Vacunasss

MICROBIOLOGIA APLICADA 1 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA
UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA. PROYECTO FINAL. OTROS PRODUCTOS DE INTERES INDUSTRIAL: VACUNA CONTRA LA ENFERMEDAD DEL NEWCASTLE.
ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA APLICADA.
PROFESOR: ISRAEL GRANDES BLANCO.
ALUMNA: JATZIRI HERNANDEZ SALAMANCA.
GRUPO: D
LUGAR Y FECHA DE ENTREGA: TEPEYANCO TLAX. A 19 DE ABRIL DE 2012.
1. MARCO TEORICO.
Los
trminos vacuna y vacunacin fueron introducidos por Luis Pasteur en 1881
despus de aplicar pblicamente para comprobar la eficacia de su vacuna antiantrxica, dichos trminos provienen del latn vacca y en honor a Edward Jenner que en 1796 descubri la vacuna contra la viruela inoculando el virus de la viruela de las vacas.
Una vacuna es una suspensin de microorganismos o fracciones de microorganismos que se utilizan para inducir inmunidad.
2. JUSTIFICACION.
La EN, como otras enfermedades de las aves, en nuestro pas constituye un riesgo similar al de una bomba de tiempo para la avicultura comercial, pudiendo afectar a los productores avcolas.
Por tal razn se han implementado agresivos programas de vacunacin, que han ayudado a disminuir considerablemente estos brotes.
3. INTRODUCCION.
Una de las enfermedades que mayor significancia econmica y sanitaria que han tenido en la industria avcola mexicana, desde el principio de la dcada de los 50, es la enfermedad de NEWCASTLE (ENC).Probablemente el agente de la enfermedad fue introducido al pas con mucha anterioridad a 1950; sin embargo, como la avicultura en esa poca consista en gallineros de traspatio, o de 50 a 100 aves y rara vez de 500 a 1000, cuando la enfermedad se presentaba en algunos de ellos, las prdidas que ocasionaba por concepto de alta mortalidad y gran disminucin en la postura, por el nmero reducido de aves, nunca se consideraron como perdidas de gran magnitud; situacin que cambio despus de 1952- 1953, en que la avicultura se empez a realizar como una industria de alta produccin de huevo para el plato y de pollo rostizado, con establecimientos avcolas de 50,100 y 200 mil aves, muchas para esa poca, en que se volvi de necesidad imprescindible proteger a cada parvada de cra y en cada granja, contra la amenaza de esta enfermedad.
El virus que causa la EN o neumoencefaltis aviar, es un miembro de la familia Paramyxoviridae del genero Paramixovirus, el cual esta integrado por 9 grupos de virus que son serolgicamente distintos y que adems tienen diferentes hospederos primarios. Los 9 grupos se designan como Paramixovirus 1 (PMV -1) que es el virus de
4
la ENC considerado como el prototipo del gnero, Paramixovirus 2 (PMV 2) hasta el Paramixovirus 9 (PMV 9) que son representantes de los grupos de virus que causan influenza en diversas especies aviares.
Fig.1. Estructura del virus
4. ANTECEDENTES HISTORICOS.
La ENC se reconoci por primera vez como entidad nosolgica de las gallinas en 1926, despus de las epidemias que se presentaron en Java (1926), Inglaterra (1927) y en Corea (1929). De los aos de 1926 a 1940, casi todos los casos graves de la enfermedad fueron detectados en o cerca de los puertos marinos en el ocano ndico.
Es muy probable que el virus de la enfermedad del Newcastle (VENC) afectara primero aves en la selva tropical hmeda del sureste de Asia. Una vez que se estableci en las aves, su difusin mundial se facilit, probablemente, por el transporte refrigerado de carne que en ese entonces era comn. La epizootia descrita por Doyle en 1926, se propago a lo largo de la costa norte de Inglaterra alrededor de Newcastle, de donde deriva su nombre comn.
4.1. DESCRIPCION DEL VIRUS DE NEWCASTLE.
Es una enfermedad muy contagiosa entre aves de origen viral producida por un Rubulavirus (paramixovirus) y las cepas se diferencian ampliamente en cuanto al grado de agresividad o de patogenisidad de la misma y se clasifican como lentogenicas, mesogenicas y velogenicas segn el tiempo que al inocularse en embrin lleguen a matarlo.
Velogenico o viscerotropico: es muy patgena, se presenta con mortalidad sbita y elevada afecta a todos los aparatos y sistemas y fue diagnosticada por primera vez en 1926 en la isla de Java. Velogenico neurotrpico: Presenta mortalidad elevada habitualmente seguida de signos respiratorios y nerviosos.
Mesogenicas: Se presenta con signos respiratorios nerviosos ocasionales, de baja mortalidad en aves adultas se presenta mayormente en aves jvenes. Lentogenicas: Se presenta con una infeccin respiratoria leve o subclnica
raramente provocan mortalidad, y se pueden utilizar como vacunas activas. Entrico o asintomtico: Normalmente consiste en una infeccin respiratoria leve no presentan sinologa por lo cual solo por medio de aislamiento viral se puede detectar y tambin son utilizados como vacuna activa.
Debemos tomar en cuenta para la aplicacin de vacuna de Newcastle, el lugar donde se encuentre ubicada la gallera, refirindome al estado de la repblica, y en que estatus est segn SAGARPA y conque frecuencia se presentan este tipo de problemas en las aves, en segundo lugar el estado de salud de las aves y de ah determinar el tipo de vacuna y cepa a utilizar para la proteccin de la progenie y reproductores, tomando en cuenta la aplicacin de la misma y periodo de proteccin, ya que cada vacuna es muy diferente entre si no es lo mismo aplicar una sota B1 que una VG/GA en nuestras aves o una virus activo que una a virus inactivo, las reacciones y el periodo de accin y proteccin de cada una es muy diferente, por lo cual es muy importante como Ya se mencion que se tenga clara la situacin y la frecuencia y la agresividad con que se presenta esta enfermedad en cada estado.
Fig. 2. Mapa de la repblica mexicana donde se muestra en color verde las zonas libres de Newcastle, y en color amarillo los estados donde estn en el proceso de erradicacin. Y en donde la vacunacin debe ser un constante en cada parvada.
4.2. TIPOS DE VACUNAS UTILIZADAS EN MEXICO PARA LA PREVENCION Y PROTECCION CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE.
La NOM establece que las vacunas que se utilicen en Mxico debern de ser elaboradas a partir de cepas lentognicas, las cuales producen muerte embrionaria a las 90hrs posteriores a su inoculacin y se clasifican como B1, de acuerdo a las normas mexicanas la dosis mnima requerida en vacunas de Newcastle elaboradas con cepas lentognicas (B1) es de 105.5 EID50 por Dosis (107.0 EID50 por ml) (NOM 013-ZOO-1994, NOM 052-ZOO-1995). En regiones donde el problema es muy frecuente se pueden utilizar de manera combinada las vacunas a activadas ms inactivadas sin ningn problema obteniendo mejores resultados y mayor
MICROBIOLOGIA APLICADA 9 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA proteccin contra ENC. En el siguiente cuadro se presentan algunas ventajas y desventajas de cada una de las vacunas activadas vs inactivadas.
Vacuna activada a virus vivo Econmicas Aplicacin agua de bebida, aspersin y ocular Sensibles a cambios de temperatura y luz solar Inmunidad corta bajos niveles de anticuerpos Riesgo de diseminacin a aves no vacunadas Presentan reaccin postvacunal que se puede complicar
Vacuna inactivada a virus muerto Un mayor costo Aplicacin solo por va subcutnea o intramuscular Inmunidad prolongada Homogeneidad en niveles de anticuerpos Sin riesgo de diseminacin en aves no vacunadas No presenta reaccin postvacunal en las aves
Cuadro 1. Representando ventajas y desventajas de una vacuna activada vs vacuna inactivada.
4.3. CEPAS VIRALES LETOGENICAS EMPLEADAS EN LA ELABORACION DE LA VACUNA DE NEWCASTLE EN MEXICO.
Vacuna activada a virus vivo
Vacuna inactivada a virus muerto
B1 tipo B1
ULSTER
La Sota B1
La Sota Tipo B1
VG/GA
KIMBER
CLONE 30
CLONE 30
Cuadro 2. Representando tipos de cepas lento gnicas utilizadas en la elaboracin de vacunas contra Newcastle en Mxico.
4.4. CALENDARIO DE VACUNACION DE NEWCASTLE EN MEXICO.
NACIMIENTO Marek
14 A 21 DIAS Activada. va ocular una gota x ave cepa la Sota B1 ms 0.2ml X ave vacuna inactivada va subcutnea cepa la Sota B1
52 DIAS Activada. va ocular una gota x ave cepa la Sota B1
3 MESES
6 MESES
CADA 6 MESES A LO LARGO DE LA VIDA DEL AVE Activada. va ocular una gota x ave cepa la Sota B1 ms 0.5ml X ave vacuna inactivada va subcutnea cepa la Sota B
0.5ml X ave vacuna inactivada va subcutnea cepa la Sota B1
Activada. va ocular una gota x ave cepa la Sota B1 ms 0.2ml X ave vacuna inactivada va subcutnea cepa la Sota B1
Cuadro 3. En este cuadro se describe que tipo de vacuna, cepa y va de aplicacin se utiliza en mi gallera dependiendo de las necesidades y estado de salud de mis aves.
4.5. APLICACIN DE LAS DIFERENTES TIPOS DE VACUNA ACTIVADA VIA OCULAR Y VACUNA INACTIVADA VIA SUBCUTANEA EN LA PARTE MEDIA DEL CUELLO DEL AVE.
Fig.3. aplicacin de vacuna ocular en pollo de 21 das de edad
10
Fig.4 aplicacin de vacuna inactivada en pollo de 12 das de edad
Fig. 5 manejo adecuado de vacuna ocular activada siempre mantener el ciclo frio no exponer a cambios bruscos de temperatura ni expuesta al sol
11
NEWCASTLE EN TLAXCALA
En el estado de Tlaxcala cuenta con una superficie de 3 914 Km 2 y una poblacin de 120 135 aves en granjas tecnificadas y de 380 517 aves de traspatio.
El estado actualmente se encuentra en fase libre de Newcastle presentacin velognica desde el 17 de agosto de 2007, hoy en dia el objetivo principal es mantener la fase antes mencionada mediante la vigilancia epidemiolgica en explotaciones tecnificadas y de traspatio.
NORMA Oficial Mexicana NOM-052-ZOO-1995, Requisitos mnimos para las vacunas empleadas en la prevencin y control de la enfermedad de Newcastle. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-052-ZOO-1995, REQUISITOS MNIMOS PARA LAS VACUNAS EMPLEADAS ENFERMEDAD DE NEWCASTLE ROBERTO ZAVALA ECHAVARRIA, Director General Jurdico de la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural, con fundamento en los artculos 35 fraccin IV de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal; 4o. fracciones I, III, V y XI, EN LA PREVENCIN Y CONTROL DE LA
12
12, 16, 21, 28, 29, 44 y 47 de la Ley Federal de Sanidad Animal; 1o., 38 fraccin II, 40 fracciones III y XI, 41 y 47 fraccin IV de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin; 12 fracciones XXIX y XXX del Reglamento Interior de esta Dependencia, y CONSIDERANDO Que es funcin de la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural, fomentar la produccin pecuaria y consecuentemente prevenir, controlar y erradicar las plagas y enfermedades que como la enfermedad de Newcastle afectan a la avicultura nacional, tanto en su nivel de produccin como en la calidad de sus productos. Que la enfermedad de Newcastle (ENC), es una enfermedad viral, contagiosa y letal que afecta a las aves domsticas y silvestres, causando alta morbilidad y mortalidad en las mismas. Que el virus de la ENC se divide por su grado de patogenicidad y virulencia en cepas lentognicas (baja patogenicidad), mesognicas (moderada patogenicidad) y
velognicas (alta patogenicidad), representado estas ltimas, un serio problema sanitario, econmico y de comercializacin para la avicultura nacional. Que la prevencin y control de esta enfermedad se basa en el establecimiento de adecuadas medidas de bioseguridad, como es el caso de la inmunizacin de las aves mediante
13
vacunas contra la enfermedad de Newcastle, que afecta a las aves domsticas y silvestres. Que para proteger a la avicultura nacional contra esta enfermedad, es necesario estandarizar los requisitos mnimos para la produccin de vacunas empleadas en la prevencin y control de la enfermedad de Newcastle, a fin de garantizar que su produccin sea de la ms alta calidad. Que conforme a las razones sealadas en los prrafos anteriores, con fecha 17 de octubre de 1996, se public en el Diario Oficial de la Federacin el Proyecto de Norma Oficial Mexicana NOM-052ZOO- 1995, Requisitos mnimos para las vacunas empleadas en la prevencin y control de la enfermedad de Newcastle, iniciando con ello el trmite a que se refieren los artculos 45, 46 y 47 de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin. Que en vista de que dentro del trmino de 90 das a que se refiere la fraccin I del artculo 47 de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, no se recibi ningn comentario en relacin a dicho proyecto, han resultado procedentes tales disposiciones en los trminos que ah se sealan, razn por la que se expiden las presentes disposiciones para quedar como NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-052-ZOO- 1995, Requisitos mnimos para las vacunas empleadas en la prevencin y control de la enfermedad de Newcastle. NDICE
