MANUSEIO DO MICROSCPIO PTICO

Vivian Farias de Lima

RA 1020587

Maro/2012

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Introduo

1.1. Histrico
Objetivo da microscopia a obteno de imagens ampliadas de um objeto, que nos permitam distinguir detalhes no revelados a olho nu. [1] O d e s e n v o l v ime n t o e a p e r f e i o ame n t o d a microscopia eletrnica est intimamente associado ao progresso alcanado pela Biologia, nos ltimos 100 anos. O microscpio eletrnico possibilitou a observao direta de aspectos ultraestruturais das clulas at ento desconhecidos. Como resultado dessas novas observaes, nossa compreenso sobre a organizao dos tecidos vegetais e animais foi enormemente ampliada e muitas das nossas ideias a respeito da construo e funo celulares foram radicalmente alteradas. [2] O desenvolvimento do microscpio ptico dependeu dos avanos na produo das lentes de vidro. Pelo sculo XVII, as lentes foram refi nadas a ponto de tornarem possvel a fabricao de microscpios simples. Utilizando um instrumento como esse, Robert Hooke examinou um pedao de rolha e em 1665 comunicou para a Royal Society de Londres que a cortia era composta de uma massa de minsculas cmaras, que ele chamou de clulas. O nome clula foi estendido at para as estruturas que Hooke descreveu, que eram apenas as paredes celulares que permaneceram depois que as clulas vegetais vivas dentro dela morreram. Mais tarde, Hooke e alguns outros dos seus contemporneos foram capazes de visualizar clulas vivas. [3] A observao das estruturas encontradas na natureza utilizando

microscopia ptica como uma extenso natural da observao a olho nu, representou papel importante no surgimento das cincias da natureza, tanto das cincias biolgicas, como a histologia, anatomia, etc. assim como a mineralogia, petrografia, gnese de rochas, etc. e continua uma tcnica importante hoje em inmeras reas da cincia, complementada pelas tcnicas de microscopia eletrnica. [4] O microscpio um sistema ptico que combina duas lentes.. Ele foi inventado provavelmente pelo holands Zacharias Janssen (1588-1632) por volta
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de 1609, na verso possuindo ocular cncava. interessante notar que a inveno deste instrumento ocorreu praticamente ao mesmo tempo que a do telescpio. O microscpio com ocular convexa foi introduzido logo a seguir por Francisco Fontana (1580-1656). [5]

1.2. O microscpio ptico

Um microscpio ptico formado por dois sistemas: o sistema ptico e o sistema mecnico (Figura 2). O primeiro composto por: 1.2.1.

Ocular

Lente (ou lentes) situada perto do olho do observador. Amplia a imagem formada nas objetivas. Quando o microscpio binocular, possui um mecanismo que permite ajustar a distncia interpupilar; 1.2.2.

Objetivas

So as lentes situadas perto da preparao, ampliando a imagem desta. Na superfcie de cada objetiva esto indicadas o aumento, a abertura numrica e ainda h um anel colorido que indica o aumento: vermelho 4X, amarelo 10X, azul 40X e branco 100X (esta ltima de imerso). As lentes objetivas trazem inscries que especificam suas caractersticas (figura 1)

Aumento de 100x

Comprimento do tubo mecnico em mm

Espessura da lamnula para qual se formar imagem ntida

Valor da abertura numrica

Figura 1: Inscries das lentes objetivas. (Wikipedia)

O ngulo formado pelo eixo ptico e os raios mais externos ainda cobertos pela objetiva a medida da abertura numrica. O valor da abertura numrica est diretamente relacionada com o ndice de refrao do meio por onda a radiao projetada. Assim, o mximo de abertura numrica para a objetiva a seco menos do que 1, e as objetivas de imerso tm uma abertura numrica ligeiramente maior, na faixa de 1,2 a 1,4. [2] Nas objetivas a seco o meio o ar, cujo ndice de refrao igual unidade. Nas objetivas de imerso, uma gota de leo de cedro colocada entre a preparao e a objetiva. O leo de cedro tem ndice de refrao igual a 1.151, que o mesmo ndice de refrao do vidro. Como se pode ver, o leo de cedro faz com que o ngulo de abertura (formado pelos raios mais externos que penetram na objetiva, vindos de um ponto do objeto) se torne maior e, consequentemente, a abertura numrica. [6] Para a focalizao correta de uma preparao com a objetiva de imerso em leo, deve-se aps focalizar com a objetiva de 40x, colocar o revlver em posio inicial intermediria, entre as objetivas de 40x e 100x e com uma gota de leo de imerso sobre a estrutura a ser observada abaixar a objetiva de 100x (esta lente deve mergulhar na gota de leo) e focalizar o material mexendo somente o micromtrico. Aps retirar a lamina da platina, para a limpeza, deve-se em adio,

limpar a objetiva de imerso com um leno de papel macio, podendo-se fazer o uso de uma soluo de ter/clorofrmio (1:1), para melhor limpeza. [7] 1.2.3.

