GENETICA BACTERIANA

Las bacterias son microorganismos con una capacidad extraordinaria de adaptacin a diferentes condiciones ambientales. Para comprender la esencia de esta capacidad es importante conocer sus bases genticas, es decir como est organizada la informacin gentica, como realizan y regulan su expresin y que mecanismos de variacin gnica poseen. La capacidad infecciosa de las bacterias patgenas radica en que poseen la informacin gnica necesaria para colonizar los tejidos del husped, invadirlos y/o producir sustancias txicas que causarn la enfermedad. Por otro lado, el conocimiento del funcionamiento gentico de las bacterias, sumado al hecho de que son de fcil manejo en el laboratorio y que tienen crecimiento rpido, ha permitido usarlas para sintetizar productos tiles a la medicina, tanto para el diagnstico como para la prevencin y tratamiento de algunas enfermedades. Estas posibilidades se han visto incrementadas con el desarrollo de la ingeniera gentica y la disponibilidad de tcnicas de biologa molecular.

Estructura del genoma bacteriano

Toda la informacin gentica esencial para la vida de la bacteria est contenida en una nica molcula de cido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena y circular, cerrado por enlace covalente. Dicha molcula se denomina cromosoma bacteriano. Muchas bacterias poseen adems ADN

extracromosmico, tambin circular y cerrado, denominado ADN plasmdico por estar contenido en los plsmidos. stos, portan informacin gnica para muchas funciones que no son esenciales para la clula en condiciones normales de crecimiento.

Las bacterias no poseen histonas asociadas a su genoma y en consecuencia no tienen la posibilidad de compactar su ADN en estructuras tipo nucleosomas como las clulas eucariotas. Por lo tanto, deben compactar su ADN de otra manera. Esto se logra porque el ADN circular cerrado es capaz de adoptar una estructura terciaria denominada superenrollamiento, que implica el enrollamiento del eje de la doble hlice sobre s mismo. Este

superenrollamiento se dice que tiene sentido negativo porque tiene el sentido contrario al enrollamiento de una hebra de ADN sobre la otra. Esto supone para la bacteria una fuente de almacenamiento de energa para ser usada en muchos procesos fisiolgicos que la requieren, por ejemplo la separacin de las dos hebras de ADN necesaria para la replicacin y la transcripcin. Las bacterias poseen enzimas (topoisomerasas) capaces de alterar la estructura del ADN, modificando su superenrrollamiento. Estas topoisomerasas actan agregando o eliminando vueltas superhelicoidales y cumplen un rol importante en los procesos de replicacin y transcripcin del ADN. Adems, es interesante mencionar que algunas de las topoisomerasas como la ADNgirasa, son blanco de accin de los antibiticos del grupo de las quinolonas, como el cido nalidxico.

PLASMIDOS
Son ADN extracromosomico. Estos, son molculas circulares de ADN de doble cadena que constituyen una unidad de replicacin

independiente del cromosoma. Por esto puede encontrarse ms de una copia del mismo plsmido dentro de la clula bacteriana. Aunque el ADN plasmdico no porta informacin gentica esencial para la vida de la bacteria, s porta genes que le confieren nuevas propiedades fenotpicas y que en algunos casos le son tiles para su adaptacin al crecimiento en determinados ambientes.

GENES
Los elementos transponibles son segmentos de ADN capaces de moverse desde una posicin a otra en el genoma. Es decir que pueden transponerse o saltar desde un sitio determinado del genoma, separndose del resto del ADN, hasta otro sitio distinto al cual se integran.

Existen dos tipos de elementos transponibles: Los elementos IS (secuencias de insercin) son segmentos

pequeos de ADN, de aprox. 1 a 2 Kb que contienen la informacin gentica mnimamente necesaria para la transposicin. Poseen secuencias especficas en ambos extremos del fragmento que consisten en repeticiones invertidas una respecto de la otra, que son reconocidas por enzimas codificadas en el mismo elemento IS, denominadas transposasas, responsables de la integracin del elemento al sitio blanco del genoma.

