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Calibrao de SiStemaS analtiCoS


nmero e nveiS de CalibradoreS
1. DefInIes AnAlIto ou mensurAnDo Substncia presente na amostra que determinada por um sistema analtico. CAlIbrAo (ou AferIo) Conjunto de operaes que estabelecem a relao quantitativa entre a resposta de um sistema analtico e os valores de concentrao ou atividade de um analito. InterVAlo operACIonAl Intervalo de concentraes do analito que pode ser medido diretamente sem diluio adicional ou qualquer outro tratamento prvio da amostra, diferente do que foi definido no procedimento padro para a determinao. meDIo Conjunto de operaes que tem por objetivo determinar um valor de uma grandeza (VIM - 2.1). sIstemA De meDIo ou sIstemA AnAltICo o conjunto de um ou mais instrumentos de medio e frequentemente outros dispositivos incluindo reagentes, configurados para fornecer valores quantitativos de determinado analito, dentro de um intervalo especificado. 2. IntroDuo Para a complementao de um diagnstico, ou acompanhamento da evoluo de uma doena, o mdico tem sua disposio o apoio do laboratrio clnico que pode determinar a concentrao ou a presena de um grande nmero de analitos. Os analitos de interesse so identificados ou medidos nas amostras dos pacientes utilizando sistemas analticos constitudos por reagentes e instrumentos. Os resultados das anlises realizadas no laboratrio podem ser qualitativos, semiquantitativos e quantitativos. Esses ltimos requerem calibrao e so provenientes de mtodos analticos que devem atender aos limites especificados de exatido para que tenham utilidade mdica. O procedimento de calibrao deve ser estabelecido considerando as caractersticas de desempenho inerentes a cada sistema de medio. A quantidade e a concentrao dos calibradores devem ser definidas visando a obteno da calibrao com o menor custo sem comprometimento da exatido do resultado. 3. sIstemAs AnAltICos quAntItAtIVos 3.1 Caractersticas da resposta Durante o desenvolvimento de um sistema analtico, a preocupao com a sensibilidade de importncia fundamental para se determinar com exatido, concentraes do analito na regio de maior interesse mdico, os chamados nveis de deciso.

Ano VI Nmero 4

O estabelecimento de um intervalo operacional visando minimizar as repeties do teste em amostras com concentraes acima do limite superior do intervalo de referncia, tambm deve ser priorizado. Assim sendo, o sistema analtico deve ter a sensibilidade ajustada convenientemente para atender a necessidade da aplicao. De um modo geral, a impreciso da medio ao longo do intervalo operacional varia de maneira inversa a intensidade da resposta do sistema. Em relao resposta frente concentrao do analito na amostra, os sistemas de medio quantitativos utilizados no laboratrio clnico so caracterizados durante seu desenvolvimento como: lineares e no lineares (Figura 1). Sistemas analticos no lineares so aqueles que, no intervalo operacional especificado, no respondem de modo proporcional concentrao do analito na amostra. So caracterizados como lineares os sistemas analticos que, no intervalo operacional especificado, respondem de modo proporcional concentrao do analito na amostra .

Fig.1-Grfico representativo de resposta linear dentro do intervalo operacional especificado (linha azul) e de resposta no linear (linha verde). 3.2 Caractersticas da calibrao Para se obter a calibrao, determina-se a resposta do sistema para amostras com concentraes conhecidas do analito, denominadas padres ou calibradores. O correto nmero de calibradores definido em funo da resposta do sistema.

