VIII Congresso Brasileiro e III Congresso Pan-Americano de Anlise Trmica e Calorimetria 01 a 04 de Abril de 2012 Campos do Jordo SP - Brasil

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ESTUDO DO COMPORTAMENTO TRMICO E DA ATIVIDADE FARMACOLGICA DE PS DAS FOLHAS DE Passiflora edulis SIMS EM DIFERENTES TAMANHOS DE PARTCULAS
Lidiane Pinto Correia1,3, Rosemary Sousa Cunha Lima3, Paula Regina Rodrigues Salgado3, Reinaldo Nbrega de Almeida Horacinna Maria de Medeiros Cavalcante2, Rui Oliveira Macdo1,2
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Departamento de Cincias Farmacuticas, Universidade Federal de Pernambuco, Avenida Artur de S,Cidade Universitria, Recife, PE, Brasil, 50740-521 2 Departamento de Cincias Farmacuticas, Laboratrios Unificados de Desenvolvimento e Ensaios de Medicamentos, Universidade Federal da Paraba, Campus I, Joo Pessoa, PB, Brasil, 58059-970 3 Departamento de Farmcia, Universidade Estadual da Paraba, Rua das Baranas, Bodocong, Campina Grande, PB, Brasil, 58429-500

Resumo
O objetivo desse trabalho consistiu na obteno e caracterizao de Passiflora edulis in different particles sizes, atravs de tcnicas trmicas e ensaio farmacolgico. As tcnicas trmicas diferenciaram as amostras de diferentes tamanhos de partcula atravs das diferentes etapas de decomposio e energias relacionadas por TG e DTA, respectivamente. O efeito ansioltico foi diferente para o infuso derivado da amostra MA01 e MA04, de acordo com o nmero de entradas e tempo de permanncia nos braos abertos e fechados. As amostras estudadas evidenciaram comportamentos trmico e farmacolgicos diferentes.

Palavras-chave: Tamanho de partculas, anlise trmica, ensaio farmacolgico. Abstract The aim of this study was to obtain and to characterize Passiflora edulis in different particle sizes through thermal and pharmacological assay. Thermal techniques differentiate the different particle size samples through its obtainded decomposition stages and related energy by TG and DTA, respectively. The anxiolytic effect was different to MA01 and MA04, according to the number arm entries and time spent in the open and closed arms. The studied samples showed different thermal and pharmacological behavior. Key-words: Particle size, thermal analysis and pharmacological assay.

INTRODUO
Passiflora edulis Sims, popularmente conhecida por maracuj, a espcie com maior valor econmico do gnero Passiflora, sendo este o maior gnero da famlia Passifloraceae [1]. A RDC 10/2010 regulamenta o uso popular de drogas vegetais e preconiza que a Passiflora edulis deve ser usada na forma de infuso, seguindo a proporo de 3g do p da planta para 150 mL de gua, duas vezes ao dia [2]. O processo de pulverizao da matria-prima vegetal constitui uma etapa importante na obteno de preparaes intermedirias e produo de medicamentos fitoterpicos, justificando, o controle da tenuidade de ps
[3]. Alguns trabalhos descreveram que a anlise trmica representa um conjunto de tcnicas importantes para a

caracterizao de matrias-primas vegetais, podendo ser aplicadas rotineiramente pela indstria farmacutica [4].

OBJETIVOS
O objetivo desse estudo consistiu em obter e caracterizar ps de Passiflora edulis em diferentes tamanhos de partculas, caracterizar termicamente, e avaliar a atividade ansioltica dos diferentes tamanhos de partculas.

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MTODOS E MATERIAIS
No desenvolvimento deste estudo, foram utilizados camundongos machos albinos da linhagem sua, com 2 a 3 meses de idade, pesando de 25 a 40 g, provenientes do Biotrio Prof. Dr. Thomas George do Laboratrio de Tecnologia Farmacutica Prof. Delby Fernandes de Medeiros da Universidade Federal da Paraba. O estudo foi realizado de acordo com a aprovao do Comit de tica em pesquisa animal (CEPA), dessa instituio, com nmero de protocolo 0207/10. O material botnico utilizado neste estudo foi coletado em fevereiro de 2010, no Municpio de Lagoa Seca PB, sob as seguintes coordenadas geogrficas: latitude (708'24''S), longitude (3547'50''L), altitude 582 m, e a distncia da sede de 5 Km com o apoio da equipe tcnica da Empresa de Assistncia Tcnica e Extenso Rural da Paraba (EMATER-PB). A exsicata da Passiflora edulis foi depositada no herbrio Arruda Cmara, localizado no Departamento de Biologia da Universidade Estadual da Paraba (UEPB), pelo botnico Prof. Dr. Ivan Coelho, sob nmero de registro 0185. O tamanho das partculas dos ps foram: 710 e 150 m, sendo as amostras nomeadas de MA 01 e 04, respectivamente. MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV) As anlises microscpicas dos ps das plantas em diferentes granulometrias foram realizadas atravs de um microscpio eletrnico de varredura, modelo MEV TM-1000, Hitachi. TERMOGRAVIMETRIA (TG) As curvas termogravimtricas dinmicas dos ps das plantas em diferentes granulometrias (710 e 150 m) foram obtidas em uma termobalana modelo TGA-50H, da Shimadzu, na razo de aquecimento de 10 C min -1, variando de 25 C at temperatura de 900 C. Utilizou-se atmosfera de nitrognio e de ar sinttico, com fluxo de 50 mL min-1. Foi utilizado massa de 5,00 0,05 mg acondicionada em cadinho de alumina para cada amostra. A calibrao da termobalana foi feita utilizando oxalato de clcio monohidratado. As curvas foram analisadas atravs do software Tasys 60, da Shimadzu, para caracterizar as etapas de perda de massa. ANLISE TRMICA DIFERENCIAL (DTA) As curvas trmicas diferenciais dos ps das plantas em diferentes granulometrias (710 e 150 m) foram obtidas em um analisador trmico diferencial, modelo DTA-50, da Shimadzu, na razo de aquecimento de 10 C min-1, variando de 25 C at temperatura de 900 C, em atmosfera de nitrognio, com fluxo de 50 mL min -1. As amostras foram acondicionadas em cadinho de alumina utilizando massa de 5,00 0,5 mg para cada amostra. A calibrao do equipamento foi realizada atravs do ponto de fuso e entalpia dos padres de ndio e zinco. As curvas trmicas diferenciais foram analisadas usando o programa Tasys 60, da Shimadzu.

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LABIRINTO EM CRUZ ELEVADO (LCE) O labirinto em cruz elevado utilizado foi da marca Insight, modelo EP 150. O mdulo feito de acrlco e consiste em quatro braos, sendo dois braos com paredes laterais e sem cobertura (braos fechados), medindo 30 cm de comprimento por 6 cm de largura e 16 cm de altura, colocados perpendicularmente a dois braos desprovidos de paredes laterais (braos abertos) com o mesmo comprimento e largura. Cada brao posicionado a 90 do brao adjacente e cruzam-se numa rea central onde o animal posicionado. O labirinto apoiado sob um suporte com 25 cm de elevao em relao ao solo. Para realizao do teste foram utilizados grupos com 5 camundongos tratados com uma nica administrao por via oral. Os grupos experimentais MA 01 e MA 04 foram tratados com doses de 500 mg Kg -1, enquanto que o grupo controle foi tratado com o veculo e o grupo padro com o Diazepam, na dose de 2 mg Kg -1. Sessenta minutos aps a administrao, os camundongos foram colocados individualmente no centro do labirinto, para que eles pudessem explorar o mesmo. Os parmetros nmero de entradas e o tempo total de permanncia nos braos abertos e fechados foram avaliados durante um perodo de 5 minutos. A entrada nos braos foi definida como a entrada das quatro patas do animal dentro do brao [5-6]. Os resultados do teste labirinto em cruz elevado foram expressos como mdia EPM, os valores mdios representam os valores dos grupos tratados menos a mdia do grupo controle (gua).

RESULTADOS
A caracterizao dos ps da folha de Passiflora edulis foi avaliada por MEV, como pode ser visto na Figura 1.

Figura 1: Eletromicrografias de varredura dos ps da planta em dois tamanhos de partculas 710 e 150 m, correspondendo a MA01 e MA04, respectivamente.

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Os valores medianos e os limites inferiores e superiores mostraram a seguinte distribuio de tamanhos de partculas por amostra, MA01 515,65 m, variando de 307,32-800,0 m e MA04 133,7 m, variando de 87,4336,4 m, respectivamente. A caracterizao dos ps das amostras em estudo revelaram atravs da MEV a heterogeneidade do tamanho e morfologia das partculas, o que demonstra limitaes no processamento de plantas para obteno de ps uniformes. O tamanho das partculas da matria-prima vegetal pode influenciar no efeito farmacolgico e toxicolgico de preparaes lquidas de uso popular, como infusos, decoctos e macerados, j que a superfcie de contato com o solvente extrator diferente. ANLISE TRMICA

Termogravimetria (TG) As curvas termogravimtricas dinmicas em atmosfera de nitrognio (Figura 2) das amostras MA01 e MA04 apresentaram trs etapas de decomposio. A primeira etapa que ocorreu na faixa de temperatura de 29115 C pode ser atribuda perda de volteis, majoritariamente gua, representando 8,2 e 6,5%, para MA01 e MA04, respectivamente. A segunda etapa de decomposio representa a degradao do conjunto dos macro e micro constituintes da amostra, ocorrendo nas faixas de temperatura de 204,0-364,0 C e 194,7-383,0 C correspondendo a uma perda de massa de 37,7% e 42,0%, para MA01 e MA04, respectivamente.

Figura 2: Curvas termogravimtricas dinmicas em atmosfera de nitrognio dos ps das folhas de Passiflora edulis A terceira etapa de decomposio ocorreu com perda de massa gradativa em uma faixa de temperatura extensa at a formao dos resduos no degradveis em atmosfera inerte. As faixas de temperatura e a

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porcentagem de perda de massa para as amostras MA01 e MA04 foram de: 364,0-900,0 C (41,7%) e 383-900,0 C (34,0%). Observou-se que a 900 C a amostra MA04 manteve esse resduo em um valor maior que a MA01. As curvas termogravimtricas dinmicas em atmosfera de ar sinttico das amostras MA01 e MA04 (Figura 3) apresentaram quatro etapas de decomposio. A primeira etapa ocorreu na faixa de temperatura de 29-137 C referente perda de volteis, majoritariamente gua, nas propores de 8,7 e 8,0%, paras as amostras MA01 e MA04, respectivamente.

Figura 3: Curvas termogravimtricas dinmicas em atmosfera de ar sinttico dos ps das folhas de Passiflora edulis A segunda etapa de decomposio das amostras ocorreu nas seguintes faixas de temperatura e perda percentual de massa: MA01215,0-347,0 C (33,6%) e MA04217-352 C (36,6%). A terceira etapa ocorreu nas faixas de temperatura e perda de massa percentual MA01347,0-457,0 C (13,6%) e MA04352,0-452,0 C (11%). A quarta etapa ocorreu nas faixas de temperatura e perda de massa percentual MA01450,0-518,0 C (25%) e MA04452,0-516,0 C (20,0%). Observou-se que o trmino da quarta etapa de decomposio sinalizou a formao do resduo no degradvel em atmosfera oxidativa, j que at a temperatura de 900C no houve registro de perda de massa. A amostra MA04 mostrou uma maior proporo de resduos no-degradveis, equivalendo a aproximadamente 25 % da massa inicial da amostra. Anlise Trmica Diferencial (DTA) As curvas de DTA foram avaliadas na faixa de temperatura correspondente a segunda etapa de decomposio das curvas termogravimtricas em atmosfera de nitrognio. Dentro dessa faixa observaram-se transies medidas atravs da altura do pico que corresponderam a uma energia mdia de 8,68 e 11,54 V, para MA01 e MA04, respectivamente.

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Atravs da Figura 4 pode observar-se a diferena de valores de energia entre as amostras nos pontos selecionados. A amostra MA04 mostrou valores mais elevados de altura de pico, quando comparado as amostras MA01.

Figura 4: Altura dos picos das amostras MA01 e MA04.

A partir de 450 at 900 C, observou-se uma queda gradativa da linha de base, correspondente a terceira etapa

de decomposio at a formao do resduo no degradvel, visualizada pelas curvas termogravimtricas em atmosfera de nitrognio. Nesse mesmo intervalo de temperatura ocorreu um evento endotrmico observado nas duas amostras, correspondendo a 3,73 e 7,88; para MA01 e MA04, respectivamente. Amostras de drogas vegetais so misturas multicomponentes de compostos orgnicos e inorgnicos, e suas curvas de decomposio trmica so parcelas de fenmenos fsico-qumicos que ocorrem quando a mesma aquecida. Assim, no possvel associar o efeito trmico e a perda de massa identificao da decomposio de um determinado componente da amostra. Estudo da atividade ansioltica A atividade ansioltica dos infusos das partculas MA01 (710,0 m) e MA04 (150,0 m), administrada via oral, avaliada atravs do teste de labirinto em cruz elevado (LCE) mostrou que para o DZP (2 mg Kg-1), os animais em estudo apresentaram maior nmero de entradas nos braos abertos no LCE, seguido da infuso da amostra MA04 e MA01 (500 mg Kg-1) como ilustrado na Figura 5. Os dados apresentados na Figura 6 demonstram o tempo de permanncia dos animais nos braos abertos, o qual foi maior para o DZP (2 mg Kg-1), seguido da infuso da amostra MA01 e MA04 (500 mg Kg-1).