14
1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN 2. REFERENCIAS 3. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS 4. DISPOSICIONES GENERALES 5. REQUISITOS MNIMOS PARA LA ELABORACIN DE VACUNAS EMPLEADAS EN LA PREVENCIN, CONTROL Y ERRADICACIN DE LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE 6. SANCIONES 7. CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 8. BIBLIOGRAFA 9. DISPOSICIONES TRANSITORIAS "APNDICE A" (NORMATIVO) PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS DE POLLO "APNDICE B" (NORMATIVO) PRUEBA DE INMUNOGENICIDAD 1. Objetivo y campo de aplicacin 1.1. La presente Norma es de observancia obligatoria en todo el territorio nacional y tiene por objeto establecer los requisitos mnimos para la elaboracin de las vacunas empleadas en la prevencin y control de la enfermedad de Newcastle.
15
1.2. La vigilancia de esta Norma corresponde a la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural y a los gobiernos de los estados en el mbito de sus respectivas atribuciones y circunscripciones territoriales, de conformidad con los acuerdos de coordinacin respectivos. 1.3. La aplicacin de la presente Norma corresponde a la Direccin General de Salud Animal, as como a las Delegaciones de la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural en el mbito de sus respectivas atribuciones y circunscripciones territoriales. 2. Referencias Para la correcta aplicacin de esta Norma deben consultarse las siguientes normas oficiales mexicanas: NOM-003-ZOO-1993, Criterios para la operacin de laboratorios de pruebas, aprobados en Materia Zoosanitaria. NOM-012-ZOO-1993, Especificaciones para la regulacin de productos qumicos, farmacuticos, biolgicos y alimenticios para uso en animales o consumo por stos. NOM-013-ZOO-1994, Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle, presentacin velognica.
16
NOM-001-SSA1-1993, Que instituye el procedimiento por el cual se revisar, actualizar y editar la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos. NOM-008-SCFI1993, Sistema General de Unidades de Medida. 3. Definiciones y abreviaturas Para efectos de la presente Norma se entiende por: 3.1. Adyuvante: Substancia capaz de incrementar la respuesta inmune. 3.2. Antgeno: Substancia que por s misma sea capaz de estimular una respuesta inmune in vivo y pueda ser utilizada en la evaluacin de la respuesta inmune in vitro. 3.3. Antisuero: Suero de cualquier animal que contiene anticuerpos contra un antgeno especfico. 3.4. Brote: Presencia de uno o ms casos de la enfermedad de Newcastle en su presentacin velognica o mesognica, en un rea geogrfica determinada y en un periodo de tiempo. 3.5. Campaa: La Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle en su presentacin velognica. 3.6. Constatacin: Procedimiento mediante el cual la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural verifica que el producto cumple con las especificaciones
17
de calidad presentadas por el laboratorio productor y/o las normas oficiales mexicanas aplicables. 3.7. Control: Conjunto de medidas zoosanitarias que tienen por objeto, disminuir la incidencia y prevalencia de la enfermedad de Newcastle en un rea geogrfica determinada. 3.8. Control de calidad: Es el conjunto de pruebas analticas llevadas a cabo en el laboratorio para certificar que las caractersticas del producto cumplen con las especificaciones vigentes. 3.9. DIEP 50%: Dosis infectante embrin de pollo 50%. 3.10. Dosis: Cantidad del producto recomendada en la etiqueta, para ser administrada en el animal. 3.11. Esterilidad: Prueba de control de calidad para verificar que un producto est libre de microorganismos viables contaminantes. 3.12. Direccin: Direccin General de Salud Animal. 3.13. ENC: Enfermedad de Newcastle. 3.14. ENV: Enfermedad de Newcastle presentacin velognica. 3.15. HI: Inhibicin de la hemoaglutinacin. 3.16. UHI: Unidades Inhibidoras de la Hemoaglutinacin.
18
3.17.
Laboratorio:
Establecimiento
de
produccin
de
biolgicos
nacional
transnacional, reconocido por la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural, que fabrique las vacunas utilizadas en la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle, conforme a la Norma Oficial Mexicana NOM-013- ZOO-1994. 3.18. Laboratorio de control de calidad: Establecimiento reconocido por la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural, que se encarga de verificar el cumplimiento de los requisitos mnimos de los productos biolgicos utilizados en la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle. 3.19. Fecha de caducidad: Lapso de tiempo asignado a un producto que designa el trmino del periodo de uso. 3.20. Inmungeno: Substancia que al ser inoculada en un animal estimula una respuesta inmune protectora. 3.21. Laboratorio aprobado: Establecimiento reconocido por la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural para realizar servicios de control de calidad y/o constatacin en materia zoosanitaria. 3.22. Lote: Cantidad especfica de producto terminado, elaborado bajo condiciones equivalentes de operacin y durante un mismo periodo.
19
3.23. Mdico Veterinario responsable: Profesional reconocido por la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural, para realizar y verificar las actividades autorizadas al laboratorio productor y de control de calidad. 3.24. Mdico Veterinario aprobado: Profesional reconocido por la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural para realizar las actividades oficiales en materia zoosanitaria. 3.25. Potencia: Prueba de control de calidad para asegurar que un producto biolgico es capaz de producir una respuesta inmune protectora, la cual se expresar en unidades internacionales o porcentaje de proteccin de acuerdo a lo establecido en las especificaciones de calidad del producto. 3.26. Producto biolgico: Aquel elaborado a partir de organismos vivos, sus componentes o productos de su metabolismo, as como de hemoderivados, que se emplean en el diagnstico, prevencin o tratamiento especfico de las enfermedades infecciosas de los animales. 3.27. Producto regulado: Aquel que puede representar riesgo zoosanitario y se encuentra bajo control de la Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. 3.28. Producto terminado: El que est envasado, etiquetado y acondicionado.
20
3.29. Pureza: Prueba de control de calidad que se realiza para verificar la presencia exclusiva del microorganismo usado en la elaboracin de un producto biolgico, activo modificado. 3.30. Procedimientos de manufactura: Conjunto de tcnicas de buenas prcticas de produccin que garanticen la calidad exigida por los requisitos mnimos establecidos en esta Norma, para las vacunas utilizadas en la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle. 3.31. Procedimientos de control de calidad: Conjunto de tcnicas de buenas prcticas de laboratorio, que garanticen al menos, la calidad en las pruebas requeridas para la verificacin y aprobacin de los biolgicos utilizados en la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle. 3.32. Secretara: La Secretara de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. 3.33. Seguridad o inocuidad: Prueba de control de calidad para verificar que un producto no cause reacciones desfavorables atribuibles al mismo. 3.34. Semilla maestra: Microorganismo identificado, seleccionado y almacenado permanentemente, a un nivel de pasaje especfico, empleado para la produccin de semilla de trabajo.
21
3.35. Semilla de trabajo: Microorganismo elaborado a partir de la semilla maestra, identificado, seleccionado y almacenado permanentemente, a un nivel de pasaje especfico empleado para la produccin de vacuna. 3.36. SPF: Libres de patgenos especficos. 3.37. Titulacin: Prueba de control de calidad para asegurar que un producto contiene la cantidad de antgeno establecido en la orden de produccin. 3.38. Tcnicas: Conjunto de procedimientos de fabricacin, verificacin y aprobacin de los biolgicos utilizados en la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle. 3.39. Vacuna contra la enfermedad de Newcastle: Producto biolgico procedente del cultivo de virus de la enfermedad de Newcastle tipo lentognico, activo o inactivado, que sea capaz de conferir inmunidad contra dicha enfermedad al ser aplicado a un animal susceptible de tal forma, que las aves vacunadas retengan su productividad si son expuestas a la enfermedad y que los animales vacunados que estn sufriendo una infeccin sean incapaces de diseminar el virus patgeno o al menos reducir la excrecin del mismo. 4. Disposiciones generales 4.1. La elaboracin y comercializacin de los biolgicos contra la enfermedad de Newcastle, estarn sujetas a lo dispuesto en el punto 9. de la Norma Oficial Mexicana
22
NOM-013-ZOO-1994, Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle, presentacin velognica. 4.2. Para la aplicacin de la presente Norma, se considerarn los procedimientos tcnicos y operativos establecidos para la Campaa Nacional contra la Enfermedad de Newcastle. 4.3. La presente Norma se orienta de manera prioritaria al establecimiento de los requisitos mnimos para la elaboracin de las vacunas, empleadas en la prevencin, control y erradicacin de la enfermedad de Newcastle en el territorio nacional, sean nacionales o importadas, con regulacin de la Secretara. 4.4. Estn obligados a cumplir con la presente Norma, los productores e importadores de la vacuna contra la enfermedad de Newcastle. 5. Requisitos mnimos para la elaboracin de vacunas empleadas en la prevencin, control y erradicacin de la enfermedad de Newcastle 5.1. Vacunas elaboradas con virus activo. 5.1.1. Las vacunas de virus activo debern de ser liofilizadas y/o congeladas. 5.1.2. Las vacunas de virus activo debern de ser elaboradas con cepas lentognicas clasificadas conforme a los estndares internacionales.
23
5.1.3. Las vacunas de virus activo liofilizadas debern ser elaboradas en embriones de pollo SPF o en cultivos celulares, a partir de embriones de pollo SPF o bien, a partir de lneas celulares, las cuales debern de ser clasificadas conforme a los estndares internacionales. 5.1.4. Las vacunas de virus activo liofilizadas debern de tener un soporte o estabilizante, que les permita resistir el proceso de liofilizacin y ser conservadas en refrigeracin a una temperatura de entre 2 y 7C. 5.1.5. Las vacunas de virus activo congeladas debern de ser elaboradas en embriones de pollo SPF, la Secretara podr autorizar otros procedimientos de elaboracin de vacunas conforme los avances tecnolgicos. 5.1.6. Las vacunas de virus activo congeladas debern tener un soporte o estabilizante, que les permita resistir el proceso de congelacin y ser conservadas en congelacin a una temperatura no menor de - 70C. 5.1.7. Las vacunas de virus activo liofilizadas y congeladas no debern de tener sales antibiticas en concentracin mayor a la permitida por los estndares internacionales, como preservativos.
24
5.1.8. Las vacunas de virus activo, para poder ser elaboradas y/o comercializadas, debern de contar con el registro de aprobacin de la Secretara, debiendo para ello haber cumplido los requisitos previos de registro de productos ante la Direccin. 5.2. Las vacunas de virus activo debern elaborarse a partir de la semilla de trabajo que cumpla con los siguientes requisitos: Por cada lote de semilla de trabajo, el productor deber realizar las siguientes pruebas: 5.2.1. Verificacin de la patogenicidad embrionaria del virus. Inocular embrin de pollo de 9 das de edad, libre de patgenos especficos con 0.2 ml del virus en la cavidad corio-alantoidea. Los embriones muertos a las 24 horas sern eliminados, considerndose muerte por traumatismo. La muerte de los embriones deber de ocurrir despus de las 120 horas post-inoculacin. El virus contenido en el fluido alantoideo de dichos embriones es capaz de hemoaglutinar eritrocitos de aves. La titulacin del virus contenido en el lquido alantoideo, se expresar en logaritmo base 10 por ml del lquido alantoideo obtenido. Se debern de registrar los resultados de la titulacin y el mtodo de clculo de resultados podr ser el de Reed and Mench o el de Karber modificado.
25
Cada titulacin de lquido alantoideo debe ser acompaado de un control positivo, el cual podr ser una vacuna de virus activo contra la enfermedad de Newcastle, cuyo ttulo sea conocido y estable y se tenga una estadstica confiable para ser utilizada como control positivo de referencia. Los eritrocitos utilizados en la prueba debern de cumplir con los estndares establecidos por la Organizacin Internacional de Epizootias, como se indica en el "Apndice A" (Normativo). 5.2.2. Prueba de pureza: Esta prueba consiste en determinar que la semilla de trabajo est libre de contaminantes. Si el producto contiene penicilina, sta deber ser inactivada mediante el uso de penicilinasa. - Mediante el anlisis bacteriolgico cuantitativo deber demostrar no contener contaminantes. En el anlisis bacteriolgico cualitativo se deber demostrar que est exento de cualquier bacteria, utilizando medios para crecimiento aerobio y anaerobio, siguiendo las tcnicas de anlisis para tal efecto sealadas por la Farmacopea Nacional conforme a la NOM-001-SSA1-1993. Debern utilizarse medios de enriquecimiento y selectivos para determinar que la semilla de trabajo no se encuentra contaminada con cualquiera de las especies del gnero Salmonella spp.
26
Debern realizarse las pruebas necesarias para demostrar que la semilla de trabajo no contenga hongos, levaduras o Mycoplasma. Demostrar que no contiene otros virus aviares tales como el de la bronquitis infecciosa, laringotraquetis, viruela aviar, adenovirus grupo I, II y III, reovirus, virus de la leucosis aviar, anemia infecciosa de las aves, encefalomielitis y otras, incluyendo el virus de la influenza aviar, neutralizando previamente al virus de la enfermedad de Newcastle. 5.2.3. Prueba de seguridad o inocuidad: Se realizar utilizando por lo menos 25 pollos SPF de 1 a 10 das de edad. Las aves se inocularn por va ocular con una dilucin equivalente a 10 dosis del producto terminado. Se observarn por un periodo de 21 das posteriores a la inoculacin, tiempo durante el cual ningn ave deber presentar reacciones indeseables atribuibles al producto. 5.2.4. Prueba de titulacin: Se reconstituir la vacuna con el diluyente que la acompaa, siguiendo las indicaciones del laboratorio productor, tomndose esta dilucin como 10o. Posteriormente debern realizarse diluciones logartmicas decimales seriadas con caldo triptosafosfatado. Por cada dilucin se deber inocular no menos de 6 huevos embrionados, utilizando para ello embriones de pollo SPF entre 9 y 12 das de edad, los cuales sern inoculados va cavidad corio-alantoidea, con un volumen de 0.1 a 0.2 ml de cada una
27
de las diluciones. Los embriones se observarn diariamente, descartndose los que mueran durante las primeras 24 horas post-inoculacin. La lectura de la prueba se realizar entre las 72 y 120 horas post-inoculacin. Para que la prueba sea considerada vlida, deber sobrevivir al menos 5 de cada 6 embriones de cada dilucin inoculada a las 24 horas post-inoculacin. Simultneamente se examinar el lquido alantoideo de cada embrin inoculado por la prueba directa de hemoaglutinacin en placa, tomando una gota de lquido alantoideo de cada embrin inoculado y de cada dilucin, confrontndolo con eritrocitos de ave del 3 al 5%, de acuerdo a lo establecido en el "Apndice A" (Normativo), considerndola como positiva en aquellos embriones en los cuales la reaccin de hemoaglutinacin directa sea franca y tambin se tomarn como positivos los embriones muertos despus de las 68-72 horas, que produzcan hemoaglutinacin. Se debern registrar los resultados de la misma y el mtodo de clculo podr ser el de Reed and Mench o el de Karber modificado, expresado como DIEP 50%/ml. La semilla de trabajo deber contener un ttulo mnimo de 109 DIEP 50%/ml de virus de la enfermedad de Newcastle. 5.2.5. Prueba de potencia: Esta prueba deber realizarse de manera obligatoria a la semilla de trabajo. Se lleva a cabo en un grupo de 20 aves SPF susceptibles de 2 a 6
28
semanas de edad, dividindose al azar en dos lotes de 10 pollos cada uno, de tal manera que un lote sea testigo y el otro el de prueba. Al lote de prueba se le aplicar el virus de la semilla de trabajo por la va y dosis recomendada por el laboratorio productor y al lote testigo se le aplicar una solucin salina fisiolgica por la misma va y en el mismo volumen que al lote de prueba. De 15 a 21 das posteriores a la vacunacin, ambos lotes de pollos sern desafiados mediante la inoculacin por va intramuscular con 0.2 ml de virus velognico viscerotrpico de la enfermedad de Newcastle, con un ttulo de 106 DIEP 50%/ml, capaz de matar o enfermar al 90% de las aves testigo. Los lotes debern ser observados durante 14 das anotndose los resultados observados. El virus de desafo deber ser recuperado de las aves testigo. La prueba se considerar satisfactoria, cuando el 90% de los animales vacunados con la semilla de trabajo permanezcan vivos y sin signos de la enfermedad de Newcastle y el 90% de las aves del lote testigo mueran o presenten signos de la enfermedad. Resultados diferentes a lo sealado, debern considerarse insatisfactorios. Para efecto de comprobacin, el elaborador y/o titular del registro deber de asegurar el 90% de proteccin y un ttulo no menor de 109 DIEP 50%/ml, para las muestras de retencin.
29
Se establecer como cepa de desafo las cepas Quertaro o Chimalhuacn, estandarizadas por un laboratorio autorizado por la Secretara. En otros pases, la semilla de trabajo podr ser desafiada con una cepa velognica viscerotrpica autorizada, clasificada conforme a estndares internacionales. 5.2.6. Prueba de inmunogenicidad: Se deber realizar conforme a lo establecido en el Cdigo Federal de Regulaciones de los Estados Unidos de Norteamrica, exclusivamente al 5 pase de la semilla maestra para los productores nacionales. En el caso de los productos importados, se debe solicitar la prueba de potencia para fines de registro y exigir los resultados de la prueba de inmunogenicidad, que haya sido realizada cuando menos tres aos antes de la fecha de solicitud de registro del producto. Tanto para los productos nacionales como para los importados esta prueba deber realizarse a la semilla maestra en forma peridica, en lapsos no mayores de tres aos y se deber contar con el certificado correspondiente como se indica en el "Apndice B" (Normativo). 5.3. Requisitos mnimos para la vacuna contra la enfermedad de Newcastle virus activo.
30
La vacuna en cualquiera de sus presentaciones deber contar con el regismtro correspondiente emitido por la Secretara, lo que permitir ser comercializada en el territorio nacional o en el extranjero. El laboratorio productor deber realizar a cada lote de vacunas las pruebas que a continuacin se describen, debindose emitir los certificados correspondientes. 5.3.1. Requisitos de pureza: La prueba deber realizarse conforme a lo descrito en el punto 5.2.2., permitindose para un lote de producto terminado, la deteccin de hasta una colonia de bacterias, hongos o levaduras no patgenos para aves por dosis. Asimismo, deber demostrarse que el lote se encuentra libre de leucosis linfoide de las aves. 5.3.2. Prueba de seguridad o inocuidad: La prueba deber realizarse conforme a lo descrito en el punto 5.2.3., permitindose para un lote de producto terminado el uso de aves susceptibles libres de anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle, lo cual deber ser confirmado por la prueba de inhibicin de la hemoaglutinacin antes del inicio de la prueba y los ttulos de inhibicin de la hemoaglutinacin tendrn que ser menores de 1:4.
31
5.3.3. Prueba de titulacin: La prueba deber realizarse conforme a lo descrito en el punto 5.2.4., debiendo presentar la vacuna un ttulo mnimo de 107 DIEP 50%/ml de virus de la enfermedad de Newcastle. En casos de productos de exportacin, el laboratorio productor podr liberar un lote de vacunas con ttulos inferiores a lo arriba indicado, conforme a los estndares del pas importador, informando de esto a la Secretara. 5.3.4. Para efecto de comprobacin, el elaborador y/o titular del registro deber asegurar el 90% de proteccin como mnimo durante el periodo de vigencia, por cada lote del producto, que no ser mayor de 18 meses a partir de su elaboracin y hasta tres meses posteriores a la caducidad indicada en la etiqueta del mismo, para las muestras de retencin. 5.4. Vacunas elaboradas con virus inactivado. 5.4.1. Deben ser emulsionadas o adsorbidas en hidrxido de aluminio, de tal forma que conserven la antigenicidad y deben ser elaboradas con cepas lentognicas. Ser elaboradas en embriones de pollo SPF o en embriones comerciales, libres de patgenos tales como Salmonella spp., Mycoplasma, virus de la influenza aviar y otros virus aviares o a partir de cultivos celulares hechos con embriones de pollo SPF; o bien,
32
a partir de lneas celulares, las cuales debern de ser clasificadas conforme al Cdigo Federal de Regulaciones de los Estados Unidos de Norteamrica vigente. Este tipo de vacunas, no debern de tener sales antibiticas y/o otros compuestos como timerosal, en concentracin mayor a la permitida por los estndares internacionales al ser utilizados como conservadores. Para poder ser elaboradas y/o comercializadas, debern contar con el registro de aprobacin de la Secretara debiendo para ello haber cumplido con los requisitos previos de registro de productos ante la Direccin. 5.4.2. Inactivacin del virus inactivado: El virus activo ser inactivado con productos qumicos. En caso de usar formol, el volumen de ste no deber de exceder de 0.3% de formaldehdo al 36% en el producto comercial. 5.4.3. Conservacin del virus inactivado. La conservacin del virus inactivado deber realizarse en refrigeracin a una temperatura que oscile entre 2 a 7C, hasta su posterior emulsificacin o adsorcin. 5.4.4. Requisitos mnimos para la vacuna contra la enfermedad de Newcastle, virus inactivado emulsionado o adsorbido en hidrxido de aluminio. Por cada lote de producto terminado antes de salir al mercado, el elaborador y/o titular del registro deber de realizar las pruebas siguientes:
33
5.4.4.1. Prueba de patogenicidad embrionaria del virus: Esta prueba deber realizarse en la semilla de trabajo de acuerdo a lo establecido en el punto 5.2.1. 5.4.4.2. Prueba de pureza: Esta prueba deber realizarse en la semilla de trabajo y en cada lote de producto previo a su inactivacin, de acuerdo a lo establecido en el punto 5.2.2. 5.4.4.3. Prueba de seguridad o inocuidad: Esta prueba deber realizarse en la semilla de trabajo y en cada lote de producto terminado, de acuerdo a lo establecido en el punto 5.2.3. pudindose utilizar aves comerciales y aplicando el producto por la va y dosis recomendada por el laboratorio productor. 5.4.4.4. Prueba de potencia: Esta prueba deber realizarse de manera obligatoria a la semilla maestra y semilla de trabajo y ser opcional en lo referente a lotes comerciales y con la periodicidad que se determine. Esta prueba se lleva a cabo en un grupo de 20 aves SPF de 2 a 6 semanas de edad, dividindose al azar en dos lotes de 10 pollos cada uno, quedando un lote testigo y un lote de prueba. Al lote de prueba se le aplicar la vacuna por la va y dosis recomendada por el laboratorio productor y al lote testigo se le aplicar una solucin salina fisiolgica por la misma va y en el mismo volumen que al lote de prueba. En pruebas a lotes comerciales se podrn utilizar aves comerciales susceptibles libres de anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle.
34
De 15 a 21 das posteriores a la vacunacin, ambos lotes de pollos sern desafiados mediante la inoculacin por va intramuscular con 0.2 ml de virus de la enfermedad de Newcastle tipo velognico viscerotrpico, con un ttulo de 104 DIEP 50%/ml, capaz de matar o enfermar al 90% de las aves testigo. Los lotes debern de ser observados durante 14 das anotndose los resultados observados. La prueba se considera satisfactoria, cuando el 90% de los animales vacunados permanezcan vivos y sin signos de Newcastle y el 90% de las aves del lote testigo, mueran o presenten signos de la enfermedad. Resultados diferentes a lo sealado, debern de considerarse insatisfactorios. El virus de desafo deber ser recuperado del lote testigo. Cada prueba de potencia realizada a la vacuna, deber de ser acompaada de un control positivo, el cual podr ser una vacuna inactivada emulsionada o adsorbida en hidrxido de aluminio, contra la enfermedad de Newcastle, cuya potencia sea conocida y estable y que tenga una estadstica confiable para ser utilizada como vacuna de referencia Para efecto de comprobacin, el elaborador y/o titular del registro deber asegurar el 80% de proteccin como mnimo durante el periodo de vigencia, por cada lote del
35
producto, que no ser mayor de 18 meses a partir de su elaboracin y hasta tres meses posteriores a la caducidad indicada en la etiqueta del mismo, para las muestras de retencin. 6. Sanciones El incumplimiento de las disposiciones contenidas en la presente Norma, ser sancionado conforme a lo establecido en la Ley Federal de Sanidad Animal y la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin. 7. Concordancia con normas internacionales Esta Norma Oficial Mexicana no es equivalente con ninguna norma internacional.
8. Bibliografa ALEXANDER, D.J. NEWCASTLE DISEASE. DEVELOPMENTS IN VETERINARY VIROLOGY, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS. BOSTON/DORDRECHT/LONDON 1988. CODE OF FEDERAL REGULATIONS. ANIMALS AND ANIMAL PRODUCTS 9-PART. 1 A 199, 113.64.
36
REVISED AS OF JANUARY 1, 1988. CODE OF FEDERAL REGULATIONS. ANIMALS AND ANIMAL PRODUCTS 9-PART. 1 A 199, 113.64. REVISED AS OF JANUARY 1, 1995. COPLAND, JOHN W. NEWCASTLE DISEASE IN POULTRY: A NEW PELLET VACCINE. AUSTRALIAN CENTER FOR INTERNATIONAL AGRICULTURAL
RESEARCH. CANBERRA, 1987. DUFOUR, LOUISE, L.J. CHRISTENSEN Y D. PAGE, RESPIRATORY REACTIONS AND INMUNOGENICITY OF A LENTOGENIC ANTERIC NEWCASTLE DISEASE VIRUS. PROCEEDINGS OF THE 39TH WESTERN POULTRY DIS. CONF. SACRAMENTO, CALIFORNIA PG. 27, 1990. HAEMOAGLUTINATION AND HAEMAGLUTINATION INHIBITION FOR AVIAN
INFLUENZA AVIAN SECTIO, NVSL. HAEMOAGLUTINATION AND HAEMAGLUTINATION INHIBITION TEST OFICIAL JOURNAL OF THE COMMUNIES, No. 1, 167/11. HOFSTAD, M.S. DISEASES OF. POULTRY, 8 EDITION. 1984. MTODOS PARA EXPRESAR LAS TASAS DE ANTICUERPOS. EN THRUSFIELD, M. EPIDEMIOLOGA VETERINARIA, ED. ACRIBIA ESPAA, 1990.
37
MOSQUEDA, T.A. Y LUCIO, M.B. ENFERMEDADES COMUNES DE LAS AVES DOMESTICAS. NORTH, O.M. MANUAL DE PRODUCCIN AVCOLA, 2A EDICIN, MANUAL MODERNO, 1986. PURCHASE, G.H., L.H. ARP, C.H. DOMERMUTH Y J.E. PIERSON, A LABORATORY MANUAL FOR THE ISOLATION AND IDENTIFICATION OF AVIAN PATHOGENS, THERD EDITION, KENDALL/HUNT PUB. CO 1989. VILLEGAS, PEDRO Y J, GLISSON, ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF A LENTOGENIC ENTERIC NEWCASTLE DISEASE VIRUS. PROCEEDINGS OF THE 39TH WESTERN POULTRY DIS. CONF. SACRAMENTO, CALIFORNIA. PG. 26, 1990. 9. Disposiciones transitorias La presente Norma Oficial Mexicana entrar en vigor al da siguiente de su publicacin en el Diario Oficial de la Federacin.
38
Sufragio Efectivo. No Reeleccin. Mxico, D. F., a 28 de febrero de 1997.- El Director General Jurdico, Roberto Zavala Echavarra.Rbrica. "APNDICE A" (NORMATIVO) PREPARACIN DE GLBULOS ROJOS DE POLLO 1.- Eritrocitos de pollo lavados a una concentracin final de 0.5% en S.S.F. que se procesan del siguiente modo: a) Se colecta una muestra de sangre de pollo sano con el anticoagulante de Alseaver(v/v). b) Se lavan los eritrocitos en un tubo para centrfuga, colocando un volumen de sangre con Alseaver y llenando el tubo con S.S.F. c) Invertir el tubo varias veces para suspender perfectamente los eritrocitos. d) Centrifugar la sangre a 800 gravedades, durante 10 minutos. e) Eliminar el sobrenadante y la capa de leucocitos (capa blanca). f) Llenar nuevamente el tubo con la S.S.F. g) Repetir el ciclo de lavado y centrifugacin 2 veces ms. Posteriormente diluir los eritrocitos a una concentracin final de 0.5% en S.S.F.
39
En un espectofotmetro ajustar a una longitud de onda 540, para dar una lectura de 0.15 a 0.17 de absorvancia para ajustar a la concentracin mencionada anteriormente. "APENDICE B" (NORMATIVO) PRUEBA DE INMUNOGENICIDAD Cada lote de semilla maestra usada para la produccin de vacuna debe ser probada para inmunogenicidad y la dosis de virus a emplear se establecer como sigue: (1) Aves susceptibles a la enfermedad de Newcastle, de la misma edad y del mismo origen sern empleados, veinte o ms aves sern vacunadas por cada mtodo de administracin recomendado en la etiqueta. Diez aves adicionales de la misma edad y origen sern usadas como controles sin vacunar. (2) Se establecer un ttulo medio geomtrico de la vacuna liofilizada obtenida de la semilla maestra de alto pasaje antes de llevar a cabo la prueba de Inmunogenicidad. Cada animal debe recibir una predeterminada cantidad de virus vacunal. Cinco titulaciones del virus debern efectuarse en una alcuota de la vacuna para confirmar la cantidad de virus administrado a cada ave usada en la prueba. Por lo menos tres diluciones apropiadas (no mayores de diluciones decimales) deben ser usadas y la prueba efectuada como sigue:
40
a) Por cada dilucin, inyecte por lo menos cinco embriones de 9 a 11 das de edad en la cavidad alantoidea con por lo menos 0.1 ml. Descarte todos los muertos durante las primeras 24 horas postinoculacin. Para ser vlida la prueba por lo menos cuatro embriones en cada dilucin deben permanecer vivos despus de 24 horas. Examine los embriones sobrevivientes para evidenciar la infeccin 5 a 7 das postinyeccin. b) Una titulacin satisfactoria debe tener por lo menos una dilucin con entre 50 y 100% de positivos y por lo menos una dilucin con entre 50 y 0% positivos. c) Calcule la DIE 50 por el mtodo Spearman Karber o el mtodo de Reed-Mench. (3) 20 a 28 das despus de la vacunacin todas las aves vacunadas y los controles deben ser desafiados intramuscularmente con por lo menos 104 DIE 50 de virus por ave y observados durante 14 das. EL virus de desafo debe ser suministrado por el Departamento de Servicios Veterinarios. (4) Si por lo menos el 90% de los controles no desarrolla signos clnicos de la enfermedad de Newcastle durante el periodo de observacin, la prueba es inconclusa y debe repetirse. Si por lo menos 19 de 20 o 27 de 30 o 36 de 40 de los vacunados en
41
cada grupo no permanecen libres de signos clnicos de la enfermedad de Newcastle durante el periodo de observacin, la semilla maestra se considera insatisfactoria. (5) La semilla maestra debe ser reevaluada para inmunogenicidad cada tres aos a menos que el uso del lote previamente evaluado sea descontinuado. Solamente el mtodo de administracin recomendado en la etiqueta necesita ser usado en la reprueba. Los animales vacunados y los controles deben reunir el criterio establecido en los prrafos c) y (4) de esta seccin. (6) Debe llevarse a cabo una prueba de identidad de cepa aceptable por el Departamento de Servicios Veterinarios. (7) Se debe realizar ante la autoridad correspondiente cualquier cambio por el uso de un nuevo lote de semilla maestra. d) Despus de que un lote de semilla maestra ha cumplido lo establecido en los incisos a), b) y c) de esta seccin cada serie y subserie debe reunir los requerimientos aplicables en 113.135 (pureza, etc.) y los siguientes: (1) Muestras del producto final de cada serie deben ser evaluadas para detectar patgenos mediante la inoculacin en embrin de pollo descrita en 113.37, excepto que si el resultado es inconcluso, la prueba de inoculacin en ave debe efectuarse empleando una vacuna evaluada satisfactoriamente.
42
5. MODO DE OBTENCION:
Deber ser preparada a partir de huevos embrionados de gallina SPF (Specific Patohogen Free) o por cultivos celulares, a partir de cepas apatgenas exclusivamente como Hitchner B1, la Sota, V4, F, con un IPIC menor a 0,4.
Los sustratos utilizados en la produccin y control de calidad de productos biolgicos aviares, deben ser SPF (Specific Pathogen Free) para la especie (sean huevos, clulas y animales) o al menos susceptibles para la enfermedad de Newcastle. Otros sustratos pueden ser utilizados en la produccin y control por medio de comprobacin cientfica, bajo la supervisin del rgano Oficial Controlador. Pollos, embriones y huevos SPF, usados en el control y en la produccin de vacunas se deben derivar de lotes de animales exentos de agentes y anticuerpos para los siguientes microorganismos:
ADENOVIRUS AVIARIO - TIPO I ROTAVIRUS AVIARIO EDS - 76 (Sndrome cada de postura) ANEMIA DEL POLLO ENCEFALO IELITIS AVIAR RINOTRAQUEITIS DE LOS PAVOS HAEMOPHILUS PARAGALLINARUM VIRUS RETICULOENDOTELIOSIS REOVIRUS AVIARIO VIRUELA AVIAR BRONQUITIS INFECCIOSA MYCOPLASMA GALLINARUM
43
ENFERMEDAD DE GUMBORO MYCOPLASMA SYNOVIAE LARINGOTRAQUEITIS INFECCIOSA MYCOPLASMA MELEAGRIDIS ENFERMEDAD DE NEWCASTLE SALMONELLA PULLORUM INFLUENZA AVIAR SALMONELLA ENTERITIDIS ENFERMEDAD DE MAREK SALMONELLA GALLINARUM LEUCOSIS AVIAR SALMONELLA TIPHYMURIUM
Deben ser controlados especialmente las enfermedades de transmisin vertical, mientras que puede admitirse un tratamiento de desinfeccin para controlar aquellas que se transmiten por contacto con la cscara del huevo.
- Definir y caracterizar Cepas Semilla Madre, Cepa Semilla de Trabajo y Cepa Semilla de Produccin.
- Inoculacin asptica de Huevos Embrionados de pollo SPF, de 9-10 das de edad, en cavidad alantidea.
- Incubacin a 37 C. Duracin de incubacin depender de cepa de virus.
- Huevos con embriones muertos dentro de las 24 horas deben ser descartados.
- Recoleccin asptica de fluidos alantideos
44
- Descartar yema y albmina.
- Conservar fluidos a 4C
- Efectuar control de calidad del producto en proceso.
- Formulacin
- Liofilizacin.
- Efectuar el control de calidad del producto terminado
6. REFERENCIAS INTERNACIONALES O DE ORIGEN:
REFERENCIA BASICA:
CFR 9 (1992- 1996) 113.329 (virus vivo)
113.300 (General requeriments for life vaccines)
113.34 (Detection haemoagglutination viruses)
113.37 (Chicken Embryo inoculation test)
113.36 (Detection of pathogens by chicken inoculation test)
REFERENCIAS COMPLEMENTARIAS:
45
British Pharmacopoeia (Veterinary) 1998.(pag. 179)
OIE MANUAL OF STANDARDS(1996) (PAG. 165)
7. DESCRIPCIN
Vacuna a virus vivo atenuado en base a cepas seleccionadas de acuerdo al ndice de patogenicidad.
8. CONTROL DE CALIDAD.
8.1. TIPO DE CEPA:
Tipo apatgena: Hitchner-B1, Lasota, V4, F u otras apatgenas con un IPIC menor a 0,4 deben ser sujetas a seleccin por dilucin lmite.
Las cepas deben tener por prueba un ndice de patogenicidad intracerebral
(IPIC) menor a 0,4 frente al desafo de cada ave por 107 DI50 por prueba o menor a 0,5 s cada ave recibi como desafo 108 por prueba.
Prueba de ndice de patogenicidad intracerebral:
46
Unos 10 pollitos de un da de edad de origen SPF son inoculados intracerebralmente con 0,05 ml de una dilucin de 101 del liquido alantoideo infectado con muestra de vacuna.
Luego de un periodo de observacin de 8 das, el ndice es calculado y debe ser inferior a 0,4.
A partir de lquido alantideo viral con ttulo hemoaglutinacion (HA) mayor a 24 diluido en sol. Salina isotnica, estril, se inoculan con 0,05 ml por va intracerebral a 10 pollitos SPF de 10 das.
Examinar los pollitos diariamente por 8 das. Anotando el resultado:
Pollitos saludables = 0
Pollitos enfermos = 1
Pollitos muertos = 2
Luego de ese tiempo, calcular el ndice medio del periodo en las muestras de virus de enfermedad de Newcastle ms virulenta (velognicas) este ndice se aproxima a 2,0. En las cepas lentognicas el ndice se aproxima a 0,0 (CFR no indica test de patogenicidad intracerebral) .
47
Prueba de identificacin de cepa por neutralizacin
La vacuna reconstituida es neutralizada por un suero inmunoespecfico inactivado. La mezcla es dejada 30 minutos a 20C y es inoculada a razn de 0,2 ml va cavidad alantidea a 5 huevos embrionados SPF de 9 das. La investigacin de hemoaglutininas en el lquido alantideo debe ser negativa despus de 4 a 7 das de incubacin a 37C y positiva en los controles inoculados con la vacuna no neutralizada. Para la identificacin positiva por lo menos 100 DI50 de los virus de vacuna deben ser neutralizadas delante del suero respectivo.
Tiempo de muerte embrionaria (TMM)
1) 2 series de huevos SPF con 9 das de incubacin son inoculados con intervalo de 8 horas, entre la primera y segunda inoculacin, va cavidad alantidea, con 0,01 ml de las siguientes diluciones de muestra de vacuna 101; 102; 108; 109; a razn de 5 huevos por dilucin. Los huevos son observados las mismas horas por un periodo de siete das. La dosis mnima letal es la ms alta dilucin en que todos los embriones de ambas series mueren y el clculo del tiempo medio de muerte de esos embriones no puede ser inferior a 80 horas.
48
2) diluciones de 106 a 109 de lquido alantideo viral en sol. salina. Inocular 0,1ml de cada dilucin. Por lo menos a 5 huevos embrionados SPF de 8 a 11 das de edad, por va alantidea. Incubar a 37C. Dejar una muestra del mismo liquido alantideo en refrigeracin por 8 horas e inocular 0,1 ml de cada dilucin por lo menos a 5 huevos de la misma edad y tipo. Incubar a 37C.
Observar los huevos durante 7 das, dos veces al da.
Registrar el tiempo medio en horas en la dosis letal mnima mata los embriones y se clasifican en cepas:
Velognicas: menos de 60 horas para matar
Mesognicas: entre 60 y 90 horas para matar
Lentognicas: ms de 90 horas para matar.
8.2 PUREZA
REFERENCIA CFR 9 (1992- 1996) 113.329- 113.35-(CFR 1992)-(Detection Viral activity) 113.37 113.36.
Referencia CFR 9 (1992-96) - 113.25 113.31 113.35
VER ANEXO PUREZA

49
8.3 INOCUIDAD:
PARA SEMILLA: Referencias CFR 9 (1992) 113.329 d. (1). (2.) 25 pollos (5 das de edad)
1.test: 25 pollos fallas aceptables: 2 rechazo: 4 Si existen 3 fallas en la primera prueba el producto puede ir a recontrol
2 test: 50 pollos fallas aceptables: 5 rechazo: 6.
PARA VACUNA:
CFR 113.329. (2) iv: -Vacunas indicadas para aves mayores de 10 das de edad, debiendo ser testadas de la siguiente forma para inocuidad:
En 25 aves de 3 a 5 semanas de edad, son vacunadas con 10 dosis de vacuna de acuerdo a las recomendaciones del fabricante.
Las aves son observadas durante un periodo de 21 das, verificando las reacciones adversas locales y generales, atribuibles al producto.
8.4 ESTERILIDAD
50
Control de Semillas y Series o Partidas (Referencia OIE Manual de Estndares- Normas Generales Cap. 1.4. ED 1996; CFR 9 - 113.27; 113.28 y 113.30/ Parte: 113.300 letra (a)(1)(2)(3)(4) (1992)
VER ANEXO ESTERILIDAD:
8.5 POTENCIA O EFICACIA INMUNOLGICA
Prueba de inmunogenicidad(CFR 9, 13.329) (c.3,4)
PARA MASTER SEED
20 aves del mismo origen SPF, y de la misma edad son vacunas por el mtodo recomendado por el fabricante.
10 aves del mimo origen y tipo son usadas como controles.
Titulaciones por media geomtrica, se extrae del mayor pasaje de la master seed. Para establecer, el titulo debe hacerse cinco titulaciones de la vacuna, para confirmar la administracin de la dosis.
Se debe hacer 3 diluciones apropiadas con intervalos que no excedan de un decimal. La prueba se conduce de la siguiente manera:
51
- Para cada dilucin inyectar por lo menos 0,1 ml a no menos de 5 embriones de 9 a 11 das de edad, por va alantidea.
- Descartar los muertos despus de 24 horas. Por lo menos deben quedar viables 4 embriones en cada dilucin, despus de 24 horas.
- Examinar los embriones sobrevivientes. 5 a 7 das despus de la
inoculacin, Una titulacin satisfactoria debe tener por lo menos una dilucin con valor 50 y 100 por ciento de positivos y otra dilucin con por lo menos 50 y 0 por ciento de positivos.
- Calcular la ID50 por medios estadsticos aceptables.(Reed y Muench, SpermanKarber).
- 20 a 28 das despus de la vacunacin, todas las aves vacunadas y controles deben ser desafiadas intramuscularmente con por lo menos 10(4)
DI50 de Virus y observadas durante 14 das.
- SI POR LO MENOS 90% DE LOS CONTROLES NO DESARROLLAN SEALES DE LA ENFERMEDAD, DURANTE EL PERIODO DE OBSERVACION, LA PRUEBA ES INCONCLUSA Y DEBE SER REPETIDA.
52
- SI POR LO MENOS 19 / 20, o 36/40 DE LAS AVES VACUNADAS NO PERMANECEN LIBRES DE SINTOMAS CLINICOS DE LA ENFERMEDAD, LA PRUEBA SE CONSIDERA INSATISFACTORIA.
PARA EL PRODUCTO TERMINADO
1). Serologa: sern vacunadas 20 aves SPF en edad de 2 4 semanas por la va indicada por el fabricante.
Para cada lote sern mantenidos por lo menos 5 testigos.
21 das despus de la vacunacin las aves sern sangradas para investigacin serolgica.
ndice de seroconversin mnimo para aprobacin ser HI:1: 25 o 1:32 segn la Tcnica del American Avian Pathology.
2.) Tcnica de potencia:
Todo lote de vacuna debe ser controlado por DP50%.
Se utilizan cuatro lotes de 20 pollitos cada uno, de origen controlado, con edad de 21 a 28 das. Uno de los lotes se reserva como testigo.
53
Los lotes son vacunados con 1:100; 1/50; y 1/15 por dosis, utilizando jeringa micromtrica.
12 das despus las aves son inoculadas por va intramuscular con 105 DI%, con una muestra de cepa velognica del Virus de Newcastle.
Las aves son observadas diariamente por un periodo de 10 das y el grupo testigo debe presentar 100% de mortalidad, con un mnimo de 80%.El nmero de aves de cada grupo que sobrevive sin mostrar evidencias clnicas, es registrado y el ttulo de la vacuna es calculado por mtodo estadstico patronizado. El resultado debe ser superior o igual a 50 DP50, con lmite inferior de confianza de p= 0,95, no pudiendo ser menor de 35 DP50 por dosis de vacuna.
3.) Prueba de eficacia:
La prueba se realiza con el producto final.
30 aves de por lo menos 14 das de edad. 20 vacunadas con una dosis y por la va indicada por el fabricante. Las otras 10 sern mantenidas como controles negativos.
Despus de 21 das los lotes sern infectados con un desafo de 10 DL50, va intramuscular con el virus de referencia.
54
Las aves sern mantenidas durante 10 das.
El 90% de los testigos deber morir o mostrar sntomas severos de enfermedad.
El 90% de las aves vacunadas deber sobrevivir y permanecer sanas.
Se acepta la validez de lo expresado en los puntos 2) Tcnica de Potencia y 3)
Prueba de eficacia, pero su realizacin, dada la situacin epidemiolgica de algunos pases, est restringida debido a que no se realizan descargas de virus.
8.6 TITULACIONES O PRUEBA DE SENSIBILIDAD
Producto terminado:
La determinacin del contenido viral es realizada a partir de muestras que fueron mantenidas a 37C por 7 das para estabilidad trmica.
La prueba ser realizada en huevos SPF o al menos susceptible para la enfermedad de Newcastle de 9 a 11 das de edad. Inoculacin por va alantidea con 0,1 ml de distintas diluciones usando un mnimo de 5 huevos por dilucin.
Los embriones son mantenidos a 37C por 5 a 7 das y posteriormente colocados a 4C durante 12 a 18 horas. Las hemoaglutininas son investigadas y el titulo calculado, deber mostrar por lo menos 105.5 DI50 por dosis de vacuna. En caso de ocurrir una
55
variacin de 100,5 del ttulo mnimo exigido, ser realizada una prueba con el doble del nmero de frascos, que se utilizaron la prueba inicial. Variaciones mayores harn considerar la prueba como insatisfactoria.
Titulacin del virus (CFR Ttulo 9 - Parte 113.329 letra (d) (3):
La titulacin del virus se realiza en huevos embrionados SPF o a los menos susceptibles para la enfermedad de Newcastle, de 9 a 11 das de edad, inoculados va alantidea, con 0,1 ml de diferentes diluciones, utilizando por lo menos 5 huevos por dilucin.
Los embriones son mantenidos a 37C por 3 a 7 das y posteriormente, colocados a 4C por 12 a 18 horas.
Las aglutininas son investigadas y el ttulo es calculado por mtodo estadstico patronizado. El mnimo aceptable nunca deber ser menor que 105,5 DIE50 por dosis de vacuna.
En caso de un ttulo inferior a 105,5 DIE50, se deber repetir la prueba de estabilidad en dos pruebas simultneas. El resultado de la media deber ser como mnimo 105,5 DIE50.
56
9.CONSERVANTES
Lactoalbmina, Fosfato mono y dipotsico, Sucrosa, Antibiticos,etc.
10. DOSIS RECOMENDADAS. VIAS DE APLICACIN.
(Especie a las que se destina)
- Indicada para aves reproductoras, ponedoras y de engorda, para ser administrada en agua de bebida, spray, intranasal o conjuntival (una dosis por ave, segn especificaciones del fabricante).
Generalmente se recomienda la vacunacin entre 2- 4 semanas de edad para evitar interferencia con anticuerpos maternos.
Reproductoras y aves de postura son vacunadas despus de las 3 semanas de edad.
13. DURACION DE INMUNIDAD.
O.I.E Manual of Standard for Diagnostics test and Vaccines
Duracin de la inmunidad depender del programa de vacunacin, el cual debe considerar el nivel de anticuerpos maternales.
57
14. PERIODO DE VALIDEZ O VENCIMIENTO:
BP 85. (liofilizada) por 12 meses.
MERCOSUR: 24 meses post- liofilizacin.
15. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO
Conservacin a 2 - 8 C al abrigo de la luz y protegido de fuentes de irradiacin.
El transporte debe realizarse en embalaje isotrmico a una temperatura de 2-8 C.
No se debe congelar.
Las vacunas reconstitudas debe ser utilizadas inmediatamente.
16. OTROS DATOS
Para liberar un lote o serie se establece la exigencia de un Test de Estabilidad acelerada (incubacin de 7 das a 37 C) para poder asegurar la estabilidad del producto frente a condiciones de almacenaje y comercializacin adversa. Este ttulo no debe inferior a 5,5 log(10) DIE 50% por dosis.
58
- Algunas cepas lentognicas de Newcastle son adecuadas para primovacunacin, en cambio otras inducen demasiadas reacciones por lo que se utilizan solo en revacunaciones
- La patogenicidad de cepas mesognicas las limita solo a ser utilizadas en planteles afectados con cepas velognicas o en la elaboracin de vacunas inactivadas.
El
uso
de
cepas
mesognicas
puede
desencadenar
severas
reacciones
postvaccinales en planteles afectados por mycoplasmas, en aves inmunodeprimidas, enfermas o con afecciones respiratorias.
NORMAS ARMONIZADAS.
ANEXO 8.2 PUREZA
A) Semillas: Solamente debe contener virus especifico de Newcastle.
B) La vacuna debe estar libre de Mycoplasma, Salmonella, Leucosis linfoide aviar, virus extraos y virus hemoaglutinantes; siguiendo las tcnicas descritas por el CFR.
C) Concentracin Celular: Las vacunas deben contener una concentracin viral de 107 dosis infectante embrin 50% (DIE50%) por mililitro.
59
De Semillas: Las Semillas solamente deben contener el Virus especifico de Newcastle. Libres de agentes contaminantes.
La vacuna debe ser Libre de Patgenos extraos: I. i. LEUCOSIS AVIAR: Cada partida propagada en fibroblastos de embrin de pollo, debe ser efectivamente controlado para detectar cantidades mnimas del virus de la leucosis linfoide aviar, que puedan ser propagados. Para controlar cultivos celulares deben tomarse 5 ml de la suspensin final celular.
Deben usarse como control negativo, cultivos de fibroblastos no inoculados.
Un grupo de fibroblastos inoculados con virus sub-grupo A y otro B, deben ser usados como control positivo A y B. Los cultivos celulares deben ser propagados e incubados a 37C (+/- 1C) por lo menos durante 21 das. Estas muestras deben ser repicadas, cuando sean necesario para mantener la viabilidad y muestras colectadas de cada pasaje deben ser testadas para el grupo antignico especifico. La prueba de microtitulacin por fijacin de complemento, debe ser realizada usando la tcnica del punto hemoltico de 50% o 100%. Para determinar la unidad de complemento, se utilizaran 5 unidades hemolticas para la tcnica del 50% y 2 unidades hemolticas para el 100%. Todos los materiales testados, inclusive los controles negativos y positivos, deben ser
60
guardados a 60C, congelados hasta que sean usados en la prueba. Antes del uso, cada muestra debe ser descongelada y congelada tres veces para romper clulas intactas y liberar el antgeno grupo especfico. El anti-suero usado en la prueba de fijacin de completo debe ser un reactivo patronizado. Cuatro unidades anti-suero deben ser usadas para la prueba. La presencia de actividad fijadora de completo en las muestras colectadas debe ser en la dilucin 1:4 o mayor. En la ausencia de actividades anti complementarias, debe ser considerada como positiva, a no ser que esa actividad pueda definitivamente ser establecida como NO causada por el virus de leucosis linfoide, Sub-grupos A y B. La actividad en la dilucin 1:2 debe ser considerada sospechosa y la muestra debe ser posteriormente sub- cultivada para determinar la presencia del antgeno grupo - especfico.
Tambin puede ser utilizada la tcnica de Elisa u otro mtodo validado. Las vacunas o lotes contaminados con VIRUS DE LA LEUCOSIS LINFOIDE AVIAR son considerados insatisfactorios.
Argentina propone que se desarrolle el Test de ELISA con antgeno P27
ii. . VIRUS HEMOAGLUTINANTES
61
Muestras de frascos de 0,2 ml del producto final son extradas e inoculadas a 10 huevos embrionados de 9 a 10 das de edad, provenientes de lotes susceptibles a las enfermedades aviares, va cavidad alantidea. Cinco embriones de la misma edad y lote, no inoculados servirn de control negativo.
