BrandarizLendoiroMariaIsabel Opt

UNIVERSIDADE DA CORUA
FACULTADE DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUIlVIICA FUNDAMENTAL E INDUSTRIAL
TEORIAS DE INTERACCION IONICA Y EQUILIBRIO

QUIMICO: ESTUDIO DE LA PROTONACION DE
AMINOACIDOS EN MEDIOS SALINOS
Memoria para optar al Grado de Doctora en C.C.Qumicas presentada por M ISABEL BRANDARIZ LENDOIRO
LA CORUA, MAYO 1994
JOSE Me QUINT'ELA LOPEZ, Director del Departamento de Qumica Fundamental e Industrial de la Universidad de La Corua,
CERTIFICA
Que la Graduada en Ciencias Qumicas Da. Isabel Brandariz Lendoiro, ha realizado en este Departamento, bajo la direccin del Prof. Dr. D. Manuel Sastre de Vicente, el trabajo que bajo el ttulo: Teoras de interaccin inica y equilibrio qumico: Estudio de la protonacin de aminocidos en medios salinos, presenta para optar al grado de Doctor en Ciencias Qumicas.
Y para que as conste, expido y firmo la presente en La Corua, a^ÎViayo de 1994.
MANiJEL ESTEBAN SASTRE DE VICENTE, Profesor Titulaz del Area de Qumica Fundamental e Industrial de la Universidad de La Corua,
CERTIFICA
Que el presente trabajo de investigacin titulado:
Teoras de
interaccin inica y equilibrio qumico: Estudio de la protonacin de aminocidos en medios salinos ha sido realizado por la Licenciada Da. Isabel Brandariz Lendoiro en el Depaztamento de Qumica Fundamental e Industrial, Laboratorio de Electroqumica, y que, como Director del mismo, autorizo su presentacin como Tesis Doctora] a fin de que pueda ser juzgada por el tribunal correspondiente.
Y para que as conste, expido y firmo la presente en La Corua, a 14 de Abril de 1994.
Fdo. M.E. Sastre de Vicente
^Cra^ci^nie^cto^:
Quiîera,
en
Prim,er
Cuâr,
m,ctniê^tar
m.i
mcd
încero
a^Cra^cimiento ^ adm.iracin a rn.i director, eLJr.
^^â^tre de Vicente,
ûe con û cort^tante e^ûerzo ^ deîcacin ^ hec^ Poîbê e^te trabaô.
^ m.i^ cooâero^ de faôratorio, âra^, Jere ^ Koêrto, ûe tarco m.e an aûcâcô c^ con ^.uiene^ îe comâricô an d ueno^ rrwrnenoe.
^C aLJecano de â ,}acu^tad de îencia^, a1Jr. X^C. ^rm^to ârbeito, Por âber aporâdo, îena^re nue^tra tarea inve^ti^Cadora. ûe ûe neceârio, e^ deârro^ô de
^f Proêôr eLJr.
^îm.^zez ûe^ta c^ û^ cofaôradore^ de^
cèPariam,enio cê ^sica por Perm,iirme [êvar a cao en û âôraorio â^
^.edida^ ^ ^,î^d .^ â Xunta ^â^cia Por â conceîn ^ una

^%,.^., corueîcà en f 992 .
êca de tercer
cicô cûrante el curô 1990-91 r^ a l /r/ini^ferio cê îûcacin Por â deca
Indice
Indice
INDICE ..................................:............. 1 GLOSARIO DE SIlVIBOLOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
INTRODUCCION ......................................... 5
ANTECEDENTES BIBLIOGRAFICOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I. Teoras de Interaccin inica .......................... 11
13
13
16
17
19
21
23
23
27
32
35
37
37
48
50
54
58
59
I.I. Introduccin . . . . . . .. . . . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . .. I.II. Modelo de Guggenheim . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I.III. Modelo de Scatchazd . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I.IV. Modelo de Pitzer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . II. Zwitteriones: Comportamiento y Estructura . . . . . . . . . . . . . . . . . II.I. Comportamiento cido-base de los aminocidos . . . . . . . . . . . II.II. Interpretacin terica de las propiedades de los iones dipolares . Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . PARTE EXPERIlÎENTAL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III. Procedimiento Experimental . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III.I. Clculo de las Constantes Estequiomtricas . . . . . . . . . . . . . III.II. Aparatos y Reactivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III.III. Calibrados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III.IV. Valoraciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . III.V. Detrminacin del pKw . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Bibliografi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV. Dependencia de Ias Constantes de Equilibrio de la I^Valina con la
Fuerza Inica segn los formalismos de Guggenheim, Scatchard
y Pitzer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV.I. Aplicacin de los modelos de interaccin a los equilibrios
de un aminocido . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV.I.I. Modelo de Guggenheim . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV.I.II. Modelo de Scatchard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . IV.I.III. Modelo de Pitzer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
61
61
62
64
66
Indice ............. IV.II. Resultados y Discusin . . . . . . . . . . Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

74
V. Anlisis Matemtico de la forma de las curvas pK'vs. I.........
77
V.I. Comportamiento pK; vs. I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78

V.II. Comportamiento pK2 vs. I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
V.III. Comportamiento pK; vs. I para zwiteriones con gran separacin de cargas ................................... 84
Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
VI. Aplicacin de las Ecuaciones de Pitzer a Aminocidos con diferentes
posiciones de los grupos Amino y Carboxilo . . . . . . . . . . . . . . .
87
VI.I. Dependencia pK; vs. I para aminocidos con separacin de cargas 87

VI.II. Resultados y Discusin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
VI.II.I. Constantes Estequiomtricas y Parmetros de Interaccin 90
VI.II.II. Aplicacin de las ecuaciones de Pitzer al producto
inico del agua . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100
Bibliografia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 109
VII. Aplicacin de las Teoras de Interaccin Inica a Equilibrios
de Aminocidos en Mezclas de Electrolitos . . . . . . . . . . . . . . . 111
VII.I. Aplicacin de los formalismos de Pitzer y Guggenheim
a los equilibrios de la L-Valina en mezclas de electrolitos ... 112
VII.I.I. Ecuaciones de Guggenheim . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
VII.I.II. Ecuaciones de Pitzer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114
VII.I.III. Resultados y Discusin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 115
VII.II. Constantes de formacin de la a-Alanina en mezclas
de electrolitos a fuerza inica constante . . . . . . . . . . . . . . . 122
VII.II.I. Aplicacin de las Teoras de Pitzer y Friedman .... 122
VII.II.II. Resultados y Discusin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 125
Bibliografi . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130
CONCLUSIONES ........................................131
APENDICE5 ............................................137
Apndice A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 139
Apndice B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143
Apndice C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 147
Apndice D . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 151
Glosario
Glosario de Smbolos
aD distancia de mnima aproximacin entre los centros de cationes y aniones en la teora de Debye-Hckel (ec.I.4) iones negativos (del electrolito soporte) constante de la ley de Debye-Hiickel (A' =A/1n10) anin del aminocido a,a' A A^
AH zwitterin del aminocido AHZ catin del aminocido A^ A, B^^ B^^ BU constante de la ley lmite en la teora de Pitzer (ec.I.18) parmetro de interaccin de Scatchazd del electrolito J(ec.I.12) pazmetro de interaccin de Scatchazd para mezclas de los electrolitos A y B(ec.I.15) parmetro de interaccin de Scatchazd paza mezclas de los electrolitos A y B(ec.I.16) segundo coeficiente del virial; recoge interacciones dobles entre los iones iyj (ec.I.19) derivada respecto a la fuerza inica del coeficiente BU iones positivos (del electrolito soporte) (tambin C^;^ tercer coeficiente del virial, recoge las interacciones triples constante dielctrica carga del electrn potencial estndar del electrodo de vidrio (ec.III.7) definida en la ec.I.18 parmetro de interaccin del electrolito MX fiterza inica constante de Boltzmann
B'^ c,c' CU D e E fr g^^ I k
Glosario
K^ KT m; M; NA^ R S T z; Z
constante de equilibrio estequiomtrica constante de equilibrio termodinmica molalidad del ion i molazidad del ion i nmero de Avogadro distancia entre las cargas del zwitterion constante de la ley lmite segn Scatchazd (S=-A) temperatura absoluta nmero de carga de i zwitterion
Letras Gtzegas
a, ^B^ ^,^ ,^^ /3^^ ^y ti; B;^ ^ Ûk parmetro de interaccin de Scatchard del electrolito J(ec.I.ll) pazmetro de interaccin de Guggenheim entre los iones i y j pazmetro de interaccin de Scatchazd para mezclas de los electrolitos A y B(ec.I.13) pazmetro de interaccin de Scatchard para mezclas de los electrolitos A y B(ec.I.14) (tambin S';^) segundo coeficiente del virial para la interaccin i j coeficiente de activitidad de la especie i segundo coe^ciente del virial para fuerzas de corto alcance entre los iones i y j segundo coeficiente del virial paza especies neutras momento dipolaz tercer coeficiente del virial paza mezclas
Introduccin
Iniroduccin
Introduccin
La tcnica potenciomtrica con electrodos de vidrio comerciales es, por su sencillez y universalidad, uno de los mtodos ms recomendables para la determinacin de constantes de equilibrio. Su aplicacin al estudio del comportamiento cido-base y las interacciones inicas de compuestos orgnicos tales como los aminocidos presenta, un gran inters, no slo prctico, dado que son sustancias naturales, si no tambin terico, debido a la presencia en disolucin de iones dipolares o zwitteriones.
Aunque existen datos de constantes estequiomtricas a fuerzas inicas aisladas, los estudios sistemticos sobre el tema son escasos', an cuando a lo largo de los ltimos setenta aos se han elaborado distintas teorias de interaccin especfica. Todas ellas toman como punto de referencia la ecuacin de Debye-Hiickel pero persiguen una potencial extensin a fuerzas inicas altas tal como se ha venido demostrando con su aplicacin al estudio de la variacin de coeficientes de actividad inico medios y coeficientes osmticos de electrolitos fuertes. Entre las teoras posteriores a la de Debye-Hiickel destaca por su amplia utilizacin el tratamiento semiemprico de Pitzer desarrollado en la dcada de los setenta. Algunas vertientes importantes de su aplicacin al estudio de equilibrios cido-base de molculas orgnicas ha sido objeto de anlisis reciente en este laboratorio'. Una aproximacin
'Fiol, S., Tesis Doctoral, Aplicacin de la ecuaciones de Pitzer a equilibrios cido-base: Estudio de la ioni7acin de aminocidos en agua de mar sinttica, Universidad de I:a Corua, Marco, 1994
Introduccin
previa a la de Pitzer desarrollada por Scatchard en los aos sesenta, no haba sido aplicada al estudio de equilibrios, hasta la publicacin de algunos resultados descritos en la presente memoria. Dado que tanto el formalismo de Pitzer como el de Scatchard tienen su antecedente ms pracimo en las ecuaciones, ms sencillas, de Guggeaahem, stas tambin han sido consideradas en el presente trabajo.
La aplicacin de los desarrollos tericos mencionados anteriormente al estudio de la ionizacin de aminocidos, se concreta en los apartados que se describen a continuacin y que resumen los objetivos planteados en esta memoria:
) Enprirner lugar'<se dedujeron:las ecuaciones'que describen' la dependena del pK;, i='1,2, de un aminvcido con la fuerza inica de la disolucin, aplicando los tratamentos mencionados a los valores de pK; de la`L-valina obtenidos potenciomtricamente. '
ii) Se abord el estudo de los posibles ;tipos de' urvas pK; vs'. I que pueden obtenerse por aplicacin de las distintas teclras de interaccin inica a los dos equiIbrios cido-base de un amini^cida, tanta en el caso en que la moicula neutra se considera s ^ separacin de cargas, como en aquellas situacianes' en que los grupos cido y amino se aleân lo suficiente corrio para considerar que interaccionan con l^s iones del rnedio de forma independiente:
iiî) Se In1c1 un posible planteamiento de modeliza in de situaciones ntermedias a los casos lmte indicados en,el apartado i, que corresponde a' una stuacin en la que tas cargas posiiiva y negativa se alejan progresivamente. Con' este fn se determinaron las' constantes de ianizacin de'la glicina, -alanina, cdo ^-,aminobutrica' y cido E-amnocpraco, 'en KNO
Introduccin
) Urra cuestin adicional que ; se ha analizad
se refiere al
carnportainiento ,del zwitterion en rnedios ^ns eomplejos constituidos por dos electrolios. Por esta `razn se lâ considerado el 'eswd'io sistemtiâ de a influei:icia que tanto ;la
posieiîn
salida
dl
medin, forinado gor mezlas de ilos electrolitos, como e valor de a< fuerza inica alcanzada' en dicho ' medio, ejercen Este sobre las
constzntes de disociacin determinadas. caba
anlisis se lev a
con el estudio ' de la dependencia de las constantes de equilibrio de ! la I.,-Valina < en mezclas'
estequio^triras
equimoeculares de KCl-KBr y de KCl-KN03, a varias Ifuerzas litnicas I y la cr-alanina en mezclas de KN03 y, ioduro de tetFaetilauionio a' fuerza inica constante, variando la fraccin de cada eteetrolito en la mezela.
Los resultados descritos en esta memoria han dado lugar a las siguientes publicaciones:
Dependende of Equilibrium Constants of L-Valine on Ionic Strength According to Guggenheim, Scatchard and Pitzer Models, I. Brandariz, X.L. Armesto, F. Arce, F. Penedo, M. Sastre de Vicente Monatsch. Chem., ]24, 249 (1993)
Dependence of the Protonation Constants of ^-Alanine on Ionic Strength in I{NO, According to Pitzer's Formalism, I. Brandariz, R. Herrero, M. Sastre de Vicente
Ber. Bunsen. Phys. Chem., 97, (1), 59 (1993).
10
Introduccin
Protonation Constants of a-Alanine, y-aminobutiric Acid, and e-aminocaproic Acid, I. Brandariz, Fiol, S., Herrero, R., Vilario, T., Sastre de Vicente, M. J. Chem. Eng. Data, 38, 531, (1993)
Pitzer and Thermodynamic Parameters of Triethanolamine and Glycine in Aqueous Saline Solution, R. Herrero, I. Brandariz, Fiol, S., M. Sastre de Vicente Collect. Czech. Chem. Commun., 59, 1269, (1993)
Application of Pitzer's and Guggenheim's Formalisms to Acid-base Equilibria of Triethanolamine and L-valine in Mixtures of Electrolytes,
[. Brandariz, R. Herrero, M. Sastre de Vicente
J. Chim. Phys., 90, 63, (1993)
Errors Encountered in the Detremination of Pitzer's Parameters from Stoichiometric Equilibrium Constants, Herrero, R., I. Brandariz, Fiol, S., Vilario, T., Sastre de Vicente, M.E., An. Qum. 89, 602, (1993)
Pitzer's Parameters calculated from Stoichiometric Equilibrium Constants with Commercial H+ Electrodes, Fiol, S.,I. Brandariz, Armesto, X.L., Arce, F., Sastre de Vicente, M., Ann. Chim. (Rome), 83, 175, (1993)
The protonation Constants of Glycine in NaCI at 25C Based on the Pitzer and Scatchard Models. Data Analysis by Ridge Regression, Fiol, S., I. Brandariz, R. Herrero, Vilario, T., Sastre de Vicente, M., Ber. Bunsen. Phys. Chem., 98, (2), 164 (1994).
The Protonation Constants of -Alanine in Electrolyte Mixtures at a Constant Ionic Strength I. Brandariz, Fiol, S., Sastre de Vicente, M. J. Sol. Chem., enviado (1994)
Antecedentes
Bibliogrficos
Teoras de Interaccin inica
13
I. Teoâs de interaccin inica

I.I. Introduccin
Las propiedades caractersticas de los electrolitos fuertes pueden
describirse sin recurrir al concepto de asociacin inica; tal nocin resulta, sin embargo, imprescindible a la hora de estudiar el comportamiento de los electrolitos dbiles. Por lo tanto se hace necesario acudir a la combinacin de las teoras de interaccin inica con la formulacin de los pertinentes equilibrios de disociacin cuando se pretende modelizar el comportamiento de sustancias orgnicas parcialmente disocidas en disolucin acuosa.l
De esta forma para un cido dbil AH parcialmente disociado segn el

equilibrio: AH ^ A-+H` la constante termodinmica KT viene dada por:
(I.1)
xT = Â ^ ^H+^ _ Â l ^H+l ' YA _ ^g^ =x`'II(Y,)"^
(I2)
(^
ÂH]
Y,â
donde K` es la constante estequiomtrica y el productorio recoge los coeficientes de actividad de las especies que intervienen en el equilibrio. Este ltimo factor puede
14
Antecedentes Bibliogrficos
expresazse en funcin de la fuerza inica del medio utilizando cualquiera de las teoras de interaccin inica disponibles en la bibliograa, lo que evidencia que el conocimiento de las constantes estequiomtricas en distintos medios salinos permite obtener informacin de como varan los coeficientes de- actividad con la fuerza inica. Ahora bien, teniendo en cuenta el estado actual de desarrollo del conocimiento de las disoluciones acuosas, los modelos utilizados paza explicar el comportamiento de las disoluciones reales son mayoritariamente semiempricos ya que los modelos ms sofisticados que aporta la mecnica estadstica, considerando, por ejemplo, la
estructura de las molculas del disolvente, no han alcanzado un grado de desarrollo suficiente para poder ser aplicados al clculo rutinazio de mezclas complejas.2
En las teorias ms sencillas, el coeficiente de actividad inico medio de un soluto, yt (J), se divide en dos trminos3, uno electrosttico y otro estadstico, segn se recoge en la expresin:
^^ t^^ -^YEL+^ÊSTAD
(I.3)
yE,, engloba las interacciones de lazgo alcance entre iones de distinta carga. Las ecuaciones usadas paza este trmino tienen su origen en la descripcin de las propiedades de las disoluciones diluidas (I < 0.01); la ms extendida de todas ellas es la deducida por Debye y Hiickel en 1923, quienes demuestran que para una disolucin diluida en la que la desviacin de la idealidad se supone debida nicamente a las interacciones electrostticas de largo alcance, el coeficiente de actividad inico medio viene dado por la ecuacin: 1ny ci = _A ^zl^,i ^
(I +BaDfn
donde I representa la fuerza inica, A y B son constantes dependientes de la temperatura, la presin y el disolvente y aD es el dimetro inico medio.
15
Por otra parte, a principios de la dcada de los 70, Pitzer' utilizando la mecnica estadstica, en lugar de un proceso de carga como el empleado en el desarrollo de la teora de Debye-Hiickel, deduce una expresin mejorada para el coeficiente de- actividad, en l que apazece un nuevo trmino: ^
^Y^. - 'A^^zixi^ ^
^ +? ln(1+1.2fn (1+1.2fn 1.2
^^
La descripcin de ln yEL segn las ecs. I.4 y I.5 proporciona una forma matemtica adecuada paza extrapolaz a dilucin infinita; sin embazgo no hay garanta de que estas mismas ecuaciones describan las interacciones de largo alcance a fuerzas inicas ms altas, aunque cualquier inexatitud debida a ello se corregira al quedar incluida junto con cualquier interaccin ion-disolvente en el trmino estadstico. Este, a su vez, recoge las interacciones dobles, triples, etc., de corto alcance y se expresa como un desarrollo en serie de potencias del tipo:
^1'^sr,^n-^ ga^tx^m^rx
n
(n)
(n)
donde g,,,^^^ es un pazmetro de interaccin y m,,,^ es la molalidad de la sal MX en disolucin.
De todos los modelos el ms sencillo es el de Guggenheim en el que se consideran nicamente las interacciones dobles entre iones de distinto signo, en este caso:
^Yt(^=^Y^^+g^^m^ ^^
16
donde :
î> 2 î v2 0 gmnc= ^ Bi,^
(I8)
siendo v; los coeficientes de los iones en la frmula de la sal y v= v, + v2 . El parmetro B,2 se considera constante aunque, realmente, vara al aumentar la fuerza inica. Este hecho es tenido en cuenta en modelos ms sofisticados como el de Pitzer en el que adems de recoger dicha dependencia se aaden ms trminos al desarrollo en serie.
Otra forma de abordar el problema la constituye el modelo
de
Scatchards6 en el que se incluyen ms trminos en el desarrollo en serie haciendo innecesario que los parmetros g dependan de la fuerza inica.
Una alternativa diferente que permite explicar las desviaciones de las ecuaciones electrostticas consiste en considerar que esta discrepancia se debe a la formacin de agregados inicos, con la consiguiente disminucin de la concentracin de iones libres en disolucin; aunque esta ltima hiptesis no resulta necesaria para explicar las propiedades de electrolitos fuertes, s lo es para el caso de electrolitos dbiles, tal como se mencion anteriormente.
I.II. Modelo de Guggenheim

Guggenheim desarrolla esta teora en los aos treinta y toma como puntos de partida la ecuacin de Debye-Hiickel (1923), y el principio de Bronsted de la interaccin especfica (1922); segn ste, la interaccin ntre iones del mismo signo no depende de los iones de que se trate en particular sino nicamente de sus
17
cargas, ya que al ser de signos iguales tienden a alejarse y las fuerzas de corto alcance pueden considerarse despreciables. En los de cargas opuestas s puede ser especfica. La ecuacin para el coeficiente de actividad de un ion M en una mezcla de electrolitos compleja adquiere la forma': 1nyM = -A zM
^ + 2E pMt'm^ l+cf
^'9)
si M e i son del mismo signo R=0 segn el principio de Bronsted. Aunque el valor del coeficiente ^ es constante hasta una fuerza inica de aproximadamente 0.1, las desviaciones de la linealidad son pequeas para la mayora de los electrolitos hasta I=2M.
I.III. Modelo de Scatchard