Condensador

Sistema de lentes situado abaixo da platina e que tem a funo de concentrar a luz gerada pela fonte de iluminao em direo preparao; 1.2.4.

Diafragma

Localizado no interior do condensador, o diafragma-iris regula o feixe de raios que atravessa o sistema de lentes, eliminando os raios muito desviados; 1.2.5.

Fonte de luz

Se trata de uma lmpada halgena de intensidade graduada, situada ao p do microscpio. Sua superfcie externa pode possuir uma espcie de anel para a colocao de filtros que facilitam a visualizao.

Alm do sistema ptico, um microscpio formado pelo sistema mecnico, o qual se compe de: 1.2.6.

Suporte

Mantm o sistema ptico e fornece estabilidade ao aparelho. composto por duas partes, sendo elas a base (ou p) e o brao; 1.2.7.

Platina

Tambm conhecida como mesa, uma plataforma horizontal com um orifcio central que permite a passagem dos raios procedentes da fonte de iluminao. Pode ser fixa simplesmente ou apresentar outra pea superior deslizante movimentada atravs de botes e denominada de carro ou charriot, destinada a movimentar a lmina onde se localiza a preparao a ser observada. Na parte posterior h um nnio que permite

fixar as coordenadas de qualquer campo ptico. Sobre a mesa existem ainda pinas para prender a lmina; 1.2.8.

Tubo de encaixe ou canho

Contm o revlver com as objetivas abaixo e o sistema de lentes oculares acima. Existem tubos monoculares e binoculares; 1.2.9.

Revlver

Contm o sistema de lentes objetivas. O revlver provido de movimento circular que permite mudar as objetivas; 1.2.10.

Parafusos macromtrico e micromtrico

Permitem o deslocamento da platina para cima e para baixo. O deslocamento grosseiro se faz por meio do parafuso macromtrico, que aproxima o enfoque, e o ajuste por meio do parafuso micromtrico, que realiza o enfoque correto. [8]

Figura 2: Microscpio ptico e suas partes.(Ufpel)

O limite de resoluo refere-se a menos distancia que pode existir entre dois pontos para que apaream individualizados na imagem formada pelo sistema ptico utilizado. O limite de resoluo (LR) depende do comprimento de onda utilizada ( )e da abertura numrica da objetiva (NA). O olho humano tem um poder de resoluo de aproximadamente 0,2 mm enquanto que os microscpios comuns, em geral, tem um limite de resoluo de at 0,25 m (Figura 3). [9]

Figura 3: Representao esquemtica de Limite de Resoluo. Ilustrao, A. M. Polizeli.

2. Objetivo
Desenvolver um estudo sobre o microscpio tico e seu manuseio.

3. Materiais e Mtodos
3.1. Materiais Microscpio ptico LMW Lab Junior Lmina preparada 3.2. Mtodos Verificou-se previamente a voltagem eltrica do aparelho que foi ento ligado a rede eltrica. Acendeu-se a lmpada do sistema de iluminao e colocouse a lamina na platina fixando-a com as presilhas, com o cuidado de que ao sistema a ser observado fosse que direcionado para cima, e com o auxilio do charriot, o mesmo foi posicionado embaixo da lente objetiva inicial, de menor aumento. Com os olhos na lente ocular, girou-se o parafuso macromtrico de modo a aproxim-lo da lente objetiva e formar uma imagem ntida, aperfeioando a imagem com o parafuso micromtrico. Vizualizou-se a lamnula por um tempo de modo a familiarizar os olhos com o instrumento. Girando o revolver, posicionou-se sob a lamnula a lente seguinte a de aumento 4x, passando para a de aumento 40x e 100x respectivamente, tomandose os devidos cuidados para que a lente no toque o sistema na platina, seja quebrada, ou perca o foco que ajustado nos parafusos macro e micromtrico. Aps utilizao do microscpio ptico, a luz foi desligada, o revolver posicionado a lente inicial de 4x, girando-se o parafuso macromtrico, abaixou-se a platina ao mximo e retirou-se a lamina do aparelho. Atravs dos dados contidos nas lentes objetivas, calculou-se o Limite de Resoluo (LR) que as lente podem oferecer e o aumento total de cada lente objetiva do microscpio atravs da equao (1). (1) Onde k=constante com valor 0,61;

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=comprimento de onda de luz empregada (luz branca=0,55m); AN=abertura numrica da lente em uso.