Se deber testar una muestra como control positivo, por ejemplo una muestra de fluido alantideo del virus de Newcastle. Tres a cinco das despus de la inoculacin, la muestra del fluido alantideo de cada huevo deber ser controlada separadamente por la prueba rpida en placa, para constatar actividad aglutinante, usando una suspensin de hemates frescos de gallina al 0,5 %.
Si los resultados son inconclusos debern efectuarse 1 o 2 pasajes usando el fluido alantideo. Fluidos de embriones vivos o muertos deben ser usados para confirmacin por medio de estos pasajes.
Si se observase actividad hemoaglutinante significara que existe virus activo residual hemoaglutinante o de Enfermedad de Newcastle.
iii. AGENTE CITOPATOGENICOS
Se deber teir con colorante citolgico apropiado y examinar el rea total de la monocapa celular teida de fibroblastos aviares, para evidenciar cuerpos de inclusin,
62
nmero total de clulas Gigantes u otra indicacin de anormalidad celular, atribuible a agentes extraos.
iv. HEMOADSORCION
Lavar la monocapa con diversos cambios de PBS
Adicionar el volumen adecuado de una suspensin de 0,2 % de hemates, para cubrir la superficie de la monocapa. Debern ser usadas suspensiones de hemates lavados de cobayos o tipo 0 humanos. Incubar la monocapa con inoculacin de hemates a 4C por 30 minutos. Lavar con PBS y observar la hemoadsorcin.
Si la hemoadsorcin no es aparente, repetir el paso indicado en b. Incubar las monocapas a 20 - 25 C por 30 minutos. Lavar con PBS y examinar por hemoadsorcin. Si se requiere para la observacin, pueden utilizarse monocapas separadas para cada temperatura.
El material testado se considera insatisfactorio si es encontrado hemoadsorcin o efecto citopatognico.
63
V. DETECION DE AGENTES PATOGENOS POR INOCULACION EN HUEVOS
EMBRIONADOS
En el caso de vacunas a virus vivo, o de semillas de cultivo, previo a esta prueba, debe ser utilizado suero neutralizante para eliminar la accin de virus activo. En ese casos debe practicarse una dilucin del virus para que 0,2 ml contengan, el equivalente a 10 dosis de vacuna. a. a. Inocular con el producto a investigar a tres grupos de 9 huevos embrionados cada uno.
Grupo I: 0,2 ml en la cavidad alantidea de cada huevo con 9 a 10 das de edad.
Grupo II: 0,2 ml en la membrana corioalantidea (CAM) de cada huevo de 9 a 10 das de edad.
Grupo III: 0,2 ml en el saco de la yema del huevo de 5 a 6 das de edad.
b. Hacer ovoscopa de los huevos de los Grupos I y II diariamente por 7 das y del Grupo III por 14 das.
c. Eliminar los embriones que se mueren en las primeras 24 horas, por muerte no especifica. La prueba es vlida si por lo menos 6 embriones de cada grupo, sobrevive despus de las primeras 24 horas, luego de la inoculacin. Examinar las anormalidades
64
de todos los embriones que se murieron durante las 24 horas post - inoculacin. Examinar tambin posibles anormalidades de las membranas corioalantideas de estos huevos y controlar los fluidos alantideos, para presencia de agente hemoaglutinantes. Adems de esto centrifugar a baja velocidad los fluidos alantideos de los huevos embrionados, inoculados va saco alantideo, para depositar las clulas. Estas sern examinadas por prueba de anticuerpo fluorescente para virus de la Bronquitis Infecciosa
d. Si ocurren muertes por efecto atribuibles al producto se efectuara un posterior pasaje por embriones, haciendo respectivos pool de los materiales de embriones vivos y muertos. Inocular cada pool en 10 huevos embrionados por cada una de las vas descriptas en el punto a.
e. Materiales de membrana corioalantidea debe ser inoculados en la membrana corioalantidea, fluidos alantideos en la cavidad alantidea y de la yema en el saco de la yema.
vi. DETECCION DE VIRUS DE RETICULO ENDOTELIOSIS (REV):
a) Inocular la semilla, previa neutralizacin con anti-suero especifico, en 5 cultivos de fibroblastos de embrin de pollo de 8 a 10 das de edad, dejando adsorber por una hora. Luego drenar los lquidos y colocar en los frascos, medio de crecimiento.
65
b) Inocular TRES cultivos con REV, como controles POSITIVOS.
Mantener TRES cultivos como controles NEGATIVOS
c) Todos los cultivos deben ser incubados a 37 C (+/ - 1 C) y subcultivados con 3 o 4 das intervalo. El ltimo subcultivo deber ser preparado sobre lminas de 20 mm.
d) Los cultivos debern ser controlados sobre lminas, por anticuerpos fluorescentes, para detectar la presencia de Virus REV.
Las semillas sern rechazadas, si se detecta en cualquiera de las muestras inoculadas con la misma el REV- La prueba ser vlida, si se detecta en los tres controles positivos el REV, y no aparece en ninguna de los negativos
Vii. DETECCION DEL VIRUS DE LA ANEMIA DEL POLLO (CAA)
a) Preparar 12 frascos de 25 ml, con 20 ml de suspensin de clulas de fibroblastos de embrin de pollo MDCC- MSB1. (Concentracin de 5 x 10 (3) clulas por ml.
b) Despus de ser neutralizado con suero monoespecfico, el virus semilla es inoculado en 5 frascos. Simultneamente sern inoculados 4 frascos con la cepa CUX - 1 de CAA., como controles POSITIVOS.
66
Otros TRES frascos sin inocular sern mantenidos como controles
NEGATIVOS.
c) Las suspensiones son subcultivadas 8 veces con intervalos de 2 a 3 das, diluyendo 1:5, en medio fresco a 37C ( +/- 1C)
d) En el final del periodo de incubacin son centrifugadas las clulas de cada suspensin a baja velocidad ( 400G) por 10 minutos y son resuspendidas a 106 clulas por ml.
e) Volmenes de 25 ml son colocados en cavidades de una lmina multiexcavada y despus de secarlas con aire, se aplica la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI).
f) Durante los sub-cultivos la presencia de CAA puede ser evidenciada por el cambio de color de los cultivos infectados. Los fluidos se quedan rojos en el caso de los controles. El cambio de color de los subcultivos, es un indicador de la presencia de CAA por cambio del metabolismo celular. La prueba de IFI comprueba la observacin.
La semilla ser rechazada si la prueba es positiva a CAA en cualquiera de las suspensiones inoculadas con la misma. Tambin deber ser detectado el CAA en los
67
CONTROLES POSITIVOS y ningn caso de los CONTROLES NEGATIVOS. CFR VOL 9 PART, 113.37, 113.36. (1997)
8.4 ANEXO ESTERILIDAD
a) Investigacin de contaminantes de origen bacteriano y mictico.
Medio fluido tioglicolato con o sin 0,5 % de extracto de carne, utilizado para detectar bacterias aerobias. Para Clostridios y flora anaerobia, sembrar en profundidad tubos con medio fluido de tioglicolato, con 0,5 % de extracto de carne, adaptados para cultivos de anaerobios.
Medio casena, soya digerida, o medio Sabouraud para investigacin de hongos. Muestra: 4 a 10 frascos para cada uno de los medios escogidos, con 2 ml de cada frasco de vacuna o con la mitad del mismo si el contenido es menos esa cantidad.
Para Bacterias se desarrollaran los cultivos a 30 35C de incubacin durante 14 das, para Hongos durante 14 das a incubacin de 20 25C
En caso de aparecer turbiedad en los medios, pero no puede ser determinada por examen visual, se practicaran sub-cultivos del 7 al 11 da, en cantidad no menor de 1 ml
68
y transferidos a tubos de 20 a 25 ml de medio fresco e incubados durante un periodo de 14 das ms.
Resultados:
Sin ningn crecimiento en ningn frasco: La partida es satisfactoria. Si se encuentra crecimiento en cualquier frasco, la prueba debe ser repetida utilizando el doble de frascos de la semilla o partida.
Si en cualquiera de estos se presenta crecimiento, la partida o semilla debe ser rechazada.
b) Pruebas para Salmonellas:
Inocular 2,5 ml de cada frasco de la muestra de semilla o partida en dos tubos conteniendo 50 ml de medio liquido Selenito F, Tryptosa o Tetrationato. Los tubos son incubados por 18 a 24 horas a una temperatura de 37C (+/- 1C). De cada tubo se procede a sembrar placas con agar Mac Conkey y agar para Salmonella-Shigella, incubado por 18 - 24 horas a 37C (+/- 1C), con pronta lectura.
69
Si el crecimiento no es observado, las placas deben ser incubadas por mas de 18-24 horas y nuevamente examinadas. Si apareen colonias sospechosas se deben hacer sub-cultivos para identificacin especifica.
En caso de crecimiento de Salmonella la muestra o partida debe ser considerada insatisfactoria
c) Prueba para Mycoplasmas:
Inocular 1 ml, de cada uno de no menos de tres frascos de la partida o semilla, en un pool, a no menos de tres tubos conteniendo 9 ml de medio fluido para cultivo de Mycoplasma spp. Incubar los tubos a 37C (+ / - 1C)durante 14 das. Durante ese tiempo debe ser inoculado 0,1 ml del material de cada tubo a placas conteniendo medio especfico para:
Mycoplasma spp, luego de 3, 7, y 14 das del cultivo en tubos. Debe utilizarse como control un cultivo de Mycoplasma spp. Seleccionado, y otro negativo. Todas las placas deben mantenerse en alta humedad atmosfrica de 4 a 6 % de CO2, y con una incubacin de 37C (+/- 1C), durante 7 das. Deben examinarse con auxilio de microscopio estereoscpico con un aumento de 35 a 100 X o en un microscopio ptico comn con aumento de 100X..Si en algn momento se observa cambio del indicador de
70
los medios lquidos, se debe proceder al cultivo en placas. Observando el crecimiento en por lo menos una placa, del control positivo y ausencia de crecimiento en las placas de control negativo, la prueba es valida. Si son observadas colonias de Mycoplasma spp, en alguna placa inoculada con material a ser testado, y el resultado es positivo, el producto resulta insatisfactorio
71
CONTROL DEL PROCESO.
Cultivo del virus:
Los lquidos sobrenadantes de las heces o las suspensiones de tejidos obtenidos mediante la clarificacin por centrifugacin durante aproximadamente10 minutos a una temperatura que no exceda los 25C se inoculan en volmenes de 0.2ml en la cavidad alantoidea de cada uno de al menos cinco huevos embrionados de aves SPF de 9 a 11 das de incubacin.
Despus de la inoculacin, se incuban de 35 a 37C durante 4 a 7 das. Los huevos que contengan embriones muertos o moribundos cuando surgen, y todos los huevos que permanezcan hasta el final del perodo de incubacin, deberan enfriarse primero a 4C y probarlos lquidos alantoideos para detectar actividad de hemaglutinacin. Los lquidos que den una reaccin negativa deberan ser pasados en al menos un lote posterior de huevos.
CONTROL DEL INOCULO.
Caractersticas del inculo:
72
El primer principio a considerar cuando se selecciona una vacuna viva del virus de la EN es si se va a usar como vacuna primaria o secundaria, siendo su patogenicidad la principal consideracin. Los mtodos de aplicacin y frecuencia de uso son consideraciones vlidas.
La consideracin ms importante en la seleccin de un inculo para preparar una vacuna inactivada es la cantidad de antgeno producida cuando crece en huevos embrionados; raramente es rentable concentrar el virus. Se han usado tantas cepas virulentas como lentognicas para preparar vacunas inactivadas, pero las primeras ofrecen un riesgo innecesario porque supone la manipulacin de grandes cantidades de virus virulentos as como el peligro de una inactivacin inadecuada y la posible contaminacin consiguiente.
Mtodo de cultivo:
Se establece un inculo de trabajo. Si la cepa se ha clonado mediante dilucin limitante o seleccin en placa, el establecimiento de un cultivo maestro slo puede implicar la produccin de un gran volumen de lquido alantoideo infectivo (mnimo 100ml), que puede conservarse en forma de alcuotas liofilizadas (0.5ml).
Validacin como vacuna:
73
A los virus del inculo de origen desconocido se les debe realizar pases a travs de huevos SPF y ser clonados antes de producir el inculo original. Tambin puede ser conveniente algn pase a travs de pollos SPF. En cualquier caso, despus de su preparacin, del inculo original se debera comprobar su esterilidad, seguridad, potencia y presencia de agentes extraos.
CONTROL DEL PROCESO. Cada lote de vacuna con virus vivo debe probarse en cuanto a su viabilidad y potencia. Para aquellas producidas en huevos, el control ms importante del proceso es comprobar la ausencia de contaminacin bacteriana y fngica. Para las vacunas inactivadas debe probarse la eficacia del proceso de inactivacin en huevos embrionados, tomando 25 alcuotas (0.2ml) de cada lote y realizando pases cada tres veces a travs de embriones SPF. CONTROL DE LOTES. Es necesario probar la infectividad delas vacunas con virus vivos para conseguir que se administren los niveles adecuados de virus. Habitualmente se titula el virusen huevos embrionados de aves hasta conseguir la EID 50. Esto implica realizar diluciones a la dcima del virus; se inoculan 0.1ml de cada dilucin en 5 a 7huevos embrionados de aves de 9-10 das de vida.
74
Despus de 5 a 7 das de incubacin a 37C, los huevos se enfran y se prueban para demostrar su actividad hemaglutinante, que es una indicacin de la presencia del virus vivo. POTENCIA. Para las vacunas vivas, se vacunan 20 aves SPF, empleando la dosis mnima recomendada. Despus de 14-21 das, cada ave vacunada y 10 aves control se desafan por va IM con 105 LD 50 del virus de desafo de la EN. La vacuna para la prueba si al cabo de 10 das el 90% delos pollos vacunados sobrevive sin sntomas de enfermedad, pero todos los controles mueren en 6 das. Para las vacunas inactivadas, se emplean pollos SPF de 21-28 das. Se inyectan va IM 3 grupos de 20 aves con volmenes de vacuna equivalentes a 1/25,1/50 y 1/100 de una dosis. Se mantiene un grupo de 10 pollos como control. Se desafan todas las aves mediante inyeccin IM de 106 LD 50 del virus de desafo de la EN, 17-21 das ms tarde. Se observan los pollos durante 21 das. La prueba slo es vlida si todas las aves control de desafo mueren en 6 das. La vacuna cumple con la prueba si la PD. DURACION DE LA INMUNIDAD. El nivel de inmunidad alcanzado con cualquier dosis nica o rgimen de vacunacin de la EN, variar enormemente tanto con la vacuna como con la especie hospedadora.
75
Generalmente, se debera hacer una evaluacin de la longevidad de los anticuerpos del suero y adoptarse regmenes de vacunacin para mantener stos por encima de un nivel aceptable. ESTABILIDAD. El producto o vacuna final, cuando se almacena bajo las condiciones recomendadas, debera mantener su potencia durante al menos 1 ao. Las pruebas de estabilidad acelerada, tales como la reduccin de la infectividad seguida de la incubacin a 37C durante7 das, pueden utilizarse como una gua para las capacidades de almacenaje de un lote de vacuna viva. Las vacunas en emulsin de aceite, tambin deberan someterse a un agente acelerador mediante almacenamiento a37C, durante un mnimo de 1 mes, sin separacin de las fases acuosa y oleosa. Las vacunas con virus vivos deben emplearse inmediatamente despus de su reconstitucin. Las vacunas inactivadas no se deben congelar. RIESGOS PARA LOS HUMANOS. Las vacunas vivas de la EN pueden representar un riesgo para los humanos. Se ha informado que los virus de la EN, tanto los virulentos como los poco virulentos para los pollos, han infectado a humanos, causando normalmente conjuntivitis aguda despus
76
de la introduccin al ojo. Habitualmente, las infecciones son transitorias y no afectan a la crnea. Las vacunas en emulsin de aceite mineral representan un riesgo serio para el vacunador. La inyeccin accidental de humanos debera tratarse con prontitud mediante la incisin y el lavado de la zona, como para el caso de una herida por inyeccin de grasa. DATOS DE LA INVESTIGACION. El trabajo de laboratorio de la presente investigacin se desarroll en las instalaciones del laboratorio de sanidad animal del SENASA, localizado en la Av. La Molina 1915, distrito de La Molina, provincia de Lima, departamento de Lima. El trabajo de recoleccin de muestra se llev a cabo durante los meses de Enero a Julio del 2008 y el trabajo de laboratorio se realiz dentro de los meses de Julio y Agosto del 2008.
77
INGENIERIA.
VACUNA CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE PRODUCIDA POR AVIMEX
Ingrediente activo (s)
La vacuna contiene la cepa LaSota de virus de la enfermedad de Newcastle. El virus se ha propagado en huevos frtiles procedentes de rebaos libres de patgenos especficos. La capacidad de la inmunizacin de la vacuna ha sido probada por la prueba de maestro de inmunogenicidad de la semilla. La vacuna ofrece inmunidad probada con reacciones leves.
Contiene la estreptomicina y la penicilina como agentes bacteriostticos.
Contiene fungizona como un agente fungisttico.
Aviso: La vacuna ha sido objeto de la potencia rgida, la seguridad y los controles de pureza y cumple con Merial Select, Inc., y los requisitos del USDA.
Vacuna contra la Enfermedad de Newcastle (cepa Sota) Indicaciones
La vacuna se recomienda para la administracin a pollos sanos como una ayuda en la prevencin de la enfermedad de Newcastle.
78
La vacuna se recomienda para la vacunacin de pollos sanos de 14 das de edad o ms viejos de la administracin del agua potable o por aerosol. Roce la vacunacin se recomienda para la revacunacin nica. La revacunacin se recomienda a las cuatro semanas y 16 semanas de edad.
Vacuna contra la Enfermedad de Newcastle (cepa Sota) Dosis y Administracin
Vacuna liofilizada:
Orientaciones para la vacunacin de Agua Potable:
1. No abra y mezcle la vacuna hasta que se vaya a vacunar.
2. Retire todos los medicamentos, desinfectantes y desinfectantes del agua potable 72 horas antes de la vacunacin.
3. Proporcionar bebederos suficientes para que todas las aves pueden beber al mismo tiempo. Limpie y lave los bebederos a fondo.
4. Retencin de toda el agua de las aves de dos (2) a cuatro (4) horas antes de la vacunacin para estimular la sed.
5. Aadir la leche descremada en polvo para el agua a razn de uno (1) onza por galn antes de mezclar la vacuna.
79
6. Retire el sello de aluminio y el tapn de goma de un frasco de la vacuna.
7. Llene el frasco de la vacuna de dos tercios (2/3) con agua limpia, fresca y mezcle suavemente.
8. Mezclar la vacuna disuelto con agua como se muestra a continuacin:
Edad de las aves
El agua por cada 1.000 dosis de la vacuna
2-4 semanas 2.5 galones (9,9 L)
4-8 semanas 5 galones (18,9 l)
8 semanas de edad o ms 10 galones (37,9 L)
9. Distribuir la solucin de la vacuna entre los bebederos. Evite la luz solar directa.
10. No proporcionar cualquier agua potable otro hasta toda la mezcla de la vacuna se ha consumido.
Aerosol Vacunacin: Utilice slo para la revacunacin de pollos sanos de dos (2) semanas de edad o ms. No utilice para la vacunacin inicial.
80
Utilice un rociador de la entrega de un aerosol-como para dispersar la vacuna rehidratarse rpida y uniformemente a travs de una casa de los pollos.
Instrucciones:
1. Retire el sello de aluminio y el tapn de goma del vial de la vacuna.
2. Llene el frasco de la vacuna con agua fra, agua destilada. Vierta la vacuna disuelta en un recipiente y aadir aproximadamente 500 ml de agua fresca, destilada por cada 5.000 dosis de la vacuna. Mezclar bien.
3. Para la vacunacin aerosol de una casa de los pollos, se aplican a razn de 500 ml por cada 5.000 pollos.
4. Ejemplo: 20.000 aves se requieren 2.000 ml (aproximadamente 2 cuartos de galn) de la vacuna rehidratada.
5. Coloque la solucin de la vacuna en el frasco pulverizador, establecer el control de las descargas y caminar por la casa rociando a una velocidad de 1.000 aves por minuto. Dirija el chorro por encima de las cabezas de las aves.
81
6. Sea cual sea el volumen de la solucin de la vacuna se utiliza, tenga cuidado para administrar 5.000 dosis de la vacuna a 5.000 aves.
7. Antes de la pulverizacin, reducir el flujo de aire a un mnimo. Mantener el flujo de aire reducido durante 20 minutos despus de la vacunacin de pulverizacin.
8. Evitar el contacto directo con la solucin de vacuna. Use gafas protectoras y una mscara durante la pulverizacin de una vacuna de virus vivo.
9. Cualquier equipo utilizado para la aplicacin de una vacuna de virus vivos no debe ser utilizado para cualquier otro fin.
Precaucin (s)
Almacenar a 35-45 F (2-7 C). No congelar.
No vacunar a las aves enfermas.
Las aves deben estar libres de enfermedades respiratorias y las infestaciones parasitarias.
Vacune todas las aves en las mismas instalaciones al mismo tiempo.
Administrar dosis de 5.000 a 5.000 aves.
82
Evitar situaciones de estrs durante y despus de la vacunacin.
No coloque los pollos en las instalaciones contaminadas.
La exposicin a la enfermedad se debe minimizar tanto como sea posible.
Para uso veterinario solamente.
No iniciar el programa de vacunacin de las aves de reemplazo despus de las aves es de 16 semanas de edad.
Utilice todo el contenido una vez abierto.
Grabar el contenedor y todos los contenidos utilizados.
Dado que el virus de la enfermedad de Newcastle puede causar inflamacin de los prpados de los seres humanos que duran hasta tres das, se debe tener cuidado para evitar la contaminacin de los ojos, las manos y la ropa con la vacuna.
La capacidad de estas vacunas para producir resultados satisfactorios depende de muchos factores, incluyendo, pero no se limitan a, las condiciones de almacenamiento y la manipulacin por parte del usuario, la administracin de la vacuna, la salud y la respuesta de los animales individuales y el grado de exposicin al campo. Por lo tanto, las instrucciones de uso deben ser seguidas cuidadosamente.
83
El uso de estas vacunas est sujeta a las leyes estatales y federales y los reglamentos.
Advertencia (s)
No vacunar dentro de los 21 das antes de la masacre.
84
REINGENIERIA.
Los brotes continuos de grave enfermedad de Newcastle (ND) en las aves de corral comerciales demuestran que las actuales estrategias de vacunacin no son plenamente eficaces y debe ser mejorada por la nueva generacin de vacunas. En este contexto, los pollos convencionales maternalmente inmunes capa fueron vacunados in ovo con un herpesvirus de pavo recombinante que expresa la fusin (F) de genes de NDV (rHVT-ND) y / o en das de edad con un enterotrpica apatgena ND
vivo vacuna administraron conjuntamente o no con quitosano por ruta oculonasal. Las respuestas inducidas vacunales inmune y la proteccin conferida frente a un desafo con una cepa velognica viscerotrpica circulante NDV fueron evaluados. El innovador rHVT-ND/live ND-quitosano rgimen de vacunacin siempre y la mejor proteccin contra la mortalidad y morbilidad, as como la fuerte reduccin de la excrecin de virus que podra estar relacionado con la ms alta mide la respuesta inmune celular y la inmunidad mediada por anticuerpos digestivos.
85