Los Tn (transposones) son segmentos de ADN que

adems de portar la informacin necesaria para la transposicin, contienen genes que pueden codificar diferentes propiedades fenotpicas. Se destaca la resistencia a ciertos antibiticos. Algunos plsmidos poseen uno o ms Tn que portan determinantes de resistencia a antibiticos; la capacidad de estos elementos para transponerse de un plsmido a otro, proporciona a la bacteria gran flexibilidad para desarrollar resistencia, dado que dichos plsmidos son generalmente conjugativos, por lo que pueden transferirse entre distintas bacterias.

REPLICACIN DEL ADN BACTERIANO

Si se inicia la replicacin, la divisin consiguiente no debe ocurrir hasta que se haya completado la replicacin y, de hecho el final de la replicacin puede disparar la divisin celular. Las bacterias, a diferencia de las clulas eucariotas, son capaces de replicar su ADN a lo largo de todo su ciclo celular. El sitio de ADN que se est duplicando, se llama horquilla de replicacin. La replicacin puede ser unidireccional o bidireccional, segn se formen una o dos horquillas en el origen. Generalmente, los cromosomas bacterianos tienen replicacin bidireccional, mientras que algunos plsmidos pueden replicarse unidireccionalmente. En la replicacin unidireccional, una horquilla sale del origen y progresa a lo largo del ADN. En la bidireccional, se forman dos horquillas que se alejan del origen en direcciones opuestas hasta que se encuentran completando la duplicacin. Esto permite a la bacteria duplicar su ADN ms rpido que si el proceso fuera unidireccional, pudiendo replicar ms de mil pb por segundo. La replicacin es semiconservativa porque cada molcula de ADN posee una cadena del ADN original y una nueva. Las enzimas encargadas de catalizar el proceso de replicacin, se denominan ADN polimerasas. Si bien en E. coli se conocen tres tipos distintos, la responsable de la mayora de los procesos de replicacin es la polimerasa III, mientras que las polimerasas I y II cumplen principalmente funciones de

reparacin de rupturas o de errores en las molculas de ADN. Tambin participan otras enzimas, como las helicasas responsables de desenrollar el ADN en el origen o cerca de l, paso indispensable para iniciar la replicacin. Podemos decir que la replicacin consta de tres fases: iniciacin, elongacin y terminacin. La primera se produce desde el origen del replicn donde se forma la o las horquillas de replicacin, gracias a la accin de las helicasas que desenrollan el ADN. De esta forma se constituye una porcin monocatenaria de ADN que estar en condiciones de formar un complejo con protenas de unin al ADN, encargadas de estabilizar la cadena sencilla, evitando la formacin de puentes de hidrgeno. Se sintetiza un corto oligonucletido de ARN con un grupo 3 oxidrilo libre, que actuar como cebador o primer, en el cual la ADN polimerasa agrega los nucletidos. La elongacin consiste en el avance de la horquilla de replicacin, conforme se van agregando nucletidos a la nueva cadena, siguiendo un orden establecido por las reglas de complementariedad de bases (A con T y C con G), entre la cadena molde y la nueva. En esta etapa participa fundamentalmente la ADN polimerasa III. Todas las polimerasas conocidas agregan nucletidos en direccin 5- 3 para el crecimiento de la cadena y requieren una cadena de ADN molde, un cebador y los nucletidos. La terminacin se produce despus de que ambas horquillas de replicacin han atravesado la mitad del cromosoma en direcciones opuestas y se encuentran en la regin terminal del genoma. En esta regin, existen secuencias de ADN que actan como bloqueadores para el avance del las horquillas, por lo tanto se asegura que la replicacin termine en esa pequea porcin del genoma.