Calculou-se o aumento total de cada objetiva do microscpio , pela equao (2) AT=Aobj . Aoc Onde AT=Aumento total; Aobj=aumento da lente objetiva; Aoc=aumento da lente ocular. (2)

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4. Resultados:
Inscries indicadas das caracterstica de cada lente objetiva, esto sintetizadas na tabela 1. Tabela 1: Inscries das caractersticas das lentes objetivas. Aumento Abertura Numrica (AN) 4x 0,10 10x 0,20 40x 0,65 100x 1,25

Comprimento do tudo mecnico (mm) Espessura da lamnula para qual se formar imagem ntida (mm)

160 _

160 _

160 0,17

160 0,17 oil

Aps identificar as partes do microscpio (Figura 2), o correto manuseio permitiu focar a imagem da lamina, e atravs das inscries contidas no equipamento (Tabela 1) pode-se calcular o limite de resoluo (LR) que as lentes objetivas podem fornecer e o aumento total de cada objetiva do microscpio , usando as equaes (1) e (2) respectivamente . Calculando o limite de resoluo para cada lente:

Sabendo-se, pela inscrio na lente ocular, que seu aumento de 10x, calculou-se o aumento total de cada lente objetiva pela equao (2):

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AT4x= AT10x= AT40x=

4.10= 40x 10.10=100x 40.10= 400x

AT100x= 100.10= 1000x Tem-se ento os dados sobre o microscpio ptico utilizado, na tabela 2.

Tabela 2: Dados calculados sobre as lentes do microscpio ptico. Ocular Objetiva AN objetiva 10x 10x 10x 10x Panoramica 10x 40x 100x 0,1 0,2 0,65 1,25 40x 100x 400x 1000x 3,3350 1,6775 0,5162 0,2684 da Aumento total LR (m)

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5. Discusses
As lentes objetivas apresentam aberturas numricas diretamente

proporcionais a sua capacidade de aumento o que proporciona as lentes de maior aumento, uma tambm maior resoluo das lentes e o brilho da imagem formada. O aumento da imagem no sinnimo de riqueza de detalhes, inclusive dependendo das dimenses do objeto estudado, o aumento da imagem pode torn-la fora de foco, o aumento ento apenas o aumento aparente do tamanho da imagem em relao ao objeto. O Limite de Resoluo (LR) diretamente proporcional ao comprimento de onda da fonte de iluminao, podendo aumentar ou diminuir o poder de resoluo do microscpio se utilizadas fontes de luz com comprimentos de onda menores ou maiores. O limite de resoluo mostra o quo prximos podem ser dois pontos e ainda identificados individualmente. O limite do olho humano de 0,2 mm [9],o microscpio faz com que diminua esse limite, permitindo que corpos ainda que muito prximos possam ser identificados individualmente. A exemplo, a lente objetiva de 100x, proporciona um limite de resoluo 1000 vezes menos que o limite do olho humano. A abertura numrica da lente, de modo inversamente proporcional ao limite de resoluo, torna a imagem mais ntida quando a primeira maior e o segundo menor. O sistema observado era composto de pequenos peixes, em que pode-se observar sua estrutura, organelas, de acordo com a aproximao da imagem atravs de lentes objetivas de diferentes poderes de aumento e resoluo.

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6. Concluso
Para obteno de um total aproveitamento de imagem do objeto estudado, deve-se compreender o manuseio do microscpio eletrnico para que se possa focar a imagem e observar os pontos desejados. Quanto maior a abertura numrica e menor o limite de resoluo, melhor a resoluo da imagem, fazendo-a mais ntida. Quanto maior for o aumento das lentes oculares e objetivas, maior ser a capacidade de aumento aparente do objeto. As lentes de imerso tem maiores aberturas numricas proporcionadas pelo leo utilizado.

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7. Referencias Bibliogrficas
[1] MANNHEIMER, Walter A. Microscopia dos materiais: Uma introduo. Rio de Janeiro: E-papers Servios Editoriais, 2002. 221p. [2] Introduo a microscopia eletrnica. 33 Biologico, So Paulo, v.65, n.1/2, p.33-35, jan/dez., 2003 Palestra Introduo a Microscopia Eletronica.

[3] ALBERTS, Bruce et al. Fundamentos da biologia celular. 2. ed. Porto Alegre: Artmed, 2006. 866 p.

[4] GOLDENSTEIN, Prof. Dr. Hlio. Microscopia Optica. Disponvel em: <http://www.angelfire.com/crazy3/qfl2308/1_multipart_xF8FF_6_Microscopia_otica. pdf>. Acesso em: 12 mar. 2012.

[5]Zilio, Srgio C. . ptica Moderna - Fundamentos e aplicaes. So Carlos: Compacta, 2009. 300 p.

[6] UNAMA. Apendice B: Microscpio. Belem: Universidade da Amazonia, 2008. 54 p.

[7] MANUAL de aula prtica: Citologia. Cuiab: 2010. 26 p.

[8]

SANTOS,

Cid Optica

Aimbir e

de

Moraes. Apostila de Drogas

de

Farmacognosia:Microscopia

Identificao

Vegetais.

Departamento de Farmcia: Ufpr, 2000. 23 p.

[9] POLIZELI, Maria de Lourdes T. Moraes. Manual prtico de biologia celular. 2 Ed. Ribeiro Preto-SP: Editora Holos, 2008, 164 p.

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