A principios de la dcada de los sesenta Scatchard5^ desarrolla una nueva teora ms compleja que la de Guggenheim en la que se tienen en cuenta las interacciones de ms de dos partculas. La expresin obtenida para el
coeficiente de actividad de un electrolito A en presencia de otro B es:

ln ^t IA [A +a + a B a A^YB ^0^ + ( AB - ^0^ l 2 + + ÂB B^^ ÂB/yB A A( vA mA +^t^B+3(B^-R^^yB-2(B^-^t^y^
(I.10)
donde y representa la fraccin de fuerza inica y los parmetros A, B, a, ,6 son funciones de la fuerza inica, la temperatura, la presin, el disolvente y las caractersticas de los solutos especificados en los subndices. Los trminos A y a recogen las propiedades de las disoluciones de los electrolitos puros, mientras que los B y /3 aparecen cuando hay mezclas. En este sentido, Scatchard recoge la idea de Friedman' que propone que el exceso de energa libre (de la que derivando
18
se obtiene ln y) se puede expresar como la suma de dos trminos, uno que recoja las contribuciones de cada electrolito puro a igual fuerza inica (en el
aparecern los trminos ms complicados, que son funcin de I, ln I, etc:) y otro que exprese el exceso de energa libre de mezcla expresado como un desarrollo en serie de potencias de la fuerza inica.
Para una mezcla de dos electrolitos los trminos A, que describen las disoluciones puras, son los ms importantes, pero existen adems una serie de trminos B, de los cuales BÔ^ es sin duda, el ms importante; de hecho segn Scatchard BÔ^ y B^'^ son suficientes para describir el comportamiento de todas las mezclas binarias por l estudiadas (aunque stas se limitan en su mayora a mezclas de electrolitos 1:1). Podran aadirse ms trminos en el desarrollo en serie pero con stos es normalmente suficiente.
La dependencia de A, B, a, y(3 con la fuerza inica viene dada por las expresiones:
a^ = 2 S[1 +aJ f- 1 +2 lnil +a,^fnl + 1 +a^f A^ i
+a jl) j +a(2) j2 +q^3) j3
A,+ a, =
2Sf+2 1 +a^^
a^ ) I+ 2 a^2) n + 3 a^3) I3
(I.12)
at^ =b1jl +b)^ +b^)Is ,
(I.13)
Rc^_b^)la+b ^)Is
(I.14)
19
B^ = b^''^ I+ 2 b^ ^ 1^ + 3 b^ ^ I3 ,â
^1^
B^ _ ^ b^ > 72 + 3 b^ ^ I3 ^ -
(I.1^
donde los parmetros a y b son constantes que dependen de las especies sealadas en los subndices y no son funcin de la fuerza inica, aunque no deben ser usados paza clculos a fuerzas inicas mayores que las utilizadas paza determinaz sus valores; por el contrario la extrapolacin a fuerzas inicas ms bajas es menos problemtica al haber incluido en las ecuaciones el trmino de Debye-Hiickel. En cuanto al valor del pazmetro a, que apazece en las expresiones I.11 y I.12, Guntelberg y Guggenheims toman a, =1 paza I< 0.1; sin embargo Scatchazd demuestra que paza concentraciones mayores a, =1.5 conduce a mejores resultados. Por otra parte Guggenheim y Stokess concluyen que paza sales de iones polivalentes es preferible tomar este a, como un parmetro ajustable, lo que es deseable tambin para electrolitos 1:1 como ha sealado el propio Scatchazd. otro modelo de similazes
Pocos aos despus, Scatchardg publica
cazactersticas (un trmino de Debye-Hiickel ms desarrollos en serie de la fuerza inica) pero en el que se expresa el coeficiente de actividad usando como componentes los iones en lugar de los electrolitos.
I.IV. Modelo de Pitzer

En la dcada de los setenta Pitzer publica otra teora en la que tambin se toman los iones como componentes pero que resulta mucho ms manejable que las de Scatchard. El coeficiente de actividad de un cation M se expresa como'^9: .
20
1nyM.= zM f y+ 2^ ma[BMa+ \ ^^) CMa^ +

a
+ 2!^ mceMc + L^ L^ mcma `ZM Bca +^ti1 C^ +^ M^) c c a 2

r .I' ZM ["^
+ 2L.^ ^ mama'(ZM Baa'+ Y^ Maa') + 2 L^ mcmcecc,
^' 1^
Para un in negativo habra que intercambiar aniones cationes.
por
La funcin f^ recoge las interacciones electrostticas de largo alcance y es funcin de la fuerza inica de la que tambin depende B, en contraste con las anteriores teoras donde todos los parmetros eran independientes de ella. El parmetro B recoge las interacciones dobles en un electrolito (p.e. Ba,,,^ representa las interacciones a-a, M-M y a-M) mientras que C da cuenta de las triples^'^ (p.e. CMa representa las interacciones M-M-a y a-a-M). î, B y B' son parmetros de mezcla, donde 9 est asociado a las interacciones entre dos iones del mismo signo (p.e. 8M^ da cuenta de la interaccin M-c, M-M y c-c, siendo ambos cationes) mientras 9' es su derivada con respecto a la fuerza inica (B' = dB/dI); este parmetro es, normalmente, omitido (excepto si hay mezclas de iones mono y trivalentes o
similares) con lo cual B se considera constante. Por otra parte ,y responde a las interacciones entre tres iones (p.e. ^GM^ representa las interacciones M-c-a, M-M-a y c-c-a). Si el principio de Bronsted fuese correcto estos ltimo trminos seran nulos; pues bien, de hecho a veces son pequeos o despreciables, pero hay casos en los que son imprescindibles para ajustar los datos exprimentales. Las interacciones triples entre iones del mismo signo no han sido tenidas en cuenta ya que son, normalmente, muy pequeas.
^'^ En muchas ocasiones en lugar de C se maneja el parmetro C, ambos estn relacionados por la expresin: C^= C^ / 2 ^ zM Zx ^'^ ,yx
21
Las expresiones para f^ y B en funcin de la fuerza inica son,

segn la teora de Pitzer:
(I.18)
f=A
^ +?In(1+1.2^n 1 +1.2 f 1.2
B= RN)+ ^^^ [1- (1+ 2^n exp(- 2^^1
(I.19)
La funcin B' se obtiene derivando B respecto a la fuerza inica. En el caso particu^lar de los electrolitos 2:2, en los que existe tendencia a la formacin de pares inicos, el ajuste de los datos experimentales hace necesario aadir un trmino a^2^ en la expresin de B.
Bibliografza
1. Pitzer, K.S., Theory: Ion Interaction Aproach in Pytkowicz R.M.(ed) Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C. Press Inc., Boca Raton, Florida, (1979) 2. Clegg, S.L., Whitfield, M., Activity Coefficients in Natural Waters, in Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, ed. Pitzer, K.S. 2nd Ed., C.R.C Press, Boca Raton, Florida, (1991). 3. Whitfield, M:, Activity Coefficients in Natural Waters in Pytkowicz R.M. Activity Coeffients in Electrolyte Solutions, C.R.C.Press, Boca Raton, Florida, (1979) 4. Whitfield, M., Mar.Chem.,l, 251,(1973) 5. Scatchard, G.,J.Am.Chem.Soc.83, 2636 (1961) 6. Wu, Y.C., Rush, R.M., Scatchard, G., J.Phys.Chem., 72(12), 4048 (1968), d, 73(6), 2047 (1969) 7. Friedman, H.L. Ionic Solution Theory, Interscience Publishers 1962, New York, London
22
8. Scatchard, G., Rush, R.M., Johnson, J.S., J.Chem.Phys., 74(21), 3786, (1970) 9. Pitzer, K.S. J.Phys.Chem., 77, (2), 268 (1973), Pitzer, K.S, Mayorga, G., J.Phys.Chem. 77, (19), 2300 (1973),
Zwitteriones: comportamiento y esbuctura
23
II. Zwiteriones: Comportamiento y Estructura

II.I. Comportamiento cido-base de los aminocidos
Kiister emple en 1897 el trmino zwitterion para describir la naturaleza de ciertos indicadores, tales como el naranja de metilo, que actan como si tuvieran un grupo cido y otro bsico completamente ionizados en cada molcula.l.
El hecho de que se forme este tipo de sustancias depende de la magnitud relativa de los pK de los grupos a ionizar: una molcula que tenga un pK, cido numricamente inferior al pKb bsico se presentaz en forma zwitterinica, en la extensin en que los grupos cido y bsico sean capaces de neutralizazse mutuamente. En las sustancias anfteras ordinarias la interaccin entre los grupos es menos importante ya que solo se ioniza un de cada vez. Adems, el comportamiento cido base es justamente opuesto en ambos tipos de sustanvias, as cuando un zwitterion o ion dipolaz se valora con cido el protn se aade al grupo carbox^lico, mientras que si se aade base se azranca el protn del grupo -NH3 (en el caso de un aminocido); por el contrario en una sustancia anftera al aadir cido se neutraliza el grupo bsico y viceversa. Una sustancia zwitterinica se cazacteriza, adems, por ser ms soluble en agua, menos soluble en disolventes orgnicos y tener un punto de fusin ms elevado que los compuestos relacionados con un solo grupo a ionizar. Aunque estos signos son insuficientes paza aseguraz la presencia de un zwitterion, ya que pueden
24
encontrazse en sustancias que aunque no sean iones dipolazes presenten un elevado momento dipolaz. Es precisamente el momento dipolar elevado, al menos 15 Debyes, otra caracterstica de este tipo se sustancias aunque hay que considerar con cuidado esta propiedad ya que se han encontrado series de zwitteriones aromticos con momentos dipolares mucho ms bajos, p.e. la p-metoxifenil glicina posee un momento dipolar de, aproximadamente, 2 Debyes'.
Una prueba ms efectiva la constituye el hecho de que el pK de uno de los grupos vara mazcadamente en relacin con el correspondiente a las molculas en las que solo aparece dicho grupo; as por ejemplo, para la glicina pK,=2.4 mientras que para el cido actico es pK=4.8 , ya que el grupo amino ionizado atrae la cazga y estabiliza el grupo aninico; de forma similar el grupo -NH 3 posee un pK de 9.7 mientras que paza el ester +H3N-CH2 COOCH3 el valor es 7.7 debindose esta diferencia a la cazga del grupo -COO^.
En el caso de aminocidos, una prueba interesante la constituye la detemiinacin de los pK en mezclas de agua con disolventes menos polazes, como alcoholes, cuyo efecto consiste en disminuir la ionizacin de sustancias neutras (sin sepazacin de cargas). Sin embazgo, debido a que el zwitterion presenta asimetra de carga el efecto del cambio de disolvente sobre la posicin del equilibrio es diferente; aunque, por otra parte, la proporcin molcula neutra-zwitterion aumenta al aumentar la proporcin de disolvente no polaz. Este hecho permite deducir la proporcin entre , ambas formas en los distintos medios; un ejemplo ilustrativo se da en la referencia 2, donde, adems, se hace patente la utilidad de los espectros de absorcin U.V. paza determinar la presencia y proporcin de zwitteriones.
Todos los posibles equilibrios entre zwitterion, forma neutra, catin y anin de un aminocido se representan en el siguiente esquema.':
Zwitteriones: comportamiento y estructura
25
ZA'ITERION KA . CA770N KB MOLECULA NEUTRA _ . KZ ^ ANION KD
Los valores de pK determinados experimentalmente paza sustancias zwitterinicas se denominan normalmente constantes macroscpicas porque describen solamente una combinacin de los procesos que realmente ocurren.
Si se representa el catin por R+, el anin por R^, el zwitterion por Rt, y la molcula neutra por R, entonces las constantes "microscpicas" del esquema anterior vienen dadas por'.:
KA _ (H+)(R*) (R+) _ (H+)(R ) (R*) KB _ (H+)(^ (R}) _ (H+)(R ) (R) KD
Kc
de donde la constante del zwitterion KZ puede expresazse como: KZ= (R*)_Ka=KD

(^ Ka Kc
(II2)
Las
constantes
macroscpicas
de
disociacin
determinadas
potenciomtricamente, K, y KZ, estn relacionadas con las anteriores por las expresiones:
26
Antecedentes Bibliogrfccos
K _ (H+)[(R^)+(R)] iR+
Ki =Ka+Ka
(II.3)
_( +)(R) ^ [(R*)+(R)]
1=1+1 Kz Kc Kn
por lo tanto conociendo K, y KZ y al menos una de las constantes microcpicas se pueden determinaz las dems. U form de obfener KZ se presenta cuando la sustancia absorbe en el ultravioleta; en estos casos, la experiencia demuestra que el espectro del ster es idntico al de la especie neutra del cido correspondiente; no obstante el del catin del ster y del cido son casi idnticos al del cido en su forma zwitterinica. El valor de KZ viene dado por:
KZ= Eester-Emor
Etnol -Ecation
(II.4)
donde Emo, se obtiene restando de la absorbancia en el punto isoelctrico la contribucin de las especies aninicas y catinicas presentes.
Ahora bien, muchas sustancias zwitterinicas no poseen espectros a partir de los que se pueda obtener KZ; en estos casos se suele suponer que la constante de disociacin, KE, del ster metilco o etlico correspondiente es aproximadamente igual a la de la especie neutra, con lo que KE= KB y todas las dems constantes se pueden obtener de las ecuaciones anteriores. En el caso de aminocidos alifticos la proporcin de la forma zwitterinica es abrumadora frente a la forma neutra, as paza la glicina es aproximadamente 250.000 veces mayor y para el cido E-aminocaproico 1.000.000 de veces^'^, como se desprende de los datos de la tabla adjunta3:
^'^cualquier inexactitud debida a la aproximacin mencionada (KE = KB) es despreciable dado el enorme valor de KZ
27
TABLA II.1.- Valores de pgZ calculados a partir de pgl, pS2 y p%E
SUSTANGIA glicina leucina ^B-alanina c y-amino-butrico c. e-amino-caproico pKl 2.31 2.34 3.60 4.23 4.43 pK2 9.72 9.64 10.19 10.43 10.75 pK^ 7.73 7.63 9.13 9.71 10.37 piî .. 5.42 5.29 5.53 5.48 5.94
II.II. Interpretacin terica de las propiedades de los iones dipolares

En la dcada de los treinta Kirkwood publica varios artculos en los que trata de desarrollar una teora que explique el comportamiento de los iones dipolares o zwitteriones en base a su peculiar estructura. Un interesante resumen de todas sus ideas al respecto viene recogida en la refencia.
Kirkwood supone que la desviacin de la idealidad de las disoluciones en las que se presentan iones dipolares se debe nicamente a la presencia de fuerzas intermoleculares de origen electrosttico en un disolvente considerado como un continuo sin estructura. El coeficiente de actividad del zwitterion, despreciando las interacciones mutuas entre los iones dipolares, se obtiene usando la ecuacin de Poisson-Boltzman tal y como se hace en la teora de Debye-H ckel. La expresin obtenida para un zwitterion de geometra esfrica, con radio b y momento dipolar , es:
28
Antecedentes Bibliogrficos logyi=-KR= I 2 _ b3a(P) a KR` 1nlODkT 3 DakT a(P)= 14^(P3-2) log(1+P)-(P3+2) log(1-P)-2P2^ 3p 2nNAê2 2
donde I es la fuerza inica, k la constante de Boltzman, T la temperatura, D la costante dielctrica, e la carga del electrn y p=b/a, siendo a la suma de los radios del ion y del zwitterion.
Si se considera el ion dipolar de forma elipsoidal con dos cargas +e y e situadas en los focos la expresin obtenida para el coeficiente de actividad es: logy^=-KR; I
2 n NAye4g(^.^R KR` 1n10(DkT)2 Jl o +1 ) 7l2 1 ô_ ( o - ) log ((^0-1) 2 -i
S(^^=^,0-2
donde 1/ao es la excentricidad del elipsoide y R la distancia interfocal (estas ecuaciones son exactas solamente en los casos lmite, esto es, cuando la excentricidad es cero o uno).
Otro modelo considera tambin la molcula elipsoidal pero con una distribucin de carga consistente en un dipolo puntual de momento dipolar , situado en uno de los focos y paralelo al eje mayor. Las ecuaciones obtenidas son:
Zwitteriones: comportamiento y estructura logy== -KRiI 3 ^ NAYe2u(^,o) 2 KR` 1n10(Dk7j2 R
29
(II7)
g u(^.^=9
1+2(^ _1)-i+g(â -1)-2 Z (^0-1) (^0+1) 1l0(7l0 -1) ^,o2 log (^ -1)
0
Kirkwood aplic las ecuaciones de los modelos esfrico y el primero de los modelos elipsoidales al zwitterion de la glicina y tambin a los pptidos di- y triglicina. Usando los datos experimentales de Scatchazd y Cohn' y sustituyendo el valor de las constantes universales, determin el valor de R, el cual parece indicar que la separacin entre las cazgas es menor que para la conformacin ms extendida de estas molculas, por lo que debe haber rotacin interna en las mismas. Utilizando el ltimo modelo, el mencionado autor calcul, nuevamente, a partir de datos obtenidos por Cohn, un momento dipolaz para varios a-aminocidos (glicina, a alanina, leucina, c. a-aminobutrico) de unos 13 D., valor que resulta ser aproximadamente igual paza todos ellos, como era de esperaz y que discrepa del valor 15 D.,que se obtiene paza la glicina empleando el modelo esfrico.
Por tanto, el coeficiente de actividad de los zwitteriones, al igual que el de las especies no cazgadass, se considera como una funcin lineal de la fuerza inica3. Sin embazgo, un caso interesante se presenta cuando las cargas del zwitterion estn lo suficientemente alejadas como para comportarse de forma independiente. Salvatore et al.b han estudiado las constantes estequiomtricas de algunos indicadores cido-base llegando a la conclusin de que el coeficiente de actividad de molculas como el naranja o el rojo de metilo en un electrolito 1:1, XK, pueden expresazse, segn la teora de Guggenheim, como:
30
1nYZ^=-ZA ^ +2caZ=,^-+aZ3,^.)r
l+l.sf
c^.g)
donde Zt representa al zwitterion. El comportamiento del ion dipolaz es el mismo que si se tratase de dos iones independientes de distinto signo, por lo que hay que consideraz la interaccin del ion positivo con el anin del electrolito, ^3^, y del negativo con el catin, (3ZK. No es dificil predecir que pueden surgir complicaciones al tratar de modelizaz el coeficiente de actividad cuando las cazgas no estn muy prximas, pero tampoco lo suficientemente alejadas como paza comportarse de forma independiente.
Un clculo aproximado de la distancia entre las cargas de un zwitterion fue llevado a cabo por Kirkwood para algunos aminocidos, basndose en OpK entre pK, y el pK del ster correspondiente. Los equilibrios cido-base de un aminocido pueden representazse como:
NH3
^H3
Kl
Rl-C -COOH ^Rl-C -COO- + H` ^ ^ R2 Rz
(II.9)
NH3
NHZ KZ (II.10)
Rl-C -COO- ^ Rl-C -COO- + H+ ^ ^ ^ ^
EI equilibrio del ster metlico correspondiente es:
31
NH3
^ Ri
NH2 Xi
^ Rz
Rl -C -COOMe ^ Rl -C -COOMe + H'
donde Me representa al grupo metilo. Entonces para la reaccin: + NH3
NH3
NH2
NH2
^12)
Rl -C -COOMe + Rl -C -COO - ^ Rl -C -COOMe +Rl -C -COO" ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ ^ la variacin de energa libre de Gibbs estndaz es:
OG=-NA^kTIn ^ Ki
(II.13)
y desde el punto de vista molecular representa el promedio del trabajo necesazio paza efectuaz la transferencia del protn entre las especies que figuran en la ecuacin II.12; dado que el ster y el aminocido presentan el mismo grupo bsico se puede suponer que la contribucin principal a OG se debe a la interaccin electrosttica entre el protn y la carga negativa del grupo cazboxlico, por lo que si R es la distancia entre ambos, se cumple que:
AG=- Ne2 D'R
(II.14)
donde D' es una constante dielctrica efectiva, que se puede calcular paza molculas esfricas y elipsoidales, tal como hicieron Kirkwood y Westheimer'4. Combinando las ecs. II.13 y II.14, se obtiene:
32
ApK=-
e2 1n10D'kTR
donde ^pK = pK2-pK2 =1n10 1nK2/1nK2.
Los resultados para R as calculados se encuentran en la tabla II.2: TABLA II.2.- Ihistancia entre los grupos amino y carboxtlico (R), calculados a partir de OpS y los correspondientes a la rotacin libre.
apK;
glicina ^4-alanina c.ti-amino-butrico c.e-amino-caproico 2.02 1.06 0.72 0.38 `R 4.05 5.15 6.10 7.85
3.56
4.19 4.72 5.63
donde RF representa el valor de la distancia para la rotacin libre en la molcula. A la vista de estos datos se puede deducir que las constantes de disociacin estn en entera armona con la hiptesis de los iones dipolares.
Bibliografa
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33
7. Edsall, J.T., Some Relations between Acidity and Chemical Structure (captulo 5), en Proteins, Amino Acids, and Peptides as Dipolar ons, Cohn, E.J., Edsall, J.T. Editores, Reinhold Publishing Corporation, New York, 1943
Parte Experimental
Procedimiento experimental
37
III. Procedimiento exper-imental

