos inorgnicos inestables a los que estn unidos (Smith, 1996). Posteriormente, se produce un descenso de la concentracin de metales pesados en la fraccin disponible, asociado a una adsorcin en compuestos orgnicos y fracciones inorgnicas del lodo (Pascual et al., 2004; Rate et al., 2004; Snchez-Monedero et al., 2004; Clemente et al., 2006). El descenso de la concentracin de metales tras los primeros meses desde la plantacin, reflej la escasa disponibilidad de los metales pesados aadidos con el bioslido. Tambin, en el caso del suelo rodeno, puso de manifiesto una reduccin de la disponibilidad de metales pesados nativos ms dbilmente unidos a este tipo de suelo, que pueden quedar adsorbidos por la materia orgnica aadida (Smith, 1996; Merrington et al., 2003). Con el tiempo incrementa la predominancia de las caractersticas del suelo en el control de la disponibilidad de los metales (Merrington et al., 2003). Los efectos observados en las plantas coincidieron con lo encontrado por Toribio y Romany (2006) sobre los mismos suelos de los lismetros sometidos a lixiviacin, donde la materia orgnica aadida tambin contribuy a una menor movilidad de los metales. En el mencionado trabajo, el uso de lodos enriquecidos 127

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en metales increment, en general, la lixiviacin de Cu, Ni y Zn. sta fue siempre mayor en el suelo cido y menor en el suelo ms arcilloso, aunque se situ en general muy por debajo de los lmites establecidos por la legislacin espaola para el agua potable (R.D. 140/2003). El Ni fue el nico metal que produjo un lixiviado, al inicio del experimento, que se situaba por encima de las recomendaciones -1 legales para agua destinada a consumo (>20 g Ni L ); pero esto ocurri slo en el suelo de menor pH, y espordicamente en el suelo margoso. El Ni forma compuestos con la materia orgnica disuelta del lodo con un alto grado de solubilidad, por lo que inicialmente presenta mayor riesgo de lixiviacin que otros metales (Ashworth, 2004; Almendro-Candel et al., 2007). De manera similar a lo observado en la concentracin de metales en los tejidos vegetales, el empleo de sales para el enriquecimiento del lodo probablemente influy en la mayor disponibilidad y facilidad para la lixiviacin de metales (Kiekens et al., 1984; Oudeh et al., 2002), por lo que los resultados pueden considerarse con carcter conservador, desde el punto de vista de la seguridad. Como se ha comentado anteriormente, la disponibilidad de micronutrientes en suelos de la Comunidad Valenciana se presume muy reducida, pudiendo producir incluso deficiencias sobre la vegetacin natural o introducida. Las especies ensayadas respondieron al incremento de estos micronutrientes. Por un lado, las dosis intermedias de Cu y Zn utilizadas en la experiencia en cultivo hidropnico estimularon el crecimiento de las plantas, probablemente por una deficiencia inducida por las dosis utilizadas como control. Este efecto es comn (Paschke et al., 2000; Paschke y Redente, 2002; Reichman, 2002) y pudo reflejar un comportamiento clsico de dosis-respuesta de metales pesados en plantas (Shaw et al., 2004) o una respuesta plstica ante un estrs qumico (Kabata-Pendias y Pendias, 1992; Arduini et al., 1994). En este sentido hay poca informacin disponible acerca de las concentraciones ptimas en algunas de las especies estudiadas (Boardman et al., 1997). Por otro lado, el incremento de la concentracin de Cu y Zn en P. halepensis fertilizados con lodos enriquecidos mejor ligeramente su estado fisiolgico durante el perodo de mxima sequa (A y PSII). La deficiencia de ambos micronutrientes, Cu y Zn, afecta a diversas etapas metablicas de la fotosntesis y la respiracin (Adams et al., 2000; Cakmak, 2000). Por ejemplo, el Cu interacta con el transporte de electrones del PSII (Mysliwa-Kurdziel et al., 2004) mientras que el Zn modula la actividad de un gran nmero de enzimas y participa en el 128

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metabolismo de carbohidratos y sntesis de protenas (Balsberg Phlsson, 1989; Marschner, 1995). La presencia de metales pesados puede afectar a otros componentes del suelo. Aunque normalmente la aplicacin de fertilizantes orgnicos favorece la actividad microbiana edfica, su acumulacin, al igual que ocurre en zonas con elevada actividad industrial, puede afectar a la actividad enzimtica del suelo, y a la biomasa y composicin de la comunidad microbiana (Fritze et al., 1996; Kunito et al., 2001; Khan y Scullion., 2002; Selivanovskaya et al., 2002). Actualmente la regulacin establece los lmites de metales pesados en base a las concentraciones totales en el suelo, lo que para muchos autores no es vlido (Rieuwerts et al., 1998; Naidu et al., 2003), ya que no se tiene en cuenta su biodisponibilidad, ni el efecto sobre los distintos componentes del suelo (Kunito et al., 2001). En general, los resultados obtenidos indican que el riesgo de fitotoxicidad por metales pesados se puede considerar bajo o muy bajo en un amplio abanico de situaciones. Tambin parece ser bajo el riesgo de transferencia a aguas subterrneas (Rate et al., 2004; Toribio y Romany, 2006). En dosis adecuadas para la vegetacin y con las restricciones vigentes, la cantidad de metales pesados aportados al suelo por la aplicacin de bioslidos y su disponibilidad para las plantas son muy bajos. Aspectos prcticos sobre el uso forestal de bioslidos Futuros cambios en la legislacin referente a la gestin de los lodos de depuradora pueden hacer necesaria la incorporacin de alternativas viables a su gestin actual. Por ejemplo, en los ltimos informes de la UE acerca de la modificacin de 1 la actual legislacin referente al uso de lodos en agricultura , una de las lneas de discusin, implica una drstica reduccin de la concentracin de metales pesados en los lodos, que superara ya, en algunos casos, a la composicin media de lodos en Espaa. Tambin es cierto que entre las opciones que se contempla (un total de cinco) se encuentran desde no modificar la actual legislacin, hasta prohibir por completo su aplicacin al suelo. El uso de bioslidos en repoblaciones forestales ha mostrado su eficacia para
Environmental, economic and social impacts of the use of sewage sludge on land. Final Report. Part I: Overview Report. Milieu Ltd, WRc and RPA for the European Commission, DG Environment under Study Contract DG ENV.G.4/ETU/2008/0076r. 1

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incrementar el crecimiento inicial y mantenerlo en el tiempo y actualmente representa una alternativa a considerar, a pesar de que la inconstante actividad repobladora no asegura un uso continuado de stos, y de que, aunque as fuera, las cantidades a utilizar no representan un volumen importante. Como ya se ha comentado, los trabajos realizados por nuestro grupo de investigacin se han centrado en la aplicacin de fertilizantes orgnicos en el hoyo de plantacin como prctica aconsejable para preservar la vegetacin existente y minimizar as los efectos de la maquinaria sobre la vegetacin natural y el suelo. La aplicacin puntual de bioslidos tiene una serie de condicionantes, estrechamente relacionados con las propias limitaciones biticas y abiticas, que normalmente determinan el xito o fracaso de la repoblacin forestal en zonas secas y semiridas. Las ms destacadas son la intensa sequa estival y el rgimen irregular de precipitaciones, la escasa profundidad del suelo y los procesos de competencia. Todo esto condiciona la dosis y el tipo de bioslido aplicado en cada caso. Como corolario de este trabajo, hemos establecido una serie de criterios bsicos para la aplicacin de bioslidos en plantaciones forestales para la provincia de Alicante, basados en experiencia propia y en la bibliografa disponible, y plasmados en forma de sistema de informacin geogrfica (SIG),. Para ello, hemos sintetizado la informacin relativa a posibles reas susceptibles de ser reforestadas, y en funcin de sus caractersticas bsicas se ha establecido su potencial o sus posibles limitaciones para incorporar la fertilizacin orgnica mediante lodos de depuradora en el hoyo de plantacin. Las consideraciones, brevemente resumidas aqu y algunos aspectos ms ampliados, se encuentran descritos en el Apndice 4, junto con la cartografa generada para la elaboracin del SIG, y los mapas resultantes. Como criterio general, es aconsejable establecer la cantidad de bioslido a aplicar en funcin del volumen de suelo disponible, teniendo en cuenta tanto la profundidad del suelo alcanzada con la preparacin previa como el horizonte al que se incorpora el bioslido. Suelos ms profundos o labores de preparacin ms intensas permitirn mayores dosis y viceversa, ya que su aplicacin a suelos poco profundos puede provocar cambios en la asignacin de biomasa y distribucin de las races en el suelo, que puede a su vez comprometer la supervivencia de los brinzales durante perodos de sequa prolongados. En estas zonas, limitadas en muchas ocasiones por la profundidad del suelo y de manera general por largos perodos secos, la presencia de vegetacin natural apenas muestra efectos 130

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perceptibles sobre las plantas introducidas, ya que no compiten por espacio ni por luz. Pero se ha comprobado que la competencia subterrnea por la colonizacin del hoyo de plantacin puede ser muy intensa, y favorecida por la aplicacin de los bioslidos y la remocin del suelo. Junto con la presencia de suelos someros y un aumento de la competencia subterrnea, otro factor que puede contribuir a interferir en el balance hdrico de las plantas introducidas es el aumento de la salinidad causada por la adicin del bioslido, o la presencia natural de suelos con niveles de salinidad elevados. En momentos clave para la supervivencia de los brinzales, la salinidad puede afectar negativamente a la disponibilidad de agua para la planta, al menos durante el primer verano, cuando la planta depende mayoritariamente del suelo del hoyo de plantacin. Otros aspectos, como el pH del suelo, se muestran menos sensibles a la adicin de bioslidos y nicamente pueden representar un problema si se aplican cantidades importantes, como en el caso de la restauracin de canteras, vertederos, etc., ya que pueden llegar a disminuir el pH del suelo, aumentando el riesgo de movilizacin de metales pesados hacia aguas subterrneas y de acumulacin de stos en la biomasa area de las plantas introducidas y naturales. Con dosis entre 15 y 30 Mg ha , hemos conseguido incrementar el crecimiento de las plantas introducidas y el contenido foliar de N y P, manteniendo tasas de supervivencia similares a las de plantas no fertilizadas y valores altos de fertilidad edfica. El uso de estas dosis ha evitado, en parte, los problemas encontrados con -1 dosis mayores (45 y 60 Mg ha ): mayor mortalidad y menor crecimiento. Las dosis recomendadas son similares a las establecidas para distintos tipos de enmiendas orgnicas, y supondran un incremento del contenido de MO del suelo del 0,5-1%. La aplicacin de dosis mayores en suelos ms profundos no produce efectos negativos o puede disminuir la eficacia de la enmienda, como ocurri en el experimento con lismetros (Captulo 4). En cualquier caso, siempre depender de factores adicionales como el tipo de suelo, la climatologa de los primeros aos tras la plantacin, etc. Las dosis de lodo seco y compost recomendadas (entre 15 y 30 Mg ha ) suponen la aplicacin de 1,2 a 2,4 kg de lodo concentrado por hoyo. Su distribucin con maquinaria agrcola no es viable, por la imposibilidad de repartir volmenes tan pequeos, y por el encarecimiento que supondra. Por esto, puede resultar factible 131
-1 -1

