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PLASMIDIOS
Molculas de cidos nucleicos extracromosmicas que se replican autnomamente (Replicn) No codifican funciones esenciales para la funcin celular Circular o lineal Amplio rango de tamao
Plasmidios
Plasmidios contribuyen a la plasticidad gentica y la evolucin bacteriana Son dispensables Son tiles en la tecnologa del DNA recombinante. Los plasmidios usan factores del husped para las mayora de la funciones de replicacin
Plasmidio
Cromosoma
Plasmidios movilizables
Son aquellos incapaces de autotransferirse, pero pueden ser transferidos a alta frecuencia desde clulas que llevan un plasmidio autotransferible.
ori T
ori T
autotransferible movilizable
ori T ori T
REPLICACION PLASMIDIAL
1.- Funciones gnicas para la replicacin plasmidial - Origen de replicacin: OriV - Protenas Rep pueden estar codificadas en el plasmidio o en el cromosoma 2.- Regulacin del Nmero de copias - Bajo nmero de copias : 1-2 por clula - Alto nmero de copias: sobre 40 por clula Restringida vs relajada
Origen
Replicn
Regin rica en AT
Iterones
gen rep
DnaA boxes
Sitio Operador
Proteina de Immunidad
Colicina
Replicn
RNAI
RNAI
Replicacin de ColE1 usa un partidor RNA para la sntesis de la hebra Leader RNAII Origen Primosome Assembly Site promotor (PAS) RNAII RNA Pol
Preprimer RNAII se transcribe desde el promotor P(RNAII) por RNA Polimerasa
"
RNasa H RNAII Leading strand
El terminal 3OH libre sobre el RNA II clivado, actua como sitio de iniciacin para la sntesis de la hebra leading por DNA Polimerasa I
RNAII
Replicacin de ColE1 usa un partidor RNA para la sntesis de la hebra Leader (cont.)
La separacin del duplex permite la iniciacin de la hebra lagging en el sitio PAS para la sntesis discontinua de los fragmentos de Okasaki
RNAII tiene una estructura plegada la cual estabiliza la Formacin de una hebra complementaria con el origen
5 3
555 nucleotidos Expresado constitutivamente del promotor para RNAII No es traducido Plegamiento en una estructura tridimensional la cual interactua con el DNA en el origen de replicacin El clivaje del hbrido RNAII-DNA en el origen por RNasa H proporciona el terminal 3OH para la sntesis de la hebra leading
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108 nucleotidos Expresado constitutivamente desde el promotor RNAI No traducido Totalmente complementario a RNAII (antisentido) Se pliega en una estructura tridimensional definida la cual interactua con el terminal 5 del RNAII. Interaccion del RNAI con RNAII resulta en una configuracin del RNAII la cual es inactiva para la formacin del duplex DNA-RNA en el origin RNAI tiene una vida media ms corta que el RNAII
RNA I
5 3
PRNA II
PRNA I
origin
Prop
Regulacin de la replicacin de plasmidios derivados de ColE1. RNA II debe ser procesado por la RNasa H para iniciar la replicacin El RNA I se une al RNA II e inhibe el procesamiento regulando el nmero de copias
5 3
RNase H RNA II 5 5 3
Replication No replication
Replicn
AT-rica
gen rep
DnaA boxes
regin rica AT
gen rep
Protena de replicacin (Rep), codificada por el plasmidio, se une a los iterones DnaA boxes : sitios de unin de la protena DnaA del hospedero Regin rica en AT donde ocurre la separacin de hebras Adems de la protena Rep codificada por el plasmidio se require proteinas de replication del hospedero (Ej. DnaA, DNA Pol III, primase [DnaG], helicasa [DnaB], single-stranded binding protein [SSB], etc.)
Rep
Iterons
Secuencias repetidas directas: 3-7 copies Cada iteron tiene generalmente 17-22 bp en longitud; iterones ms cortos se separan por espaciadores para dar una longitud de 22-bp: 22-bp
Iterons
Rep
Protena DnaA
Protena DnaA (codificada por el husped) se une a los boxes DnaA
Host-encoded DnaA
Rep
RepA-DnaA-DNA forma un complejo nucleoproteco que promueve la separacin de hebras en la regin rica en AT-rich en el origen La separacin permite el acceso de de las protenas de replicacin codificadas por el husped (DnaA, DNA PolIII, primasa [DnaG], helicasa [DnaB], single-stranded binding protein [SSB])
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Regulacin de la replicacin de plasmidios con iterones Modelo handcuffing o coupling para la regulacin de plasmidios con iterones. A baja concentracin del plasmidio, la protena Rep solamente se une a un plasmidio iniciando la replicacin A alta concentracin del plasmidio, la protena Rep une a dos plasmidios, impidiendo la replicacin
Baja concentracin de plasmidios Alta concentracin de plasmidios
Replicacin
No replicacin
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PARTICIN
Division celular and Cell Division y distribucin desigual Uneven Plasmid del Distribution plasmidio
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Particin
par funcin que evita que la clula pierda el plasmidio
Plasmidios con bajo nmero de copia necesita un eficiente sistema de particin. Plasmidios con alto nmero de copias generalmente no requieren funcin par par puede estar estrechamente ligado al ori.
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Curacin de un plasmidio sin un sitio par. Cada plasmidio tiene igual probablidad para segregar en las clulas hijas en la divisin celular. Ocasionalmente una de ellas perder el plasmidio con la siguiente probabilidad: P = (1/2)2n x 2
Incompatibilidad
Incapacidad de dos plasmidios para coexistir sin seleccin en una linea clonal de clulas. Plasmidios idnticos o estrechamente relacionados no son distinguidos por el mecanismos de mantencin del nmero de copias.
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Incompatibilidad (Inc)
Los plasmidios del mismo grupo Inc pueden ser incompatibles porque: Comparten el mismo mecanismo de control de la replicacin Comparten las mismas funciones de particin (par)
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A B
Distribucin desigual de A y B
Plasmidios del mismo grupo de Inc resultarn en que la mayora de las clulas portarn slo un tipo de plasmidio
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