Tinciones para bacterias, virus, hongos y plasmocitos

Microbiologa ; Ingeniera en Industrias Alimentarias Instituto Tecnolgico Superior de Uruapan ; IV semestre

21/03/2012 Docente: Alejandra Gallegos Len Alumno: Urbina Paz Cuauhtmoc Armando

Con la tincin de plata es comn ver alteraciones de las paredes capilares: aspecto irregular, proyecciones subepiteliales ("spikes") y zonas con aspecto vaco o de huecos en ella. Los depsitos son negativos con el rojo Congo. El mtodo de tincin LgG Inmunofluorescencia Hay tincin para IgG en casi todos los casos, usualmente acompaada de C3; con menor frecuencia se encuentra tambin IgA e IgM. La tincin es mesangial y parietal. En mesangio los depsitos son confluentes y en paredes capilares pueden ser irregulares y granulares, o con un patrn en cinta, dando aspecto lineal. En la mayora de casos hay expresn de ambas cadenas ligeras, pero en unos pocos hay una nica cadena, usualmente Kappa. En tbulos, vasos e intersticio no se detectan depsitos inmunes. En menor proporcin se usa la tincin de Papanicolaou .

Bacterias:
Son seres generalmente unicelulares que pertenecen al grupo de los protistas inferiores. Son clulas de tamao variable cuyo lmite inferior est en las 0,2m y el superior en las 50m; sus dimensiones medias oscilan entre 0,5 y 1m . Las bacterias tienen una estructura menos compleja que la de las clulas de los organismos superiores: son clulas procariotas (su ncleo est formado por un nico cromosoma y carecen de membrana nuclear). Igualmente son muy diferentes a los virus, que no pueden desarrollarse ms dentro de las clulas y que slo contienen un cido nucleico .Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia de una flora bacteriana normal es indispensable, aunque grmenes son patgenos. Anlogamente tienen un papel importante en la industria y permiten desarrollar importantes progresos en la investigacin, concretamente en fisiologa celular y en gentica. Las bacterias forman uno de los tres dominios en los que se dividen los seres vivos. En los antiguos sistemas taxonmicos, las bacterias formaban un subreino del reino Monera. El trmino bacteria tambin se emplea para denominar a todos los organismos unicelulares sin ncleo diferenciado que constituyen el nivel de organizacin procarionte. Los organismos procariontes se subdividen en Eubacterias (dominio Bacteria) y Arque bacterias (dominio Archaea). Son los organismos ms abundantes del planeta y su tamao ronda entre las 0.5 y 5 m (micrones). Pueden ser de carcter patgeno o no. Generalmente poseen una pared celular, similar a la de plantas u hongos, pero compuesta por peptidoglicanos; muchos antibiticos son efectivos slo contra las bacterias ya que inhiben la formacin de esta pared celular. Muchas de ellas tambin poseen cilios o flagelos.

La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas.

Recoger muestras.* Hacer el extendido en espiral. Dejar secar a temperatura ambiente. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.) Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las clulas gram positivas y gram negativas se tien de color azul-purpura. Enjuagar con agua. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. Enjuagar con agua. Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion) Enjuagar con agua. Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Tincin cido Resistente:

Una vez teidos, conservan su color resistiendo al lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul. Tincin negativa Este procedimiento consiste en la tincin de fondo con un colorante cidos para dejar las clulas incoloras en contraste. Comnmente se utiliza el colorante negro

llamado nigrusna. El mtodo sirve para observar bacterias o estructuras que difcilmente se tien con las tcnicas directas. Tincin de los flagelos Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una suspensin coloidal inestable de sales de cidos tnico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su presencia y disposicin en las clulas. De esta manera el dimetro aparenta que la estructura aumento de tamao con fuscina bsica los hace visibles en el microscopio ptico. Tincin de la cpsula La cpsula se pone de manifiesto mediante una coloracin negativa o una modificacin de esta. Uno de los mtodos de tincin de la cpsula incluye el tratamiento de las bacterias con un solucin caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solucin de sulfato de cobre. El sulfato de cobre tambin imparte color al fondo y esto resulta en que la clula y el fondo aparezcan teido en color azul oscuro mientras la cpsula aparece de color azul plido. Tincin del ncleo Los ncleos se pueden teir por la tincin de Feulgen la cual es especifica para el ADN.

Hongos:
Los hongos son organismos eucariotas tpicos y poseen un ncleo que contiene varios cromosomas (siete en Candida albicans, ocho en Aspergillus nidulans y diecisis en Saccharomyces cerevisiae) delimitado por una membrana nuclear, con nuclolo rico en ARN y orgnulos citoplsmicos, como mitocondrias, vacuolas, retculo endoplsmico, aparato de Golgi y ribosomas 80 S. El citoplasma se encuentra limitado por la membrana citoplsmica, que es una doble capa de lpidos que contiene protenas y esteroles y que controla la permeabilidad celular y participa en la sntesis de la pared celular. La estructura de las clulas de los hongos es muy diferente de la de las bacterias que son organismos procariotas. Aunque comparten muchas estructuras, las clulas de los hongos se diferenciaen de las de las plantas en la composicin de la pared celular y en que carecen de cloroplastos y clorofila, y de las humanas en que tienen pared celular y en la presencia de ergosterol en la membrana citoplsmica. Por el exterior de la membrana citoplsmica, presentan una pared celular que est compuesta fundamentalmente por polisacridos y por diversas protenas. Los polisacridos ms importantes son la quitina (polmero de n-acetil glucosamina), el manano (polmero de manosa) y el glucano (polmero de glucosa).

