Estefana Valencia David Gilberto Torres Vargas

174547 174703

SEPARACIN DE MEZCLAS MEDIANTE CROMATOGRAFA DE CAPA DELGADA (CCD) Objetivos: Realizar el montaje de una placa para CCD Realizar la separacin de una mezcla de Sudan IV (Rojo Escarlata) y p-nitroanilina Elaborar la serie eleutrpica de los solventes disponibles en el laboratorio Determinar la concentracin optima de una mezcla binaria de eluyentes para Cromatografa de Columna

Identificacin de la muestra: La muestra coloreada se compone de una mezcla de 2 sustancias, p-nitroanilina y Sudan IV. A continuacin se muestran las fichas de estas dos sustancias (Falta Aldrich)
p-nitroanilina Sinnimos: p-nitranilina, 4-nitroanilina Formula qumica: C6H6N2O2 Numero CAS: 100-01-6 Estado Fsico: Solido (Polvo) Color: Amarillo Brillante 20 D 4: 1.424 g/mL Punto de Fusin: 146C (Index) 147,5C (CRC) Punto de Ebullicin: 332C (Calc Index) Punto de Ignicin: 500C IR (20C): PELIGRO T DL50 (Oral rata): 750 mg/Kg (ChemDAT) Solubilidad: 1g/1250 ml H2O; 1g/45 ml H2O (100C); 1g/25ml Etanol; 1g/30 ml ter dietilico; Soluble en benceno, metanol, DMSO; forma sales solubles en agua al reaccionar con cidos minerales Frases de Advertencia (SGA): H301, H311, H331 Riesgos especficos para la seguridad y Consejos de Seguridad: R23/24/25, R33, R52/53; S28-1, S36/37, S45, S61 Tomado de: Tomado de: ChemDAT CD. 2002; The Merck Index 14th ed. 1968. N 6584; CRC Handbook of Chemistry and Physics. 2003. pp 548 Sudan IV - 1-[[2-metil-4-[(2-metilfenil)azo]fenil]azo]-2-naftol Sinnimos: Rojo Escarlata; o-toliazo-o-toliazo--naftol; 1-(4-o-toliazo-o-toliazo)-2-naftol Formula qumica: C24H20N4O Numero CAS: 85-83-6 Estado Fsico: Solido (Polvo) Color: Caf oscuro 20 D 4: Punto de Fusin: 181-188C (Ablandamiento 175C) (Index) Punto de Ebullicin: Punto de Ignicin: 260C ATENCIN Xn Solubilidad: Insoluble en agua; 1g/15ml Cloroformo; Soluble en aceites, grasas, petrolatum, parafina y fenol. Ligeramente soluble en benceno, acetona y etanol Frases de Advertencia (SGA): H315, H319 Riesgos especficos para la seguridad y Consejos de Seguridad: R36/38 Usos: Se usa en veterinaria para promover la curacin de heridas Tomado de: The Merck Index 14th ed. 1968. N 8393; CRC Handbook of Chemistry and Physics. 2003. pp 624

La muestra incolora se compone de una mezcla de 3 sustancias, p-aminoacetofenona, - naftol y Benzoato de Etilo. A continuacin se muestran las fichas de estas sustancias

MONTAJES: Montaje de una placa para CCD:

Montaje Para cromatografa de Columna:

DIAGRAMAS DE FLUJO:

DATOS Y CALCULOS: En la tabla 1 se muestran los datos obtenidos para las cromatografas sobre Silica G
Tabla 1: Datos de las Cromatografas en Capa Delgada para distintos eluyentes Siembra Frente Solvente Eluyente Distancia 1 Distancia 2 Rf1 (cm) (cm) ter de Petrleo 1,20 3,50 0,00 0,00 0,00 ter de Petrleo 1,20 5,80 0,55 0,10 0,09 Tolueno 1,20 2,40 1,30 0,50 0,54 Acetato de Isopropilo 1,20 5,40 5,30 4,90 0,98 Metil Etil Cetona 1,20 7,00 Metanol 1,20 6,00 5,50 5,30 0,92 9 ter - 1 Acetato 1,20 5,50 2,80 0,45 0,51 8 ter - 2 Acetato 1,20 5,90 3,35 0,90 0,57 7.5 ter - 2,5 Acetato 1,20 5,80 4,40 2,20 0,76 7 ter - 3 Acetato 1,20 5,40 4,05 2,00 0,75 6.5 ter - 3,5 Acetato 1,20 5,95 5,00 3,15 0,84 5 ter - 5 Acetato 1,20 5,80 4,55 3,00 0,78 2 ter - 8 Acetato 1,20 5,80 5,50 5,05 0,95 1 ter - 9 Acetato 1,20 6,10 5,80 5,30 0,95