III.I. Clculo de las constantes estequiomtricas
Los equilibrios a considerar en un disociables son los siguientes:
AHZ ^ AH + H' (III.2)
aminocido con dos grupos
AH ^ A- + H' donde para simplificar
AH representa al zwiterion, AH2+ es la molcula del
aminocido protonada y A- es su anin. Las constantes correspondientes a estos equilibrios son: r (AH)(H`) = Y,^Yg- [AH][H`] _ Y, _
(^2 ) Y^2 [^2 ] -Kl Kl
K, _
(III.3)
r_ (A )(H`) = Y^-Ya [A ][H`] _ r, _ -K2 K2 [AH] K2 (A^ Y,,B
(III.4)
donde .KT representa las constantes termodinmicas del aminocido correspondiente que dependen de la temperatura, la presin y el disolvente; los trminos K', que representa las constantes estequiomtricas y Ky que recoge la influencia de los
38
Parte Experimental
coeficientes de actividad, dependen adems de la fuerza inica de la disolucin.
Cualquier mtodo que permita conocer con la suficiente precisin la concentracin . de al menos una de las especies presentes en el equilibrio, necesaria, junto con la composicin analtica de la
proporciona la informacin
disolucin, para calcular la concentracin de todas las especies restantes y por tanto la constante de equilibrio estequiomtrica. ^
Una de las tcnicas ms interesantes a este repecto es, sin duda, la valoracin potenciomtrica con electrodo de vidriol, que permite conocer en cada punto de la valoracin la concentracin de protones. Para ello es necesario llevar a cabo el calibrado de dicho electrodo con el fm de obtener la relacin entre el potencial que mide el pHmetro y la concentracin de protones del medio. Es interesante que el calibrado se lleve a cabo en funcin de la concentracin de protones y no de actividadesZ para evitar los errores inherentes al uso de la escala de pH.3 El sistema formado por la disolucin de trabajo y el electrodo de vidrio puede representarse segn el siguiente esquema:
Primer electrodo de referencia(interior del electrodo de vidrio)
Disolucin Problema
Segundo electrodo de referencia
donde v y 1 indican, repectivamente la membrana de vidrio y la unin liquida entre el puente salino y la disolucin de trabajo. Existen cuatro contribuciones a la diferencia de potencial medida entre los dos electrodos de referencia. Dos surgen de los electrodos de referencia, tienen signos opuestos y normalmente magnitudes comparables, aunque lo ms importante es que su contribucin es independiente de la
39
disolucin de trabajo y tiene, por tanto, un valor fijo, simbolizado aqu por E^. Por otra parte existen sendas diferencias de potencial generadas a travs de los lmites v y 1, que dependen de las actividades de las especies a cada lado de la membrana, y que se denotarn como E y E,, con lo que la diferencia de potencial total de- la clula se puede expresar como:
E^=E,+E^+E^ ^5^
En el caso del potencial de unin lquida se requieren cambios considerables en la composin de la disolucin de trabajo para que ste se altere significativamente, por lo que puede considerarse constante. En cuanto al electrodo de vidrio, se encuentra experimentalmente que exhibe una respuesta nernstiana, por lo que la ecuacin anterior puede reescribirse:
E^^=E,+E^+E+p log(H') (III.6)
donde E representa el potencial estandar del electrodo de vidrio, p=59.16mV es la pendiente nernstiana y(H+) representa la actividad de protones. Ahora bien, si la fuerza inica de la disolucin permanece constante, el coeficiente de actividad del protn tambin es constante y la ecuacin III.6 se convierte en:
E^^=E+p log[H7 E=E^+E1+E^+p logyR.
Una forma usual de llevar a cabo el calibrado es aadir base sobre cido, ambos de concentracin conocida, y fuerza inica ajustada. Antes del punto de equivalencia la concentracin de protones viene dada por:
40
Parte Experimental [Hr] _ cQV-cyv V+v
(III.8)
siendo c, la concentracin del cido, cb la de la base, V el volumen inicial y v el volumen aadido en cada punto de la valoracin. Despus del punto de equivalencia se cumple:
CbV -CaV
[OH-] _
(III.9)
V+v
como :
Kw=[H'][OH-] (III.10)
entonces:
[H'] _ K,,, _ Kw'( V+y)
(III.11)
[Oly-]
(cbv-caV^
Sustituyendo en la ec.III.7 las expresiones paza la concentracin de protones antes y despus del punto de equivalencia se puede obtener E, K,,, , y p, paza ambos ajustes. Resulta recomendable usar el intevalo p[H+] =2.3-2.9 en medio cido y p[H+] =10.8-11.3 en medio bsico, zonas en las que experimentalmente se demuestra que la respuesta frente a E es lineal.2
Operando de esta forma, de la representacin E vs. p[H+] se obtienen, normalmente, valores de p desviados de 59.16mV., que es el valor correcto para la pendiente nernstiana a 25C, tanto en medio cido como en bsico. Este fenmeno es debido a la combinacin de errores relativamente pequeos en el valor de las concentraciones de cido y base, que sin embargo provocan desviaciones importantes en el valor de la pendiente.Z4 Existen al menos dos formas de subsanar este problema, una de ellas descrita en la refL consiste en usaz un programa de ordenador que corrija
41
las concentraciones de cido y base hasta obtener la pendiente nersntiana, la otra consiste en realizar el calibrado aadiendo cido o base sobre una disolucin que contenga nicamente el electrolito inerte, evitando as la mencionada combinacin de errores4. Si se aade cido de concentracin c, sobre un volumen V de disolucin de electrolito inerte:
[g']- cv V+v (III.12)
el calibrado en medio bsico permitira, en principio, obtener KQ aunque con el calibrado cido es suficiente para conocer E. Utilizando este procemiento se constata que la pendiente coincide con la nerstiana dentro del error experimental.
Una vez determinado el potencial formal del sistema, E, la ec. III.7 permite calcular [H+] sustituyendo el potencial, E, medido en cada punto de la valoracin de la sustancia problema.
En el caso particular de un aminocido la valoracin se puede realizar de dos formas distintas^'^:
Valorar una disolucin de minocido con cido estandariZado, lo que implica la protonacin de la especie AH, ec.III.l y permite calcular pK,, y en otra experiencia aadir base sobre una disolucin de minocido, lo que supone arrancar un protn a la especie AH, ec.III.2 y permite calcular pKZ
Valorar con base una disolucin de aminocido protonado (aminocido + cido fuerte), con lo que se sustraen sucesivamente dos protones a la especie AH Z y se calculan ambos pK en una misma experiencia .
^ Todas las disoluciones empleadas en una misma experiencia tienen idntica fuerra inica, detenninada por un exceso de electrolito inerte y son de concentracin conocida.
42
Parte Experimental
En principio resulta ms interesante esta segunda opcin ya que permite un interesante ahorro de tiempo en la determinacin rutinaria de ambas constantes. El pK en cada punto de la valoracin se calcula a partir de los balances de cargas y de conservacin de materia aplicados a las especies presentes en los equilibrios.l
Se parte de un volumen inicial, Vo, de disolucin de concentracin co de aminocido y ao de cido XH, que se valora con una disolucin de base MOH, de concentracin cb. La condicin de neutralidad elctrica de la disolucin se expresa mediante la siguiente igualdad:
[^Z l +[H'] +[M'] =[X -] +[OH-l (III.13)
donde [X^] es igual a la concentracin inicial de cido HX que se aade al aminocido.
Por otra parte como el aminocido se encuentra en forma neutra y protonada se cumple:
co=[AH?l +[AH] (III.14)
Despejando los valores de [AH] y[AH2+] de las ecuaciones III.13 y 14:

[^s ] =ao+[OH-] -[H'] -[MOH]
[AH] =co-[AH2]
(III.lV7
sustituyendo cada concentracin en la expresin de K;, definida en la ecuacin III.3, se obtiene:

K'- H' co-ao-[OH-]+[H']+[MOH] 1-[ l ao+[OH-]-[H']-[MOH] (III.1,^
43
Teniendo en cuenta que el volumen en que estn contenidas todas las especies es el mismo, las concentraciones en el numerador y el denominador de la fraccin pueden sustituirse por el nunero de moles, o mejor, de milimoles de cada sustancia y el resultado es: - . . a-B K1=[H ] B
--
^
(III.18)
donde B viene dado por la expresin:

B=C+(Vp+Vy). ( KW -[H~] -CbNb
(III.19)
l [H']
[H+J =1 OÊ-EÎ59.16
(III.20)
siendo:
a= nmero de milimoles iniciales de aminocido
c= nmero de milimoles iniciales de cido
v= volumen inicial de disolucin en la clula de valoracin (ml)
vb = volumen de bitse aadido (ml)
cb = concentracin de base (moles/litro)
K,^. = producto inico del agua
Anlogamente para el segundo equilibrio la condicin de neutralidad elctrica de la disolucin y la de conservacin de la masa permiten establecer las siguientes ecuaciones: co=[A j+[AH] (III.21)
[X-]+[OH-J+[A^]=[H'l +[M']
(III.22)
Operando de la misma forma que para el primer equilibrio se obtiene:
44
Parte Experimental ^2 _[H .], A a-A (III.23)
donde el pazmetro A es:

A=cb^v+(Vo+v^ [H`]- Kw l c [H+] I (III.24)
Las ecuaciones III.18 y 23 permiten calcular pK; y pK2 de un aminocido a partir de los datos de la correspondiente valoracin potenciomtrica.
En cualquier caso el clculo de constantes a partir de valoraciones potenciomtricas se suele llevaz a cabo utillizando una gran variedad de programas de ordenador especialmente diseados paza ello. Uno de los que ms se ha utilizado en los ltimos aos es el MINIQUAD, cuya primera versin fue publicada en 1974.5
En realidad este y otros programas usan ecuaciones anlogas a las que se han deducido anteriormente, aunque con la fmalidad de aplicarlas de la forma ms general posible resulta ms adecuado manejaz las constantes de formacin acumulativas, que en el caso de un aminocido son:
A-+H`ÂH
RAA_ [^l [A-][H']

(III.25)
A +2H'ÂHz
pA^=
[î ]
: [A ] [H.]a
su relacin con las constantes ya definidas es:
45
o 1 R^Z s* KZ K1 _ o
logR,,g-PKi= (III.26) log ^,^2 PKi +pKs
Paza el caso general de una reaccin como:

a A+ b B+ c C+.... ^ A^bC^..... (III2^
las constantes de formacin sucesivas adquieren la forma:
R^^..._ [Al[Bl b[Cl `
[AaBbC^ -!
(III.28)
Para cada punto experimental de la curva de valoracin se puede escribir un sistema con las ecuaciones del balance de masa, para el caso general:
CA=[A^+â R^...[Al[B]b[Cl`...
^B=[^1+^ b R^...[A][Blb[c7`...
etc.
(III.29)
donde Ca, Cb, ... representan la concentracin de los reactivos A, B, .. .
El programa MINIQUAD calcula los valores de las constantes de formacin acumulativas, (3, que hacen mnima la suma de los cuadrados de los residuos entre las concentraciones analiticas observadas y las calculadas:
U=^ (C^^_C`^`)Z (III.30)
donde el sumatorio abazca las ecuaciones de balance de materia de todos los puntos experimentales.
46
Parte Experimental
EI programa lee los datos de la vloracin y las estimaciones iniciales paza las constantes. En cada punto de la valoracin la concentracin de una o dos especies se mide potenciomtricamente (si se usa un electrodo de vidrio se conoce en ^ cada punto la concentracin de protones gracias al calibrado, pero tambin se pueden usaz simultneamente otro electrodo y procesar la informacin conjuntamente), la concentracin de las restantes se conoce resolviendo el sistema de ecuaciones de los balances de masa. Estas concentraciones se usan como valores iniciales en el proceso de minimiâcin, que concluye con la obtencin de aquellos valores de las constantes de formacin que hagan mnima la suma de los cuadrados de los residuos de todas las ecuaciones de los balances de masa.
Existe una gran cantidad de programas que al igual que el MINIQUAD se utilizan paza el refinamiento de constantes potenciomtricas. Las diferencias se basan en el uso de distintos algoritmos para el proceso de minimiâcin, en la consideracin o no de un factor de peso estadstico paza disminuir la importancia de los puntos que vienen acompaados de un mayor error (p.e. los cercaos al punto de equivalencia) y adems en el hecho de que es posible definir la funcin U como suma de los cuadrados de los residuos de otras variables, como potenciales, volmenes, etc., en lugaz de concentraciones. De hecho no existe un criterio nnime en el trabajo potenciomtrico acerca de que funcin es la ms adecuada paza expresaz los residuos. Si como hace el MINIQUAD, se usan las concentraciones, se est suponiendo que los valores de potencial son exactos, en cambio si se definen los residuos en funcin de los valores de potencial, se consideran las concentraciones libres de error. Evidentemente ambos procedimientos son en parte incorrectos ya que ninguno de los parmetros es exacto y los errores aunque aleatorios se convierten en sistemticos paza todos los puntos correspondientes a una misma curva de valoracin. Por ello es necesazia una gran precaucin a la hora de expresaz las constantes calculadas por el programa con sus correspondientes desviaciones, ya que es frecuente que estas afecten a la tercera o cuarta cifra decimal del pK cuando son obtenidas para una sola curva
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de valoracin, mientras que si se analizan los datos de varias experiencias se encuentra un error mayor. Es, por tanto, recomendable calcular el promedio y la desviacin a partir de los valores obtenidos en distintas experiencias, ya que existen errores sistemticos inevitables en cada experimento. Como-consecuencia de^ estehecho -los errores en los datos de la curva de valoracin pueden dejar de presentar una distribucin normal. Algunos de los errores sistemticos que pueden aparecer en las determinaciones potenciomtricas ataen a:
a) el calibrado del electrodo, b) preparacin y valoracin de las disoluciones, c) uso de reactivos contaminados (particularmente disoluciones alcalinas carbonatadas), d) cambios de temperatura, e) la calidad del agua, fj cambios en la fuerza inica que afectan a las actividades, g) potenciales de unin lquida, e h) nperfecciones en la selectividad del electrodo. .
Obviamente la mejor solucin para evitar los errores sistemticos es un cuidadoso trabajo experimental, aunque nunca es posible eliminarlos por completo. El refmamiento de los parmetros nunca puede sustituir a un cuidadoso procedimiento experimental, o dicho de otra forma, aunque se pretenda extraer de los datos experimentales la mayor cantidad de informacin posible, esta informacin nunca ser mejor que los datos de los que ha sido obtenida.' De hecho se ha llegado a afirmars que el efecto de la propagacin de los errores sistemticos es, por s solo, capaz de causar las discrepancias que comnmente afectan a las constantes de formacin encontradas en bibliografa.
Por otra parte, si se tiene en cuenta, como se mencion anteriormente, que no todos los puntos experimentales de una valoracin tienen la misma importancia debera considerarse el peso estadstico de cada punto para disminuir la influencia sobre los parmetros optimizados de aquellos con mayor error experimental. Aunque
48
Parte Experimental
este factor de peso estadstico es normalmente ignorado, como en el caso del MINIQUAD, este hecho no parece preocupante por dos motivos: primero que, por lo menos apazentemente, las funciones de residuos basadas en las concentraciones que omiten el factor estadstico no difieren apenas de.las que lo onsideran y segundo que aunque se considere este factor no se obtienen buenos resultados a menos que los errores sistemticos hayan sido eliminados.9
III.II. Aparatos y reactivos

Todas las experiencias se llevaron a cabo en una clula con doble pared por la que circulaba agua procedente de un termostato a 25.00.1 y se haca
burbujear nitrgeno del 99.999% de pureza con el fm de eliminaz el C02 y agitar la disolucin. Para la adicin del valorante se us una bureta CRISON microBU 2031 con jeringas de 2.5 y 10 ml. , que estaba controlada por un ordenador TANDON PAC 286, por medio del programa ALIA10, que despus de cada adicin lea los datos procendentes del pHmetro CRISON micropH 2O02, conectado a un electrodo RADIOMETER GK2401C.
El programa utilizado, el ALIA, gobierna el proceso de valoracin, pero para ello es necesario especificar una serie de instrucciones. As, por ejemplo, el volumen de adicin puede ser fijo, si se aaden siempre volmenes iguales en toda la valoracin, o variable, si se aade un volumen v, cuando la diferencia entre los dos ltimos potenciales medidos es menor que un cierto valor y otro volumen ms pequeo v2 si es mayor, con lo cual se logra recoger pocos puntos cuando la diferencia entre potenciales sucesivos es pequea y tener ms puntos cuando esta variacin se va haciendo ms importante. Una vez aadido el valorante el ALIA efecta la lectura de datos del pH-metro, paza ello deja transcurrir unos segundos para homogeneizar la disolucin y estabilizaz la medida (8 segundos), pasado este tiempo
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se toma el primer dato y se espera nuevamente antes de tomar la siguiente medida, si ambas se diferencian en ms de 0.3 se toma otra y se repite la operacin hasta que la diferencia sea menor. A continuacin se realizan varias lecturas (se considera que cinco o seis son suficientes) a intervalos de -tiempo regulares (cada- 4 segundos) y se hace la media entre stas, si la primera dif'iere ms de 0.1 de la media se desprecia, se toma otra y se repite el proceso sucesivamente hasta que sea menor. El valor de f.e.m. as obtenido es el que recoge el programa en un archivo de datos que crea para cada valoracin. Los parmetros antes indicados pueden ser cambiados, aunque para las experiencia llevadas a cabo se ha comprobado que permiten una buena estabilizacin de la medida.
El programa ALIA es capaz adems de crear para cada experiencia un archivo de datos con el formato adecuado para introducir en el MINIQUAD y obtener las constantes estequiomtricas ( tambin puede exportar los datos con el formato adecuado para introducir por ejemplo en el MAGEC) y permite, a su vez, la visualizacin de la grfica f.e.m. vs. volumen durante el transcurso de la valoracin.
En las siguientes tablas se muestra un resumen de todos los aparatos y reactivos utilizados: TABLA III.1. Reactivos utilizados
`REACTIVOS Sales para ajustar la fuerza inica aminocidos KNO,, KBr, KCl MERCK, p.a. ioduro de tetraetil amonio FLUKA glicina, L-valina, a-alanina, ^-alanina, c.y aminobutrico :NTERCK c. e -aminocaproico SIGMA CARLO ERBA, 37%, p=1.186, grado reactivo MERCK, p.a. CARLO ERBA, p.a.
HCl NaOH, KOH Ftalato cido de potasio
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Parte Experimental
TABLA III.2. Aparatos utilizados

APARATOS
Microbureta automtica pH-metro Electrodo Ordenador Termostato Tratamiento previo del agua Equipo de medida de densidades CRISON microBU 2031, con jeringas
HAMILTON de 2.5 y 10 ml. CRISON micropH 2O02 RADIOMETER GK2401 C(electrodo de vidrio combinado)
TANDON DATA Pac-286
TECTRON 3473100
Sistema Millipore-Mi11iQ
Bidestilador Aquatron A4D
Densmetro AP PAAR DMA 60
Clula de densidad AP PAAR CMA 602
Termostato HAAKE F3
Termmtro digital AP PAAR DT 100-30
Se explican a continuacin el procedimiento detallado que se ha seguido para la realizacin de los calibrados y valoraciones, as como los hechos experimentales ms destacados que se han observado.
III.III. Calibrados
Como ya se mencion en el apartado sobre el clculo de las constantes estequiomtricas la mejor manera de llevar a cabo los calibrados es aadir cido fuerte de concentracin conocida y fuerza inica ajustada, sobre una disolucin que contenga nicamente el electrolito inerte. La relacin entre la concentracin de protones y el potencial medido por el pHmetro es: E = E + p log[H'] (III.31)
51
(III.32) [g^ V v 0
El calibrado. se realiza aadiendo cido desde el volumen que corresponde a p[H+] =2.9 al conespondiente a p[H+] =2.3, calculados a partir de las frmulas anteriores. Normalmente se parte de 40m1. de disolucin del electrolito inerte sobre la que se aaden de 0.04 en 0.04 ml del cido para obtener el suficiente nmero de datos con los que realizar el ajuste de E vs. p[H+] por mnimos cuadrados y calcular E y p. El potencial formal del sistema influye de manera importante en los clculos posteriores ya que cualquier error en su valor afectar de forma sistemtica a las constantes calculadas usando este calibrado (tal como se indic en el apartado anterior). Un problema que surge en el clculo del potencial formal y la pendiente es debido al estrecho mrgen de p[H] en el que la respuesta del electrodo es lineal.2 Un ejemplo tpico de los calibrados realizados se recoge en la figura III.1:
FIGURA III.1. Calibrado en medio cido
S E ^ w
^-i
1.00
1.50 P[H+^
2.00
2.50
3.00
52 Parte Experimental
No es dificil deducir que una desviacin relativamente pequea con repecto a la pendiente de Nernst va a inducir un cambio signifacativo en la ordenada en el origen, esto es, en el potencial formal del sistema, el cual introducido en el MINIQUAD va a producir un error sistemtico en todas las constantes. Una forma interesante y sencilla de ver como afecta el error en E(m^ a las constantes es tomar los datos de una valoracin y recalcular las constanes sustituyendo E por E+1, E + 2, ..., E + 4 y por E-1, .. , E-4, tl como se aprecia en el ej emplo de la figura III.2,
FIGURA III.2. Variacin de la curva p%'-I al cambiar el potencial formal del sistema de forma sistemtica. MQCLA NITRATO-CLORURO
en la que se evidencia la gran influencia que ejerce un pequeo cambio en E. Se ha de tener especial cuidado en la realizacin de los calibrados y es aconsejable despreciar aquellas experiencias en las que haya una desviacin ms o menos
53
importante de p=59.16 para evitar el error en E. En la siguiente grfica se recogen los datos de los calibrados llevados a cabo con el mismo electrodo en KN03 a diferentes fuerzas inicas, a lo largo de varias semanas, en diferentes aos.
FIGURA III.3. Potencial formal obtenido de los calibrados en BN03 en medio cido en diferentes momentos con el mismo electrodo
386.0 383.0 380.0 > E 377.0 + 374.0 371.0 +

00
o Feb.-Marzo 1992 o Mayo-Junio 1992 e 1993 01994

0 0 8
8 o
0 0 e
g e
e e O
o 0
368.0 ^ ^ ^ '-^-^ 0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 M(N03K)
La pendiente ms baja que se ha usado para obtener el valor medio de E en estos calibrados es 58.4 y la ms alta 60.5 ( en el apndice A se recogen los valores de todos los calibrados realizados en nitrato potsico).
Por otra parte, los calibrados a una misma fuerza inica se repitieron en das diferentes, observndose que en un corto plazo de tiempo, das, o semanas, no se aprecian cambios significativos, pero s a lo lazgo de varios meses. Teniendo esto
54
Parte Experimental
en cuenta no parece imprescindible realizar calibrado y valoracin en el mismo momento, y adems pazece correcto realizaz la media de todos los calibrados a una misma fuerza inica y usazlos paza refmar todas las constantes a esa misma fuerza inica, siempre que ambos hayan sido obtenidos en un plazo de tiempo razonable (das o semanas). Se ha apreciado, adems, que la dispersin de los valores para ferzas inicas bajas, I_<0.1 molaz, es mayor, con lo que el posible error en las constantes sera ms importante (esto no se refleja en la grf'ica al haber tomado valores medios para E).
Por otra parte los calibrados realizados en medio bsico son menos satisfactorios que los que se llevan a cabo en medio cido, obtenindose mayores divergencias respecto a la pendiente nernstiana, que en medio cido.4
III.IV. Valoraciones
Las valoraciones se realizan aadiendo NaOH o KOH 0.1 M sobre una disolucin 0.01 M de aminocido con aproximadamente igual concentracin de HCI, de tal forma que el aminocido se encuentra como AH2+ y la base le sustrae sucesivamente ambos protones.
Un caso tpico de curva de valoracin as obtenida se aprecia en la figura III.4:
55
FIGURA III.4. Curva de valoracin de la L-valina en BBr con I=I.6M.