TRANSCRIPCIN Y TRADUCCIN
Durante la transcripcin, las reglas del apareamiento de bases son aplicadas por la ARN polimerasa para sintetizar un producto complementario a una cadena del ADN usada como molde, que es el ARN. Una de las clases ms importantes de ARN es el llamado mensajero (ARNm), que porta la informacin para la sntesis de protenas. La ARN polimerasa bacteriana, es distinta de la que tienen las clulas eucariotas; de hecho, algunos antibiticos que tienen como sitio blanco de accin la ARN polimerasa (por ejemplo la rifampicina) son efectivos exclusivamente ante clulas procariotas. La ARN polimerasa reconoce un sitio especfico en el ADN, llamado promotor, al cual se une iniciando la transcripcin. Un mismo transcriptor, ARNm, puede contener la informacin correspondiente a ms de un gen, por lo tanto se traducir luego en ms de un polipptido. El conjunto de genes que son transcriptos en un nico ARNm y que por tanto se expresan en conjunto se denomina opern. Los genes procariotas no poseen intrones como los eucariotas, es decir que una vez transcripto el ARNm, ste ser traducido directamente en una secuencia polipeptdica, sin necesidad de realizar ningn procesamiento despus de la transcripcin. Otra diferencia importante con la expresin de los genes eucariotas, es que como las bacterias no tienen un compartimento nuclear definido, los procesos de transcripcin y traduccin estn acoplados. Es decir que mientras se est sintetizando una molcula de ARNm, el ARN naciente puede tomar contacto con los ribosomas e iniciar la sntesis proteica (ver figura 5). sto es una ventaja para la bacteria y constituye una importante causa de su elevada capacidad para adaptarse a diferentes ambientes, porque le permite responder rpidamente a los estmulos sintetizando las protenas necesarias, en el momento adecuado. La traduccin es un proceso por el cual el ARN ribosmico, el ARN de transferencia (ARNt) y muchas protenas ribosomales, realizan la lectura del cdigo gentico. Dicho cdigo est escrito en tripletes de nucletidos o codones portados por el ARNm; de la escritura de la secuencia

correspondiente de aminocidos, surge el producto polipeptdico. El ribosoma desempea un rol fundamental, reuniendo al ARNm y a los ARNt cargados de aminocidos. La estructura y composicin de los ribosomas procariotas (ARN y protenas), difiere en cierta medida de los ribosomas eucariotas. Tienen menor masa y por lo tanto, menor coeficiente de sedimentacin (la subunidad mayor 50 S y la menor 30 S, ambas suman 70 S). Estas diferencias entre los ribosomas procariotas y eucariotas, igual que otras diferencias en la expresin gnica (polimerasas, topoisomerasas, protenas, mecanismos regulatorios y factores de elongacin), tienen una serie de implicancias. Una de stas es la sensibilidad diferencial de procariotas y eucariotas a toxinas y antibiticos. Por ejemplo los macrlidos, los aminoglucsidos, el cloramfenicol y otros son antibiticos que actan en el ribosoma bacteriano o en el proceso de sntesis proteica; en cambio, algunas toxinas bacterianas como la diftrica, actan selectivamente en la sntesis proteica eucariota. Existen dos sitios en el ribosoma: el aceptor (sitio A), donde los ARNt cargados se asocian en primer lugar y el sitio peptdico (sitio P), donde se sujeta la cadena polipeptdica en crecimiento. En cada adicin de aminocidos, el ARNm avanza un codn y el nuevo aminocido se traslada del sitio A al P, incorporndose a la protena en formacin. Como el cdigo gentico es universal, el significado de los codones es similar al de los

eucariotas, aunque cabe mencionar que existen algunas diferencias en los codones que determinan la iniciacin y la terminacin de la traduccin, preferencia codones. Como en los procesos de replicacin y transcripcin, el paso inicial de la traduccin es un importante punto de regulacin. as de como uso de en la

ciertos

Yenifer Elaine Antonio Aguilar