Hospital General Bsico de Baza.

Servicio de Anlisis Clnicos

Manual de Procedimientos

1.1. Hidatidosis. Hemaglutinacin Indirecta (Cellognost Echinococcosis)

I. Fundamento A. Utilidad
Diagnstico de la infeccin causada por Echinocccus granulosus agente productor del quiste hidatdico.

B. Objetivos
Deteccin de anticuerpos anti Echinococcus en pacientes con sospecha de quiste hidatdico.

C. Aplicacin de mtodos
Hemaglutinacin indirecta. Los eritrocitos humanos de grupo O sensibilizados con antgeno soluble de E. granulosus, obtenido de lquido de quistes hidatdicos de cordero, se aglutinan en presencia de diluciones de sueros que contengan anticuerpos homlogos.

II. Especmenes
Nombre: Sangre. Tipo de contenedor: Tubo sin anticoagulante (Tapn rojo). Cantidad mnima: 5 ml. Preparacin previa: No precisa. Muestra: Suero sin hemolisis. Volumen mnimo: 2 ml. Conservacin: 5 das 2-8C 6 meses -20C.

III. Materiales A. Reactivos

Definicin: Cellognost Echinococcosis. Que contiene: Echinococcosis IHA (eritrocitos recubiertos), Control Cells (eritrocitos sin recubrir), Diluent, Control positivo y control negativo Preparacin Echinococcosis IHA: Aadir 2,5 mL de agua destilada a un vial agitar e incubar hasta el da siguiente a 2-8C. Conservacin: Los componentes no reconstituidos se mantienen a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Echinococcosis IHA reconstituido 4 semanas a 2-8C Suministrador: Dade Behring. Referencia OTSO13.

B. Controles
Control positivo reconstituir el vial con 0,5 mL de agua destilada.

Versin: 1

Fecha:

23/07/02

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HIDATIDOSIS HEMAGLUTINACIN

IV. Procedimiento
1. Preparacin del suero: diluir 50 L de suero problema con 350 L de Solucin Tampn Tris. 2. Dispensar 50 L de Solucin Tampn Tris en los pocillos de la placa microtiter desde B hasta H. 3. Dispensar 100L de la dilucin de suero inicial en el pocillo A de la placa microtiter. 4. Efectuar diluciones seriadas con 50 L del pocillo A hasta pocillo H, los ltimos 50 L se desechan. 5. Diluir el reactivo Echinococcosis IHA reconstituido a con Solucin Tampn Tris (1mL de reactivo y 1 mL de Tris). 6. Aadir 25 L de la suspensin de trabajo de Echinococcosis IHA en cada pocillo. Agitar suavemente la microplaca. 7. Incubar 2,5 horas a temperatura ambiente. 8. Lectura: Eritrocitos sedimentados aparecen como un botn Negativo. Eritrocitos aglutinados aparecen como un velo en el fondo de la placa ocupando la mayor parte del fondo Positivo. Diluciones efectuadas: Pocillos: A 1/8 B 1/16 C 1/32 D 1/64 E 1/128 D 1/256 E 1/512 F 1/1024 G 1/2048 H 1/4096

V. Resultados
1. El titulo es el primer pocillo en el que la hemaglutinacin es negativa o es del 50%. Los ttulos mayores de 1/512 son diagnsticos de quiste hidatdico. Los ttulos comprendidos entre 1/32 y 1/128 son indeterminados. Ttulos inferiores a 1/32 son negativos.

VI. Limitaciones del mtodo

Los ttulos comprendidos entre 1/32 Y 1/128 deben estudiarse por otros mtodos (ELISA, Inmunofluorescencia, etc.)

VII. Procedimiento postanaltico A. Conservacin de especmenes

Guardar 6 meses en congelador a 20C.

B. Eliminacin de residuos
Desechar especmenes, placa de microtitulacin, etc. a cubos de desechos biopeligrosos (Cubos verdes con bolsa roja)

C. Limpieza y descontaminacin del material reutilizable

No tiene.

VIII. Referencias
1. Manual de la tcnica Cellgnost Echinococcosis Dade Behring

Autor: JARM

MICROBIOLOGA

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