VALORACION 1=1.6 m BrK 300
240
180
120
60
S
E ^
0
-O
-120
-180
-40
-300
0 2 4 6 V(ml) 8 10 12 14
Los valores E, v de cada experiencia, junto con las concentraciones de reactivos, el potencial formal del sistema y un valor aproximado de las constantes son introducidos en el MIlVIQUAD paza obtener el vaior exacto de dichas constantes. Para el caso particulaz de un amino ido la forma de los archivos introducidos en el programa viene recogida en el apndice B, tanto para el caso en que se calculan los dos pK en una misma experiencia, como cuando se calculan separadamente.
Cuando se introducen los datos en el MINIQUAD se eliminan aquellos ms cercanos al punto de equivalencia, que vienen afectados por un mayor error. Si se calcula el pK en cada punto con las ecuaciones III.18 y 23, y se representa frente al volunen, se aprecia como estos puntos son los que ms se desvan:
56
PaRe Experimental
FIGURA III.S. Representcin del pS' en cada punto de la valoracin calculado a partir de las ecs. III.18 y IIL23 para la L-valina en BBr I=1.0 M.
Valoracion 1=1M BrK ([CIH]=0.00968, [NaOH]=.0886, [val]=0.00915)
10
8+
6 -F
Y a
4+
4 V(ml)
Una causa de error en la determinacin de constantes es, como se mencion en el apartado III.I, el error en la concentracin de las especies utilizadas. Para comprobar que las concentraciones de cido y base son las correctas se puede representar la primera derivada, DE/OV, calculada numricamente, frente al
volumen. La presencia de un punto de inflexin que ha de coincidir con el punto de equivalencia, supone la presencia de un extremo, mximo o mnimo, en la primera derivada; para la segunda se espera que DE/^V =0, en ese punto. La primera y segundas derivadas para una valoracin tpica, se representan en la figura III.6:
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FIGURA III.6. Representacin de la curva y primera y segunda derivadas de una valoracin potenciomtrica
-1eo+
. .,
-a3o
..^^
350 3.70 390 4.10 4.30 ^50 4J0 bY0 ^10 5.30 5.50
î^
Por ltimo otro factor interesante a tener en cuenta a la hora de determinar constantes estequiomtricas se evidencia cuando se trabaja en disoluciones de bajas fuerLas inicas, I<_0.1 M. En este caso la respuesta del electrodo es ms lenta, sobre todo en las inmediaciones del punto de equivalencia, as p.e. una
58
Parte Experimental
valoracin a I=0.1 M. para cualquiera de los aminocidos usados dura aproximadamente tres horas, en lugar de las dos horas que dura en igualdad de condiciones a fuerzas inicas ms altas. En este caso el realizar la determinacin de los dos pK' por separado puede llegar a suponer un ahorro de tiempo.
Ili. V. Determinacin del pKW

La relacin entre la concentracin de protones y el potencial medido por el pHmetro cuando se aade cido sobre una disolucin que contiene nicamente el electrolito inerte viene dada, tal como se explic en el apartado anterior, por las expresiones III.31-32. Si en lugar de aadir cido, se aade base, no se conoce la concentracin de protones sino la de hidroxilos, con lo que resulta conveniente expresar E en funcin de [OH^] a partir del producto inico del agua; como K,,,=[H+]/[OH^], entonces:
K` w
E= E + p log[H'] = E + p log
[OH-] E= E - p pKw- p log[OH-] =E1 - p log[OH-] donde:

E=E1 - p pKw
(III.31)
(III.32)
de donde despejando se obtiene el producto inico del agua:

pKw _ E1-E P (III.33)
59
Bibliografa
1. Albert, A., Serjeant,.E.P., The Determination of Ionization Constants, A Laboratory Manual, 3ef Ed. Chapman and Hall, London, New York, 1984. 2. May, P.M., Williams, D.R., Linder, P.W., Torrington, R.G. Talanta, 29, 249 (1982). 3. Illingworth, J.A., Biochem.J., 195, 259 (1981). 4. Fiol, S., Arce, F., Armesto, X.L., Penedo, F., Sastre de Vicente, M., Fresenius J.Anal. Chem. , 343, 469, (1992) 5. Vacca, A., Sabatini, A., MINIQUAD and MIQW Two Approaches for the Computation of Formation Constants from Potentiometric Data Cap. 5; May, P.M., Williams, D.R., MAGEC, A Program for the Definitive Calibration of the Glass Electrode, en Computational Methods for the determination of Formation Constants, Plenum, New York, 1985. 6. Casassas, E., Tauler, R., Filella, M., Anal.Chim. Acta, 191, 399 (1986) 7. Casassas, E., Filella, M., Tauler, R., Anal.Chim. Acta, 191, 413 (1986) 8. May, P.E., Murray, K. Talanta, 35, (12), 933 (1988) 9. May, P.M., Murray, K., Talanta, 35, (12) 927, (1988) 10. Penedo, F., Arce, F., Resultados n publicados
Dependencia de las constantes ...
61
IV. Dependencia de las constantes de equilibrio de la L-Valina con la fuerza inica segn los forntalismos de Guggenheim, Scatchard y Pitzer
IV.I. Aplicacin de los modelos de interaccin a los equilibrios de un aminocido
Las constantes termodinmicas de equilibrio estn relacionadas con las estequiomtricas por medio de los coeficientes de actividad, segn se recoge en la siguiente expresin:
K` =KT ^ (y,)c^d (IV.1)
donde i se refiere a todas las especies que aparecen en el equilibrio considerado, v; son los coeficientes estequiomtricos y ry; los coeficientes de actividad, que, en general, son funcin de la fuerza inica de la disolucin.
A partir de la ecuacin N.1, sustituyendo ry; por la funcin de la fuerza inica correspondiente segn los modelos de Guggenheim, Scatchard y Pitzer se obtiene la expresin de pK' vs. I, para los dos pK' de cualquier aminocido.
62
Parte Experimental
Tomando logaritmos decimales en las ecs. 1II.4 y III.S, se tiene: PKi PKi +logY,^+logy^.-logy,^2= 1 T -PKl +1n10^Y^+^Yg.-lny,^^
(IV 2)
PKz pKi +logyA-+logYX.-logy,^= PKiT + 1n10^Â + ^Y^.-lny,^x^
(IV.3)
Los parmetros conespondientes a las distintas teoras se han calculado para la L-valina a partir de las constantes estequiomtricas determinadas experimentalmente en disoluciones en las que KCl y KBr se usaron para mantener la fuerza inica constante en las distintas experiencias. Se determinan, primeramente, las expresiones para los pK; en los tres modelos, para, a continuacin, exponer los datos experimentales obtenidos y el resultado del ajuste de dichos datos a los modelos propuestos.
IV.I.I. Modelo de Guggenheim

Los coeficientes de actividad que aparecen en las ecs.IV.2 IV.3 son segn la teora de Guggenhen, ec.I.9, en un electrolito 1:1, de frmula, XK: 1ny^2 = -A (IV.4)
l+^f
^
l+cf
a,,Az,x
1nyH. _ -A
+ 2lan.x-
cIVs)
1nyA_ _ -A
^ + 2IpA-^. l+cf
(^^
63
1nYZ = 2^.I
^^
donde Z representa el zwitterion del aminocido y las otras especies se representan con las mismas letras que las indicadas anteriormente, (ver ecs. III.1 y III.2); en cuanto al valor de c, puede tomazse c=1.5, tal como se indica en la ref.l El coeficiente de actividad del zwitterion se ha considerado igual al de una molcula neutra, sin ninguna carga, tal como se indic en el apartado II.II.
S^stituyendo las ecs. N.4 a IV.7 en N.2 y N.3, se obtiene:

pKi pKi+sl I
(N8)
PKi PKiT -2A'
^ +e21 l+cf
^9)
siendo:
E' 1n10^^-p`âzx +aa'x-^
(IV.10)
__ 2
E2 ln1O^-^,
+RA-^.+^3A,x-^
(IV.11)
donde A' =A/ln 10.
Por lo tanto la representacin pK; vs. I debe ser una lnea recta, mientras pKz vs. I presenta una forma diferente debida a la presencia del tnoaino que contiene la ley lmite de Debye-Hiickel.
64
Parte Experimental
IV.I.II. Modelo de Scatchard

Considerando el contrain de la especie AH2, que debe ser el Cl- ya que se aade HCl paza protonar al aminocido, la constante para el primer equilibrio puede escribirse como:
* Y(^ "Y t(H^ T KI =K1
La modificacin anterior se realiza porque en la tera desazrollada por Scatchazd en los aos 60 se usan coeficientes de actividad inico medios. A partir de la ec. I.10, los coeficientes de actividad que figuran en la ec. N.12, son:
i o 21nY t(XH) =AxFr+axg+Bxx,^rx-Bxx,JCx o i 21nY t(AH^ =A,^^+a^+B^2^-B^z^
(1V.13)
(IV. 14) (IV.1^
InYZ=ho1
Sustituyendo las ecs. IV.13 a IV.15 en la ec.N.12, se obtiene: 1nKi=1nKi +1nYZ+A^-A^^+Bi^xxx-B ,^x^x,xx+B,'^r^xxx-B^^ ^.l)
Si A y B se expresan en funcin de la fuerza inica ecs. I.11-I.16, tomando hasta los trminos con I^, y considerando a, =1.5 para todas las especies, el resultado es:
65
A1
^1
(IV.1^
pKl PK' donde:
1n101 21n10^
A1=a;^^+b^^^-a^^-b^^^-ho
(IV.18)
B _ac2^
i- ^rZx- ^ Ax2x,xa- xx,xx
ac2>+bro,^^
bco,2> +bc^,^^
ax,^r- ar^^c,xg
bc1,^^
(IV.19)
La segunda constante puede formularse, anlogamente: T . YA-YH- YZ x Yt(A^ YZ
KZ =K2
K2
(IV.20)
donde ry+(AH) es el coeficiente de actividad inico medio de los iones A- y H+ , y no de la especie zwitterinica neutra AH, que por este motivo se ha simbolizado como Z, y no como AH, para evitar posibles confusiones (nicamente en este apartado). Operando de igual forma que para pK; se tiene: r s PKi pKi + AZ BZ + In101+ 2 1n10^ ln 10 (1 +a^^n 2 Sf (IV.21)
donde:
A =aî^+bco,i> +aci)_h 2 ax ax,arx ^c o B _ac2>+2aca)+bco,^) _bci,^> ^t Aa,xg Aa,xg 2 - ,ur
(IV.22)
(IV.23)
En este caso pK; vs. I es una funcin polinmica de la fuerza inica, mientras que en el segundo aparece nuevamente la ley lmite modificando la forma de
66
Parte Experimental
la curva pK; vs. I.
IV.I.IIL Modelo de Pitzer

Ls coeficientes de actividad de las ecs. IV.2 y N.3, segn la teora de Pitzer, son: 1nYH. f +2I(B^+I C^) +I2(B ^+C^) +I(2 9^x+1 t^r^) (IV.24)
^YAHZ
+21 (BxAx2 +ICarAxz) +l(B'êrc+C^) +I (2 6Ax^r+I ^r,ur^rx)
(IV2^
1nYA - f +21 (BAx+I C,^x) +IZ(B xx+Cxx) +1 (2 6,ur+l Vr,ixx) 1nYz=2^.zKIx+2^,ÎX=2llzxx
(IV26)
(IV2^
donde el coeficiente de actividad del zwitterion se considera como el de una especie neutra, sin asimetra de carga.Z
Sustituyendo de igual forma que en los anteriores modelos y tomando la funcin B de la ec.I.19, se obtiene:
* T 21 ( 0 0 g 1 1
PKi pKi
- ln lOLRxAx2-^z,xx-px^cJ- ln lOLRxAx2-Rr^^
(N.28)
2^
21
PKz pKi + ln 10 + ln
lOLRAx-^z,xx+Rx^c^+
(IV.29)
+1n10LR,1lx+px-Rxx^+ln lOR^ e-^ donde la funcin g es: S=1-(1 +2fne-Zf (IV.30)
y los parmetros 6, >G y C, han sido omitidos, ya que, en general, son despreciables
67
La forma matemtica de las curvas pK" vs. I, es para ambos equilibrios ms compleja que en los dos modelos anteriores, debido a los trminos exponenciales que aparecen a consecuencia de la dependencia de B con la fuerza inica, adems de lo cual Pitzer aade un nuevo trmino a la ley limite (ver ec. I.18). --
IV.II. Resultados experimentales y discusin

Las constantes estequiomtricas determinadas tal como se indica en el apartado III.I, son:
TABLA IV.1. pg; de la L-valina a distintas fuenas inicas de gCl, ambos valores se expresan en molalidad I(KCl) 0 0.10 0.25 ' pK; 2.286 2.303 2.252 pK; 9.719 9.548 9.457
0.51
0.72 1.03 1.25 1.46 1.68
2.280
2.326 2.282 2.280 2.305 2.352
9.480 .
9.474 9.469 9.480 9.511 9.518
68
Parte Experimental
TABLA IV.2. pg; de ta L-valina a distintas fuezas inicas de KBr, ambos valores se expresan.en molalidad
Ì(KBr) ,< 0 0.25 0.51

0.72
PK^ 2.286 2.297 2.231

2.347
'> PKz '' 9.719 9.487 9.461

9.482
1.04
1.26
2.361
2.377
9.497
9.528
1.48 1.70
2.399 2.429
9.550 9.563
El error medio de los valores de pK' est coinprendido enue 0.005 y 0.050
Los valores de pKT se han tomado de la ref.', dado que al no haberse determinado el pK; a fuerzas inicas lo suficientemente bajas como paza poder extrapolar con un mnimo de fiabilidad, se consider ms adecuado utilizaz los valores termodinmicos ya publicados por otros autores. Por otra parte, las constantes fueron determinadas en la escala de molaridad y las transformaciones a molalidad, fueron realizadas utilizando datos de densidadess, a partir de la relacin entre molaridad(c) y molalidad(m) expresada por la ecuacin (ver apndice C)6:
(IV.31) P-^M;PM; i
donde el sumatorio se extiende a todas las especies i en disolucin, p es la densidad y PM la masa molecular. La relacin entre pK'ma^ Y PKMolaz es:
pKm =pKM +log^p- ^ MPM^
(IV.32)
69
Los valores de las tablas N.1 y 2 se ajustaron a las distintas funciones de la fuerza inica empleando el programa de clculo estadstico SOLO' y se calcularon los parmetros de interaccin que se tabulan a continuacin:
TABLA IV.3. Parmetros de interaccin y pR'^ de la Irvalina en %Cl y gBr segn la teora de Guggenheim, cakulados a parlir de las ecs.N.8-Il
PKi KCI KBr 2.261 f0.018 2.283 f0.008
0.090.04 0.180.02
0.042
0.015
PK'z
KCI KBr 9.734 0.011 9.7290.007
Ez
0.32 0.02 0.400.02 0.020
0.013
TABLA N.4. Par^metros de interaccin y pRT de la L-vlina en KCI y gBr segGn la teora de Scatchard, calculados a partir de las ecs.IV.l7 y 21 KCl pK; A, B, ol 2.281 t 0.024 +0.09 0.16 -0.21 t 0.17 0.042 KB 2.287 t 0.012 -0.15 0.07 -0.04 0.08 0.016
KC t pKZ AZ 9.726 0.015 +0.400.09
KB 9.722 0.010 +0.460.07
BZ
02
-0.090.10
0.024
-0.07 0.08
0.013
70
Parte Experimental
TABLA IV.S. Parrmetros de interaccin y p^ de la Uvalina en gCl y gBr segn la teora de Pitzer, calculados a partir de las ecs.N.28-29 KCl ' pK; 2.290 0.032 K#3
2.2860.014 0.390.16
^ ^2
0.70 f 0.37
0 ax^rZ-^z,xx
ol
0.060.07
0.042
0.100.03 0.016
KCl ; pK2 9.722 0.019 0.540.21
KB 9.721 f 0.012 0.400.14
R^
0 Rag-^z,xa
a2
0.01 0.04
0.024
0.04 f 0.03
0.014
Como se puede apreciaz existen elevados errores en algunos de los pazmetros, aunque el error del ajuste (v, y a2 para el primer y segundo equilibrios respectivamente) es pequeo y en consecuencia el error en los valores de pK' est dentro del mazgen aceptado para este tipo de medidas segn textos especializados (0.06 unidades de pK')g9^10. Recientemente se ha abordado el estudio de la problemtica que plantean los errores mediante la utilizacin de un modelo de regresin alternativo al de mnimos cuadrados ordinarios denominado regresin ridgell-la
Otra conclusin que se desprende del anlisis de Ias tablas anteriores y
71
de la representacin grfica de la figura N.1 es qu cualquiera de las tres teorias es buena para explicar el comportamiento experimental., sin que ninguna se manifieste claramente mejor que las otras.
FIGURA IV.1. Representacin pg; vs. I para la IrValina en los electrolitos indicados
2.50 2.45 2.40 2.35 t 2.30 2.25 2.20^ 0.00 i 0.25 i 0.50 + 0.75 m (CIK) ^ 1.00 i 1.25 i 1.50 ^ Ptos. exp. ---- Scatchard ----- Pitzer - Guggenheim
._-^ _-
2.50 ^ ptos. exp. ---- Scatchord ^---^ Pitzer -Guggenheim
2.45
2.40 +
Y a
2.35 +
. i
2.251 0.00
i 0.25
i 0.50
f i 1.00 0.75 m(BrK)
i 1.25
i 1.50
^ 1.75
72
9.80 I 1 9.70 ^
Parte Experimental
< ptos. exp. - Pitzer ---Scatchard ----- Guggenheim
9.60+1
9.50 +
9.401 0.00
I 0.25
E 0.50
I 0.75 m(CIK)
I 1.00
F 1.25
! 1.50
9.80 ^ ptos.exp. - Pitzer -- Scatchord ^--- Guggenheim
9.70 ^
Y 9.60 a
t.
^' ^^b.^
9.50
9.40 I 0.00
I 0.25
i 0.50
I 0.75
^ 1.00
I 1.25
I 1.50
1-^ 1.75
m(BrK)
Por otra parte se observa una destacable diferencia en las curvas pK; vs. I: en la grfica pKz vs. I aparece un importante incremento en pK2 cuando I-^0, mientras que tal comportamiento no se observa para pK^. Para entender esta diferencia resulta interesante estudiar la forma de la derivada de la funcin pK;(I) cuando IÔ. A partir de las ecuaciones N.28 y IV.17 se obtiene, respectivamente, para los modelos de Pitzer y Scatchard:
Dependencia de tas constantes ...
73
i 2(i 0 d(PRi )__ 2 f 0 ln lOlRxarr2-^z,xg-Rxx^-1n10LRxarr2-arrx] dl r-o
(IV.33)
d(PKi ) _ _ 1=i dl ln 10 r-o
(IV.34)
En la funcin pK2(I) apazece un nuevo trmino en cualquiera de las tres teoras, en la de Pitzer es fY (ec..I.18): (IV.35)
f =-A
^ +? ln(1+1:2^^ ^ 1+1.2 f 1.2
cuando I^0 se cumple: dfdpKi* --^ ^ _-^ I-0 dl r-0 dl (IV36)
Paza las otras dos teoras la nueva funcin es:

f 1 +a f (IV.377
que es la misma tanto en el desarrollo de Scatchazd como en el de Guggenheim ya que A=-S = A'/1n10, como S<0, entonces se cumple, tambin, la ecuacin IV.36, lo que implica un importante crecimiento del pK2 a fuerzas inicas bajas.
De esta forma queda explicada la diferencia de comportamiento entre los valores de pK; de la L-valina, pero surge la interesante cuestin de cuales son las posibles formas que se pueden encontraz en las representaciones pK; vs. I paza los dos tipos de equilibrios que se presentan en un aminocido sencillo, en base a las
74
Parte Experimental
funciones de la fuerza inica que se proponen en las teoras de interaccin. Un anlisis matemtico sobre las distintas formas de las . curvas constituye el contenido del apartado siguiente.
Bibliografa
1. Scatchazd, G.,J.Am.Chem.Soc.83, 2636 (1961) 2. Pitzer, K.S., Theory: Ion Interaction Aproach in Pytkowicz R.M.(ed) Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C. Press Inc., Boca Raton, Florida, (1979) 3. Pitzer, K.S., J.Chem. Phys., 77(2), 268, (1973) 4. Robison, R.A, Stokes, R.H., Electrolyte Solutions, Butterworhts, London, (1959) 5. C.R.C. Handbook of chemistry C.R.C. Press 1986-1987(1986) 6. Whitfield, M., Activity Coefficients in Natural Waters in Pytkowicz R.M. Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C.Press, Boca Raton, Florida, (1979) 7. Statistical Package SOLO. Distributed by BMDP Statistical Softwaze Inc. Version 03 8/88. 8. Albert, A., Serjeant, E.P., Determination of Ionization Constants, Chapman and Hall, Cambridge, (1984) 9. Herrero, R. , Armesto, X. L. , Arce, F. , Sastre de V icente, M. , J. Sol . Chem. 21, (11), 1185,(1992) 10. Fiol, S.,I. Brandaziz, Armesto, X.1., Arce, F., Sastre de Vicente, M., Ann. Chim. (Rome), 83, 175, (1993) 11. Fiol, S., Tesis Doctoral, Aplicacin de la ecuaciones de Pitzer a equilibrios cido-base: Estudio de la ionizacin de aminocidos en agua de mar sinttica, Universidad de La Corua, Marzo, 1994 12. Fiol, S., I. Brandaziz, R. Herrero, Vilario, T., Sastre de Vicente, M., Ber. Bunsen. Phys. Chem., 98, (2), 164 (1994). 13. I. Brandariz, Fiol, S., Herrero, R., Vilario, T., Sastre de Vicente, M. J. Chem. Eng. Data, 38, 531, (1993) 14. Herrero, R., I. Brandariz, Fiol, S., Vilario, T., Sastre de Vicente, M.E., An. Qum. 89, 602, (1993)
75
13. I. Brandariz, Fiol, S., Herrero, R., Vilario, T., Sastre de Vicente, M. J. Chem. Eng. Data, 38, 531, (1993) 14. Herrero, R., I. Brandariz, Fiol, S., Vilario, T., Sastre de Vicente, M.E., An. Qum. 89, 602, (1993)
Anlisis matemtico...
V. Anlisis matemtico de la forma de las curvas pK* vs. I