Rf2 0,00 0,02 0,21 0,91 0,88 0,08 0,15 0,38 0,37 0,53 0,52 0,87 0,87

Eficiencia 0,18 0,38 0,92 0,96 0,16 0,27 0,50 0,49 0,63 0,66 0,92 0,91

Las distancias se obtuvieron a partir de la resta entre el centro de las manchas, cuando estas estuvieron bien definidas y la lnea de siembra que para todos los casos estuvo a 1,2 cm del borde inferior de la lamina. Los valores Rf se obtuvieron utilizando el clculo mostrado a continuacin.

La eficiencia se calcul mediante la relacin entre el Rf menor y el Rf mayor, esto se hizo para determinar la mezcla que debe ser empleada para la Cromatografa de Columna (CC) ANALISIS DE RESULTADOS: La cromatografa en capa delgada se emplea cuando las sustancias a separar son de carcter hidrofbico o cuando los componentes de las mezclas a resolver no son voltiles (OEA & Garcia Sanchez). El desarrollo unidimensional ascendente, es el mas empleado en este tipo de cromatografa debido a su simplicidad, sin embargo como ocurre en todos los desarrollos ascendentes los valores Rf estn limitados por accin de la gravedad (OEA).Con respecto a la cromatografa en papel, la CCD permite utilizar gran variedad de sustancias cromgenas e igualmente de condiciones de revelado. Young (1994) menciona que una buena CCD se caracteriza por generar valores de Rf entre 0,2 y 0,8

Los sorbentes mas empleados son la almina y el gel de slice, los cuales debido a su polaridad permiten separar gran variedad de sustancias de acuerdo a su polaridad; por otro lado la celulosa se emplea cuando la mezcla problema contiene compuestos orgnicos muy polares o solubles en agua, por lo cual es un medio mas verstil. (Garcia Sanchez)En el caso de que el gel

de slice no se encuentre activado, las separaciones ocurren por fenmenos de reparto entre este y el eluyente. (OEA) Dependiendo del adsorbente y de la mezcla a separar se hacen ensayos con seleccin de solventes puros en muchas ocasiones estos no son efectivos en la separacin de los componentes, por lo que es necesario hacer mezclas de estos. En esos casos se deben tener dos precauciones, la primera es que los solventes sean miscibles en todas las proporciones y la segunda es la proporcin en la que realice la mezcla, ya que para estas, variaciones pequeas en la composicin pueden llevar a cambios grandes en los valores Rf obtenidos. (OEA) Para el caso de la mezcla Sudan IV/p-nitroanilina sobre Silica gel, la fase estacionaria no se encuentra activada por lo cual los fenmenos de separacin se deben al reparto entre las dos fases. Por esta razn al realizar los ensayos con solventes prticos la separacin no era efectiva y los valores Rf eran cercanos a 1 (Figura Met); por otro lado al usar un eluyente apolar como el ter de petrleo se observan valores Rf que tienden a cero (Figura Etp), por ello es conveniente utilizar mezclas entre eluyentes cuya diferencias de polaridad sean altas, procurando emplear solventes polares aprticos como el acetato de isopropilo. Cuando se realizo la resolucin de la mezcla de tres componentes incoloros se observaron comportamientos similares a la mezcla anterior, al realizar la CCD en la misma serie de solventes. El Sudan IV tiene valores Rf mas altos que la p-nitroanilina lo que nos indica que la primera sustancia es mas afn con la fase mvil que con la fase estacionaria, este comportamiento es independiente del fenmeno que causa la separacin de la sustancias ya que se observan los mismo valores Rf para los cromatogramas de adsorcin (placa activada) y de reparto (sin activar). Por otro lado la p-nitroanilina al ser mas polar es ms afn con la fase estacionaria, particularmente si esta se encuentra inactiva. Cuando la placa se activa la sustancia pierde algo de afinidad por la fase estacionaria y realiza una migracin ligeramente mayor. Una recomendacin importante es que los solventes puros se pueden emplear en varios desarrollos, pero las mezclas de solventes deben ser utilizadas una nica vez en especial si estos son voltiles, debido a que la composicin de la mezcla cambia con el tiempo. Otro error que se puede cometer es colocar de forma brusca la placa dentro de la cmara, lo que provoca que el solvente ascienda de forma irregular, causando cromatogramas con colas o con manchas que son difciles de interpretar. (Figura MEK)