AMORTIGUADORES FISIOLGICOS La concentracin de protones es una de las constantes del medio interno que se mantiene dentro de lmites muy

estrechos, porque los cambios del pH provocan graves trastornos en el metabolismo. Para controlar el equilibrio cido-base del medio interno, los seres vivos disponen de un conjunto de sistemas amortiguadores: los amortiguadores fisiolgicos. Podemos clasificar los amortiguadores fisiolgicos en dos grupos: los inorgnicos y los orgnicos. Entre los amortiguadores inorgnicos ms importantes estn el sistema fosfato monocido/dicido y el sistema cido carbnico/bicarbonato. Entre los amortiguadores orgnicos ms importantes se encuentran los aminocidos y protenas y el sistema hemoglobina reducida/oxihemoglobinato.

1.- FOSFATO MONOSUSTITUIDO/FOSFATO DISUSTITUIDO (H2PO4-/HPO4=) El cido fosfrico (H3PO4), adems de formar parte de numerosos compuestos orgnicos (cidos nucleicos, fosfolpidos, azcares, etc.) tambin se encuentra en forma libre, aunque en pequea proporcin. La concentracin de iones fosfato en el plasma sanguneo es de unos 2 mEq/litro. El cido fosfrico tiene tres protones disociables segn las reacciones (Figura 7):

Cada forma, molecular o inica acta como cida respecto a la que tiene a su derecha y como bsica respecto a la que tiene a su izquierda. Se pueden establecer, por tanto, tres equilibrios de disociacin, cada uno con una constante caracterstica a 25C: K1 = 5,7 10-3(pK1 = 2,12) ; K 2= 6,2 10-8(pK2 = 7,21) y K3 = 2,2 10-13(pK3 = 12,67). Estos valores indican que el primer H+ se desprende con facilidad an a pH cido (a pH = 2,1 la mitad del H3PO4 se ha disociado a H2PO4-), lo que quiere decir que el H3PO4 es un cido moderadamente fuerte. El pK de la segunda disociacin (7,2) es el ms prximo al pH del medio interno y por lo tanto, esta segunda disociacin es la que tiene lugar reversiblemente en el medio interno, y de ah su accin amortiguadora. El tercer H+ se disocia en medio muy alcalino (pH = 12,7), y por tanto no tiene inters biolgico. A la temperatura del organismo, y teniendo en cuenta la fuerza inica del plasma en condiciones fisiolgicas ordinarias, se acepta generalmente el valor de 6,8 para el pKa de la segunda ionizacin del fosfato. A partir de este valor se puede calcular la relacin de de ambos fosfatos en el plasma a pH 7,4:

Como

la

concentracin

del

HPO4= es cuatro veces superior a la de H2PO4, el sistema es ms eficaz para amortiguar cidos fuertes que para amortiguar bases fuertes, lo cual supone una ventaja biolgica, ya que en el organismo predomina la tendencia a las variaciones hacia el lado cido. Tanto en condiciones normales como en condiciones fisiolgicas, las proporciones relativas de las otras dos especies inicas (H3PO4 y PO4) son despreciables, y no participan en la actividad amortiguadora del sistema. 3.- AMINOCIDOS Y PROTENAS La caracterstica ms llamativa de los aminocidos (AA) es la existencia en una misma molcula de grupos cidos (capaces de ceder H+) y grupos bsicos (capaces de captar H+). Por lo tanto, en medio cido se comportan como bases, y en medio bsico se comportan como cidos. Las molculas que presentan esta caracterstica se dice que son anfteros o anfolitos. Los grupos cidos y bsicos pueden neutralizarse mutuamente, constituyendo una sal interna formada por un in hbrido (carga positiva y carga negativa), que se llama zwitterion. Si consideramos un AA sencillo (que slo tiene dos grupos ionizables), ste puede adoptar tres formas inicas diferentes:

El primer grupo que se disocia es el carboxilo (pK1 = 2,22). Debido a la proximidad del grupo NH3+, el COOH se comporta como un cido moderadamente fuerte. Si aplicamos la ecuacin de Henderson-Hasselbalch al primer equilibrio de disociacin, resulta que a pH fisiolgico, la concentracin de la forma catinica es prcticamente despreciable (una de cada 151.000 molculas en la forma zwitterin). El segundo grupo en disociarse es el NH3+. Como el pK2 es 9,86, la concentracin de la forma aninica es muy pequea en comparacin con la forma zwitterin (1 molcula en forma aninica por cada 300 en forma zwitterinica). El AA se comporta a pH fisiolgico como un cido dbil que est disociado al 0,35% (Figura 14). Existe un pH para el cual la carga elctrica media de la molcula es cero. Este pH se llama punto isoelctrico (pI). El pI es el pH en el que la molcula se disocia por igual en ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK, puede obtenerse por susemisuma:

As, para la glicina (pK1 = 2,34 y pK2 = 9,6, el pI vale 5,97. As, a pH = 5,97 la immensa mayora de las molculas de glicina estaran en forma de iones hbridos (zwitterin) y no se desplazaran hacia ningn polo al aplicarles un campo elctrico. Cuando el AA contiene otros grupos cidos o bsicos, el poder amortiguador gana posibilidades. As, el cido glutmico tiene tres grupos disociables, cuyos pK son: pK1 = 2,19; pK2 = 4,25 y pK3 = 9,67:

La forma I (totalmente protonada) tiene una carga neta positiva. La forma II tiene carga neutra (una positiva y una negativa), la forma III tiene una carga negativa y la forma IV tiene dos cargas negativas. El punto isoelctrico del cido glutmico (forma II) ser aproximadamente la semisuma de pK1 y pK2 (pI = 3,22). La proporcin de molculas en la forma IV (2 cargas negativas) es tan pequea que puede considerarse como despreciable a la hora de calcular el pI. En el caso del AA arginina existen dos grupos bsicos y uno cido. La disociacin de la arginina se esquematiza del siguiente modo, donde pK1 = 1,8; pK2 = 9,2 y pK3 = 12,5

La forma I (totalmente protonada) tiene dos cargas positivas. La forma II tiene una carga neta positiva, la forma III es neutra (una positiva y una negativa) y la forma IV tiene una carga negativa. El punto isoelctrico de la arginina (forma III) ser aproximadamente la semisuma de pK2 y pK3 (pI=10,75). La proporcin de molculas en la forma I (2 cargas positivas) es tan pequea que puede considerarse como despreciable a la hora de calcular el pI. Las protenas estn formadas por la unin de AA mediante un enlace peptdico. Este enlace se produce entre el grupo COOH de un AA y el grupo NH2 de otro, de forma que desaparecen sus propiedades amortiguadoras. Sin embargo, siempre existir al menos un grupo amino y un grupo carboxilo terminal, que puedan actuar como amortiguadores. Adems hay algunos AA que aportan grupos ionizables en sus cadenas laterales: cido asprtico y glutmico, arginina, lisina, histidina, etc. La disociacin de los grupos cidos o bsicos de estas cadenas laterales presentan unos valores de pK que pueden verse alterados por la influencia de otros grupos ionizables prximos. En la Figura 18 se recogen algunos de estos grupos y sus valores de pK. Es de destacar el pK del AA histidina, que tiene un pI de 7,6 y, por lo tanto, a pH fisiolgico ser el que presente mayor capacidad amortiguadora.