Examen Directo con Solucin Salina Colocamos una gota de la muestra lquida en un porta y aadimos una gota de solucin salina. Ponemos el cubre y observamos al microscopio con poca luz y variando el aumento. Los hongos se observan refrctiles o brillantes, ligeramente verdosos. En el caso de las levaduras pueden aparecer inclusiones. Tambin se pueden observar burbujas de diferentes tamaos. No debemos confundir las levaduras con hemates y con burbujas de aire. Se diferencian porque las levaduras presentan pequeas inclusiones en la clula y las burbujas van a ser siempre de diferentes tamaos. Hidrxido Potsico con Dimetil Sulfxido No es necesario calentar la preparacin, de esta forma no aparecen precipitados. Las muestras de pelos, escamas y biopsias se observan con poca luz. Es importante no confundir artefactos como fibras de tejidos, granos de polen, etc, con hongos. Otra causa de error es lo que se denomina hongos en mosaico, que suele aparecer cuando las muestras estn muy queratinizadas. Suelen ser acmulos lipdicos que desaparecen cuando se calienta la preparacin.

Colocamos la muestra en pequeas porciones sobre un porta y aadimos varias gotas de KOH + Dimetil y ponemos el cubre. Observamos los elementos fngicos (hifas, levaduras, etc). Si la muestra observada son uas muy queratinizadas, el tiempo que acta del KOH es de varias horas. Es conveniente dejar el porta en una cmara con ambiente hmedo (placa de petri con un algodn empapado en agua dentro). Azul Algodn de Lactofenol Se realizan las preparaciones a partir de cultivos. El fenol destruye la flora acompaante y organismos; el cido lctico conserva las estructuras fngicas y el azul algodn tie la quitina de las paredes fngicas. Aadimos una gota de la muestra o una porcin del hongo en un porta. Sobre ella colocamos una gota de azul algodn y ponemos el cubre. Observamos al microscopio. Blanco de Calcofluor Se realiza un examen directo sea cual sea la muestra. Es til en cortes de tejidos. Colocamos en un porta la muestra + 1 gota de KOH dimetil sulfxido + 1gota de calcofluor. Mezclamos y ponemos el cubre. Despus de varios se ha producido la clarificacin, y se observa en un microscopio de fluorescencia (verde brillante o blanco azulado). Las fibras elsticas y colgeno se observan con fluorescencia amarillo verdosa. Estas se pueden confundir con hongos y levaduras y se diferencian en la fluorescencia. Hay algunos hongos (hongos dematiaceos) que producen enfermedades como micetomas que se tien con gran dificultad usando el blanco de calcofluor. Colorante de Cobre ( tinta parker-KOH) Para el diagnstico de Malassecia furfur se tien intensamente de color azul. La tinta china se utiliza en muestras de LCR y exudados. La usamos siempre que busquemos Criptococcus neoformans. La tcnica consiste en aadir 1gota de tinta china junto con 3 gotas de la muestra, dejar reposar, apareciendo un color marrn (la cpsula se rodea con un halo blanco). Tincin de Gram Se realiza para la identificacin de hongos. Suelen ser Gram+ y la nica consideracin a tener en cuenta es que el cristal violeta hay que mantenerlo por ms tiempo.

Virus: El virus es un agente gentico que posee una regin central de cido nucleico, ADN o ARN (genoma) y que est rodeado por una cubierta de protena o cpside y, en algunos casos, por una envoltura lipoproteica. Los virus contienen toda la informacin necesaria para su ciclo reproductor; que solamente puede ocurrir adentro de las clulas vivas, apoderndose de las enzimas y de la maquinaria biosinttica de sus hospedadores. Los virus difieren entre s por el tamao, la forma y la composicin qumica de su genoma.

En caso de microscopa electrnica de transmisin, se emplean sustancias de alto nmero atmico que, por tanto, resultan opacas a los electrones transmitidos. Tpicamente, estas sustancias son acetato de uracilo, citrato de plomo o molibdato de amonio. Al electrnico, esta tcnica permite visualizar virus, flagelos, bacterias y otros entes de escaso tamao

Mtodo de la Orcena Shikata Infectadas VHB Pardo /Negro Fondo Amarillento-pardusco

Bibliografa:
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/Dibulgeneral/LosVirus/Virus2/Virus.htm http://www.bio-nica.info/biblioteca/Bacterias.pdf http://www.aulados.net/Botanica/Curso_Botanica/Hongos/31_hongos_general_texto.pdf http://html.rincondelvago.com/micologia_2.html http://www.lawebdelcalifa.net/temasap/TEMA3ap.pdf http://www.geocities.ws/vidianne_mx/bactincionesbactyhon.pdf http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtml