TESTES DE DETECO DE ANTICORPOS

ELISA (teste imunoenzimtico): este teste utiliza antgenos virais (protenas) produzidos em cultura celular (testes de primeira gerao) ou por meio de tecnologia molecular recombinante. Os antgenos virais so adsorvidos por cavidades existentes em placas de plstico e, a seguir, adiciona-se o soro do paciente. Se o soro possuir anticorpos especficos, estes sero fixados sobre os antgenos. Tal fenmeno pode ser verificado com a adio de uma antiimunoglobulina humana conjugada a uma enzima, por exemplo, a peroxidase. Em caso positivo ocorre uma reao corada ao se adicionar o substrato especfico da enzima. Esta tcnica amplamente utilizada como teste inicial para deteco de anticorpos contra o vrus, devido sua facilidade de automao e custo relativamente baixo. Apresenta atualmente altas sensibilidade e especificidade.

Western-blot: este ensaio envolve inicialmente a separao das protenas virais por eletroforese em gel de poliacrilamida, seguida da transferncia eletrofortica dos antgenos para uma membrana de nitrocelulose. Em um terceiro momento a membrana bloqueada com protenas que so adsorvidas por stios no ocupados pelos antgenos. Posteriormente a membrana colocada em contato com o soro que se deseja pesquisar. As reaes antgenoanticorpo so detectadas por meio da reao com antiimunoglobulina humana, conjugada com um radioistopo ou uma enzima. A revelao feita por auto-radiografia ou por substrato cromognico. Geralmente utilizado para confirmao do resultado reagente aos teste ELISA (ou seja, teste confirmatrio da infeco), devido sua alta complexidade e custo. Tem alta especificidade e sensibilidade.

INTRODUO

A tcnica de ensaio por imunoabsoro por ligao enzimtica (Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA) um teste imunoenzimtico que detecta a presena de anticorpos e antgenos encontrados no plasma sanguneo. Essa tcnica utiliza plataformas proprietrias de elevado custo para executar exames sanguneos, tornando-se um equipamento de difcil acesso. Nos testes ELISA comumente empregado o uso de placas de microtitulao, tambm chamadas de microplacas. Essas se caracterizam por possurem uma superfcie inerte com poos ao modelo de uma matriz. No interior desses poos so colocadas amostras de fluidos corpreos cujas quantidades de antgeno que se deseja determinar. Na sequncia coloca-se uma quantidade conhecida de anticorpo especfico capaz de se ligar ao antgeno de interesse. Esse anticorpo conecta-se enzima da amostra de plasma sanguneo a ser examinado, e por ltimo adicionada uma substncia indicadora com caractersticas dependentes do complexo antgeno-anticorpo para que seja possvel quantificar a presena do complexo a partir da anlise do indicador presente. Este caso aborda tambm o teste ELISA baseado em

fluorescncia, que utiliza energia luminosa para fazer o indicador ser levado a um estado excitado. O processo de retorno da molcula indicadora para o estado no excitado geralmente acompanhado pela emisso de ftons de fluorescncia. Desta forma, o complexo antgeno/anticorpo fluorescer indicando a quantidade de antgenos na amostra atravs de correlao com a magnitude observada de fluorescncia. Os ensaios ELISA tem grande impacto no diagnstico de doenas e vrus (HIV, por exemplo), determinando a concentrao de anticorpos no soro sanguneo. No presente artigo apresentam-se os resultados preliminares de uma plataforma mecnica de baixo custo destinada a ensaios imunoenzimticos ELISA, com a finalidade de futura utilizao para pesquisa.