Discusin

incrementar las dosis de aplicacin con la precaucin de situar las plantas introducidas a cierta distancia de la zona de mezcla de lodo y suelo, para minimizar los efectos fsicos del secado del lodo y del incremento de salinidad durante los meses posteriores a la plantacin. En estas condiciones, la experiencia llevada a cabo en Zarra mostr efectos positivos sobre la morfologa de las plantas introducidas y sobre la fertilidad y actividad biolgica del suelo. Aun as, su realizacin en el contexto de un proyecto piloto puso en evidencia la necesidad de transformar el lodo concentrado antes de su uso, al menos si se realiza de manera anloga a la ensayada por nosotros. En el contexto de la aplicacin de bioslidos, hay ciertos aspectos que deben priorizarse respecto a las consideraciones cientficas, tcnicas y econmicas. El hecho de trabajar con lodos de depuradora concentrados puede generar un problema de manipulacin, por el mal olor y los riesgos sanitarios, que dificulte la aplicacin y posterior plantacin. Los operarios estn obligados a utilizar mascarillas y guantes para evitar el contacto directo con el lodo, debido a que el riesgo sanitario es alto. Adems, el aspecto visual del lodo concentrado, ya supone un rechazo para su manipulacin directa, a lo que ayuda el factor psicolgico de su origen. Por lo tanto, el uso de lodos frescos concentrados se puede restringir a zonas de poca pendiente y con buenos accesos por su dificultad de transporte y manejo. Su aplicacin suele optimizarse en zonas de vocacin agrcola, con poca vegetacin que preservar y con suelos moderadamente profundos en los que la aplicacin mediante enterramiento en surcos, que reduce el contacto directo con la enmienda y potencia la mezcla con el suelo, es habitual. El riesgo de contaminacin tras la aplicacin de bioslidos, tanto para las aguas subterrneas como para su acumulacin en plantas y su posible paso a la cadena alimenticia, es relativamente bajo cuando se utiliza el rango de dosis recomendado anteriormente. La movilidad de los metales pesados es muy baja en las condiciones de pH bsicos presentes en gran parte de los suelos de la provincia de Alicante, as como por el alto contenido en carbonatos en muchos de estos suelos. Especies utilizadas hasta ahora en restauracin, como Pinus halepensis y Pistacia lentiscus muestran un buen potencial para ser usadas en caso de presencia de metales pesados, mientras que la baja capacidad de almacenamiento de estos elementos en el sistema radicular y sus altas tasas de traslocacin a la parte area hace que especies como Juniperus oxycedrus y Rhamnus alaternus no sean buenas candidatas para su uso en este mbito. 132

Conclusiones

Conclusiones

Conclusiones El uso de dosis altas de bioslidos concentrados, calculadas para combinar la viabilidad econmica y ecolgica, afect negativamente a la supervivencia de los brinzales de Pinus halepensis y Quercus ilex. El incremento de la mortalidad relacionado con el deterioro de las propiedades fsicas del suelo podra ser evitado mediante mejoras en la tcnica de aplicacin que optimice la mezcla con el suelo, o modificando previamente las caractersticas del bioslido (principalmente mediante una reduccin de su humedad). La prdida de humedad, adems, se hace imprescindible para poder incrementar el rendimiento en este tipo de actuaciones de restauracin. La proximidad entre el bioslido y las races de los brinzales inhibi el crecimiento radical en el caso de la encina, afectando negativamente a su estado hdrico, y provoc un descenso de la disponibilidad de agua al inicio del perodo seco, afectando negativamente a la supervivencia de ambas especies. La disminucin de la dosis y una mnima separacin del brinzal al volumen de suelo ms afectado por el lodo redujeron notablemente la mortalidad durante el primer verano. La baja disponibilidad de fsforo en el suelo, unida a la mejora nutricional de las plantas, el incremento de colonizacin de los hoyos fertilizados sugieren que, junto con la disponibilidad hdrica, los nutrientes limitan el establecimiento de brinzales en extensas zonas de la Comunidad Valenciana. El fsforo permanece disponible en el suelo aos despus de la aplicacin del bioslido. Por el contrario, el nitrgeno aadido es mineralizado ms rpidamente y su efecto sobre las plantas es ms efmero. En este tipo de zonas, limitadas por el agua, la aplicacin de dosis bajas, o -1 puntualmente, intermedias, de lodo o compost (15-30 Mg ha ) son suficientes para conseguir, a medio plazo, la mxima concentracin foliar de fsforo y nitrgeno. Dosis mayores no han supuesto una mayor acumulacin de estos nutrientes, ya que el efecto de la aplicacin de bioslidos sobre el estado nutricional de las plantas no es lineal. La 135

Conclusiones

mejora nutricional de P. halepensis se relacion con un mayor crecimiento, pero no con una mayor resistencia al estrs hdrico. Con todo, podemos afirmar que, de manera general, la aplicacin de bioslidos en el hoyo de plantacin muestra un efecto positivo sobre el crecimiento a corto y medio plazo de los brinzales de Pinus halepensis. Pese a ello, la competencia subterrnea con la vegetacin previa, el aumento del potencial osmtico del suelo asociado a la salinidad y los cambios en la distribucin de biomasa de los brinzales son condicionantes adicionales que se deben tener en cuenta antes de aplicar bioslidos en zonas limitadas hdricamente. La combinacin de estas enmiendas con preparaciones del suelo profundas, puede favorecer la independencia del brinzal de las condiciones del hoyo durante el primer verano, incrementando sus posibilidades de supervivencia. La cantidad de materia orgnica necesaria para modificar la capacidad de infiltracin y retencin de agua en el suelo a corto y medio plazo puede ser incompatible con la excesiva cantidad de nutrientes aportados para una sola planta si no va acompaada de una preparacin de suelo intensa u otros mtodos que eliminen posibles efectos deletreos sobre las plantas introducidas. En caso contrario, el incipiente sistema radicular puede quedar confinado en el volumen del hoyo de plantacin, siendo particularmente sensible a la sequa estival. Estas condiciones pueden extenderse en el tiempo de existir una alta resistencia a la penetracin de las races en profundidad, o en las paredes del hoyo de plantacin: la acumulacin del sistema radicular en el horizonte superior del suelo, confiere menor resistencia a perodos de sequa, incrementando la competencia subterrnea, llegando a contrarrestar, en caso de darse, el efecto hdrico positivo tras la aplicacin de materia orgnica al suelo. El efecto de la fertilizacin es muy dependiente de la disponibilidad hdrica. La fertilizacin en zonas secas y clidas puede incrementar la mortalidad, como consecuencia de un aumento del estrs hdrico por efecto osmtico de las sales concentradas en la rizosfera. Cuanto menos 136

Conclusiones

madura sea la materia orgnica aadida, mayor ser la velocidad de mineralizacin inicial y, en ausencia de lluvias o con limitaciones edficas, mayor puede ser el efecto negativo de la enmienda sobre el desarrollo inicial de la raz del brinzal, factor clave para su supervivencia. Los riesgos asociados a la presencia de metales pesados (Cu, Ni y Zn) en bioslidos evaluados en este trabajo son mnimos. Ninguno de los riesgos potenciales analizados en estos y otros experimentos realizados por nuestro grupo de investigacin (bioacumulacin en plantas, efecto negativo en el desarrollo, acumulacin en suelos o en sus lixiviados) ha resultado de suficiente entidad como para desaconsejar la aplicacin de bioslidos en estas zonas. Probablemente su uso adecuado en actuaciones de restauracin ecolgica ocasiona menor impacto ambiental que su aplicacin agrcola al tratarse de acciones puntuales y no acumulativas, y alejadas de alimentos y, normalmente, de zonas sensibles a contaminacin de acuferos. De hecho, en suelos donde es presumible una baja disponibilidad de micronutrientes (suelos carbonatados, pH bsico, clima semirido) la concentracin de estos elementos en planta puede alcanzar valores deficientes o crticos, especialmente tras la aplicacin de bioslidos. La aplicacin de bioslidos domsticos no ha supuesto en ningn caso un incremento de la concentracin de los metales estudiados en los brinzales. nicamente se produjo un increment sustancial al utilizar bioslidos enriquecidos artificialmente. Este incremento provoc mejoras en el estado fisiolgico de los brinzales. De manera similar, las especies cultivadas en cultivo hidropnico mostraron una respuesta morfolgica positiva a la presencia de valores intermedios de Cu, Ni y Zn, valores superiores a los habituales en solucin de suelos forestales no contaminados. La sensibilidad de plntulas a Cu, Ni y Zn fue dependiente de la especie. Pinus halepensis y Pistacia lentiscus toleraron mayor concentracin interna de metales pesados que Juniperus oxycedrus y Rhamnus alaternus. Tanto P. halepensis como P. lentiscus presentaron una alta 137

Conclusiones

capacidad de retencin de Cu, Ni y Zn en las races, con tasas de traslocacin muy inferiores a las de J. oxycedrus y R. alaternus lo que las hace mejores candidatas para acciones de reforestacin en zonas contaminadas con metales pesados, o en zonas restauradas con productos que puedan contener estos elementos, reduciendo as los riesgos potenciales de entrada de metales en la cadena alimentaria. La presencia de metales pesados en los bioslidos no supone un riesgo dentro del rango de condiciones incluidas en este trabajo. Al contrario, pueden suponer una ventaja para el adecuado funcionamiento fisiolgico de los brinzales plantados en suelos donde usualmente la biodisponibilidad de estos elementos es reducida. Los criterios para la utilizacin de especies normalmente utilizadas en trabajos de restauracin forestal que incluyan conocimientos acerca de su comportamiento frente a suelos contaminados o utilizacin de enmiendas orgnicas supone un paso adicional para optimizar estas acciones de manera segura desde el punto de vista medioambiental. Consideraciones adicionales La ejecucin de acciones de restauracin que implique el uso de residuos orgnicos ha de tener preestablecido un objetivo claro en su diseo y en su efecto ecolgico, ya que, como se ha repetido a lo largo de esta memoria, el efecto conseguido con su aplicacin va a ser muy distinto en funcin de un gran nmero de variables. La degradacin inicial de la zona y el inters de conservar la vegetacin natural, as como la valoracin del riesgo de alterar el suelo, sern factores a tener en cuenta, ya que la aplicacin en mayores superficies, como terrazas o zonas que permitan la incorporacin 'agrcola' del residuo, probablemente aporte ventajas adicionales frente a la actuacin en hoyo de plantacin. Esta ltima es viable y confiere ventajas al repoblado, al mismo tiempo que representa una oportunidad para el reciclaje y para la gestin eficiente de estos residuos. Es necesario centrar futuras experiencias en el desarrollo de tcnicas que permitan optimizar la preparacin puntual del suelo, profundizar en el desarrollo de productos orgnicos y productos derivados de mezclas, que eliminen las limitaciones que presentan actualmente y mejorar en el conocimiento de la interaccin bioslido-suelo-clima en el contexto de la restauracin forestal. 138

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159

160

Apndices

Apndice 1

Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin.


Bioslidos. Produccin y valorizacin Los lodos o fangos son el desecho principal del proceso de depuracin de las aguas residuales urbanas o industriales. Se denomina 'lodo tratado' cuando ha sido sometido a algn tratamiento biolgico, qumico o trmico mediante almacenamiento a largo plazo o por cualquier otro procedimiento apropiado, de manera que se reduzca de forma significativa su poder de fermentacin y los inconvenientes sanitarios de su utilizacin (MAPA, 1990). Los lodos tratados o 1 bioslidos son los nicos lodos autorizados para su aplicacin en medios agrarios. Dentro de stos, los lodos digeridos sufren un proceso biolgico de digestin aerbica o anaerbica, que permite reducir los niveles de microorganismos patgenos, y producir un material ms estable que no genere olores desagradables. El bioslido ms frecuentemente utilizado como enmienda orgnica (lodo concentrado) es el producto de la deshidratacin de lodos aerobios o anaerobios. sta se lleva a cabo mediante la extensin del mismo en eras de secado o mediante diferentes sistemas mecnicos (filtro de bandas, centrifugacin, secado trmico). El resultado es un producto con un alto contenido de materia orgnica y nutrientes esenciales (Tabla 1), de consistencia pastosa (ca. 80% de humedad) y con un contenido de microorganismos patgenos y metales pesados habitualmente bajo, si bien este ltimo aspecto depende de los efluentes que recibe la depuradora. Los tratamientos posteriores aplicados al lodo concentrado tienen como objetivo reducir su contenido de agua para minimizar los gastos asociados al transporte y manipulacin. Los procesos ms comunes para conseguir este fin son el secado y el compostaje. El diseo ptimo de un sistema de secado de lodos depender del volumen de agua tratado por la depuradora y, consecuentemente, por la cantidad de lodos que sta genere, siendo comn, en pequeas instalaciones, el anteriormente comentado secado al aire en eras abiertas. Para un volumen mayor
1

A lo largo de este texto emplearemos indiferentemente los trminos lodo y bioslido para referirnos a lodos tratados y conformes con los requerimientos legales para su aplicacin en el suelo.

163

Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin

de lodos y una mayor optimizacin del espacio, se suele emplear el secado trmico, que conlleva el uso de una cantidad elevada de energa. Los sistemas de cogeneracin y, principalmente, la gasificacin, aportan la solucin a este problema, permitiendo optimizar, o incluso cerrar, el ciclo energtico (Bordas, 2008). En este sentido, existen sistemas novedosos como el aprovechamiento del calor de los hornos de plantas cementeras para secar lodos que luego adems sern valorizados como combustible para los propios hornos (CEMEX, San Vicente del Raspeig, Alicante; R. Sempere, empresa CEMEX, com. pers.) o el secado solar de lodos, que permite gestionar un gran volumen de bioslidos de manera automatizada en instalaciones cerradas de cristal y con un ciclo energtico muy eficiente (Scheerer, 2007).
Tabla 1. Caractersticas agronmicas generales de los lodos de depuradora producidos en Espaa (MARM, 2009). Los datos provienen de 66 estaciones depuradoras seleccionadas en todo el territorio nacional. Se muestran los valores medios y la desviacin tpica. Variable (unidades) pH CE (dS m-1) Ctot (%) Cox (%) C/N N (%) Ptot (%) Pasim (mg kg-1) K (%) Kasim (mg kg-1) Ca (mg kg-1) Mg (mg kg-1) Fe (mg kg-1) Cd (mg kg-1) Cu (mg kg-1) Ni (mg kg-1) Pb (mg kg-1) Zn (mg kg-1) Hg (mg kg-1) Cr (mg kg-1) Media E.T. 7 0.7 6 1.7 35 6 20 3 92 4 0.9 1.9 0.5 2735 920 0.4 0.1 1615 1110 5.3 2.1 6650 1955 19520 10810 0.5 1.4 285 115 65 75 90 60 800 435 1.2 0.5 280 490

164

Apndice 1

El compostaje se define como la descomposicin controlada de los residuos orgnicos mediante un proceso microbiolgico aerobio que combina fases mesfilas y termfilas para conseguir una materia orgnica ms estabilizada y libre de patgenos y semillas de malas hierbas. Durante este proceso se libera CO2, agua, nutrientes y energa en forma de calor. Finalmente, se consigue un producto sanitariamente permisible, y con un estado fsico, qumico y biolgico que le confiere gran valor agronmico (Navarro et al., 1995; Pomares y Canet, 2001). Idealmente, el producto final mantiene una humedad cercana al 40%, por lo que la reduccin de volumen es menor que la conseguida mediante los protocolos de secado descritos anteriormente. La reduccin del volumen del residuo supone un importante ahorro en su posterior transporte y aplicacin. Pero los procesos de produccin de lodos secos y compostados son relativamente caros debido a la tecnologa necesaria, al espacio fsico y al tiempo requerido para su realizacin. El incremento de costes que representan los productos compostados respecto al residuo orgnico bruto es muy variable segn la calidad y presentacin del producto final. Los precios de -1 venta a granel oscilan entre 10-13 Mg , para los productos de calidades medias y bajas propios de las plantas de residuos slidos urbanos (RSU), hasta los 20-30 -1 Mg para calidades mayores, normalmente con recogida selectiva en origen (por ejemplo, los producidos en Catalua y Navarra; MMA, 2001). El compost ms elaborado, incluyendo distintas formulaciones de NPK, puede llegar a alcanzar los -1 100 Mg . El precio del compost empleado en el Captulo 2 de la memoria, -1 ensacado y de buena calidad, fue de 95 Mg . A modo de comparacin, cabe -1 destacar que el coste del secado trmico puede oscilar entre 60 y 140 Mg (CEDEX, 2007). Por otra parte, la relativa escasez de plantas de secado y compostaje puede elevar sustancialmente los gastos de transporte. Con la implantacin de la Directiva 91/271/CEE, de 21 de mayo de 1991, sobre el tratamiento de las aguas residuales urbanas, todas las aglomeraciones de ms de 10.000 h-e (poblacin-equivalente: carga orgnica biodegradable correspondiente a una demanda bioqumica de oxgeno a los 5 das (DBO5) de 60 g de oxgeno da 1 ) deban disponer de un tratamiento secundario o de un proceso equivalente antes de final del ao 2005. Esta normativa afectaba incluso a las aglomeraciones mayores de 2.000 h-e, si el vertido se realizaba en aguas dulces o estuarios. Este hecho gener un espectacular aumento de estaciones depuradoras que, unido a un 165

Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin

proceso de depuracin cada vez ms efectivo, provoc un incremento espectacular del volumen de bioslidos generados. En el ao 1997 se produjeron en Espaa 685.670 Mg de materia seca de lodos (3.000.000 Mg peso fresco), cantidad que increment hasta 1.070.000 Mg de materia seca en 2006 (4.500.000 Mg peso fresco). Esto supuso un aumento de un 56% de la produccin de bioslidos en un periodo de 10 aos (MARM, 2009). A nivel autonmico, el I Plan Director de Saneamiento y Depuracin de la Comunidad Valenciana asumi como propias las consideraciones emanadas de la Directiva 91/271/CEE, contemplando las obras y actuaciones precisas para cubrir el dficit en infraestructuras de depuracin en la Comunidad Valenciana. Con la implantacin de ste, y del posterior II Plan Director de Saneamiento y Depuracin de Aguas Residuales (iniciados en 1994 y 2003, respectivamente), se logr quintuplicar la produccin de lodos entre 1993 y 2005, pasando de 90.420 Mg a 501.000 Mg anuales (Fig. 1). A partir del ao 2005 la produccin de lodos se ha estabilizado, coincidiendo con la estabilizacin del volumen de agua depurada.

500 Produccin de lodo (miles Mg)

materia fresca materia seca

400

300

200

100

0 1994 1996 1998 2000 2002 2004 2006 2008 Ao

Figura 1. Evolucin de la produccin de lodos en la Comunidad Valenciana durante el perodo 1993-2008 (EPSAR, 2009).

En el marco de los planes mencionados, se ha creado importantes infraestructuras para la gestin de los lodos de depuradora, tales como plantas de compostaje y secado trmico de lodos. En el informe de gestin de la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales de la Comunidad Valenciana (EPSAR) del ao 2007, se destaca el funcionamiento de seis plantas de tratamiento de lodos: dos 166

Apndice 1

plantas de compostaje (Calles, en Valencia, y Aspe, en Alicante) con capacidad -1 para 26.300 Mg ao , tres plantas de secado trmico (Ibi y Alcoi, en Alicante, y -1 Quart-Benager, en Valencia) con capacidad para 29.590 Mg ao , y una de -1 valorizacin energtica (Pinedo, Valencia) con capacidad para 25.000 Mg ao . En total, durante el ao 2009 la cantidad de lodo tratado en estas cinco instalaciones fue de 49.634 Mg (aproximadamente un 10% de la produccin total). A fecha de hoy contina la construccin de una planta de secado trmico en San Vicente del -1 Raspeig, con capacidad para 57.000 Mg ao , que servir para la co-incineracin en los hornos de la cementera CEMEX. As mismo, se ha concesionado la instalacin de una planta de secado trmico con co-incineracin en Sagunto, con -1 capacidad para 35.000 Mg ao (LAFARGE; EPSAR, 2009). Segn el principio de jerarqua que establece la ley de residuos (Ley 10/1998, de 21 de abril), se ha de prevenir, en la medida de lo posible, la generacin de residuos, reutilizar lo que se pueda, reciclar lo que no se pueda reutilizar, y valorizar energticamente el resto. El depsito final en vertedero es la opcin menos satisfactoria. Desde el VI Programa de Accin de la Unin Europea en materia de Medio Ambiente (2002-2012), y dentro del mbito de Gestin y Uso Sostenible de Recursos Naturales y Residuos, tambin se anima a desarrollar estrategias que minimicen la cantidad de residuos generados en origen y promuevan la reutilizacin y, especialmente, el reciclaje. En este sentido, el objetivo principal previsto en el Plan Nacional de Lodos de Depuradora (2001-2006) era la valorizacin, en alguna de sus modalidades, de al menos el 80% de los lodos generados, y la reduccin a un mximo del 20% los lodos depositados en vertederos. Al final del perodo de vigencia de este plan, la valorizacin agrcola de los lodos se aproxim al 65% (un 20% mayor que en su inicio), mientras que un 16% seguan teniendo como destino final el vertedero (Fig. 2). La redaccin del Plan Nacional Integrado de Residuos (PNIR) 2007-2015, aborda nuevamente los objetivos de incrementar la valorizacin de los lodos y mejorar su gestin en todos los mbitos. En la Comunidad Valenciana, el informe de gestin de la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales para el ao 2009, situaba la valorizacin agrcola de los bioslidos en un 94% mientras que un 5% se destinaba a la obtencin de energa. nicamente un 1,2% de los lodos producidos tuvo como

167

Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin

destino final el vertedero. En el ao 1999 el reciclaje en el sector agrcola de los lodos producidos en la Comunidad Valenciana ya era del 75%, lo que situaba el nivel de reciclaje muy por encima del promedio del 50% de otros pases (USEPA, 1999; European Commission, 2000).
Agricultura Vertedero Incineracin Otros usos

1998

2007

Figura 2. Evolucin del destino de los lodos de depuradora en Espaa durante el perodo 1998-2007 (MARM, 2009).

La opcin ms viable, desde el punto de vista ecolgico y econmico, es su reciclaje en agricultura, aunque hay que tener presente los riesgos que puede entraar la presencia de metales pesados y patgenos en alimentos, o la contaminacin de acuferos por nitratos, entre otras consideraciones. Adems de su evidente inters agronmico, la creciente aparicin de depuradoras en ncleos de poblacin rural, el gran desarrollo y disponibilidad de maquinaria en la mayora de estos ncleos, el ahorro econmico que supone para los agricultores, y la certeza de que este uso resulta ms econmico para la empresa gestora de los lodos que su depsito en vertedero han contribuido a aumentar el uso agrcola de los lodos como destino final. Aunque a nivel global la disponibilidad de terrenos agrcolas no resulta limitante, existe un marcado desequilibrio entre las zonas productoras y las zonas potencialmente receptoras (Cazurra, 1994), que puede suponer un sobrecoste. Por otra parte, la opcin que todava constituye una de las mayores vas de eliminacin en muchos estados miembros de la Unin Europea es la de depsito en vertedero. Esta opcin supone un elevado gasto, adems de riesgos ambientales como los asociados a malos olores y a la contaminacin de las aguas freticas (Pibot, 1998). Adems, el ambiente anxico del vertedero produce gases de efecto 168

Apndice 1

invernadero como el metano. La incineracin plantea, como principal problema, el coste de depurar los gases de combustin, adems de la manipulacin de los restos, la produccin de CO2 y la destruccin de la materia orgnica y nutrientes de los lodos (CCE, 1991). En los ltimos aos han aparecido un buen nmero de usos alternativos, como la reutilizacin del producto seco para la fabricacin de ladrillos, grava o pavimentos cermicos. Aspectos legales relacionados con la aplicacin de bioslidos En la actualidad no existe normativa europea especfica que regule la utilizacin de bioslidos en el sector forestal, y nicamente los pases con mayor tradicin en esta prctica han desarrollado instrumentos al respecto (USEPA, 1999). En Espaa, la inexistencia de una normativa concreta supone que, en la prctica, las aplicaciones forestales se rijan por regulaciones de carcter general, frecuentemente concebidas desde una perspectiva agrcola. La Directiva comunitaria 86/278/CEE, regula las condiciones en que se pueden aplicar los lodos a los suelos agrcolas. La legislacin espaola nicamente permite la utilizacin en agricultura de bioslidos que han sufrido algn proceso de almacenamiento o algn otro proceso adecuado, que reduzca de forma significativa su poder de fermentacin y los inconvenientes sanitarios de su utilizacin (MAPA, 1990). Su aplicacin debe hacerse teniendo en cuenta las necesidades de nutrientes de las plantas y que los lodos debern ser previamente tratados, aunque permite excepciones, si as lo autorizan los Estados miembros. As mismo limita los contenidos de metales pesados de los lodos y de los suelos que los reciben, y exige un anlisis peridico de lodos y suelos, as como un control estadstico de produccin, composicin y destino de los lodos. Su transposicin a la legislacin espaola se efectu mediante el Real Decreto 1310/1990 y se complet mediante la Orden del 26 de Octubre de 1993 en la que se aaden algunos requisitos sobre la gestin de los lodos. Otra regulacin europea a tener en cuenta es la Directiva 91/676/CEE relativa a la proteccin de las aguas frente a la contaminacin producida por nitratos procedentes de fuentes agrarias. En ella se establece que el aporte anual mximo por hectrea en zonas vulnerables a la contaminacin de acuferos es la cantidad de estircol que contenga 170 kg de N, aunque durante los primeros programas de accin cuatrienal los Estados miembros podan permitir una cantidad de estircol 169

Produccin y valorizacin de bioslidos. Aspectos legales relacionados con su aplicacin

que contuviera hasta 210 kg de N. Esta Directiva fue transpuesta en Espaa mediante el Real Decreto 261/1996. Adems, son de obligado cumplimiento todas las normas en vigor relativas a los residuos, en particular la Ley 10/1998 de Residuos. En el marco de la Unin Europea los intentos de modificacin de la Directiva 86/278/CEE, con un tercer borrador en el ao 2000 que sigue en revisin (European Commission, 2000), parecen no llegar a un consenso entre los Estados miembros. Este borrador apunta hacia criterios ms restrictivos en el contenido en metales pesados y patgenos (Tabla 2), as como en el contenido de determinados compuestos orgnicos y dioxinas. Cabe tener en cuenta que estas modificaciones podran llevar a algunos pases a disminuir drsticamente su capacidad actual de reciclar lodos en zonas agrcolas. A modo de ejemplo, el 50% de las zonas potencialmente aptas para recibir lodos en Escocia quedaran excluidas en aplicacin de esta normativa ms restrictiva. Adems, sera necesario aumentar la superficie de tierra necesaria para cumplir los objetivos de reciclaje, dada la reduccin en las cantidades anuales aplicables debido a los nuevos lmites en los contenidos de metales pesados en lodos (Towers et al., 2002).
Tabla 2. Lmites legales de los contenidos de metales pesados (ppm) en lodos de depuradora y en los suelos receptores segn la normativa vigente y la nueva propuesta de la UE. Elementos Valor lmite en lodos R.D. 1310/1990 pH1< 7 pH>7 20 1000 300 750 2500 16 1000 40 1750 400 1200 4000 25 1750 Revisin Directiva 86/278/CEE 10 1000 300 750 2500 10 1000 Revisin Directiva Valor lmite en 86/278/CEE suelos R.D. 1310/1990 6<pH<7 5<pH<6 6<pH<7 pH>7 1-3 50-140 30-75 50-300 150-300 1-1,5 0,5 20 15 70 60 0,1 30 1 50 50 70 150 0,5 60 1,5 100 70 100 200 1 100

Cd Cu Ni Pb Zn Hg Cr
1

pH del suelo receptor

En el mencionado documento de trabajo se advierte que, con el objetivo de aumentar, o al menos mantener, las tasas de reciclado de estos subproductos, se deben abrir las restricciones. Para ello sera necesario incorporar sectores hasta

170

Apndice 1

ahora no tenidos en cuenta, como la selvicultura y la restauracin de zonas degradadas. Esta revisin sugiere la prohibicin del uso de lodos en bosques (reas con una fraccin de cabida cubierta superior al 20%), aunque los Estados miembros puedan autorizar su uso en plantaciones forestales y en reforestaciones en situaciones que requieran un aporte suplementario de nutrientes. En cualquier caso, segn este texto no se debera permitir la utilizacin de lodos no estabilizados ni en el sector forestal ni en el agrcola. Esta propuesta es contraria a la poltica actual de algunos pases en los que se permite el uso de lodos sin tratar bajo ciertas circunstancias. Adems, la propuesta establece que no se deben aplicar lodos en suelos con pH inferior a 5, encharcados, congelados o cubiertos por la nieve, y que su aplicacin no debera generar escorrenta, compactacin del suelo o emisin de aerosoles. Finalmente, se recomienda que en el caso de lodos de depuradora compostados, su produccin y utilizacin con fines comerciales quede sujeta a la Normativa de Fertilizantes y Afines (Real Decreto 824/2005, de 8 de julio, sobre productos fertilizantes). En dicha Normativa se detallan las caractersticas mnimas que ha de cumplir el compost para poder ser etiquetado y/o comercializado. Normalmente la exclusin del uso de un lodo de depuradora se debe al contenido excesivo de un determinado metal o un grupo de ellos. Este hecho se asocia normalmente a vertidos puntuales o ilegales a la red de tratamiento de aguas, o a la especializacin de la industria predominante en la zona y, por lo tanto, a una composicin especfica de estos vertidos y de los bioslidos generados tras su depuracin. Por ejemplo, el elevado contenido de Cu, Zn y Ni hace que la aplicacin agrcola de lodos quede descartada en ms de un 10% de las depuradoras de la Comunidad Valenciana (EPSAR, 2003). Los lodos pueden contener cantidades de contaminantes orgnicos, como los compuestos nonilfenlicos (NP) y alquibencnicos (LAS), que superan normalmente los lmites propuestos en la legislacin (Langenkamp et al., 2001) y representan un problema ambiental considerable. Ambos tipos de compuestos provienen de surfactantes aadidos a detergentes para uso domstico e industrial. Su degradacin depende normalmente del tipo de aplicacin y de condicionantes edficos, como la aireacin y la capacidad de sorcin (Gmez-Rico et al., 2008). Existe escasa legislacin que regule los lmites de estos compuestos en bioslidos, y el conocimiento sobre su degradacin en suelos est basado fundamentalmente en experimentos de laboratorio y enfocado a suelos agrcolas. 171

172

Apndice 2

Apndice 2. Datos adicionales no incluidos en las publicaciones presentadas

Tabla 1. Propiedades del suelo medidas en los hoyos de plantacin 6 aos despus de la aplicacin de lodos concentrados en la repoblacin de Zarra. El muestreo se realiz en noviembre de 2006, recolectando los 20 primeros centmetros de suelo de N=10 individuos (hoyos) por tratamiento. Los datos complementan a los aportados en el artculo cientfico correspondiente al Captulo 1 de la memoria. La metodologa empleada para la determinacin de cada variable se explica en el Captulo 2, excepto la usada para la determinacin de la respiracin de suelo (g C-CO2/g suelo dia-1, extrada de Anderson y Domsch, 1990). Se muestran los resultados de los respectivos ANOVA univariante y los de los anlisis a posteriori (b de Tukey para un nivel de significacin de 0,05, indicado mediante letras diferentes). Respiracin (g C-CO2 g-1 dia-1) Control 3,7 (0,3) a 3 (1) a 0,21 (0,02) a 0,51 (0,02) a 100 (4) a H7P 4,8 (0,4) ab 103 (16) b 0,28 (0,02) b 0,82 (0,13) ab 114 (11) ab H14P 4,8 (0,4) ab 121 (16) b 0,30 (0,02) b 1,16 (0,16) bc 106 (7) ab H14L 6,1 (0,5) b 167 (15) c 0,42 (0,03) c 1,58 (0,28) c 135 (8) b F 5,44 27,65 14,32 7,24 3,58 P 0,002 0,000 0,000 0,000 0,017 M.O.: materia orgnica oxidable. CE: Conductividad elctrica de extracto de pasta saturada. Los valores 7 y 14 en la denominacin de los tratamientos corresponden a dosis de 7,5 y 14,5 kg p.s hoyo-1 de lodos. P y L corresponden a la preparacin del terreno puntual y lineal, respectivamente. Tratamiento M.O. (%) P Olsen (ppm) N Kjeldahl (%) CE (dS m-1)

173

Datos adicionales no incluidos en las publicaciones presentadas

0,8

0,6

P asimilable (mg kg-1)

+F -F

350 300 250 200 150 100 50 0 0,25

R =0.226

P<0.001

%N

0,4

0,2

R =0.724
0,0

P<0.001
R =0.246
2

Cond. elctrica (dS m )

-1

mg C-CO2/g suelo da

P<0.001

R =0.643

0,20 0,15 0,10 0,05 0,00

P<0.001

0 100

E
Densidad (g cm-3)

1,4 1,2 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 12 0 2 4 6 8 10


2

F
R =0.350

Est. de agregados (%)

80 60 40 20 0 0 2 4 6 8

P<0.001

R =0.118

P<0.001
10

12

Materia orgnica del suelo (%)

Materia orgnica del suelo (%)

Figura 1. Relacin entre el contenido de materia orgnica y diversas variables fisicoqumicas del suelo tras la aplicacin de bioslidos en dos zonas repobladas en Enguera (3 aos, tringulos) y Zarra (6 aos, aspas). Los anlisis se realizaron sobre suelo recogido en hoyos de plantacin. Los smbolos en color rojo representan los suelos no fertilizados (-F) y en color negro suelos a los que se aplic bioslidos (+F). La metodologa empleada para la determinacin de cada variable se explica en el Captulo 2, excepto la usada para la determinacin de la respiracin de suelo (mg C-CO2/g suelo dia-1, extrada de Anderson y Domsch, 1990). Est. Agregados hace referencia a la estabilidad de los agregados del suelo. Se muestran los resultados de sendos anlisis de regresin lineal.

174

Apndice 2

120 100

A
Altura total (cm)

50 40 30 20 10 0 H0 H7 H14 H14L

Compost Lodo seco Control

Altura total (cm)

80 60 40 20 0

15

30

45

60

Tratamiento

Dosis de aplicacin (Mg ha-1)

Figura 2. Altura del tallo de los individuos de Pinus halepensis plantados en las parcelas experimentales de Zarra (a) y Enguera (b) en 2006, tras 72 y 36 meses de la plantacin, respectivamente. Los tratamientos aplicados en Zarra se corresponden con las abreviaturas usadas en el Captulo 1: H0: control, H7: dosis baja con aplicacin puntual, H14: dosis alta con aplicacin puntual, H14L: dosis alta con aplicacin lineal.
Peso relativo 100 Peso relativo
P

200 180

150

A A
N N K K P P P K K P N N

160 140

100

200

B B

Concentracin relativa

160 140 120 100 80 60 40


50 100 150 200

250

200

120 100

H14-C H14 H7 H14 (Oct)

80 60

N K

N K

15 Mg ha-1 30 Mg ha-1 60 Mg ha-1

250

300

50

100

150

200

250

300

350

Contenido relativo

Contenido relativo

Figura 3. Diagrama de vectores que describe la dinmica de macronutrientes en acculas de Pinus halepensis en Zarra (izquierda) y Enguera (derecha) durante el primer ao tras la plantacin. Todos los valores estn normalizados respecto al valor del control, establecido como (100,100,100) y representado por un crculo negro. Los tratamientos aplicados en Zarra se corresponden con las abreviaturas usadas en el Captulo 1: H7, dosis baja con aplicacin puntual; H14: dosis alta con aplicacin puntual; H14-C el mismo tratamiento con la planta situada en el centro del hoyo. H14(Oct) se corresponde al muestreo posterior al verano.

175

Datos adicionales no incluidos en las publicaciones presentadas

2,0 n.s 1,5 N foliar (%) 1,0 0,5 0,0 0,20 P foliar (%) 0,15 0,10 0,05 0,00 F=14,61

Compost Lodo seco

b c c

P<0.001

H0

H7

H14

H14L

15

30
1

60

Tratamiento

Dosis (Mg ha- )

Figura 4. Concentracin de N y P foliar en brinzales de Pinus halepensis 3 y 6 aos despus de su plantacin en las parcelas experimentales de Zarra (izquierda) y Enguera (derecha), respectivamente. Los datos de las grficas de Enguera y su anlisis estadstico figuran en la Tabla 4 del Captulo 2 de la memoria. Los tratamientos aplicados en Zarra se corresponden con las abreviaturas usadas en el Captulo 1: H0: control, H7: dosis baja con aplicacin puntual, H14: dosis alta con aplicacin puntual, H14L: dosis alta con aplicacin lineal

176

Apndice 2

Humedad volumtrica (%) 0 0 5 10 15 20 25 30

h (MPa)

-5

-10

0 Mg ha-1 15 Mg ha-1 30 Mg ha-1 60 Mg ha-1

-15

-20

Figura 5. Curvas caractersticas de humedad de los suelos enmendados con diferentes dosis de lodo seco en el rea experimental de Enguera. Los parmetros de las ecuaciones usadas para su representacin (ecuaciones potenciales) se describen en la Tabla 3 del Captulo 2 de la memoria.

177

178

Apndice 3

Apndice 3. Estimacin del coste de la aplicacin de bioslidos en Zarra


Mediante las mediciones realizadas durante la ejecucin del proyecto piloto en Zarra se determinaron los costes de la repoblacin forestal propiamente dicha, as como los costes generados a raz de la aplicacin de lodos de depuradora en el hoyo de plantacin. Se realiz un seguimiento temporal de los distintos procesos implicados, como la carga del remolque, el movimiento por la repoblacin y la aplicacin del lodo (Tabla 1). Todos los tiempos fueron cronometrados por separado y promediados para cada tratamiento.
Tabla 1. Resumen de los tiempos empleados en cada uno de los tratamientos y rendimiento para cada tratamiento. Tratamiento 14L 14H 7H Control
1

N hoyos 493 680 511 320

Horas reparto
(1)

14 20 14 -

Horas totales(2) 18,4 26,1 16,9 3,5

Hoyos/hora 26,7 26,1 30,3 97

Tiempo exclusivamente en operaciones de carga de bioslido desde volquete y disposicin en hoyo + remocin y tapado con tierra + movimiento hasta siguiente hoyo. 2 Incluye tiempos de carga en zonas de acopio.

La aplicacin de los bioslidos disminuy el rendimiento de trabajo en un 71%, sin apenas diferencias entre las distintas dosis. A partir de los datos facilitados por la empresa encargada de la ejecucin del proyecto (TRAGSA; Tabla 2), y obtenidos para el nmero total de hoyos incluidos en el proyecto piloto (2012 brinzales) se calcul el equivalente para cada tratamiento a una densidad de 800 pies por hectrea, que es una prctica comn en las repoblaciones forestales realizadas en la Comunidad Valenciana (Alloza et al., 2003).

179

Estimacin del coste de la aplicacin de bioslidos en Zarra

Tabla 2. Presupuestos parciales para cada tratamiento. Uds h h 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 Tratamiento 14L (dosis alta, preparacin lineal) Denominacin Precio ud.() Retroexcavadora 70 C.V. 4 x 4 35,8 Tractor 60 C.V. 2x ms remolque 21,8 Distribucin planta pequea (pino) 9,8 Colocacin tubo invernadero 466,3 Distribucin planta bolsa grande (encina) 14,7 Proteccin castillete 115,0 Plantacin hoyo tapado b. pequea (pino) 291,5 Plantacin hoyo tapado b. grande (encina) 445,8 Realizacin de alcorque 245,0 Transporte tubo 6,1 Arranque, transporte y riego de plantas 75,3 Tubo protector 126,2 Pinus halepensis de 1 savia cont300 cm3 168,3 Quercus ilex de 1 savia cont.300 cm3 246,4 Uds. 18,4 15,7 0,246 0,493 0,246 0,493 0,246 0,246 0,493 493 0,493 0,493 0,246 0,246 Total () 658,3 342,1 2,4 229,9 3,6 56,7 71,7 109,7 120,8 3,0 37,1 62,2 41,4 60,6 1.799,5 Total () 933,8 462,0 3,3 317,1 5,0 78,2 99,1 151,6 166,6 4,1 51,2 85,8 57,2 83,8 2.498,8

Uds h h 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000

Tratamiento 14H (dosis alta, preparacin puntual) Denominacin Precio ud.() Uds. Retroexcavadora 70 C.V. 4 x 4 35,8 26,1 Tractor 60 C.V. 2x ms remolque 21,8 21,2 Distribucin planta pequea (pino) 9,8 0,34 Colocacin tubo invernadero 466,3 0,68 Distribucin planta bolsa grande (encina) 14,7 0,34 Proteccin castillete 115,0 0,68 Plantacin hoyo tapado b. pequea (pino) 291,5 0,34 Plantacin hoyo tapado b. grande (encina) 445,8 0,34 Realizacin de alcorque 245,0 0,68 Transporte tubo 6,1 680 Arranque, transporte y riego de plantas 75,3 0,68 Tubo protector 126,2 0,68 Pinus halepensis de 1 savia cont.300 cc. 168,3 0,34 Quercus ilex de 1 savia cont.300 cc 246,4 0,34

180

Apndice 3

Uds h h 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000

Tratamiento 7H (dosis baja, preparacin puntual) Denominacin Precio ud.() Uds. Retroexcavadora 70 C.V. 4 x 4 35,8 16,9 Tractor 60 C.V. 2x ms remolque 21,8 15,2 Distribucin planta pequea (pino) 9,8 0,255 Colocacin tubo invernadero 466,3 0,511 Distribucin planta bolsa grande (encina) 14,7 0,255 Proteccin castillete 115,0 0,511 Plantacin hoyo tapado b. pequea (pino) 291,5 0,255 Plantacin hoyo tapado b. grande (encina) 445,8 0,255 Realizacin de alcorque 245,0 0,511 Transporte tubo 6,1 511 Arranque, transporte y riego de plantas 75,3 0,511 Tubo protector 126,2 0,511 Pinus halepensis de 1 savia cont.300 cc. 168,3 0,255 Quercus ilex de 1 savia cont.300 cc 246,4 0,255 Tratamiento H0 (control) Denominacin Precio ud.() Retroexcavadora 70 C.V. 4 x 4 35,8 Distribucin planta pequea (pino) 9,8 Colocacin tubo invernadero 466,3 Distribucin planta bolsa grande (encina) 14,7 Proteccin castillete 115,0 Plantacin hoyo tapado b. pequea (pino) 291,5 Plantacin hoyo tapado b. grande (encina) 445,8 Realizacin de alcorque 245,0 Transporte tubo 6,1 Arranque, transporte y riego de plantas 75,3 Tubo protector 126,2 Pinus halepensis de 1 savia cont.300 cc. 168,3 Quercus ilex de 1 savia cont.300 cc 246,4

Total () 604,7 331,2 2,5 238,3 3,8 58,8 74,3 113,7 125,2 3,1 38,5 64,5 42,9 62,8 1.764,2 Total () 107,3 1,6 153,9 2,4 37,9 48,1 73,6 80,8 2,0 24,9 41,7 27,8 40,7 642,6

Uds h 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000

Uds. 3 0,165 0,33 0,165 0,33 0,165 0,165 0,33 330 0,33 0,33 0,165 0,165

A partir de los precios estimados de cada tratamiento, se calcul el coste unitario por tonelada de bioslido, y su diferencia respecto a dos destinos alternativos: depsito en vertedero y aplicacin agrcola. La estimacin de las dosis aplicadas 181

Estimacin del coste de la aplicacin de bioslidos en Zarra

en cada tratamiento se realiz en el momento de la plantacin, pesando la cantidad de bioslido cargado por el cazo de la retroexcavadora desde el remolque -1 (N=15). Los resultados fueron de 14.5 0.6 kg p.s hoyo en los tratamientos 14 H y -1 14 L, y de 7.5 0.7 kg p.s hoyo en el tratamiento 7H. Teniendo en cuenta la densidad de plantacin mencionada, estas cantidades representan, aproximadamente, una aplicacin total de 60 y 30 Mg p.s de bioslidos por hectrea, respectivamente. En la Tabla 3 se recogen con detalle estas estimaciones.
Tabla 3. Comparacin del coste unitario de aplicacin de lodos en repoblacin con el de vertido directo a vertedero. Tratamiento Coste (/ha) 2993 3013 2831 1597 Mg ha-1 Coste para cada dosis (/Mg) 23,3 23,6 41,2 Coste diferencial (/Mg) 1 Vertedero -13,3 -13 4,6 Agricultura 5,3 5,6 23,2 -

14L 14H 7H Control


1

60 60 30 0

A partir de un coste de vertedero de 36.6 /Mg y 18 /Mg coste de la aplicacin agrcola (datos facilitados por la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales (EPSAR, 2001)).

A la vista de estos resultados, la utilizacin de bioslidos concentrados supone un encarecimiento considerable de la repoblacin (del orden de un 100% de coste -1 adicional, o unos 1.500 ha ; Valdecantos et al., 2001). Estos costes son, en buena parte, atribuibles a las dificultades tcnicas de la aplicacin, limitada por los escasos medios disponibles en el momento de la evaluacin. Cabe tener en cuenta, no obstante, que los costes son asimilables a los derivados de la aplicacin agrcola y netamente inferiores a los de su asignacin a vertedero. El desarrollo de maquinaria adecuada permitira aumentar el rendimiento y reducir el coste sustancialmente. Se debe advertir, sin embargo, que no se han tenido en cuenta aspectos como la distancia entre la estacin depuradora y la zona a restaurar o los problemas logsticos a mayor escala. As mismo, tanto los precios de vertedero como, sobre todo, los de aplicacin agrcola de lodos igualmente son muy variables en funcin de numerosos factores (distancias, accesos, dosis, superficie, maquinaria, etc.).

182

Apndice 4

Apndice 4. Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. Sistema de Informacin Geogrfica (SIG) para la aplicacin de bioslidos en repoblaciones forestales de la provincia de Alicante
Criterios para la eleccin de zonas a reforestar usando bioslidos La aplicacin de bioslidos en restauracin y repoblacin forestal est limitada prcticamente a trabajos de investigacin forestal, principalmente en zonas no productoras de madera. Aunque hay excepciones de trabajos a gran escala, suelen estar ligados a su aplicacin agrcola (EPSAR, 2001) ya que la absorcin de los bioslidos en este sector minimiza, a da de hoy, la puesta a punto de otras alternativas. El objetivo de este ejercicio de la realizacin de un sistema de informacin geogrfica (SIG) que ayude a cuantificar a gran escala la potencialidad de las zonas forestales de la provincia de Alicante aptas para la aplicacin de lodos de depuradora en los trabajos de repoblacin forestal. La aproximacin se hace en base a ciertos limitantes tcnicos y ecolgicos, basados mayoritariamente en la respuesta de las plantas, y extrados tanto de los trabajos realizados por nuestro grupo de investigacin como de la informacin publicada al respecto. Aun as hay componentes del ecosistema que no se han abordado con profundidad por lo que se debe considerar como un paso bsico hacia la optimizacin de la aplicacin de bioslidos en repoblaciones forestales, pero no una propuesta definitiva. De manera simple, cualquier zona que cumpla los criterios bsicos para llevar a cabo trabajos de reforestacin es susceptible de recibir enmiendas orgnicas. Su uso estar en funcin de las caractersticas del medio y de los objetivos fijados, aunque desde el punto de vista de la restauracin se han de priorizar las zonas con escasa cubierta vegetal y baja capacidad de proteccin, debido a limitaciones hdricas o nutricionales, o a la ocurrencia de perturbaciones recurrentes. La informacin base para determinar los tipos de cobertura vegetal es el Mapa Forestal de Espaa (escala 1:50.000). Como aproximacin a las zonas descritas, se ha optado por escoger reas con un nivel bajo de madurez (<4) y una fraccin de cabida cubierta menor al 25%, en las cuales sera posible mejorar la categora de proteccin desde el punto de vista de la vegetacin. Las zonas seleccionadas siguiendo estos criterios corresponden principalmente a matorrales degradados o semidegradados, y bosques poco densos con escasa vegetacin en el sotobosque, 183

Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

entre otros, en los que se recomienda actuaciones como repoblaciones, densificaciones y/o enriquecimiento. Tras los incendios forestales, muchas de estas zonas son muy sensibles a desarrollar procesos erosivos, por lo que no se aconseja realizar intervenciones tempranas en zonas con pendiente que puedan agravar estos procesos, como el uso de maquinaria o una excesiva remocin del terreno. La adicin de residuos orgnicos con o sin siembra, ha dado buenos resultados en condiciones de estrs hdrico moderado (Guerrero et al., 2001; Meyer et al., 2001). Sin embargo, en condiciones ambientales mediterrneas, la aplicacin de bioslidos en reas incendiadas con cierta capacidad de recuperacin de la cubierta vegetal puede recomendarse en etapas posteriores para favorecer este proceso de recuperacin (Larchevque et al., 2005), o cuando se reintroduzcan individuos de especies que no han regenerado suficientemente bien o que haban desaparecido de la zona antes del incendio (Valdecantos, 2011). Los cultivos activos o recientemente abandonados han sido tradicionalmente las zonas donde se ha empleado, en mayor medida, la aplicacin de bioslidos. Estas zonas suelen ser accesibles para la maquinaria, tanto de transporte como de dosificacin del bioslido in situ. Las caractersticas generales de este tipo de terreno (mayor profundidad de suelo, menor pedregosidad superficial, ausencia de afloramientos rocosos) lo hacen, adems, especialmente apropiado para aprovechar las ventajas de las enmiendas orgnicas a costes bajos. A su vez, son reas con niveles de materia orgnica muy bajos donde el aporte de fertilizacin orgnica puede ayudar a recuperar la productividad del ecosistema. Otras zonas con un alto potencial para el uso de bioslidos son las dedicadas a la extraccin minera, construcciones u obras de infraestructura, zonas que han sido sometidas a una importante degradacin por la prdida completa de la vegetacin y la decapitacin de los horizontes superficiales del suelo. La aplicacin de bioslidos en estas zonas ha sido ampliamente descrita (Sort y Alcaiz, 1996; Alcaiz et al., 1997; Brofas et al., 2000; Moreno-Pearanda, 2000; Jorba y Vallejo, 2010), aunque resultara deseable disponer de ms informacin relativa a la superficie afectada y localizacin para estimar su verdadero potencial para el uso de bioslidos.

184

Apndice 4

Por ltimo, las reas protegidas son excluidas de la aplicacin de bioslidos, para preservar sus valores de hbitat y biodiversidad. La futura legislacin europea que modificar la actual legislacin sobre uso de lodos de depuradora, ya prev la prohibicin de actuar en este tipo de reas. Con estos criterios generales se realiz una reclasificacin de las clases descritas en el Mapa Forestal Espaol obteniendo seis nuevas categoras: Cultivos agrcolas Mosaico de cultivo y matorral Zonas adecuadas para repoblacin Masas forestales Zonas no forestales Zonas en proceso de urbanizacin Condicionantes para la aplicacin forestal de lodos de depuradora Las condiciones ambientales particulares de las reas forestales en zonas Mediterrneas aportan gran variabilidad al efecto causado por los bioslidos al sistema suelo-planta, por lo que los resultados obtenidos en otras zonas pueden no ser directamente extrapolables. Adems, los ensayos y trabajos de aplicacin de lodos de depuradora en el hoyo de plantacin y en situaciones climticas similares a las nuestras no son abundantes. Los suelos forestales mediterrneos se suelen caracterizar por su elevada pedregosidad, y su escasa profundidad, en parte resultado de haber sido relegados histricamente a zonas marginales de baja productividad (Vallejo y Alloza, 1998). Estas caractersticas, as como la orografa abrupta del terreno en muchas zonas, condicionan tanto las tcnicas de preparacin del terreno para la plantacin, como la aplicacin e incorporacin posterior del bioslido. Los planes de gestin de residuos orgnicos a gran escala, normalmente limitan la aplicacin de estas enmiendas a zonas con pendientes muy bajas (Theocharopoulos, 1998), centrndose tradicionalmente en zonas agrcolas en activo o abandonadas. Muchos trabajos de investigacin publicados al respecto han centrado su atencin en la aplicacin de bioslidos en superficie, o incorporado en los primeros centmetros del suelo, y casi siempre de manera areal, es decir, en toda la

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

extensin de la zona. La necesidad de preservar la vegetacin existente y aprovechar los procesos de recuperacin naturales de vegetacin y suelo, implica la adicin del bioslido en una sola operacin, de manera puntual, y con la maquinaria ms adecuada en cada caso para minimizar la intensidad del impacto y la superficie afectada. Su incorporacin dentro del hoyo de plantacin elimina los problemas de contaminacin por arrastre de nutrientes y contaminantes durante los procesos de erosin superficial hacia cursos de agua o zonas transitadas, permitiendo su aplicacin en pendientes ms pronunciadas. De todos modos, las dificultades asociadas a su transporte y reparto en los hoyos de plantacin desaconsejaran sobrepasar valores de pendiente por encima del 30%. En la cartografa se especifica que existe una limitacin tcnica en caso de trabajar por encima de esta pendiente. Las limitaciones para el uso de lodos con alto contenido de agua son mayores. Para el uso de estos productos quedaran excluidas las laderas con pendientes superiores a un 5-10%, donde la mecanizacin de la aplicacin (de carcter agrcola) puede verse comprometida. Algunos planes de gestin, sin embargo, no limitan la aplicacin de este tipo de bioslidos hasta pendientes mayores del 30%, a partir de las cuales aconsejan utilizar productos con bajos contenidos de humedad (Cogger et al., 2000). La idoneidad para la aplicacin de bioslidos en trabajos de reforestacin (en hoyo de plantacin) coincide con los criterios mnimos de profundidad de suelo y pedregosidad que debera establecerse en cualquier plantacin forestal para asegurar su xito, y que en gran medida depender de la especie plantada y del objetivo de la intervencin. El criterio general es de mayor idoneidad en zonas profundas y de pedregosidad baja, descartando definitivamente la aplicacin en suelos cuya profundidad no alcanza los 30 cm. As, para suelos entre 30 y 40 cm se -1 podra aplicar hasta 30 Mg peso seco ha , mientras que en suelos con una -1 profundidad mayor a 40 cm la dosis podra alcanzar los 45 Mg peso seco ha . Como ya se mencion anteriormente, la aplicacin de residuos orgnicos a suelos con distintas clases texturales normalmente responde a objetivos concretos y distintos en cada caso. La aplicacin de enmiendas en suelos arenosos se dirige a incrementar la capacidad de retencin de agua (Gupta, 1977), mientras que en los suelos con altos contenidos en arcillas se busca incrementar la porosidad, permeabilidad, aireacin y mejorar el drenaje (Aggelides et al., 2000). La respuesta

186

Apndice 4

a la adicin de enmiendas orgnicas normalmente es ms acentuada y rpida en suelos con mayor contenido de arena que sobre texturas ms pesadas (Hernndez et al., 2002; Aggelides et al., 2000). Los riesgos de contaminacin de aguas subterrneas si se utilizan dosis altas son, sin embargo, mayores en los primeros, debido al mejor drenaje y mayor profundidad que normalmente presentan este tipo de suelos. Al no existir mapas de profundidad de suelo, pedregosidad y textura, hemos utilizado la cartografa realizada por Antoln (1998) de Capacidad de Uso del Suelo como aproximacin, al menos, a las variables de profundidad de suelo y pedregosidad, descartando as algunas zonas con fuertes restricciones. Para la realizacin del mapa, las pendientes se calcularon a partir de las curvas de nivel, mediante interpolacin espacial, obteniendo un modelo digital de elevaciones (MDE). A partir del MDE se derivaron las clases de pendientes en porcentajes. Otros impactos a tener en cuenta, tras la incorporacin de bioslidos, son los relativos al pH y a la salinidad del suelo. Por lo general, la adicin de compost genera un incremento del pH en suelos cidos, mientras que en suelos alcalinos el pH desciende ligeramente o no se altera (Fuentes et al., 2007a). Las dosis propuestas en este trabajo no suelen producir cambios significativos en el pH del suelo en el hoyo de repoblacin, aunque en algunas zonas muy degradadas, las altas dosis que se aplican durante los trabajos de restauracin podran hacer disminuir notablemente el pH (en caso de suelos bsicos). En esta situacin, la movilizacin de metales pesados hacia aguas subterrneas o la bioacumulacin en vegetales aumentara, por lo que estos suelos deberan ser monitorizados tras la aplicacin de enmiendas. Prcticamente la totalidad del suelo en la provincia de Alicante presenta un carcter fuertemente bsico, por lo que en nuestro caso el pH no se ha planteado como un criterio excluyente para utilizar enmiendas orgnicas. El incremento de la salinidad del suelo es uno de los mayores limitantes para el uso de bioslidos. De las consideraciones realizadas en el apartado de Discusin, se concluye que el efecto del bioslido en la CE del suelo depende de numerosos factores que afectan a su velocidad de descomposicin y a la concentracin de sales en la solucin del suelo. Su efecto posterior sobre la disponibilidad de agua se encuentra muy influido por las caractersticas del suelo y de las precipitaciones acaecidas durante el primer ao. Para la cartografa, se elabor una capa con

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

informacin bsica sobre salinidad del suelo extrada del trabajo de Antoln (1998). La clasificacin del nivel de salinidad es acorde con la que propone el United -1 States Salinity Laboratory (EEUU), y oscila entre <2 y >16 dS m . La nica clase sin restricciones para el uso de las dosis recomendadas de lodos es la que -1 corresponde a suelos con valores de conductividad inferior a 2 dS m . A partir de ah, se ha tenido en cuenta otros factores, como la profundidad del suelo y la precipitacin, que pudieran tener efectos sinrgicos con la salinidad, para establecer restricciones de dosis y especie. Como se ha comentado anteriormente, el rgimen de precipitaciones es otro factor que hay que tener en cuenta en la aplicacin de bioslidos. En la cartografa se ha distinguido 3 niveles de precipitacin media anual, menos de 300 mm, entre 300 y 500 mm y ms de 500 mm. Segn estos niveles, las dosis de bioslidos -1 pueden ir desde <15 Mg peso seco ha en las zonas ms secas, hasta 45 Mg peso -1 seco ha en las de mayor precipitacin, siempre dependiendo de la especie que se pretende utilizar y de los objetivos perseguidos. Cabe tener en cuenta que a mayor precipitacin, la interaccin negativa entre salinidad y sequa estival se ver atenuada. Otro problema que puede plantear el uso de bioslidos es la presencia de metales pesados. En la memoria se ha destacado el alto potencial de retencin e inmovilizacin que presentan la mayora de suelos de la Comunidad Valenciana, as como su bajo nivel de concentracin natural de estos elementos. Adems, tanto la materia orgnica propia del suelo como la aadida en la enmienda pueden inmovilizar nutrientes y metales pesados, por lo que su aplicacin a las dosis indicadas supone un riesgo bajo de transferencia de metales pesados a otros compartimentos o ecosistemas. Adems, se debe tener en cuenta que, salvo excepciones, actualmente los productos forestales aportan poco a la dieta humana. Condicionantes en funcin del tipo de bioslido La aplicacin de productos con bajo contenido en humedad, como el compost o el lodo seco, se puede realizar de manera manual, del mismo modo que se realizan actualmente el resto de operaciones en la plantacin (aporcado, colocacin de protectores, castillete y mulch, etc.). De hecho, la dosificacin y reparto de abono est ya incorporado como unidad de obra en las empresas de trabajos forestales. Como ya se ha comentado, la aplicacin dentro del hoyo de plantacin tiene como objetivo preservar la vegetacin preexistente, lo que a menudo es incompatible

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Apndice 4

con su incorporacin areal o lineal. Esto implica que el aporte del bioslido se deber realizar en el momento de la plantacin para reducir los costes de ejecucin, por lo que es muy conveniente mezclarlo bien con el suelo del hoyo (aproximadamente 20-30 cm de profundidad). Adicionalmente, cabe tener en cuenta que el borrador de la nueva legislacin prevista por la Unin Europea que regular el uso de bioslidos en trabajos de restauracin forestal aconseja evitar formas de aplicacin que puedan provocar arrastres por escorrenta, as como malos olores. Un inconveniente de estos productos, respecto a bioslidos con mayor contenido de humedad, es que muchas depuradoras no poseen capacidad para realizar el secado o compostado de lodos. En concreto, en la provincia de Alicante, existe actualmente una nica planta de compostaje de lodos de depuradora (planta de Aspe, gestionada por la Entidad Pblica de Saneamiento de Aguas Residuales de la Comunidad Valenciana, EPSAR). Una baja densidad de pistas forestales en las zonas repobladas podra ser otro fuerte limitante para el reparto. El uso de lodos concentrados (aproximadamente un 80% de agua), encarece el transporte, manipulacin y distribucin, especialmente en zonas de difcil acceso y en terrenos abruptos. Como se ha descrito anteriormente, con la maquinaria agrcola convencional, la dosificacin de este tipo de bioslido en el hoyo de plantacin es difcil debido a su textura pastosa, que adems dificulta mucho la mezcla homognea dentro del hoyo y acaba por crear problemas fsicos en el suelo (grietas y cavidades) cuando se seca. Por lo tanto, aunque una incorporacin inmediata evita la prdida de N y materia orgnica, y la lixiviacin de nutrientes, puede ser necesario esperar a incorporarlo en el suelo, en el caso de que la futura legislacin lo permita, una vez haya disminuido su contenido en agua. As, el uso de este producto implica un incremento sustancial del coste de la repoblacin, limitando su potencial aplicacin a zonas con pendientes reducidas y fcilmente mecanizables, donde se pueda incorporar, bien utilizando rotovator, o bien con el uso de aperos agrcolas que lo entierren mientras realizan las lneas de subsolado (topos). Adems, para reducir costes es necesario contar con un centro productor que pueda suministrar en poco tiempo la suficiente cantidad para realizar la obra. Por ejemplo, la Diputacin de Alicante realiz durante varios aos un programa de aplicacin de lodos de depuradora frescos en unas 400 hectreas de terrenos agrcolas (olivos y almendros principalmente) en el trmino municipal de Biar, mediante la aplicacin sub-superficial del lodo. Sin embargo, y como se ha 189

Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

comentado con anterioridad, esta tcnica es inviable en condiciones forestales y, si no se dispone de rigurosos controles, puede suponer un serio perjuicio para las zonas enmendadas (cultivos o repoblaciones). Otro aspecto de capital importancia, es la aceptacin social de esta prctica. De hecho, el rechazo social que sigue causando el uso de estos productos, debido a la generacin de olores, y la presencia de insectos y patgenos, sigue siendo un freno importante a la utilizacin de bioslidos en sectores con gran capacidad de acogida, como son la obra pblica, jardinera, etc. Para estos casos, la mejora sanitaria y la transformacin previa de los productos parece un paso indispensable previo a su utilizacin. La tendencia actual de restauracin de canteras, donde se incluye habitualmente el uso de lodos frescos (Sort y Alcaiz, 1996; Alcaiz et al., 1997; Jorba y Vallejo, 2010), aumenta considerablemente su potencial de uso, ya que en la provincia de Alicante hay un gran nmero de estas explotaciones que normalmente requieren el aporte de grandes cantidades de materia orgnica para dotar a los suelos afectados de cierta estructura y mejorar su fertilidad. Una de las ventajas del lodo fresco es que la mayora de poblaciones disponen de plantas depuradoras, por lo que las distancias hasta las zonas a repoblar no son excesivas (en comparacin con el compost, o incluso con el lodo desecado). Las principales restricciones se dan en caso de existir suelos superficiales, o si los trabajos de restauracin se centran en zonas donde interese mantener intacta la vegetacin preexistente y que se puede ver perjudicada por el empleo de este tipo de maquinaria (subsolado, rotovator, etc.). Adems, dependiendo del tipo de camin que transporte el lodo, puede ser necesario contar con pistas en buen estado del firme y suficiente anchura. Dosis Desde un punto de vista de la supervivencia de los brinzales, la dosis de compost y lodo seco propuesta para su uso en zonas secas-semiridas es la utilizada mayoritariamente en la bibliografa y por nuestro grupo de investigacin (15-30 -1 Mg ha ). Estas dosis corresponden a hoyos de plantacin de 40 x 40 x 40 cm, ya que el objetivo concreto de estas actuaciones es mejorar el establecimiento y crecimiento inicial de la repoblacin. As, una plantacin de una hectrea, a una -1 -1 densidad de plantacin de 800 pies ha y una dosis de 30 Mg ha , supondra una aplicacin de 380 kg p.s. de bioslido. Por encima de estas dosis, es ms probable 190

Apndice 4

que aparezcan los efectos negativos de los bioslidos sobre la planta descritos en el Captulo 3 de la memoria. Riesgo de contaminacin El cdigo de buenas prcticas agrarias de la Comunidad Valenciana, en cumplimiento de la directiva europea 91/676/CEE de 12 de diciembre y su transposicin a la legislacin espaola mediante el Real Decreto 12/2/96 especifica -1 -1 -1 la adicin mxima de 210 kg N ha ao (los dos primeros aos y 170 kg N ha -1 ao los dos restantes, dentro de planes cuatrienales) en zonas vulnerables, para evitar la contaminacin de cursos de agua superficiales y subterrneos con nitratos. Las dosis aconsejadas en la seccin anterior son muy inferiores, ya que, -1 aunque se refieren a Mg ha , se aplican al 1,28% de la superficie de cada hectrea -1 (suponiendo una densidad de plantacin de 800 individuos ha , con una superficie por hoyo de 0,40 x 0,40 m), por lo que, teniendo en cuenta la concentracin media -1 de N en bioslidos (4%; MARM, 2009), se incorporaran 15 kg N ha y nicamente el primer ao. La excepcin ya comentada sera su aplicacin en zonas muy degradadas (extracciones mineras, obra civil) donde la dosis suele ser mayor (200-1 400 Mg p.s. ha ; Sort y Alcaiz, 1999; Alcaiz et al., 1997), por lo que sera un criterio restrictivo en caso de encontrarse dentro de zonas vulnerables a la contaminacin de acuferos. Para la Comunidad Valenciana existe un mapa de vulnerabilidad de contaminacin de acuferos elaborada por la Conselleria de Obras Pblicas Urbanismo y Transportes que define cinco clases de vulnerabilidad, desde muy baja en zonas con aguas de muy baja calidad o muy profundas, hasta vulnerabilidad muy alta en zonas de descarga o emergencia de aguas subterrneas o acuferos muy superficiales. En la cartografa se especifica la existencia de condicionantes de dosis y especies a utilizar en las zonas con vulnerabilidad alta o muy alta, refirindose a las actividades comentadas con aplicacin de dosis elevadas. Costes Como se ha descrito en el Apndice 1, debido a las dificultades tcnicas para trabajar en zonas forestales poco accesibles, la aplicacin de bioslidos hmedos (sin secar o compostar) con los medios actualmente disponibles, supone un encarecimiento considerable de la repoblacin. El desarrollo de maquinaria adecuada y su adaptacin a zonas de orografa difcil, permitira aumentar el

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

rendimiento y reducir el coste sustancialmente. En medios mediterrneos, este sobrecoste no est compensado con un incremento de la produccin de madera (ni, probablemente, en medios ms productivos; Binkley, 1993). Sin embargo, se debe tener en cuenta que el coste de destinos alternativos de los lodos, como el vertido, es considerable y, probablemente, se ver incrementado en un futuro (segn el MMARM unos 70 Mg en el ao 2007; http://xurl.es/spxp2). Como se ha comentado con anterioridad, en la Comunidad Valenciana se han realizado diversos programas para la reutilizacin de lodos de depuradora (http://www.proaguas.com), donde se pone a disposicin de los agricultores el lodo fresco mediante un sistema integrado de reparto, aplicacin y control sanitario. Los costes de valorizacin del producto por esta va son menores que si se opta por la va del vertedero. Actualmente el 93,9% de los lodos generados en la Comunidad Valenciana se reciclan en agricultura (Memoria de Gestin 2009, EPSAR). El sobrecoste que genera la aplicacin del bioslido hmedo en repoblaciones forestales, no es asumible, a no ser que la empresa gestora de estos bioslidos sea la que internalice estos costes. Por ello, en el caso de las repoblaciones forestales destinadas a restauracin del paisaje o control de la erosin (sin beneficio tangible directo), y teniendo en cuenta la compleja orografa de la provincia de Alicante, el uso de productos secos o compostados es ms conveniente ya que disminuira notablemente los costes de transporte (distancia desde las plantas de compostaje o depuradoras y la zona a repoblar, volumen de lodo a transportar), distribucin y reparto en los hoyos. En actuaciones que comprendan pocas hectreas, el coste unitario incrementa, aunque tambin depender en gran parte de la humedad, densidad y manejabilidad del producto. Las dosis propuestas para su aplicacin en hoyo de plantacin supondran el transporte y acopio de entre 400 y 450 kg de bioslido por hectrea repoblada en forma de compost (considerando un 40-50% de -1 humedad y densidad de plantacin de 800 plantas ha ), por lo que no seran necesarias condiciones especiales en las vas de acceso a las zonas de trabajo. Suponiendo distancias de 100 km (4 horas de transporte), el coste total de la aplicacin de compost oscilara entre el 7% y el 2% del presupuesto total de la plantacin, dependiendo de las hectreas repobladas. Este porcentaje disminuira algo en caso de usar lodo seco, debido a que disminuye el coste del producto y el contenido de humedad, y aumenta su densidad, facilitando el transporte.

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Apndice 4

La cartografa propuesta define las zonas susceptibles de reforestacin y las depuradoras ms cercanas a stas, mostrando el tipo de producto generado en la depuradora, su composicin, la aptitud para ser aplicado al suelo y las capacidades productivas de sta. Esta herramienta permitira planificar la cantidad de producto necesario en el momento en que se lleve a cabo la actuacin, y prever, por ejemplo, zonas de acopio en caso de ser necesario. Cuestiones adicionales Para ambas formas de bioslidos (hmedo y seco) es previsible, en funcin de las hectreas a repoblar, que se establezcan zonas de acopio y almacn temporal del bioslido, por lo que se debe establecer distancias mnimas a zonas habitadas y masas de agua. El lodo hmedo es notablemente ms desagradable que el seco, y se requiere un mayor volumen del primero que del segundo, pero las recomendaciones son comunes para todos los productos. Se han descrito ciertas normas de seguridad, sobre todo para el uso agrcola de estos productos, que aconsejan mantener una distancia mnima de 35-50 metros cualquier masa de agua (segn los Cdigos de Buenas Prcticas Agrarias de algunas Comunidades Autnomas), y 100-300 metros desde la zona de acopio a viviendas aisladas y ncleos de poblacin, respectivamente. En la cartografa se han generado zonas de amortiguacin (buffer) que consideran estas distancias mnimas. Las zonas de acopio deben situarse en zonas con pendientes menores al 2% y se ha de calcular con precisin la cantidad requerida, para evitar su abandono posterior. El transporte se limitar a das sin lluvia y una vez en la zona de acopio se debe establecer un cordn en forma de caballn que rodee a los bioslidos de, al menos, 20 cm, Esta prctica tiene como objetivo evitar la entrada de lluvia a la zona de acopio, as como la salida de lixiviados. Algunas de estas recomendaciones estn incluidas en el borrador del 'Manual de Gesti dels Residus Orgnics per a la seva Aplicaci als Sls Agrcoles' difundido por la Generalitat de Catalunya (Pous et al., 1988) que, aunque no ha sido publicado, pensamos que tiene plena validez.

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Cartografa A continuacin se detallan las fuentes de informacin utilizadas para la elaboracin de los mapas de aptitud para la aplicacin de bioslidos en repoblaciones forestales de la provincia de Alicante. La escala de representacin ha sido en todos los casos 1:50.000. Mapa de cobertura vegetal. Se ha realizado a partir del Mapa Forestal Espaol, con una nueva reclasificacin en seis clases de coberturas vegetales, entre ellas las zonas ms adecuadas para repoblacin forestal. Mapa de profundidad de suelos. Aproximacin en funcin de las clases descritas por Antoln (1998). Mapa de salinidad edfica. Aproximacin en funcin de las clases descritas por Antoln (1998). Mapa de pendientes. Elaboracin propia a partir de mapas topogrficos con equidistancia entre curvas de nivel de 20 m. Mapa de vulnerabilidad de los acuferos a la contaminacin, a partir de datos de COPUT (Consellera de Obras Publicas, Urbanismo y Transportes; http://xurl.es/mrtr1). Mapa de precipitacin. Elaboracin propia a partir de series histricas obtenidas en el Laboratorio Climatolgico de la Universidad de Alicante. Mapa de pistas forestales. Se ha elaborado a partir del mapa de senderos de la COPUT (Consellera de Obras Publicas, Urbanismo y Transportes) digitalizando nuevas pistas a partir de ortoimagenes. Mapa de Estaciones Depuradoras de Aguas Residuales. Se ha generado a partir de la informacin de la EPSAR (Entidad Publica de Saneamiento de Aguas Residuales). En cada una de ellas existe informacin, en caso de estar disponible, del anlisis qumico de los lodos que genera, as como de su produccin y otras variables (ver Mapa detalle).

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Apndice 4

Cobertura vegetal

Cultivos agrcolas Mosaico de cultivo y matorral Zonas adecuadas para repoblacin Masas forestales Zonas no forestales Zonas en proceso de urbanizacin

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Profundidad de suelo

< 10 cm 10 30 cm 30 40 cm 40 80 cm > 80 cm

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Apndice 4

Pendientes

< 30% > 30%

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Vulnerabilidad de acuferos

Vulnerabilidad muy baja Vulnerabilidad baja Vulnerabilidad media Vulnerabilidad alta Vulnerabilidad muy alta

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Apndice 4

Salinidad

< 2 dS m-1 2 4 dS m-1 4 8 dS m-1 8 16 dS m-1 > 16 dS m


-1

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Precipitacin

< 300 mm 300 500 mm > 500 mm

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Apndice 4

Pistas Forestales

Pistas Forestales

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Depuradoras

Con anlisis qumico Con anlisis qumico no apto Sin anlisis qumico Planta de copostaje

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Apndice 4

Depuradoras (detalle)

Con anlisis qumico Con anlisis qumico no apto Sin anlisis qumico Planta de copostaje

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Mapas de aptitud para la aplicacin forestal de bioslidos Con la informacin cartogrfica de origen se ha elaborado dos mapas de aptitud que muestran las zonas aptas para repoblacin forestal utilizando bioslidos. Los principales condicionantes que se ha tenido en cuenta para hacer las clases de aptitud son el tipo de cobertura vegetal, la pendiente, la salinidad edfica, la precipitacin media anual y la profundidad del suelo. En cada caso se han reclasificado las distintas clases de cada mapa, establecindose nuevas capas y mapas intermedios. El primero de ellos muestra nicamente las zonas catalogadas como forestales que cumplen criterios bsicos, relativos a la cobertura vegetal, para poder ser repobladas. En el segundo mapa se han incluido zonas que actualmente estn catalogadas en el Mapa Forestal Espaol como zonas de cultivo, pero mezcladas con distintos tipos de vegetacin forestal (Pinus halepensis, vegetacin termfila, vegetacin de garriga, etc.). Estas zonas las hemos considerado como aptas para restaurar o reforestar y adecuadas para el empleo de lodos hmedos, inviables en las zonas resultantes del anterior mapa. En ambos casos la leyenda es la misma: Apto: zonas que no tienen ningn condicionante a priori, a partir de la cartografa utilizada, para poder ser repobladas con aplicacin de bioslidos. Con condicionantes de dosis/especie: zonas que presentan algn tipo de condicionante que determina un estudio previo para establecer la dosis ms adecuada, o en todo caso, adecuar la especie vegetal a utilizar en la reforestacin. Con condicionantes de dosis/especie. Limitaciones tcnicas: zonas como las anteriores con pendiente mayor de 30%. Con limitaciones tcnicas: zonas aptas que tienen una pendiente mayor del 30% y si bien no son excluidas, las limitaciones tcnicas y econmicas para la aplicacin del bioslido pueden ser determinantes para excluir su aplicacin. No apto: Zonas urbanas, humedales, reas protegidas, etc., o que no cumple algn requisito bsico para repoblacin o para la aplicacin de bioslidos

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Apndice 4

Tabla 3. Superficie ocupada por cada clase de aptitud para reforestacin con bioslidos nicamente en zonas forestales y sumndole las zonas con mosaico de cultivos y matorral. Clases de aptitud 1. Apto 2. Apto con condicionante de dosis y especie 3. Apto con condicionante de dosis, especie y limitaciones tcnicas 4. Apto con limitaciones tcnicas 5. No apto Forestal (ha) 7.831 14.320 830 135 558.291 Forestal + Mosaico (ha) 21.668 20.404 863 239 538.233

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Mapa de clases de aptitud para la aplicacin de bioslidos

Apto Apto (condicionantes de dosis/especie) Apto (condicionantes de dosis/especie y lim. tcnicas) Apto (limitaciones tcnicas) No apto

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Apndice 4

Mapa de clases de aptitud para la aplicacin de bioslidos (incluyendo zonas potenciales)

Apto Apto (condicionantes de dosis/especie) Apto (condicionantes de dosis/especie y lim. tcnicas) Apto (limitaciones tcnicas) No apto

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Consideraciones adicionales sobre el uso de bioslidos en repoblacin forestal. SIG

Conclusin La elaboracin del sistema de informacin geogrfica pone de manifiesto la existencia, a nivel de la provincia de Alicante, de una superficie de 7.831 hectreas (21.668 ha si se tienen en cuenta zonas con mosaico de cultivos y vegetacin forestal) en las que se podra contemplar la utilizacin de lodo en la reforestacin de manera nica y puntual en los hoyos de plantacin. Adems, esta superficie se ampla (hasta 14.320 ha) si los bioslidos son empleados bajo ciertas condiciones. Esta herramienta requiere de una validacin previa de la cartografa generada mediante muestreos de campo antes de poder ser incorporada a la toma de decisiones en la gestin forestal.

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