POP- AULA PRTICA DE HEMOGRAMA (ERITROGRAMA) Prof.

Archangelo Material Necessrio

Seringa 5ml com agulha 25x7 Alcool 70% (iodado) Garrote Tubo vacuun EDTA ( tampa roxa ) microscpio lminas para microscopia laminulas tubo capilar (sem heparina) carto para leitura de Ht tubo de ensaio pipeta volumtrica de 10 volumes pra para aspirao reagentes Drabkin- Hayen corante pantico Becker p/ descate para materiais micropipetas com ponteiras cmara de neubauer

banho maria bico de Bunsen microcentrfuga espectrofotmetro + cubetas gua destilada Descarpack

Noes bsicas:
lcool 70% - Iodado Puno garrote - bizel Micropipetas - 1 e 2 estgio Ponteiras excesso- descarte- lavagem Menisco de pipetas volumtricas Canara de neubauer lamnula micropipeta Capilar bico de Bunsen Microscpio macro e micromtrico lentes - chariot

Ordem para a realizao do Hemograma Completo:

-Hematcrito -Dosagem de Hemoglobina -Contagem de glbulos brancos e vermelhos -Contagem e diferencial dos leuccitos com observao da srie vermelha -Clculo dos ndices Hematimtricos (VCM, HCM, CP.CM) -Contagem de plaquetas e reticulcitos quando solicitados -Velocidade de Hemossedimentao (VHS) quando solicitado.

Hematcrito:
Preencher do volume do tubo capilar, vedar uma das extremidades ( com massa de modelar ou queimando). Em seguida colocar o tubo na microcentrfuga (colocando a parte vedada para fora), centrifugar a 10.000 RPM por 5 minutos. Realizar a leitura em tabela apropriada.

Valores de referncia: Homens: 40% a 50% Mulheres: 35% a 45% Crianas at um ano: 34% a 40% Recm-nascidos : 50% a 60% Interpretao: Valores abaixo indicam anemia ou hidratao excessiva (gravidez), e valores acima indicam desidratao ou policitemia.

Dosagem de Hemoglobina:
Mtodo da cianometahemoglobina:
Para dosagem de Hb necessrio: Usarmos padres de concentraes conhecidas, geralmente utiliza-se as concetraes de 5, 10 e/ou 15g/dl. Lquido de Drabkin: Bicarbonato de Sdio - 1,0g Cianeto de Potssio - 52,0mg Ferrocianeto de Potssio - 198,0mg

gua destilada - 1000,0ml Em um tubo de ensaio pipetar 5,0 ml de reativo de Drabkin e colocar 20l de sangue total (homogenizado). Incubar 10 minutos temperatura ambiente e fazer a leitura em esprectrofotmetro em 540 nm zerando o aparelho com Drabkin . Calculo:
Deternina-se a densidade tica (DO) do padro e posteriormente um fator que nos fornecer a concentrao de cada amostra quando medidas com mesmo reagente. Portanto: .[]P = F

DO P Assim: Fator: concentrao do fator leitura do padro

Ento : [ ] da Hb da amostra = DO amostra x F

Valores de referncia: Homens: de 14 a 18 g/dl Mulheres: de 12 a 16 g/dl Crianas at um ano:11 a 12 g/dl Recm-Nascido: de 14 a 19 gIdl

Assim: Leitura x fator = Hb g /dl

Interpretao: A dosagem de Hb est relacionada diretamente com o contedo e colorao do eritrcito sendo de grande auxlio no diagnstico das anemias. Valores baixos correlacionam-se processos anmicos

Contagem de hemcias:
Contagem de clulas:

Mtodo do Hemocitmetro em Cmara de Neubauer

Contagem de glbulos vermelhos: determinao de eritrcitos por mm de sangue.

Em tubo de ensaio pipetar 4,0 ml de soluo de Hayen (diluidor isotnico contendo um fixador para conservao das clulas) e 20l de sangue total (diluio 1:200). 0,02 ml X 3,98ml
Soluo diluente: Citrato de sdio - 3,8g Fornol a 40% -2,0 mI gua destilada q.s.p. - 100,0mI

Fixar a lamnula sobre a cmara de Neubauer e preencher-la com o sangue diludo e contar os cinco quadrados indicados na imagem abaixo. Para esta contagem pode ser
utilizada a objetiva microscpica de 10x.

Multiplicar o nmero de hemcias encontradas nos cinco quadrados por 10.000. Resultado em mm.
Valores de referncia: Homens: ],5 a 5,5 milhes/mm Mulheres: 4,0 a 5,0 milhes/mm Recm-nascidos: 5,5 a 7,0 milhes/mm Interpretao: Valores aumentados so encontrados nas policitemias e os valores diminudos relacionam-se aos processos anmicos de diversas etiologias. A contagem em cmara de Neubauer oferece grande variabilidade de erro e dispndio de tempo, portanto sempre que possvel prefervel a contagem em aparelhos automatizados.

ndices hematimtricos:

Contagem de reticulcitos:
Em um tubo de ensaio colocar 2 gotas de sangue e 2 gotas de azul de cresil brilhante, incubar 15 minutos em banho- Maria 37 C. Fazer o esfragao e contra corar com Pantico ou Leishman. Observar de 1000 a 2000 relatando a porcentagem de Reticulcitos encontrados. Calculo: N de hemcias por mm x reticulcitos encontrados N de hemcias contadas V. R. 50 a 150 mil mm ou de 0,5 a 1,5%