Em seguida, ao se estabelecer a relao entre as concentraes do analito nos calibradores e as respectivas respostas, obtm-se a calibrao (Curva de calibrao, Curva Padro ou Fator de Calibrao). De maneira inversa, a concentrao do analito em amostras de pacientes determinada atravs da relao entre a resposta do sistema para estas amostras e a calibrao. 3.2.1 sistema Analtico no linear A calibrao em geral obtida atravs da medio das respostas de quatro a seis nveis de calibradores. representada graficamente por uma curva e pode ser descrita por equaes que representam as funes polinomial, logartmica, exponencial, entre outras. A quantidade e concentrao dos calibradores so definidas de modo a conferir maior exatido dos resultados principalmente nas faixas de concentraes de maior utilidade mdica. Os pontos de calibrao devem necessariamente compreender todo o intervalo operacional sendo que de um modo geral, o limite superior do intervalo operacional do sistema estabelecido pela maior concentrao do analito utilizada na calibrao. 3.2.2 sistema Analtico linear A calibrao deste sistema frequentemente obtida atravs da medio das respostas de dois ou mais nveis de calibradores. A calibrao representada graficamente por uma reta descrita pela equao y = ax + b. y = concentrao do analito na amostra do paciente; a = coeficiente angular da equao da regresso (fator de calibrao); x = absorbncia obtida para a amostra do paciente; b = coeficiente linear da equao da regresso. O valor de b um valor absoluto expresso em unidades do analito que est sendo determinado; Quando o coeficiente linear (b) da equao da regresso da calibrao multiponto de um sistema analtico no significativamente diferente de zero, o resultado do teste obtido pelo produto ax (figura. 2).

Fig. 3 Grfico da curva de calibrao obtida pela medio de quatro calibradores com diferentes concentraes. O coeficiente linear (b) da equao da regresso da calibrao significativamente diferente de zero. Em ambos os casos, a calibrao poder ser obtida apenas pela associao das medies de um calibrador com concentrao do analito igual a zero (gua, NaCl 150 mmol/L ou o(s) reagente(s)) e de um calibrador com concentrao do analito capaz de produzir uma resposta fotomtrica situada na regio de baixa impreciso do sistema analtico. 4. ConCluso sistemas analticos no lineares Devido caracterstica da resposta frente a diferentes concentraes do analito, estes sistemas analticos so obrigatoriamente calibrados atravs do ensaio de quatro a seis nveis de calibradores. Portanto, alterar a quantidade ou a concentrao dos calibradores estabelecidos para o procedimento de calibrao pode comprometer a exatido do sistema. sistemas analticos lineares Por responderem de modo proporcional concentrao do analito na amostra, as respostas do sistema para apenas duas diferentes concentraes do analito so suficientes para a obteno da calibrao. A utilizao de dois calibradores com significativa diferena de concentrao entre si melhora a exatido e diminui a variabilidade entre calibraes. Assim sendo, a calibrao pode ser obtida atravs da medio da resposta do sistema para um calibrador com concentrao do analito igual a zero (gua, NaCl 150 mmol/L ou apenas o(s) reagente(s)) e outro calibrador com concentrao do analito situada na regio de menor impreciso do sistema. Considerando que a impreciso do sistema varia de modo inverso a sua resposta, a concentrao do analito para o calibrador de valor diferente de zero deve se situar na regio intermediria do sistema operacional. Este procedimento de calibrao vem sendo utilizado com sucesso no Laboratrio de Controle da Qualidade da Labtest, obtendo-se menor variabilidade entre diferentes calibraes. A Labtest est recomendando utilizar o CALIBRA H como calibrador diferente de zero para a calibrao de seus produtos que fornecem resposta linear. Com a aplicao do CALIBRA H, so evitados os efeitos indesejveis da maior impreciso da medio encontrada na regio de menor intensidade da resposta do sistema. A adoo do calibrador CALIBRA H, alm de facilitar o trabalho durante o procedimento de calibrao, possibilita reduo de custos de aquisio e minimiza o trabalho de reconstituio e fracionamento em alquotas.

Fig. 2 Grfico da curva de calibrao obtida pela medio de quatro calibradores com diferentes concentraes. O coeficiente linear (b) da equao da regresso da calibrao no significativamente diferente de zero. Se o coeficiente linear (b) da equao da regresso da calibrao multiponto de um sistema analtico significativamente diferente de zero, o resultado do teste obtido pela adio do valor de b ao produto ax (figura. 3).

referncias 1. Labtest Dados de arquivo 2. Vocabulrio Internacional de Metrologia VIM 3. Systematic Comparison of Bias and Precision Data Obtained with Multiple-Point and one-Point Calibration in Six Validated Multianalyte Assays for Quantification of Drugs in Human Plasma. Anal. Chem. 2007, 79,4967-4976 Infotec - Informartivo tcnico da labtest
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