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MA 01 (500 mg/kg)

N de entradas nos braos abertos

MA 04 (500 mg/kg)

10 8 6 4 2 0

Diazepam (2mg/kg)

Administrao via oral (mg/Kg)

Figura 5: Nmero de entradas nos braos abertos dos animais tratados com infuso de Passiflora edulis (MA01 e MA04) no teste de labirinto em cruz elevado.

MA 01 (500 mg/kg)

Permanncia nos braos abertos (s)

MA 04 (500 mg/kg)

200 150 100 50 0

Diazepam (2mg/kg)

Administrao via oral (mg/Kg)

Figura 6: Tempo de permanncia nos braos abertos dos animais tratados com infuso de Passiflora edulis (MA01 e MA04) no teste de labirinto em cruz elevado. Observou-se que os animais tratados com DZP (2 mg Kg-1) e o infuso da amostra MA01 reduziram o nmero de entradas nos braos fechados no teste LCE, enquanto os tratados com o infuso da amostra MA04, aumentaram a resposta a este parmetro, conforme ilustrado na Figura 7. Os dados apresentados na Figura 8 demonstram que houve uma diminuio no tempo de permanncia nos braos fechados induzida pelo DZP (2 mg Kg-1), seguido pela infuso da amostra MA01 e MA04, ambas admnistradas na dose de 500 mg Kg-1.

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MA 01 (500 mg/kg) MA 04 (500 mg/kg) Diazepam (2mg/kg)

N de visitas nos braos fechados

-2

Administrao via oral (mg/Kg)

-4

Figura 7: Nmero de entradas nos braos fechados dos animais tratados com infuso de Passiflora edulis (MA01 e MA04) no teste de labirinto em cruz elevado

MA 01 (500 mg/kg) MA 04 (500 mg/kg)

Permanncia nos braos fechados (s)

Diazepam (2mg/kg)

0 -50 -100 -150 -200

Administrao via oral (mg/Kg)

Figura 8: Tempo de permanncia nos braos fechados dos animais tratados com infuso de Passiflora edulis (MA01 e MA04) no teste de labirinto em cruz elevado. A atividade ansioltica dos infusos das amostras baseou-se no ensaio de labirinto em cruz elevado, de acordo com Jones et al, 1992 [8], o aumento do tempo de permanncia, bem como no nmero de visitas nos braos abertos, quando comparada com o grupo controle um indcio de que houve atenuao da inibio da atividade exploratria induzida pelo medo, caracterstica esta, das substncias com atividade ansioltica. O tempo

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de permanncia nos braos abertos dos animais tratados com DZP e outras drogas com atividade ansioltica tende a ser maior que nos braos fechados [9]. DZP tem sido utilizado como um ansioltico padro e freqentemente empregado na farmacologia comportamental como substncia de referncia. Trata-se de uma substncia com potencial ao ansioltica e eficaz quando avaliada atravs do teste de labirinto em cruz elevado [10]. No presente estudo o DZP 2 mg Kg-1 v.o., mostra um efeito ansioltico em camundongos caracterizado pelo aumento no nmero de entradas e tempo de permanncia nos braos abertos, possivelmente a diminuio no nmero de entradas e tempo de permanncia nos braos fechados corroboram com este efeito ansioltico. O resultado da atividade do infuso das amostras MA01 e MA04, quando comparado com a resposta da atividade do DZP foi indicativo do possvel efeito ansioltico destas amostras. A resposta acentuada do DZP em relao aos testes experimentais pode ser atribuda a sua alta dose. Diante das diferenas observadas atravs do LCE, observa-se que o tamanho das partculas dos ps da planta utilizados para preparao do infuso, influencia na sua atividade farmacolgica. Segundo Li et al, 2009 [11], a Passiflora edulis possui atividade sedativa em doses elevadas, no possuindo efeitos neurofarmacolgicos em baixas doses. Diante disso, verifica-se que necessrio a realizao de mais investigaes para avaliar a atividade ansioltica da infuso do p das folhas da Passiflora edulis.

CONCLUSES
A droga vegetal Passiflora edulis mostrou diferenas no comportamento fsico e qumico em funo dos tamanhos de partculas do p, visualizadas atravs do MEV e da anlise trmica. Amostras de infusos com diferentes tamanhos de partcula de Passiflora edulis demonstraram atividades farmacolgicas distintas, sugerindo que a granulometria do p um parmetro que influencia esta atividade.

AGRADECIMENTOS
Ao CNPq pelo suporte financeiro.

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