Vacunasss

Caricato da

Informazioni sul documento

Descrizione originale:

Titolo originale

Copyright

Formati disponibili

Condividi questo documento

Condividi o incorpora il documento

Opzioni di condivisione

Hai trovato utile questo documento?

Questo contenuto è inappropriato?

Copyright:

Formati disponibili

Vacunasss

Caricato da

Copyright:

Formati disponibili

MICROBIOLOGIA APLICADA 1 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA APLICADA.

PROFESOR: ISRAEL GRANDES BLANCO.

ALUMNA: JATZIRI HERNANDEZ SALAMANCA.

LUGAR Y FECHA DE ENTREGA: TEPEYANCO TLAX. A 19 DE ABRIL DE 2012.

MICROBIOLOGIA APLICADA 2 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 3 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

trminos vacuna y vacunacin fueron introducidos por Luis Pasteur en 1881

MICROBIOLOGIA APLICADA 4 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 5 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

Fig.1. Estructura del virus

MICROBIOLOGIA APLICADA 6 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

4.1. DESCRIPCION DEL VIRUS DE NEWCASTLE.

MICROBIOLOGIA APLICADA 7 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 8 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

Cuadro 1. Representando ventajas y desventajas de una vacuna activada vs vacuna inactivada.

4.3. CEPAS VIRALES LETOGENICAS EMPLEADAS EN LA ELABORACION DE LA VACUNA DE NEWCASTLE EN MEXICO.

Vacuna activada a virus vivo

Vacuna inactivada a virus muerto

MICROBIOLOGIA APLICADA 10 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

4.4. CALENDARIO DE VACUNACION DE NEWCASTLE EN MEXICO.

52 DIAS Activada. va ocular una gota x ave cepa la Sota B1

0.5ml X ave vacuna inactivada va subcutnea cepa la Sota B1

Fig.3. aplicacin de vacuna ocular en pollo de 21 das de edad

MICROBIOLOGIA APLICADA 11 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

Fig.4 aplicacin de vacuna inactivada en pollo de 12 das de edad

MICROBIOLOGIA APLICADA 12 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 13 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 14 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 15 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 16 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 17 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 18 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 19 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 20 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 21 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 22 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 23 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 24 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 25 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 26 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 27 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 28 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 29 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 30 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 31 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 32 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 33 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 34 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 35 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 36 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 37 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 38 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 39 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 40 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 41 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 42 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 43 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

MICROBIOLOGIA APLICADA 44 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA

- Incubacin a 37 C. Duracin de incubacin depender de cepa de virus.

- Recoleccin asptica de fluidos alantideos

MICROBIOLOGIA APLICADA 45 UNIVERSIDAD POLITECNICA DE TLAXCALA