A la vista del diferente comportamiento observado en las representaciones pK' vs. I, para los dos tipos de equilibrio que se presentan en un aminocido con dos grupos disociables, tal como la L-valina, se ha considerado interesante analizar de forma ms general los distintos tipos de curvas que pueden obtenerse en las grficas pK' vs. I como consecuencia de la aplicacin de distintas teoras de interaccin inica a equilibrios cido-base.l Los dos equilibrios a considerar aparecen en las ecs. III.1 y III.2, y las funciones pK; vs. I fueron deducidas en el apartado anterior utilizando los modelos de interaccin inica de Guggenheim, Pitzer y Scatchard. El anlisis se centrar en la forma que pueden adoptar las representaciones de las curvas N.28 y N.29, segn la teora de Pitzer; para las de Scatchard y Guggenheim el comportamiento deberia ser ms sencillo ya que para pK; vs. I, es simplemente un polinomio en la ferza inica. Para el segundo equilibrio el comportamiento debera ser ms limitado que el del modelo de Pitzer, ya que en este aparece un trmino ms como resultado del parmetro responsable de las interaciones dobles y que, adems, es dependiente de la fuerza inica.
En las referencias2' se describen otras simulaciones de las ecuaciones
78
Parte Experimental
de Pitzer aplicadas a equilibrios cido-base que analizan la influencia de errores sistemticos en la fuerza inica, errores aleatorios en el valor de pK', nmero de puntos empleados en el ajuste de pK' vs. I, as como el intervalo de fuerza inica considerado y el efecto de la multicolinealidad del modelo.
V.I. Comportamiento pK vs. I

El primer equilibrio a considerar es: ^2 # ^ + g+ (V.1)
La constante correspondiente es:

T_ (^(H+) = YaaYs- [^][H+] = v, _ Ki Ki Ki (î ) Yî ^î l
(V2)
Despus de tomaz logaritmos y sustituir cada coeficiente de actividad por su valor segn el modelo de Pitzer, ecs. N.24 a N.27, se obtiene: PKi =a+ ^.^1^+ S.f ^+ E.ft3) donde: ,t1^=2 I f^^=1-(1+2^ne-^ }^^=Z
a pKi
(V.3)
(V.4)
^, S y s son funcin de los pazametros de interaccin (^lii^0^, ^3^'^, C^, B, ^y) entre las especies presentes en disolucin. La ec.V.3 se diferencia de la ec. IV.28 en que apazece el trmino f^3^, ya que no se han despreciado los parmetros 6, ^ y C, con
79
el fin de hacer ms general el presente estudio; no obstante el trmino E va a ser importante solo a concentraciones elevadas I> 2M.
Con el objeto de construir distintas curvas que evidencien los diferentes comportamientos pK' vs. I, se han escogido diversas combinaciones de valores paza las constantes ^, S y E de la ecuacin V.3 que oscilan entre los siguientes intervalos: -6<S<6 -1<E<1
-1.5<^^<1.5
Resultados representativos de las simulaciones efectuadas se recogen en la figura V.1. El valor de a solo influye en la ordenada en el origen y se ha escogido azbitrariamente como a = 2.
La ecuacin V.3 puede ser desdoblada en una pazbola y la funcin f^2^, de tal forma que pK` = Y, + Y2, donde: Y1=a+ 2Î+ sl Y2=S,^^
Funcin Yl.- El comportamiento de la parbola es bien conocido y pemte predecir un valor pequeo para el parmeto E, ya que de otro modo el pK` aumentara drsticamente con la fuerza inica, tal como se ilustra en la figura V.l.a; se aprecia, adems, que el signo de E determina la direccin de las ramas de la parbola. Si se tiene en cuenta que en el vrtice de la pazbola Iv =-^/E, se puede predecir que solo aparecer un mnimo o un mximo, si la solubilidad del electrolito lo permite, cuando ^ y s tengan signos diferentes, ya qu si no el extremo de la funcin aparecera a un valor de I negativo, lo cual cazece de significado fisico. Funcin Y2.- En cuanto a f^2^, es una funcin montona creciente con una asntota horizontal en 1, con lo que YZ vara entre 0 y S, como se deduce de las siguientes ecs.:
80
Parte Experimental
df^2^ = 2exp(-2^)>0 ^ montona creciente dI limf^^= 1 ^ asntota horizontal
(V^
(V.^
El efecto de esta funcin vara fuertemente dependiendo del coeficiente S y es particularmente marcado a fuerzas inicas bajas, donde la influencia de la parbola es menos importante. Si tiene una tendencia contraria a la de la parbola, entonces puede aparecer un mximo o un mnimo en la regin de bajas fuerzas inicas, an en el caso de que los coeficientes, ^ y E sean del mismo signo. Si este efecto se aade al del vrtice puede aparecer un sinusoide como se aprecia en la figura V.l.b. En el caso de que el coeficiente ^ sea muy pequeo, el efecto de esta funcin va a ser, prcticamente, inapreciable.
. FIGURA V.1. Curvas representativas pS' vs. I para el primer equilibrio
20.00
pK*= 2+0.6f 1-O.6f2+df3
15.00 10.00 ^ 5.00 -^
I^^ÎI) ^
. 1.0
. . 0.8
. . 0.6 ^ .
. ' ^ . 0.4
. ' .
::.' . .
0.2
^.. ..
0
'^'^^ ' ................ -0.2
................ . . . .
-0.4
%:C.;.. ':'. ' -0.6 . ,' . -0.8 . -1.0
-10.00 0.00
0.50
1.00
1.50 I
2.00
2.50
3.00
3.50
Anli.ris matemtico...
3.00 8 2.75 . 2.50 . 2.25
Y
81
pK"= 2+f1-2f2+df3
-0.?5
-0.50
.
s
2.00 1.75 1.50

1.25 ; 0.00
-0.75 . .
-^.o
F 0.20 ^ 0.40 I 0.60 I 0.80 i 1.00 I I-^
1.20
1.40
1.60
I 4.50
pfCrt=2+0.1 f1 +0.4f2+df3
4.00 3.50 a 3.00 2.50
2.00 1.50 0.00 .
. . .
.
. o.^
. 0.05
.
a' . 0 . .. . .t';'.^^^.. . . . . . . .-o .05
.
: : . : . . . . . . . . . : .^^^^^^^^ ................. .. '-0.1
0.50
1.00
1.50 I
2.00
2.50
3.00
3.50
Es interesante estudiaz el comportamiento a bajas fuerzas inicas dada la dificultad que plantea obtener puntos experimentales en tales condiciones y la necesidad de extrapolar para determinar los pKs termodinmicos a I=O. Paza ello, al igual que en el apartado anterior se calcula la derivada de pK; cuando IÔ, que es: (V.8)
dP^l )
1-0
Y' + .
Y2 =2 ^ +2S
^ 1-0 !^ I-0 ^
82
Parte Experimental
EI comportamiento de la funcin depender de los valores relativos de ^ y S, que estn relacionados con (3 y(3', como se deduce si se compara con la ec.IV .28.
V.II. Comportamiento pI^ vs. I

El equilibrio a considerar es: AH#A-+H+ donde AH representa al (V.9)
zwitterion y A^ es su anin. La constante
correspondiente es:
r_ (`4 )(H+) = YA^YH- [`4 ][H+l =KY K` z 2 [AH] Ki (A^ Y,^
(V.10)
que despus de tomar logaritmos y sustituir los coeficientes de actividad tal como se hizo para el primer equilibrio, queda:
pg2 =a ^+ ^ ^tl>+ g ?^^+ E fc3)+ ^ ^4^+ X .^^
(V.11)
donde las funciones f^'^, f^2^ y f^3^ ya fueron definidas, f^4^ = fY, ec. I.18, y f^5^ _ 1+(1 +2I12+2I)exp(-2I'^2). EI parmetro w' =2, mientras que todos los dems varan de un sistema a otro.
La ec. V.11 puede considerarse como suma de cuatro funciones, dos iguales a las del primer equilibrio y dos nuevas: Y, e YZ defmidas para el primer equilibrio, adems de Y3=w'f^4^ e Ya=X't^s^. La diferencia ms importante con pK; tiene lugar a fuerzas inicas bajas, por lo que se calcula la derivada de cada una de estas cuatro funciones, el resultado es:
Anlisis matemlico...
83
di1= 2^+ 2E'1

d 2 = 2S'exp(-2^) dY3 --^lA 1 + 2(1 + b^) ^ 2^(1 + ^)z dl dl cuando I ^0:
lim I-o dpK2 dI dY3 dY4 dY2 dY, =1im- + lim- + lim- + lim- _- o0 I-.o dI Iô dI I-o dI I-.o dI
(V.12)
=-2X'êxp(-2^)
(V.13)
El lmite es -^ debido a la funcin
Y3, esto es, el trmino
correspondiente a la ley lmite, que provoca el comportamiento observado en la figura V.2 o en la IV.1, en las que los valores de pKZ se incrementan considerablemente al acercazse al valor I=0, tal como se seal en el captulo N.
FIGURA V.2. Curvas representativas pg` vs. 1 para el segundo equilibrio
2.40
2.20
0.25
0.50 I
84
Parte Experimental
V.III. Comportamiento de pK* vs. I para zwitteriones con gran separacin de cargas -
En toda la discusin anterior se ha considerado que el zwitterion se comporta igual que una molcula neutra, sin sepazacin de carga, como sucede en el caso de los a-aminocidos. Sin embazgo tal como se mencion en el apartado II, ec.II.8, en los zwitteriones de ciertos indicadores las cazgas estn muy alejadas y pueden interaccionar separadamente con los iones del medio, por lo que el coeficiente de actividad toma la forma: lnyZ*=-2A ^ +2(^Z=,x-+RZ=,^.)I 1 +1.5 f (V.14)
para un electrolito 1:1, KX, segn la teora de Guggenheim. Para los modelos de Pitzer y Scatchard habra que consideraz tambin las interacciones dobles entre iones de igual carga y las triples; pero de cualquier modo lo que es evidente es que la funcin que representa la ley lmite apazece en el coeficiente de actividad del zwitterion, lo que antes no suceda y adems est multiplicada por dos (ya que se consideran las dos cargas como iones independientes). Si se tiene esto en cuenta al sustituir cada coeficiente de actividad por su correspondiente funcin de la fuerza inica en las expresiones de las dos constantes estequiomtricas, se encuentra que la ley lmite aparece en la ecuacin del pK; y desaparece en el caso del pK2, con lo que el comportainiento esperado para ambos pK se intercambia repecto al descrito en los apaztados V.I y V.II. Por tanto todas las conclusiones que se obtuvieron paza el pK2 y en- concreto el aumento brusco de pK', cuando IÔ, debe corresponder al pK;, mientras el comportamiento adscrito al pK;, corresponde en estas circunstancias al pKz en cualquiera de la tres teoras. Ahora bien, es claro que el problema surge al intentar modelizaz las situaciones intermedias en las que las cargas del ion dipolar no estn lo suficientemente alejadas, ni lo suficientemente juntas para exhibir las pautas de
85
comportamiento aqu indicadas; tal problemtica se discutir en la seccin siguiente.
Bibliogra,â
1. Herrero, R., I. Brandaziz, Sastre de Vicente, M., Ber. Bunsen. Phys. Chem., 97, (1), 59 (1993). 2. Fiol, S., Tesis Doctoral, Aplicacin de la ecuaciones de Pitzer a equilibrios cido-base: Estudio de la ionizacin de aminocidos en agua de mar sinttica, Universidad de La Corua, Mazzo, (1994) 3. Herrero, R., I. Brandaziz, Fiol, S., Vilazio, T., Sastre de Vicente, M.E., An. Qum. 89, 602,(1993) 4. Salvatore, S., Ferri, D, Palombazi, R., J.Sol.Chem., 15, 423 (1986)
Aplicacin de las ecs. de Pitzer...
$7
VI. Aplicacin de las ecuaciones de Fitzer a aminocidos con diferentes posiciones de los grupos amino y carboxilo
VI.I. Dependencia pK vs.l para aminocidos con separacin de cargas
Los dos equilibrios a considerar en un aminocido con dos grupos disociables aparecen recogidos en las ecs. III.1 y III.2, y las constantes correspondientes en las ecs. III.3 y III.4. Tomando logaritmos decimales en ambas expresiones se obtiene:
* T 1
PKi pKl + 1n10^Y^+^YH'-lny,^xZ^
(VI.1)
PKi pKi
1 f^^,
+ 1n10L-YA
_ +lnyg--lny,^^
(VI2^
Los coeficientes de actividad en KN03, de las especies inicas que aparecen en los equilibrios anteriores pueden expresarse segn la teoria de Pitzer, e . L 17, como:
88
Parte Experimental
ln^/ax2 f +21(BNO,,AxZ+jCNO,,,^x2)+2I6^^+^{BNO3g+CNO3^+^r,îô^)
^.3) (VI.4)
1nYR. f +2I(BNO3^+lCNO^)+2I9A^+i{BNO,g+CNO,x+Â,^vo^)
1nyA - f +2 I(BA^+ICA^) +2 I 9^,03 +l {BNO3B+CNO,g+ â,rvO,,x)
donde B y la funcin fY vienen dadas por las expresiones I.18 y 19, respectivamente.
El coeficiente de actividad del zwitterion (AI^, en el caso de que las cazgas estuviesen lo suficientemente juntas como paza exhibir el mismo
comportamiento que una molcula neutra, sin asimetra de cazga, puede expresazse como' : lny^=2 I(^,,u^No,+^,ur,g) =2 I^, (VI^
Sin embargo, si se considera que las cazgas se comportan de forma independiente, esto es, los grupos -NH 3 y-COO^ interaccionan de manera autnoma con las distintas especies presentes en el medio, el coeficiente de actividad del zwitterion se expresa como2:
^Yax ^/ +2 I (BNx,NO, +I CNx3,A,0,) +21 6^3^+^ {BN03K+CN03g+ ^/NA^03^) +
+f +2I(Bcoo,x+lCc^^)+2I6c^^,o3+l{BNO,x+CNO,x+^coo,rvo,,g)= (^^ =2 f +Z I^BNX3,NO3+BCOO%+I(CNH3,NO3+CCOO,R^ +2I(6^vr^^+ecoo,tvo3)+

+2 ^j2 (BN03B+CN03%) + I2 `^NX3,NOyK+ ^COO,T103,K)
Con el objeto de modelizar situaciones intermedias a las descritas arriba, se ha supuesto que el logaritmo del coeficiente de actividad del zwitterion consta de una contribucin ponderada de cada una de las situaciones descritas anteriormente. Esto equivale a considerar que en una fraccin p de molculas de zwitterion los dos
89
grupos cargados se comportan de forma independiente, en tanto que en la fraccin restante, 1-p, actan como una especie neutra, sin separacin de cazgas, entonces el logaritmo del coeficiente de actividad sera:
^î,lg)^L=(1 P)^Y^q)^Â+P^Y^y)CARGA DOBLE
(VI8)
Tomando esta expresin, junto a la de los otros coeficientes de actividad, ecs. VI.3-5, y sustituyendo en la ec.VI.I, se obtiene:
PKi pK1+1n10^2p[ +Rriô,%I'e-zfi^+ +Ctel [1-(1 +2^n e -^^] +Cte2 2 I+Cte3l}
(VI.9)
donde: + Cte 1= ^N03,H-F'N03,AHz P'A ^l^ R^l^ Cte2=îivô,,a-îv,,Ax2+ea,x-9,u^z,x+P B+^(1'P)

Cte3=CO,,iy-CNO,,Axy+^V NOê,rf-^NO,,x,ahr2+p ^
(VI.10)
Paza el segundo equilibrio: PR2 pKi+1n10t2{1 P)[.fl+liô,x'I'e-^^

+Ctel [1-(1 +2 f^ e-2f^] +Cte221+Cte3 I2}
(VI.11)
donde:
90
Parte Experimental
Cte1=îv,,x+^l,-Rivo,,x PA Ctez=îvô,,x+R^^,+ex,g+eA,NO3 P B-^^1 P)

Cte3=CN03^+2CN03,1^+ A,g+t^fN03,%x+Â,NOyK P^
(VI.12)
adems A,B y C conesponden a:

A - R (Nx3,NO3+ ^ COO,B- ^NOyg
B=R^ iv^x,,rvo,+ ^ ôo,x+eNx,,x+eNO^,coo

C=C^3Ô3 +CNOy%+CCOO,B+^V Nx3,N03,%+^COO,N03,x
VI.II. Resultados y discusin

VI.II.I. Constantes estequiomtricas y parmetros de interaccin Se han determinado las do constantes estequiomtricas de varios aminocidos en los que los grupos funcionales se van alejando progresivamente: glicina, a-alanina, c. ry-aminobutrico y c. s-aminocaproico, a 25C y a distintas fuerzas inicas en nitrato potsico, usando el procedimiento descrito en el apartado III. El paso de molaridad a molalidad se efectu segn se describe en el apndice C. Los resultados figuran en las tablas VI.1 y 2, y algunos valores de pK` encontrados en la bibliografa en el apndice D.
91
TABLA Vl.l. pK;, en RNO^, de los aminocrdos indicados. Valores expresados en escala de molalidad gticina 0.01 0.05 0.10 ^-alanina 3.578 3.563 3.581 3.584 3.617 3.632 3.666 ^ y-aminobutrico E-aminocaproico 4.356 4.380 4.386 4.375 4.390 4.416
4.451 4.482
4.482
4.006
2.371 4.037
4.035 4.070 4.075
4.129 4.149
4.183
0.20 0.30
0.51 0.72 0.94 1.15 1.38 1.60 1.83 2.06 2.18
2.397
2.405 2.436 2.435 2.444 2.453 2.501
3.676 3.698
3.742 3.768 3.777
4.194 4.230
4.509 4.536
Error experimental entre 0.005 y 0.05
TABLA VI.2. pg, en KNO^, de los aminocidos indicados.

Valores expresados en escala de molalidad
glicina 0.01 ^ aianina ^y-aminobetrico E-aminocaproico 10.674
10.361 10.168
9.627 9.536 9.542 9.592 10.098 10.065 10.046 10.058 10.361 10.357 10.345 10.344 10.351
0.05
0.10
10.686
10.659
0.20
0.30 0.51 0.72
10.687
10.685 10.705 10.713
0.94
1.15
9.608
9.628
10.061
10.068
10.385
10.405
10.747
10.767
1.38
1.60
9.659
9.703
10.089
10.096 10.104 10.126
10.415
10.451
10.789
10.808
1.83
2.06 2.18
10.169
Error experimental entre 0.005 y 0.05
92
Parte Experimental
En el ajuste de los datos experimentales se ha despreciado el tnmino correspondiente a interacciones triples, que en general, debe ser poco importante por debajo de 2 molat3 y se han llevado a cabo diversos anlisis, tal como se refleja en las tablas VL3-6:
ajuste considerando el parmetro p variable, incluyendo el dato a I=0.01, y omitindolo.
ajuste considerando el parmetro p=0, incluyendo el dato a I=0.01, y omitindolo.
Las razones por las que se han efectuado dichos ajustes son las siguientes:
Estudiar la validez del modelo propuesto para el comportamiento del zwitterion con p variable en comparacin al modelo que considera p=0, y que es ampliamente aceptado para el cso de los a-aminocidos.l
El mayor error existente en los valores de pK' a fuerzas inicas bajas justifica el estudio de su inclusin o no en el aju te (en general los datos a I< 0.1 M son menos reproducibles y plantean ms problemas experimentales).
Comprobar como afecta a los parmetros determinados la inclusin o no de datos a fuerzas inicas bajas, sobre todo a la forma de las cu.rvas y al pKT.
Los resultados obtenidos para los parmetros de interaccin calculados usando un mtodo estndar de regresin lineal con el programa SOLO', a partir de los datos de las tablas VI.1-2 y de las ecs. VI.9-13 se encuentran recogidos en las tablas VI.3-6.
Aplicacin de tas ecs. de Pitzer...
93
TABLA VI.3. Par^metros de interaccin y pl^, segn la teora de Pitzer, de los aminoccidos indicados, en KNO^, calculados usando todos los datos de las tablas VL 1-2 y aplicando las ecs. V1.9-13
PKi p Cte, Cte2 0
2.19 f 0.19 -1.1 1.1 - 1.92.0 0.100.05 0.013
3.61 t0.04
0.23 t0.28 0.12t0.51 0.160.01
3.990.03
-0.23 t0.22 -0.400.51 0.1'S0.03`
4.360.03
0.03 0.21 -0.02f0.50 '0.120:04
0.008
0.010
0.012
glicina : pKZ p 10.270.16 -2.71.0
> ^4-alanina 10.360.08 -0.30.5
c. ryaminobut. 10.360.02 1.10.1
> c. e aminocapr. 10.680.02 0.90.2
Cte
CteZ v
5.1 f 1.7
0.280.04 0.012
1.20.9
0.180.02 0.013
0.850.32
020t0.02' 0.010
-0.040.40
0.140.03 0.009
TABLA VI.4. Parrmetros de interaccin y pRT de los aminocidos indicados, en RNO calculados usando todos los datos de las tablas VL 1-2 y aplicando las ecs. VI. 9-13, con p= 0 glicina ' pK; Cte, Cte2 2.370.02 0.03 0.22 0^080:04 ^-ala. 3.57 0.01 ac. y aminobut. 4.02 0.01 0.13 0.12 ac. ^ aminocapr. 4.360.01 0.040.12 O. I2 +O. Q3 0.011
-0.290.07
0.16+'b.01
0.12 0.03
0.011
0.013
0.008
94
Parte F.xperimental
<ac. y-
ac. e
aminobut. pK2
Cte
^minocapr.
9.82 t 0.03
0.35f0.29 0:33t0.06 0.017
10.32 f 0.01
0.70t0.11 `0.18^-0.02 0.013
10.48 f 0.02
1.7f0.3 0.08f0.06 0.002
10.79 f 0.02
2.1t0.2 0.03t0'.fl5' 0.020
Cte 0
TABLA VI.S. Parmetros de interaccin y pll^ de los aminocidos indicados, en g1V0^, calculados aplicando las ecs.VL9-13 y usando los datos de tas tablas VLI-2, omitiendo los datos a I= O.OI
c. y c. e c'. y ' c. E
aminobut. PKi P Cte, Ctej 4.080.07 0.360.50 0.7 0.9 0.13 0.04 0.010
aminocapr 4.480.06 0.8f0.4 1.4t0.7 0.090.03 :'. pKZ p Cte CteZ
aminobut. 10.38f0.05 1.Of0.4 -0.50.7 0.19O.fl3 '
arr inocapr 10.73t0.06 0.6t0.4 O.St0.8 0'.12 t0.03
0.009
0.007
0.009
TABLA VI.6. Parmetros de interaccin y pl^ de los aminoeidos indieados, en SN03i

calculados aplicando las ecs. VL 9-13 y usando los datos de las tablas VI.1-2,
omitiendo los datos a 1= O.Ol, para p= 0
ac. yac.'ec. yc. E-'<
aminobut. pK; 4.030.01
aminocapr. ' 4.370.01 pK2
aminobut. ' 10.520.01
aminocapr, 10.820.01
Cte,
Cte2
0.01 0.13
0.140.03
-0.03 t 0.14
` 0.13 t0.03 '
Cte
CteZ
1.3 f 0.1
0.150.03
1.7 f 0.1
0.09+0.03;: ._
0.010
0.011
0.010
0.011
95
Los resultados reflejados en las tablas VI.3-6 permiten apreciaz que para el modelo con p ajustable los valores de este parmetro no estn comprendidos entre 0 y 1, tal y como era de esperar, aunque hay que considerar dos cuestiones importantes al respecto. La primera es que el valor de p viene afectado, en general, por errores importantes, aunque el error del ajuste est dentro de los mrgenes aceptados para valores de pK, segn textos especializadoss. En segundo lugar hay que tener en cuenta que la mayor diferencia existente en las curvas pK' vs. I, paza los dos modelos lmite, esto es, p=1 y p=0, se debe a la presencia del trmino correspondiente a la ley lmite, en el pK; para el primer caso y en el pK2 para el segundo (vase el apartado V.3). El anlisis anterior permite concluir que son, precisamente, los datos a fuerzas inicas bajas los de mayor peso a la hora de calcular el pazmetro p. Sin embargo es en esta regin donde es ms impreciso el trabajo experimental y los datos presentan mayor error, lo que explica la diferencia de comportamientos cuando I^0 en las figuras VI.1-2, y por tanto las diferencias en el pKT y el pazmetro p. De esta forma se explica, tambin, que con el modelo con p ajustable paza la glicina no se obtenga un valor p=0 del ajuste, aunque este comportamiento est perfectamente comprobado en bibliografial. Por ltimo, es interesante destacar que los pazmetros Cte2 y Cte2 no varan, dentro del error experimental, ni de un modelo a otro, ni al cambiar de aminocido. Esta circunstancia ha sido observada con anterioridad al analizaz datos de otros autoresb.
96
Parte Experimental
FIGURA VI.1. p%; vs. I obtenidos en KN03. Trazadas las curvas correspondientes a los distintos ujustes realizados.
2.55 , 2.50 +
O ptos.exp. - zwit.2 carg. - zwit.neutr.
GLICINA
2.30 I' 0.00
i 0.20
f 0.40
i-^ i i 0.60 0.80 1.00 1.20 I(m, KN03)
i I 1.40 1.60
3.80 3.75 3.70

Q 3.65 t 3.60 3.55
3.50 '
0.00 0.40 0.80 I 1.20 (mKN03) 1.60 2.00
Aplicacin de las ecs. de Pit.zer...
97
4.25
O ptos.exp. - zwit.2 carg. ---- zwit.neutr. - 2carg.sin .O1 ---- neutr.sin 0.01
AC. y-AMINOBUTANOICO .^ ^^.
4.15
4.05
3.95 0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1.60
I ^mKN03^
4.55
4.50
O ptos.exp. - zwit.2 carg. ------ zwit.neutr. - 2carg.sin .01 ^---- neutr.sin 0.01
AC. E-AMINOCAPROICO
^/^ :^
Y^ 4.45 a
4. 40
4.35
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 I ^mKN03^
98
Parte Experimental
FIGURA VI.2. pg vs. I obtenidos en g1V0^. Trazadas las curvas correspondientes a los distintos ajustes realitados.
9 .50 -1 0.00
i 0.20
i 0.40
- -i -i 0.60 0.80 1.00 I(m,KN03)
i 1.20
i--; . 1.40 1.60
10.40
O ptos.exp. - zwit.2 carg. --- zwit.neutr.
-ALANINA
10.30+
Q 10.20
10.10
10.00 ^----^----+ 0.00 0.40 0.80
1.20 I(mKN03^
^-T 2.00 1.60
O ptos.exp. - zwit.2 carg.

-- zwit.neutr.
- 2carg.sin .01
----- neutr.sin 0.01
10.30 0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40
1 .60
I ^mKN03
10.90
10.85 +
O ptos.exp. - zwit.2 carg. -- zwit.neutr. - 2carg.sin .01

----- neutr.sin 0.01
AC. E-AMINOCAPROICO
10. 60 -I 0.00
i 0.20
^0.40
i 0.60
i 0.80
i 1.00
i 1.20
i 1.40
I 1.60
I ^mKN03
100
Parte Experimental
VI.II.II. Aplicacin de las ecuaciones de Pitzer al producto inico del agua

La determinacin de las constantes cido-base de los aminocidos estudiados en el apartado anterior se llev a cabo siguendo el procedimiento experimental descrito en el apartado III, usando, por tanto, el MINIQUAD' para el ajuste de las constantes. El producto inico del agua, pKw, aparece en las ecuaciones III.18 y III.23, que son bsicamente las mismas que utiliza este programa, aunque las plantee de forma ms general. El pKW puede ser introducido como un valor fijo o a refinar por el mencionado programa. Esta ltima opcin constituye el procedimiento utilizado paza obtener los resultados que se recogen en la figura VI.3 y la tabla VI.7, en la que se aprecia que el valor del producto inico del agua depende en gran medida del tipo de aminocido presente, cuando debera ser una constante a cada fuerza inica.
FIGURA VI.3. pgWVS. I obtenidos en el ajuste del MINIQUAD
de los pK' de los aminocidos indicados en la,figura
y los calculados usando los calibrados en medio bsico
oe-aminocap. , ey-aminobut. ^-alanina vgli ina o calibrados
8 ^ 13.7 e ^ 13.6 O e ^ g ;
13.5
0 0 e
0 0 e
v v 0.25 0.50 0.75 v
v v
13.4 13.3 13.2 0.00
1.00 1.25 M(KNO^
1.50
1.75
2.00
101
TABLA VI.7. pK^, en KNO,, cakulados por el MINIQUAD para los aminocidos indicados, y vcrlores obtenidos a partir del calrbrado. Todos elios expresados en molaridad calibrado 0.10 13.770 ,', glicina 13.533 ^-aianirra -amino- ' butrico s=a^nioo- ' caproico ' 13.744 13.677 13.650 13.651 13.642 13.677 13.699 13.377 13.299 13.403 13.454 13.317 13.433 13.426 13.542 13.458 13.506 13.494 13.441 13.492 13.508 13.409 13.477 13.570 13.638 13.619 13.629 13.660 13.664 13.683 13.702 13.666 13.664 13.682 13.706 13.720 13.751 13.783
13.613
13.693
0.20
0.30 0.50 0.70
0.90
1.10 1.30 1.50 1.70 1.90
2.00
El valor de pKw se puede determinaz, adems, realizando los calibrados en medio bsico, tal como se explic en el apartado III.V; los resultados aparecen recogidos en la tabla VI.7 y en la figura VI.3. La diferencia en los valores del producto inico calculados para los distintos aminocidos puede deberse a que la diferencia entre el pK2 y pK^ en la glicina y la ,6-alanina no permite el clculo de la constante del agua con los datos de las valoraciones correspondientes a estos aminocidos. Por esta razn se calcula pK;y como la media de los valores obtenidos en los calibrados y de los cidos ry-aminobutrico y E-aminocaproico (tabla VI.8).
102
Parte Experimental
TABLA VI.8. Media de pg, en g1V03, obtenidos para los cidos y-aminobutrico
y e-aminocaproico y valores obtenidos a parlir del calibrado, expresados en molaridad
P^w 0.10 13.732
0.20 0.30 0.51

0.72 0.94 1.15
13.669 13.640 13.627

13.625 13.648 13.653
1.38
1.60
13.669
13.687
(La conversin de molaridad a molalidad se Ileva a cabo tal como se indica en el Apndice C)
Por otra parte, la ausencia en la bibliograa8-12 de valores de esta constante en KN03 es, a su vez, la causa de que no apazezca tabulado el valor de algunos parmetros de mezcla del protn y el hidroxilo con los iones nitrato y potasio, que, por tanto, han de ser determinados a partir de los datos de pK; vs. I. Paza calcularlos es necesario aplicar el formalismo de Pitzer al equilibrio de ionizacin del agua: H20 ^ H+ + OH cuya constante termodinmica es: T__ (H^{OH ) _ + , Yx^ôx- _ = Yx^ôx (H20) - LH l [OH^ ' (H20) Kw ^ (H20) donde K,y = [H+] [OH^] . Tomando logaritmos : (VI.1^ (VI.14)
Aplicacin de las ecs. de Pitzer:..
103
K" - KT +lo P w-P w g
Yb`ôa
axZo
(VI.1^
Los coeficientes de actividad de los iones H+ y OH^ en presencia de un electrolito 1:1, XK, se pueden expresar usando el formalismo de Pitzer segn las ecuaciones: 1nyH.=}'^+21(Bxx+l'Cxx)+2I'9xR+l{B^+C^+ ^V^) (VI.17)
^Y ox- '^ +2 I(Bo^+j'Coxx) +2'I ôxx+j2 {B1cx+Cxx+ ôx,ar,x)
(VI.18)
sumando ambas se llega a: ^(Yx`ôx-)=2f +21[Bxx+Bo^x+l{CoxR+Cxx)1+21{9Ag+eo^)+ +21'^ {Bicx+Cxx)+^ {^xxx+ôHxx> sustituyendo cada parmetro por su valor, omitiendo los parmetros de mezcla (9 y ^) se obtiene: ^(YH`ôx-)=2f+0.6406g+0.0494g'+0.4834I+0.011712 donde: f = -0.3910 ^ +? ln(1 + 1.2 f^ 1+1.2 f 1.2 (VI.20) (VI.19)
g=1-(1+2 Î)e-W
g^= _1+(1+2 ^+2^.e-af
Paza calcular la actividad del agua se recurre a su relacin con el coeficiente osmtico13:
104
Parte Experimental
^ _ -1000 ^x2 _ -250^x o Mwv m 9I z
^.21)
donde Ma es la masa molecular del disolvente, u es la suma de los coeficientes estequiomtricos de los iones de la sal, v=uxo3+uK=2 y m es la molalidad del soluto, que es igual a la fuerza inica por tratarse de un electrolito 1:1. El coeficiente osmtico, es segn las ecuaciones de Pitzer:
^-1=-0.3910
^
1+1.2 f
+I '^RN03R+ axo,x'e-2^)+^'Crîo,g (VI.22)
_ -0.3910
^ -0.0816I+0.0494Ie -2^+0.006612
1+1.2 f
Sustituyendo las ecs. VI.2U y VI.21 en la ec. VI.23 se obtiene el producto inico del agua: (VI.23)
pKw=13.997+ ^10[ln(Yx^Yox-) + 250 ^, donde se ha sustituido el pI^ del agua por su valor.$
Si se agrupan todos los parmetros conocidos en un miembro de la ecuacin el resultado es:

2
pK,;, -13.997 - 1n10 ^^Yx'Yox-) + 250 - eoxNo, ^ 1n10 + ^xNo,,x+ ôxNo,,.^) ^ 1n10
donde:
ln(Yx'Yox-) =2f+0.6406 g+0.0494 g'+0.4834 I+0.0117 l ^ -1= -0.3910 ^ -0.0816I+0.0494Ie -^+0.00661

1+1.2 f
(VI.24)
Aplicacin de tas ecs. de Pitzer...
105
El ajuste pK"W vs. I de los datos experimentales que figuran en tabla VI.8, a la ec. VI.24 se realiza con el programa SOLO, y el resultado se recoge en la tabla VI.9 y en la figura VI.4 respectivamente.
FIGURA VI.4. Representacin de los valores del producto inico del agua
y la curva correspondiente al ajuste realizado usando la escala de molalidades
14.0
TABLA VI.9. Parmetros de interaccin calculados usando el producto inico del agua ordenada origen eoxNo, â,NO,,g+ôrt,NO,,x v -0.0370.014 -0.400.11 0.14 t 0.07 0.021
Se aprecia que aunque el error del ajuste es bueno, los pazmetros 9 y ,^ poseen valores atpicamente altos si se comparan con datos anlogos ya publicadosà
1^
Parte Experimental
Por otra parte, los parmetros de mezcla que aparecen en las ecuaciones para el clculo del producto inico del agua deberan ser despreciables a fuerzas inicas moderadas I< 2 M3 y permitir el clculo de pK,,, sin tenerlos en consideracin. En este caso el producto inico del agua se obtendra a partir de la ecuacin VI.24 pero omitiendo los parmetros B y^ en el clculo de los coeficientes de actividad. La curva correspondiente a este ajuste se recoge en la figura VI.4, pero como se aprecia responde peor al comportan ento experimental que la correspondiente al modelo que considera la ecuacin completa.
Otro electrolito para el que s se encuentran datos publicados de la constante de ionizacin del agua es el cloruro potsico. En la ref.8 aparece tabulado el valor de (yHyoH)/aaga, frente a la fuerza inica de KCl a la que se determin cada valor, lo que permite calcular el producto inico del agua que figura en la tabla VI.10, a partir de la expresin: '
*__ pKw lo
Kw
^X'YOH aw
(VI2^
Aplicacin de las ecs. de Piizer...
107
TABLA VI.10. Valores del producto inico del agua en gCl
I^m^
7x' ^òx
PK.
0.01
0.02 0.03
0.816
0.760 0.726
13.906
13.875
13.855
0.04
0.06 0.11 0.21 0.51 1.01 1.51 2.01 3.01 3.51
0.702
0.668 0.618 0.574 0.534 0.592 0.672 0.787 1.056 1.205
13.840
13.819 13.785
13.753
13.722 13.766
13.821
13.890
14.018
14.075
Paza el computo de pK^, a partir de las ecuaciones de Pitzer es necesario conocer la actividad del agua y los coeficientes de aciividad del protn y el hidroxilo.
El producto de los coeficientes de actividad es, usando los pazmetros 9y^G: In(yg.^yoH-)=2f+0.6145 g+0.2122g'+0.5246I-0.0109412 si stos se omiten el resultado es: ln(y^.^yoR_)=2f+0.6145 g+0.2122g'+0.6146I+0.0041 I2 (VI27) (^26)
Por otra parte, la ecuacin del coeficiente osmtico aplicando el formalismo de Pitzer, es:
108
Parte Experimental
^_1-0.391
^ +0.04835I+0.21221e-2^-0.0008412 1+1.2 f
^28^
Sustituyendo en la ecuacin VI.23 las ecuaciones VI.26 y VI.28 y las ecs. VI.27 y VI.28, se obtienen sendas curvas representadas en la figura VI.S.
Se aprecia, por tanto, que la concordancia es muy buena, an a fuerzas inicas elevadas, siempre que se usen los parmetros 6 y î; en caso contrario la discrepancia con el experimento es mayor a medida que aumenta la fuerza inica, como es de esperar. Otro sistema para el que se ha realizado este tipo de clculo es el NaCI. En este caso la curva obtenida incluyendo los parmetros B y>G es prcticamente igual a la dibujada sin tenerlos en cuenta.
FIGURA VI.S. Constante del agua vs. I para el KCl(A) y NaCI(B).
o Ptos.exp. - con C, sin 8 ni ^p ------ s i n C, 9, n i cp --- con C, B, y ^p
13.8
^Z^_...r ......... ...........
.A...: -: -
^^^ 1.5
13.7 0.0
0.5
1.0
2.0
m(KCI)
2.5
3.0
3.5
4:0
109
1.00 m(NaCi)
1.50
2.00
Bibliogra,â
1. Edsall, J.T., Dipolar Ions and Acid-Base Equilibria (captulo 4), en Proteins, Amino Acids and Peptides as Dipolaz Ions, Cohn, E.1., Edsall, J.T. Editores, Reinhold Publishing Corporation, New York, (1943) 2. Salvatore, S., Ferri, D, Palombari, R., J.Sol.Chem., 15, 423 (1986) 3. Pitzer, K.S., J.Chem. Phys., 77(2), 268, (1973) 4. Statistical Package SOLO. Distributed by BMDP Statistical Softwaze Inc. Version 03 8/88. 5. Albert, A., Serjeant, E.P., Determination of Ionization Constants, Chapman and Hall, Cambridge, (1984) 6. Fiol, S. , Brandaziz, I. , Armesto, X. L. , Arce, F. , Sastre de V icente, M. E. Ann. Chim. (Rome), 83, 175, (1993) 7. Vacca, A., Sabatini, A., MINIQUAD and MIQUV Two Approaches for the Computation of Formation Constants from Potentiometric Data Cap. 5 en Computational Methods for the determination of Formation Constants, Plenum, New York, 1985
110
Parte Experimental
8. Harned, H.S., Owen, B.B., Physical Chemistry of Electrolyte Solutions, Reinhold Publishing Corporation, Chapman and Hall, London, 1958 9. Baes, C.F. Jr, Mesmer, R.E., The Hydrolysis of Cations, Wiley-Interscience Publication, New York, 1976 10. Liberti, A., Light, T.S., J.Chem.Educ. 39(5), 237, (1962) 11. Covington, A. K., Ferra, M., Robinson, R. A., J.Chem. Soc. Faraday Trans., 1721, (1977) 12. Braibanti, A., Brusdri, C., Fiscaro, E., Pasquali, Talanta, 33(6), 471, (1986) 13. Stokes, R.H., Thermodynamics of Solutions en Pytkowicz R.M.(ed) Activity Ccefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C. Press Inc., Boca Raton, Florida, (1979) 14. Pitzer, K.S., Theory: Ion Interaction Aproach in Pytkowicz R.M.(ed) Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C. Press Inc., Boca Ra.ton, Florida, (1979)
Mezclas de electrolitos
111
VII. Aplicacin de las teoras de inteYaccin inica a equilibrios de aminocidos en mezclas de electrolitos
Normalmente la determinacin de constantes de equilibrio cido-base se lleva a cabo en medios electroliticos sencillos, esto es, constituidos por un solo electrolito inerte con el fin de mantener constante la fuerza inica del medio'. Este hecho es la causa de que prcticamente no existan datos tabulados de constantes de equilibrio en medios constituidos por dos o ms electrolitos. Por esta razn se ha considerado interesante el estudio sistemtico de la influencia que tanto la
composicin salina del medio, formado por mezclas de dos electrolitos, como el valor de la fuerza inica alcanzada n dicho medio, ejercen sobre las constantes de disociacin determinadas. Este anlisis se ha materializado con el estudio de la dependencia de las constantes estequiomtricas de equilibrio de los siguientes sistemas:
L-Valina en mezclas equimoleculares de KCl-KBr y de KCl-KN03, a fuerzas inicas comprendidas entre 0.1 y 1.5.
-alanina en mezclas de KN03 y ioduro de tetraetil amonio, a fuerza inica constante, variando la fraccin de cada electrolito en la mezcla.
112
Parte Experimental
Los resultados obtenidos se detallan en los siguientes apartados.
VII.I. Aplicacin de los formalismos de Pitzer y Guggenheim a los equilibrios cido-base de la L-valina en mezclas de electrolitos
Se han determinado las constantes de equilibrio estequiomtricas de la L-valina en mezclas equimoleculazes de KCl-KBr y de KCl-KN03, a fuerzas inicas comprendidas entre 0.1 y 1.5. Estos datos han sido analizados empleando los modelos de Pitzer y Guggenheim para los coeficientes de actividad de las especies que intervienen en los equilibrios, lo que permite expresaz la dependencia de las
constantes estequiomtricas en funcin de la fuerza inica de la disolucin. El modelo propuesto por Pitzer2 en la dcada de los 70, supone un considerable aumento en complejidad en relacin al de Guggenheim3, pue to que el nmero de pazmetros que dan cuenta de las interacciones existentes en el medio es mucho mayor. No obstante este modelo es relativamente sencillo comparado con otros, como por ejemplo los propuestos por Scatchazd o Reilly y WoodS, que se han empleado con resultados muy satisfactorios en la representacin de coeficientes osmticos y de actividad paza electrolitos fuertes en amplios intervalos de fuerzas inicas.
VII.I.I. Ecuaciones de Guggemheim

Los coeficientes de actividad que aparecen en las ecs. IV.2 y IV.3 son segn la teora de Guggenheim (ec.I.9), paza una mezcla de electrolitos 1:1, de frmulas, JK y LK:
^ + ^3^.^_ I+ (i^^^_ 1 lny^. _ -A z z z 1+1.5^ (VII1)
Mezclas de electrolitos I
113
lny^. _ -A
+ (3 R.^- I+ R H.y- I
(VII.2)
1+1.5 f
1nyA_ _ -A
^ + 2Ia A-^.
l+cf
(VII.3)
Iny,^ = 2^,^Ì
(VII.4)
donde AH representa el zwiterion del aminocido y las otras especies se representan con las mismas letras que las indicadas anteriormente (ver apartado III.I). La fuerza inica total es I, por lo que la molalidad de K+ es I, y las de J^ y L- son I/2. Sustituyendo las ecs. VII.1-4 en IV.2 y N.3, se obtiene: PKi PKi+E i 'I ^^
pg2 =pg2-2A'
^ +e2 I l+cf
(^^
siendo:
E1=1n1o^2^ -R^r2,^-+RH',^--pùr2,^-+^g'.c-^
E2
1n10^-2a.m+2Â-^,+îH.^-+(3R-^-^
(VIIg)
El superndice m indica que el parmetro en cuestin se refiere a la mezcla y no a los electrolitos simples (seccin N.I.n.
114
Parte Experimental
Por lo tanto la representacin pK; vs. I debe ser una lnea recta; sin embazgo pKZ vs. I presenta una forma diferente debido a la presencia de la ley lmite de Debye-Hckel, tal como sucede cuando solo se emplea un electrolito para controlaz la fuerza inica del medio (ver seccin N.I.I, ecs. N.8-9).
VII.I.II. Ecuaciones de Pitzer

Los coeficientes de actividad de las ecs. IV.2 y N.3, segn la teora de Pitzer, en una mezcla equimolecular de electrolitos JK/LK, son:
^Yx^+1 ^BJx+Br.x+l{CJx+C^)^+2I9xx
(VII,9)
+ 2 (BJx+Br.r^+Crx+Cr.g+^xJg+^xr.x+ 2 ^xLr)
]nY^2 _f +I ^BJ.ut2+B^Z+I(CJ^Z+C^Z)^+2I6^r^ (VII.10) + 2 (BJx+Br.g+CJx+C^+ÂxZ,^x+âx.^+ 2 ^V Ax^tr)
1nYA- f +2I (B,^x+lC,^)+I (9,v+6,v + (VII.11)

+ 2 (BJ%+BLK+CLK+CJK+1VAJg+ ^V^)
1ny^=l^,^^+I^.^^=1^,^`
(VII.12)
donde el coeficiente de actividad del zwiterion se considera como el de una especie neutra. b
Operando de igual forma que en el modelo anterior y sustituyendo B, ec.I.19, se obtiene:
I 0 0 0 0
i15
T_
PKi pKl
ln
lOLRrAr^2+Rrax2-Aûy,^x-^.^^-Rar-ÂL+2(e,^xZx-exx)]
m_ ^ (vII.13) Z g f ^ ^ ^ ^ ^ ^ 21n10LRÂR2+RzAtrZ-Rrv-RxL]-21n10^C^`^Z+C1AH2-C^ CHL+
+.^Âx2x+^âx^-^r^x-^xr,x+ 2(Âx^rL-^x^L)^
PKi PKi + 2^ + I^Rix+Rl.rc^ e-2 ^+ g^R.lia+Rrl.x-R;x-Rix+2 Rx^ 2ln 10 ln 10 ln 10

+
ln 10
I ^2 Rx-Âx,^x ÂH,Lx+R^+RXL+e^+e^+2e^x]+ Cù+C+C^t;+C^v+C^,+^V,ux+1V ^+V ivx+^xrx+ 2^x^L
14
+ 21n 1012
La forma de las curvas pK^ vs. I, es similar a la esperada para el caso de un solo electrolito, ya que varan solamente las constantes que multiplican a las distintas funciones de la fuerza inica (ver seccin V).
VII.I.III. Resultados y discusin

Los valores de las constantes estequiomtricas de equilibrio para la L-Valina figuran en la tabla VII.1. Tanto la fuerza inica como los pK se encuentran referidos a la escala de molalidades.
116
Parte Experimental
TABLA VII.1. pg; y pg para la L-valina en mezclas equimoleculares de RCl-RBr y%CI-K1V03 UValina KCI-KBr Um 0.10 0.25 0.50 0.51 0.71 1.02 1.22 1.23 1.43 2.407 9.563 2.387 9.524 2.346 2.364 2.365 2.362 9.481 9.491 9.492 9.522 2.369 9.504 2.354 9.498 pl^ 2.278 2.324 pIC1 9.539 9.473 pKI, 2.244 2.313 2.345 KCl-KN03 p^ , 9.527 9.486 9.493
1.44 Error experimental entre 0.005 y 0.05
Los parmetros obtenidos mediante la aplicacin del modelo de Pitzer ec. VII.13 y VII.14 a los datos de la tabla VII.1 empleando un mtodo stndard de regresin' figuran en la tabla VII.2, junto con el error obtenido en cada ajuste (Q).
TABLA VII.2. Parcmetros de interaccin de Pixzer para la L-valina en me.zclas de electrolitos L-Valina KCI-KBr pK, A, B, 2.273.002 0.81 f0.84 -0.961.89 KC1=KN03 , 2.269.002 0.040.91 O.Sf2.1 pKZ AZ BZ KCI-KBr 9.720.17 -0.110.58 0.68t0.66 KC1-KN03 9.710.01 0.040.42 0.710.47
C, 0
-0.35t0.60 0.03
0.14t0.67 0.03
Cz 0
0.20f0.41 0.02
-0.04f0.15 0.01
siendo:
117
0
0 Ai RJ,^x2+Rraxz-a.,^xx,^x-a.,^,y^+2s,m^
i i Bi=R^,ui2+Rutr2. 1
lAI2+CL^^HZ+^.1A7Izx+^lAfi^%+ 2 ÂHr7L C1=C^ 0
A2=2 R,^x-^,ur,^x-ârr,.rx+9e.^+e^
B2=R^
1 C2=2C^+^r,vx+âr^+ 2 ^r^L
Tambin se ha llevado a cabo el ajuste eliminando los trminos correspondientes a las interacciones triples C^, as como los parmetros de mezcla ^ y B, aproximacin justificada cuando I< 2M.8 En este caso las ecuaciones quedan:
+ T_ I 0 0 0 0
PKi pKl
_ S
ln
lOLRârt2+RraH2-Jl,vi^x-^,ui,r^ Rr^-RaL]-
(VII.1^
1
21n1o R'^Z
-Rx,-RA^
a^
PKz pK2+ln
f 10+21n10LR^H+Rz,x-R^x-Rtx+2R,îrc^+
(VII.16)
+ln
0 0 _2f+ I ( o I f i i In10L2Rax-âA,^x-Âx,t.x+Rxr+RxL^ 10`R.rx+Rirr^ Q
Los parmetros obtenidos segn las ecs. VII.15 Y VII.16 se recogen en la tabla VII.3:
118
Parte Experimental
TABLA VII.3. Parmetros de interaccin de Pitzer para la Irvalina en mezclas de electrolitos L-Valina KC1-KBr pK, A, 2.28 0.02 0.35t0.12 ', KCI-KN03 ;; 2.27 t.02 -0.06.16 pK2 AZ 'KC1=KBr 9.72 f 0.01 0.130.09 > KC1-KN03< 9.716 .009 -0.01.07
B, 0
siendo:
0.040.56 0.03
0.100.66 0.03
BZ Q
0.41 f0.19 0.02
0.770.15 0.01
Ai - a.raa2+ RraxZ-Âa,^x-^.vi,Lx Bi = R.ii.ui2+ Ri^r2

0 A2=2 R,t,r-^,,,Y,tx-^,^,^ ^
B2= R.^x
Comparando los resultados de las tablas VII.2 y VII.3 puede apreciarse que los parmetros son significativamente diferentes, mientras que el error del ajuste es similar. Por lo tanto, si ambos ajustes pueden considerarse igualmente aceptables ya que Q est dentro del mrgen de error permitido para este tipo de medidas- resulta ms aconsejable utilizar el ms sencillo, ecuaciones VII.15 Y VII.16. En cualquier caso, si C^, ^G y B son despreciables a I< 2M - como sugiere el formalismo de Pitzer los valores de los otros parmetros no debieran variar apreciablemente al tomar las ecuaciones completas o las simplificadas, aunque no es este el comportamiento observado. Esta discrepancia puede explicarse, sin embargo, teniendo en cuenta el alto porcentaje de error que afecta a los parmetros de regresin (tablas VII.2 y VII.3) que a su vez es compatible con un error promedio del ajuste, perfectamente aceptable en la determinacin de constantes de equilibrio empleando electrodos de vidrio comerciales9.
119
Resulta tambin de inters la comparacin de estos resultados con los obtenidos al utilizar como electrolito soporte una de las sales, ecuaciones IV.28 y VII.29, y las correspondientes a las mezclas, ecs. VII.15 Y VII.16. Se aprecia que el parmetro que multiplica a la fuerza inica en la ecuacin VII:15, para la mezcla, es la suma de los parmetros que multiplican a la ferza inica en la ecuacin paza los electrolitos por separado, ec. IV .28. Esto mismo sucede para los otros parmetros en los dos equilibrios. Por lo tanto, previsiblemente, los valores calculados en la tabla VII .3 a paztir de las experiencias realizadas con las mezclas podran estimarse a partir de datos obtenidos usando los electrolitos puros. Los valores de los parmetros obtenidos para L-valina en KBr y en KCl se encuentran recogidos en la tabla IV.S.
Sin embazgo no se observa la aditividad de pazmetros prevista; conviene, no obstante, recordaz que el error con que se determinaron los pK' con electrodo de vidrio es totalmente aceptable paza este tipo de medidas.
Por otra parte los parmetros correspondientes al modelo de Guggenheim se encuentran recogidos en la tabla VII.4. Los pazmetros para la L-valina en las dos mezclas pueden considerarse iguales dentro del error con que se determinan. Asmismo el error del ajuste es aproximadamente el mismo que el obtenido con las ecuaciones de Pitzer y como puede apreciazse en las figuras VII.1 y VII.2 ambos modelos describen aceptablemente el comportamiento de los datos experimentales, lo que parece indicaz que la precisin obtenida en los valores de pK` determinados con electrodo de vidrio comerciales no permite apreciaz la mayor exactitud que la teoria de Pitzer ha demostrado para dar cuenta del comportamiento de los coeficientes osmticos de gran cantidad de sistemas (fundamentalmente electrolitos fuertes) sobre todo a fuerzas inicas elevadas.
El problema de los errores asociados a los parmetros ha sido ampliamente analizado en las referencias'o^'3
120
Parte Experimental
TABLA VII.4. Parmetros de interaccin de Guggenheim para la L-valina en mezclas de electrolitos L-Valina KGI+ KBr PKi PKi PKi KC1 t KN0 PKz
pK
e
2.300.01
0.070.02
9.73f0.01
0.190.01
2.280.01
0.080.02
9.740.02
0.17 f0.02
0.03
0.02
0.02
0.03
FIGURA VII.1. pK; vs.7 para la L-valina en RCI+gBr y RC1+RN03
2.60 o Ptos. exp. - Modelo Pitzer con C, B, ^p --- Modelo Pitzer sin C, 9,^p --^ Modelo de Guggenheim
L-Valina
2.50 +
2.40 +
^^:........
2.30 ^/ 0
^..^-::^_---.
:^:._-
_,:,.,._.. -_.. ....--o
.^ ^^^^
2.20 + 0.00 2.60
0.50 I(KCI+KBr)
1.00
1.50
2.50
o Ptos.exp. - M. Pitzer con C, B, ^p ------ M. Pitzer sin C, B, ^p --^-- M. Guggenheim
L-Valina
2.40 t
. ...-...-o^
_.. . .._. __^

2.20 ^ 0.00
0.50 I(KCI+KN03)
1.00
1 .50
Me.zclas de electrolitos
121
FIGURA VII.2. pKz vs.l para la L-valirca en KCI+KBr y KCl+KN03
9.80
a Ptos.exp. - M.Pitzer con C, B, ^p
-- M. Pitzer sin C, B, ^p
---- M. Guggenheim
L-valina
9.70 +
Y 9.60 ^ a ^
9.50 +
9.40 ^ 0.00
0.50 I (KCI+KBr)
i 1 .00
1 .50
9.80
9.70 +
o Ptos. exp. - M.Pitzer con C, 9, cp

------- M.Pitzer sin C, B, ^p
- M. Guggenheim
L-Valina
Y 9.60 +,^ a `
9.50 +
9.40 I 0.00
^ 0.50 I(KCI+KN03)
1.00
' 1.50
122
Parte Experimental
VII.II. Constantes de protonacin de la a-alanina en mezclas de electrolitos a fuerza inica constante

Se han determinado las constantes estequiomtricas de equilibrio cido base de la a-alanina en mezclas de Et^NI+KN03 a fuerza inica constante I=1.4m y T=25C. Los resultados obtenidos se analizan a partir de los tratamientos de Pitzerz$ y Friedman'a,^s
VII.II.I Aplicacin de las teoras de Pitzer y Friedman

Los dos equilibrios a considerar en un aminocido con dos grupos disociables estn recogidos en las expresiones III.I y III.2, y las constantes de equilibrio correspondientes en las ecs. III.3 y III.4. Los coeficientes de actividad de las especies inicas que aparecen en los equilibrios anteriores pueden escribirse segn la teora de Pitzer, para una mezcla de KN03-EtaNI como: ^YX ^ +2'I ^ 1-y) (BNO,,x+l^CNO3,x) +2 l y(BI^+ICI^) +
+2 I{1-y) 8^^+2 ly9X^,+(1-y)2 IZ(BO,g+CNO,g+^pgô^) +
(VII.1^
+y212(BN,r+CN.I+^PH,N.,) +(1-y) i^ ^(BN03,N+CNO3,N+^pHô3^)+
+(1-y) y I2(B%^+^^,^+^H^,^>+I2y^1-y>'^H,NO,,^
^YA- J +2'I ll -y)(BA,1^+1 CA,1^)
+21 y(BA,N+I CA,^,) + (VII.18)
+2 I { 1-y) 6A,^,o3 +2 Iy'9A,^+(1-y)2 ^(Bivos,x+CNO^+ Â,NO3,x) +

+y2 ^^(BN,I+CN,f+^N.l^l) +(1-y) y I2(BNOyN+CN03,N+Â,N03,N) +
+(1-y) y I2(8^,^+^1,^+Â,^x>+IZyÎ -y)'Â,N^

en la que mK = mNO3 = I(1-y), y mi = m^,N =I. y, I es la fuerza inica total, e y representa la fraccin de fuerza inica correspondiente al ioduro de tetraetilamonio. El smbolo N ha sido utilizado para representar el ion EtdN+^ La expresin
123
^ correspondiente a ln y,^.12 es idntica a la ec. VII.17 pero sustituyendo H+ por AH,+. La dependecia del pazmetro B, que da cuenta de las interacciones dobles entre iones de distinto signo, con la fuerza inica viene dada por la ec. I.19, y la funcin f^ por la e . L 18.
El coeficiente de actividad del zwitterion (AH), en el caso de que presente el mismo comportamiento que una molcula neutra, sin sepazacin de cargas, viene dado por:
ln^(^=2I(1-y)(^.AH,N03+ÂH,K)+2Iy(,AH,I+ÂHN) _
(VII.19)
=27(1-Y)(^NO3,x)+2Iy(^lI,N)
La dependencia de las dos constantes de equilibrio con la fraccin de fuerza inica se obtiene despus de tomaz logaritmos y sustituir cada coeficiente de actividad en las ecs. III.3-4:
-1nKi =-ZnKi +(1-y)2I '[BH.NO3-BAHZ.NO3+I`^H,NO3-CAHyN03 )+e^,%gAx2,x+^,r,N]+ +y21[B1^,r-BAx2^+I(Cx,r-CAHZ,^)
+ex,^-eAH2,N+^NO3x] +
^x,r,g-Âxr,x)
(VII.20)
+(1-y)2 '^^V ^HJ^03,K- ÂHZN03,K) +Y2'12(^H,N,r-Âfr2,N,r)

+y(1 y)I2(V^x,NO^-ÂHZ,NO3,r+
TH.NO3,N-TAHbNO3^N+
-1nK2 =-lnK2 +2f +y2I [BX,I+BA,N+I(CH,I+CA,N)+eA^+BR^-a.l^] +
+(1-Y) 2I [BA,K+BXN^3 +I(CA+K+CHN03) +eX,K+eA,NO3 -J1N03.1^] +
+y2 z(2B^+2CN,I+1V A,N,1+^V H,NJ) + +(1-y)2 ^(2BjVOyK+2CNOy+i^lA,N03^+^fIN03,K) + (VII.21)
+y(1-y)l(2B^+2Cr,x+Â,r,g+ ^H,1,B+2BN03^+2CN03,N+ ^rA,NO3,N+^x,NO3,N)+
+y(1-y)I2(VÂ,N,g+â,r,NO3)
124
Parte Experimental
Para el caso en que I sea constante, todos los trminos que multiplican a 1-y e y tambin lo son. Se aprecia en las ecuaciones anteriores que el trmino cuadrtico en el caso de pK2 es una suma de parmetros B ,C y >li, mientras que en el caso del pK; es una diferencia entre pares de parmetros ^y, por lo que en el caso de ser estos de la misma magnitud e igual signo implicara prcticamente la desaparicin de dicho trmino.
En aquellas situaciones en las que el aminocido se encuentre en presencia de un nico electrolito, por ejemplo nitrato potsico o ioduro de tetraetilamonio, para la a-alanina las expresiones correspondientes para los coeficientes de actividad de las distintas especies se obtienen de las ecuaciones anteriores haciendo y=1, si solo existe ioduro o bien, y=0 si solo existe nitrato y suprimiendo las interacciones cruzadas tales como N,N03 y K,I, inexistentes en los sistemas sencillos.
Ahora bien, teniendo en cuenta que los coeficientes de actividad recogen la desviacin de la idealidad de los sistemas reales se hace patente la posibilidad de ligar las expresiones anteriores con algn tipo de energa libre de exceso: II ^`' OG,à` y` - 1T1 T =111%i ` RT II nP
^p P
lIIK T=121K
(VII.22)
en donde OGeX representa el trmino logartmico que contiene el cociente de los coeficientes de actividad de las especies que intervienen en el equilibrio en cuestin. Pasando a logaritmos decimales se obtiene: pK`=pKT+ 1 pG>^` RT 1n10 (VII.23)
Por analoga con el procedimiento empleado en el estudio clsico de
125
mezclas en ausencia de un equilibrio qumico', para el proceso representado en la Fig. VII.3:
FIGURA VII.3 I=cte, T=25C
-alanina AHZ ^ AH + H+ AH^H++A' en Et4M
a-alanina AHZ ^ AH + H+ AH: H++A' en KNO, (1-y)I
a-alanina AHZ ^ AH + H+ AH^H++A en Et,NI+KNO,
YI
se define:
A^[A G^`] = A G^`- LY O G^ro +(1-Y) OGâto.l
(VII.24)
Segn Friedman141a variacin de la energa libre de Gibbs de exceso de mezcla se puede expresar como: O m[O G*"l (Y^ = IZ ^y(1-y) ^ gp (1-2y^ P=0,1,2,... (VII2^
En el apartado siguiente se har una comparacin de las expresiones obtenidas a partir de los desarrollos de Pitzer y Friedman a la luz de los resultados obtenidos.
VII.II.II. Resultados y discusin

En la Fig. VII.4 se observa una variacin lineal del pK, con la fraccin de fuerza inica. Los datos utilizados en la representacin grfica se recogen en la tabla VII.S:
126
Parte Ezperimental
TABLA VII.S. Valores de pBm frente a la fraccin de la fuerza inica de yoduro con 7=1.4 m para la a-alanina PKa ' 9.789 9.737
yN 0.00 0.25
P^t 2.448 2.463
0.50
0.75
2.482
2.495
9.695
9.658
1.00
2.533
9.629
Si restamos a cada valor del pK; (i =1 y 2) en la mezcla, los valores de los pK; en los electrolitos puros multiplicados por la fraccin de fuerza inica de cada uno de ellos en la mezcla, se obtiene, para ambos equilibrios de la a-alanina: Om,1=(PK^ )m-Y(PK^ )^-(1-Y)(PK^ )gô3=
In1O (^H,N03,1-ÂHZ,N03j+^H,N03,N
(VII26)
-ÂHZ,N03,1V+^H1. ^,lHZ,,A)y(1-y)=
=A, 12 y(1-y)
0^,2(PKi)m-y(PKZ),^-(1-Y)(PKZ)xô,= _ ^ O (2Bjvo,,rv+2CNO,,n,+^H,rvo3,^v+Â,^vo,,^,+
+2B^+2CIJC+^H,I,K+Â,^,S+ ^VH,nrO,,r+^VA,N,K)Y(1-y)
=A2 n y(1-y)
donde en los trminos A, y AZ se han incluido, para los dos equilibrios, los parmetros constantes y el factor de conversin entre logaritmos.
127
De todas fonmas para comprender el significado de ^,,,,, y 0,,,,2 en funcin de energas de exceso es necesario tener en cuenta que al restar al pK; y pK2 del aminocido en la mezcla, el correspondiente al sistema en el que se haya solo presente uno de los electrolitos, multiplicado por su fraccin de fuerza inica, supone que se anula la energa de exceso debida a interacciones que ya existan en los dos sistemas ms sencillos (aminocido+Et^l`TI y aminocido+KN03), quedando solo reflejadas en A,,,,, y 0,,,,2 las interacciones nuevas propias de la mezcla ternaria que no existan en las binarias, esto es, las interacciones triples recogidas en los parmetros presentes en las ecuaciones VII.26 y VII.27. Estos parmetros se pueden relacionar con la energa de exceso correspondiente al proceso de mezcla, simbolizada como 4GE, obtenindose a partir de las ecuaciones VII.26 y VII.27:
^mG j=RTA,Y(1-Y)^ ^.2)
AmG 2=RT A?y(1-y)1
(VII.29)
donde todos los parmetros constantes han sido englobados en A, y A2, en tanto que y vara entre 0 y 1; de esta forma las representaciones de ^GE vs. y, donde y E[0,1], debieran ser parbolas simtricas con respecto a la recta y=0.5, que cortan al eje de abscisas en y=0 e y=1, con un mximo en y=0.5.
Reordenando la ecuacin de Friedman, se observa que concuerda con la ecuacin VII.25 para p=0 y en consecuencia: go=A1
para el leT eq.
(VII.30)
go=A2
para el 2^ eq.
(VII.31)
la posible presencia de trminos superiores vara la forma de la representacin ^GE vs. y, as por ejemplo, cuando se observa asimetra en la parbola suele atribuirse al trmino g, .
128
Parte Experimental
Si se parte de las ecuaciones VII.26 y VII.27 y se considera aproximadamente cero el segundo miembro, lo que puede deberse a que los coeficientes ^G-^0 (es decir, que no se consideren interaciones triples), entonces se obtiene la ecuacin:
ÎI.32)
(PK`),^=y(PR`)M+(1-Y)(PK')^vo,
lo que constituira una elcpresin aplicada a situaciones de equilibrio qumico de la primera regla de Younglb.l', segn la cual, la propiedad de la mezcla se puede aproximar a travs de una ponderacin apropiada de las propiedades de las disoluciones de los electrolitos simples. Definiendo:
(PK'>^vo, -r ^Ks)Nr
(VII.33)
se obtiene:
(pK')m=(pK`),,n.[r+y.(1-r)] ÎI.34)
por lo tanto en este caso el pK` de la mezcla es una funcin lineal de la fraccin de fuerza inica, tal y cmo se observa en la Figura VII.4.
129
FIGURA VII.4. Valores de pK^, frente a la fr.accin de fuerza inica

de ioduro con I=1.4 para la a-alanina
2.8 ^
2.55 -I
2.45
2.4
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
9.8 ^
9.75 ^
9.65 ^
9.6 0.0
^ 0.2
0.4
0.6
-T 0.8
^ 1.0
y1Nl)
130
Parte Experimental
Bibliografa
1. Perrin, D.D. in: Organic Ligands. Pergamon Press, ( 1979). 2. Pitzer, K.S., Theory: Ion Interaction Aproach in Pytkowicz R.M.(ed) Activity Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C. Press Inc., Boca Raton, Florida, (1979) 3. Pitzer, K.S. and Brewer, L. Revision of Lewis and Randall's Thermodynamics Mc Graw-Hill, New York, Chapter 23., ( 1961). 4. Scatchazd, G., J. Amer. Chem. Soc.,83, 2636, 1961. 5. Reilly, P.J.; Wood, R. H., Robinson, R.A., J. Phys. Chem., 75, (9) 1305, (1971). 6. Pitzer, K.S., Silvester, L.F., J.Sol.Chem.,5, 269, ( 1976). 7. Statistical Package SOLO. Distributed by BMDP Statistical Softwaze Inc. Version 03 8/88. 8. Pitzer, K.S., J. Chem. Phys., 77(2), 268, (1973) 9. Albert, A., Serjeant, E.P., Determination of Ionization Constants, Chapman and Hall, New York, Cap. 3, ( 1984).
lO.Fio1, S., Tesis Doctoral, Aplicacin de la ecuaciones de Pitzer a equilibrios cido-base: Estudio de la ionizacin de aminocidos en agua de maz sinttica, Universidad de La Corua, Marzo, 1994
11. Fiol, S., I. Brandaziz, R. Herrero, Vilario, T., Sastre de Vicente, M., Ber. Bunsen. Phys. Chem., 98, (2), 164 (1994). 12. I. Brandaziz, Fiol, S., Herrero, R., Vilazio, T., Sastre de Vicente, M. J. Chem. Eng. Data, 38, 531, (1993) 13. Herrero, R., I. Brandaziz, Fiol, S., Vilario, T., Sastre de Vicente, M.E., An. Qum. 89, 602, (1993) 14. Friedman,H.L.Ionic Solution Theory, Interscience-Willey, New York, (1962). 15. Hua Xu, Friedman,H.L., J.Sol.Chem., 19(12), 1155 (1990) 16. Young, T.F., Smith, M.B., J.Phys.Chem., 58, 716 (1954) 17. Young, T.F., Rec.Chem.Proc., 12, 81 (1951)
Conclusiones
Conclusiones
133
Conclusiones
1. La;,depenrlencia,<pK^ vs. l para PK^ y Pg^ ;de un 'a aminocido puede ser explicada expresando los coe,ficientes de 'ackvidad de las especies que' aparecen en los equiiibrios en fncin de la fuerza inica aplicando tas teoru de . Guggenheim, Scatchard o Pitzer. Los resuitados obtenidos para la L-valirta permiten constatar que <ningcuca de lur tres es superior a las otras a 1a hora de explicar e1 comportamiento experimental
Z. Se ha llevarlo a cabo un anlisis matemtico de lus funcivnes : que describen la dependencia de la eonstante estequiomtrica cido-base con la fueiza inica, al apdicar ,el formalismo de ' Pitzer a los coeficientes de > actividad de las especies que <aparecen en dos' equilibrios de monoprotonacin
representativos. Se ha efectuado, tambin, una simulacin de las curvus de pR? en frcncin. de la fuerza iniea que permite globalmente brterpretar la dependencia pg; vs. I.
134
Conclusiones
3. Se han ensayado dos modelos e oe para la'especie'zwtterinica: :
iente de'actividad
) Bien como una molcula sin separaci
de carga o
ien considerando que las dos cargris interaceionan de forma independiente con los iones del medio. El comportamiento de pK* vs: I en ambas situaciones es. opuesto; esto es, en'; el primer easo se ohserva un crecimiento pronunciado rlel pK^ cuando I-0, por;el contrario este hecho se observa para pR;^ en el segundo 'casa ' b) EI intento de lodelizacin de situaciones intermedias n los dos comportamientos lmite del zwitterion ha puesto e mauifcesto la importancia de valores a,fuerzas inicas<bajas y el rnadelo utilizado en la determinacin 'del pl^.':
4. Ei !modelo' de Pitzer resulta ms manejable que el <de ' Scatchard al estuiar equilibrios en una mezcla de dos o rns electroltos. Los parmetros de mezcla a partir de esta teora pueden ser despreciados para electrotos dbiles a fuerzas inicas'relativamente bajas, tal y como se pone de manifiesto ai ' calcular los parmetros de interaccin en el intervalo de I comprenddo entre 0.I y 1.S con igual uerza inica de dos ' electrolitos. Este hecho conduce a la posibitidad de extrapatar el comportamiento en la mezcla a partir de los datosobtenidos ' en los electrolitos sencillos aunque el error con que se calculan ' `los parrmetros' no permite comprobar esta apreciacin, taI y;' como se evidertcia a partir de los datos obtenidos para la L valina en mezclas de %CI-gBr y gIVO^-gCl.
Conclusiones
135
5. La determinacin; de pK* y p%^ de la ^-alartina en una mezcla rle ioduro de tetraetilamonio y nitrato potsico, aûerui inica constante variando ta proporcitt de cada uno de ellos en fiesto el cumplimiento de la ^gla la me.zcla ha puesto de mcr^ de Young, esto es,, la posibilidad, de calcular e! pR' en la mezcla a partir de los correspondientes a lor electroliios puros.
Apndices
Apndice A
139
Apndice A
Datos del potencial formal en nitrato potsico obtenido de los calibrados cidos en las fechas que se indican en las tablas. La representacin de los valores medios se haya representada en la figura III.3.
M(KNO^Î^ 0.05 0.05 0.1 0.1 0.1 0.3 0.3 0.5 0.7 E 370.57 371.86 372.83 37325 373.19 374.24 373.74 374.91 376.15 p (^^f 57.89 58.24 58.61 58.70 58.68 59.45 59.17 59.41 59.58 ' fecha
0.9999
0.999
17-3-1992
16-3-1992
0.9999 0.9999 0.9999 0.9999

0.9999
6-2-1992
7-2-1992
6-2-1992
3-2-1992
3-2-1992
3-2-1992
3-2-1992
4-2-1992
10-2-1992
4-2-1992
5-2-1992
5-2-1992
10-2-1992
11-2-1992
5-2-1992
0.9999 0.9999 0.9999

0.9999
0.9
0.9 1.1 1.3
377.69
377.42 378.59 379.46
59.61
59.41 59.74 59.61
0.9999 0.9999 0.9999

0.9999
1.5
1.5 1.7 1.7 1.9
380.31
381.26 382.49 381.58 383.93
59.68
60.03 60.11 59.89 60.69
0.9999
0.9999 0.9999 0.9999
6-2-1992
6-2-1992
10-2-1992
23-3-1992
1.9 1.9
2.0
384.41 384.23
384.18
60.79 60.58
60.47
0.9999 0.9999
^'^ I, M(KNO^ es la fuerza inica de nitrato potsico expresada en la escala de molaridad a^ pendiente Nersntiana que debe ser aproximadamente 59.16 mV
140
Calibrados en KN03
M(KNO^
P (^^'
371.66 374.65
377.19
fecha
0.05 0.05
0.05 0.1 0.1 0.1 0.3 0.3
58.36 59.43 60.01

59.11
0.9998 0.9999 0.9999 0.9999 0.9999

0.9999
14-5-1992
15-5-1992 24-6-1992
15-5-1992 14-5-1992
373.68
375.78
374.51 375.01
375.62
60.26
59.50
24-6-1992 30^-1992
24-6-1992 8-5-1992 12-5-1992
59.10 59.85
60.11 59.33 59.75
0.9999 0.9999
1.0000
0.5
0.5
376.90 374.66
376.21 376.40 377.47
378.04
0.9999 0.9999
0.9999
0.5
0.7 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5 1.5
24-6-1992
24-6-1992
59.58 59.93
59.76 59.44
60.00
0.9999 0.9999
0.9999
16-6-1992
16-6-1992
378.32
380.37 380.56 375.95
16-6-1992
16-6-1992 16-6-1992
0.9999
0.9999
59.66 60.38
0.9999
18-5-1992
Apndice A
141
l^q(KNp^
p(mV}
fecha
0.05
0.05 0.05
367.26
373.19 374.87
57.04
59.32 59.98
0.998
0.99999 0.99996
0.1
0.1
372.56
372.36
59.06
58.95
0.99999
0.99995
23-3-1993
23-3-1993
0.1
0.1
372.65
371.63
59.32
58.95
0.99999
0.99999
5-5-1993
5-5-1993
0.3
0.3 0.3 0.3 0.5 0.5 0.7
372.49
373.14 371.50 372.62 371.38 371.48 372.40
59.17
59.39 59.03 59.49 59.24 59.28 58.92
0.99998
0.99998 0.99999 0.99999 0.99999 0.99999 0.99999
23-3-1993
23-3-1993 5-5-1993 6-5-1993 20-4-1993 20-4-1993 22-4-1993
0.7
0.7
372.62
372.65
58.88
59.20
0.99999
0.99999
22-4-1993
26-4-1993
0.9
0.9
374.57
374.20
59.46
59.48
0.99999
0.99999
4-5-1993
27-4-1993
0.9
0.9 1.1 1.3
373.95
374.88 374.21 375.13
59.24
59.74 59.12 59.13
0.99999
0.99999 0.99999 0.99999
30-4-1993
-1993 27-4-1993 27-4-1993
1.3
375.99
59.15
0.99999
27-4-1993
142
Calibrados en KNO,
1, M(KNO^ 0.1 0.3
P {m^
`feeha
368.73
368.79
369.97
371.24
58.67
58.94
59.22
59.03
0.9999 0.99999
1.00000 0.99999
14-3-1994 18-1-1994
15-3-1994 19-1-1994
0.3 0.3
0.5 0.5 0.5
370.81
370.23
371.90
59.28
58.95
59.08
0.99999 0.99999
0.99999
15-3-1994 17-1-1994
18-1-1994
0.5
0.7 0.7
371.76 370.97
371.20
59.19 59.00
58.85
0.99999 0.99999
1.00000
19-1-1994 14-3-1994
16-3-1994
0.7 0.7 0.9

0.9
371.40 371.07
370.58
371.95
58.83 58.84
58.82
58.57
0.99999 0.99999 0.99999

1.00000
18-1-1994 19-1-1994 14-3-1994

16-3-1994
0.9 0.9 0.9

1.1 1.1 1.1
371.76 371.99
371.94
59.17 58.97
59.03
1.00000 0.99999
0.99999
18-3-1994 18-1-1994
19-1-1994
371.62
372.61
373.14
372.93
374.98
58.29
58.99
59.30
58.85
59.29
1.00000 0.99997 0.99999 0.99999

1.00000
18-3-1994 18-1-1994 19-1-1994 18-3-1994

16-3-1994
1.3
1.3 1.3
374.58 374.62
58.70 58.92
0.99999 0.99999
20-1-1994 21-4-1994
1.5
Apndice B
143
Apndice B
Archivos del MII^TIQUAD empleados para un aminocido con dos
grupos disociables cuando se determinan las dos constantes y cuando se determina cada una de ellas por separado.
Archivo para calcular %l

Valoracin, I=0.05 (nitrato potsico), [cido] =0.0199, 0.08629 milimoles de ,6 alanina, en 40 ml. de volumen inicial, a 25C. 2 2 2
- 3 1 1 1
25.000000 3.550000
1.780000 -14 2 1
1 2 1
0 -1 1
0 0
0.086290 0.000000
0.000000 0.019900
372.760000
40.000000 0 0 0 0.440 +99.0 0.480 + 101.5
0.520 + 103.8
0 -1 3
-1
4.020 +176.1
4.120 +177.3
144
Archivo MINIQUAD
Archivo para calcular KZ

Valoracin I=0.05 (nitrato potsico), [base] =0.0178, 0.0854 milimoles de (3-alanina, en 40 ml. de volumen inicial, a 25C. 2 2 2
25.000000 2.510000 10 1.780000 -14 2 1 0.085400 0.085400

0.000000 -0.017780
372.760000
40.000000 0 0 0 0 0.500 -166.7
0.540 -168.9 0.580 -171.0 0.620 -173.0
1 2 1 1 1 1
0 -1 1 0 0
-1 3
-1
4.140 -241.3
Apndice B
145
Archivo para calcular 1^ y B^

Valoraci, I=0.3 (nitrato potsico), [baseJ=0.1070, 0.3848 milimoles de
aminocido, 0.4194 milimoles de HCI, 0.8042 nilmoles de HCl+aminoc., en 40 nnl. de volumen inicial, a 25C.
25.000000 5.620000 10 1.500000 15 1 1 1 2 1 1
1.780000 -14 2 1 1 2 1
0 -1 1 0 0
0.384800 0.804200
0.000000 -0.107000
374.960000
40.000000
0 0 0 0 0.440 + 174. 8 0.480 + 172.6 0.520 + 170.4 0.560 + 168.3
-1 3 -1
10.100 -304. 2
Apndice C
147
Apndice C
Las constantes estequiomtricas fueron determinadas en la escala de molaridad y las transformaciones a molalidad, fueron realizadas utilizando datos de densidades, bien obtenidos de la referencia^'^, cuando se usa un solo electrolito inerte, o bien midindola cuando se trata de mezclas de ele^trolitos cuyas densidades no se encuentran en la bibliografia.
La relacin entre molalidad (m) y molaridad (M) de una disolucin viene dada por la expresin^Z^:
m= M e M=
m p
(C.1)
1 +^ m; PM; ^
P-^M;PM; ^
donde el sumatorio se extiende a tods las especies i en disolucin, p es la densidad y PM la masa molecular. La relacin entre K`mo,^, Y K'Mo,^ para un equilibrio cuya constante es del tipo K=m, ' m2/m3 viene dada por:
. ml m2 _ Ml M2 K,^= m3 M3
1
^ P- ^ M PMt
, =KM
(C.2)
P -^ Mt PM^ ^
^'^ C.R.G Handbook of Chemistry C.R.C. Press 1986-1987(198^ ^2^ Whitfield, M., Activity Ccefficients in Natural Waters in Pytkowicz R.M. Activiry Coefficients in Electrolyte Solutions, C.R.C.Press, Boca Raton, Florida, (1979)
148
Conversin Molar a molal
o bien, tomando logazitmos: pK,^ =pKM+log p -^ MtPMi ;
(C.3)
Sin embazgo paza el producto inico del agua se convierte de una escala a otra por la ecuacin:
K;=mg.mog-=Mg. Mog
1 p -^ M^ PM^ ^
1
p -^ M^ PM^ ^
c (C.4)
que, tomando logaritmos: pKM pKm+2log{ 1 (C.5) P -^ M; PM; ^
donde el cociente encerrado entre corchetes corresponde a la relacin m/M.
Usando los datos de la referencia2 y ajustando m vs. M se obtienen las siguientes expresiones paza los electrolitos indicados:
mô3 =7.192310^+0.99627 Mô3+0.0466 Mô3
(C^
Apndice C
149
mxC1=6.33610^+0.9978 MRC1+0.0328 M^l
(C.7)
m^,. = 5.913 10^+0.9976 M^,+0.04037 M^T
(C.8)
que permiten el paso de molaridad a molalidad y, tambin, conocer el valor del cociente indicado.
Apndice D
151
Apndice D
Algunos valores de constantes de los aminocidos estudiados en esta memoria se recogen en las siguientes tablas:
TABLA D.1. pK de los aminocidos indicados a distintas fuerzas inicas de g1V037 a 25C. Todos los valores se expresan en la escala de molaridad
0.00 0.00 0.10
2.35 2.31` 2.26 2.41 2.39
3.55' 3.60 3.55
4.031 4.23'
4.373 4.43'
0.50 1.00 2.47
3.68
152
Tablas de constantes de diversos AA
TABLA D.2. pKi de los aminoccidos indicados a distintas fuerzas inicas de BN03, a 25C. Todos los valores se expresan en molaridad
0.00 0.00 0.10
9.778 9.72' 9.61 9.63 9.56 9.55 9.70
10.295 10.19' 10.15
10.556 10.43'
10.804 10.77`
0.50 1.00 9.83
10.03
Todos los datos pertenecen a la referencia^'^, salvo los indicados con un asterisco se han tomado de la referencia^2^.
^'^ Perrin, D.D., Organic Ligands, Pergamon Press (1979) ^Z^ Amino Acids, and Peptides as Dipolaz Ions, Cohn, E.J., Edsall, J.T. Editores, Reinhold Publishing Corporation, New York (1943)

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UNIVERSIDADE DA CORUA

TEORIAS DE INTERACCION IONICA Y EQUILIBRIO

AMINOACIDOS EN MEDIOS SALINOS

LA CORUA, MAYO 1994

Y para que as conste, expido y firmo la presente en La Corua, a^^IViayo de 1994.

Que el presente trabajo de investigacin titulado:

Y para que as conste, expido y firmo la presente en La Corua, a 14 de Abril de 1994.

Fdo. M.E. Sastre de Vicente

a^Cra^cimiento ^ adm.iracin a rn.i director, eLJr.

ûe con û cort^tante e^ûerzo ^ deîcacin ^ hec^ Poîbê e^te trabaô.

^îm.^zez ûe^ta c^ û^ cofaôradore^ de^

cèPariam,enio cê ^sica por Perm,iirme [êvar a cao en û âôraorio â^

^.edida^ ^ ^,î^d .^ â Xunta ^â^cia Por â conceîn ^ una

cicô cûrante el curô 1990-91 r^ a l /r/ini^ferio cê îûcacin Por â deca

INDICE ..................................:............. 1 GLOSARIO DE SIlVIBOLOS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

Indice ............. IV.II. Resultados y Discusin . . . . . . . . . . Bibliografa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67

V. Anlisis Matemtico de la forma de las curvas pK'vs. I.........

V.I. Comportamiento pK; vs. I . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78

VI.I. Dependencia pK; vs. I para aminocidos con separacin de cargas 87

B'^ c,c' CU D e E fr g^^ I k

) Urra cuestin adicional que ; se ha analizad

constzntes de disociacin determinadas. caba

Teoras de Interaccin inica

I. Teo^as de interaccin inica

De esta forma para un cido dbil AH parcialmente disociado segn el

xT = ^A ^ ^H+^ _ ^A l ^H+l ' YA _ ^g^ =x`'II(Y,)"^

Teoras de Interaccin inica

^ +? ln(1+1.2fn (1+1.2fn 1.2

donde g,,,^^^ es un pazmetro de interaccin y m,,,^ es la molalidad de la sal MX en disolucin.

Otra forma de abordar el problema la constituye el modelo

I.II. Modelo de Guggenheim

Teoras de Interaccin inica

I.III. Modelo de Scatchard

coeficiente de actividad de un electrolito A en presencia de otro B es:

at^ =b1jl +b)^ +b^)Is ,

Teoras de Interaccin inica

Pocos aos despus, Scatchardg publica

I.IV. Modelo de Pitzer

1nyM.= zM f y+ 2^ ma[BMa+ \ ^^) CMa^ +

+ 2!^ mceMc + L^ L^ mcma `ZM Bca +^ti1 C^ +^ M^) c c a 2

Para un in negativo habra que intercambiar aniones cationes.

Teoras de Interaccin inica

Las expresiones para f^ y B en funcin de la fuerza inica son,

^ +?In(1+1.2^n 1 +1.2 f 1.2

B= RN)+ ^^^ [1- (1+ 2^n exp(- 2^^1

Zwitteriones: comportamiento y esbuctura

II. Zwiteriones: Comportamiento y Estructura

Zwitteriones: comportamiento y estructura

ZA'ITERION KA . CA770N KB MOLECULA NEUTRA _ . KZ ^ ANION KD

de donde la constante del zwitterion KZ puede expresazse como: KZ= (R*)_Ka=KD

Zwitteriones: comportamiento y estructura

TABLA II.1.- Valores de pgZ calculados a partir de pgl, pS2 y p%E

II.II. Interpretacin terica de las propiedades de los iones dipolares

Zwitteriones: comportamiento y estructura logy== -KRiI 3 ^ NAYe2u(^,o) 2 KR` 1n10(Dk7j2 R

Rl-C -COOH ^Rl-C -COO- + H` ^ ^ R2 Rz

Rl-C -COO- ^ Rl-C -COO- + H+ ^ ^ ^ ^

EI equilibrio del ster metlico correspondiente es:

Zwitteriones: comportamiento y estructura

Rl -C -COOMe ^ Rl -C -COOMe + H'

donde Me representa al grupo metilo. Entonces para la reaccin: + NH3

donde ^pK = pK2-pK2 =1n10 1nK2/1nK2.

Zwitteriones: comportamiento y estructura

III. Procedimiento exper-imental

aminocido con dos grupos