La terapia gentica es la tcnica que permite la localizacin exacta los posibles genes defectuosos de los cromosomas y su sustitucin por

otros correctos, con el fin de curar las llamadas enfermedades genticas, entre las que se encuentran muchos tipos de cncer. El desarrollo de la terapia gentica se ha apoyado en los avances cientficos experimentados por determinadas ramas de la biologa, como la gentica, la biologa molecular, la virologa o la bioqumica. El resultado es una tcnica que permite la curacin de casi cualquier patologa de carcter gentico. En el desarrollo de dicha terapia hay que tener en cuenta diversos factores. Por un lado, es necesario saber cul es "tejido diana", es decir, el que va a recibir la terapia. En segundo lugar, conocer si es posible tratar in situ el tejido afectado. Igualmente importante resulta determinar el que facilita el traspaso de un gen exgeno a la clula, es decir, qu vector se ha elegir para el desarrollo del nuevo material gentico que posteriormente se introduce el tejido. Finalmente, es preciso estudiar al mximo la eficacia del gen nuevo y saber que respuesta tendr el rgano o tejido hospedador, con la entrada del gen modificado. La finalidad principal de los estudios sobre terapia gnica en el mbito de la medicina es conseguir los mejores resultados tanto en prevencin como en investigacin, diagnstico y terapia de las enfermedades hereditarias; sin embargo, esta manipulacin del material gentico puede ser utilizada en ingeniera gentica, con el fin de mejorar determinadas caractersticas de los seres vivos. Los inicios de la terapia gnica Los primeros trabajos en terapia gnica se realizaron con ratones, mediante tecnica del ADN recombinante, que consiste en introducir el ADN extrao en los embriones, de forma que dicho ADN se expresa luego completamente, a medida que desarrolla el organismo. El material gentico introducido se denomina transgn; los individuos a los que se les aplica esta tcnica reciben el nombre de transgnicos. Con la introduccin de estos transgenes se puede lograr la identificacin de zonas concretas del material gentico para llevar a cabo su cloonacin, con el fin de que solo se vean afectadas un tipo especfico de clulas. Vectores Los vectores virales agrupan cuatro tipos de virus: retrovrus, adenovirus, virus adnoasociados y herpesvirus; existen tambin vectores no virales, como el bombardeo con partculas, la inyeccin directa de ADN, los liposomas catinicos y la transferencia de genes mediante receptores. Vectores virales Los retrovirus comprenden una clase de virus cuyo material gentico es una cadena sencilla de ARN; durante su ciclo vital, el virus se transcribe en una molcula bicatenaria de ADN, gracias a la accin de la enzima reverso transcriptasa, que se integra en el genoma de la clula husped sin aparente dao para ella. La mayor parte de los retrovrus a excepcin del HIV, slo se pueden integrar en clulas con capacidad para replicarse, lo cual restringe su uso. Sin embargo, se pueden desarrollar en grandes cantidades y su expresin en la clula

hospedadora se realiza durante largos periodos de tiempo. Los adenovirus son un conjunto de virus con ADN lineal de cadena doble. Los vectores de adenovirus son ms grandes y complejos que los retrovirus, pues en su construccin solamente se elimina una pequea regin del material gentico vrico. Su ciclo de infeccin, que comprende de 32 a 36 horas en un cultivo celular conlleva en primer lugar la sntesis de ADN de la clula y, posteriormente la sintesis y ensamblaje del ADN y las protenas vricas. Las infecciones de estos virus en seres humanos estn asociadas a enfermedades benignas, como la conjuntivitis. La Principal ventaja de su utilizacin en la terapia gnica es que se pueden producir en grandes cantidades y transfieren de forma muy eficaz el material gentico a un nmero elevado de clulas y tejidos, aunque el hospedador parece limitar la duracin de la expresin del nuevo material gentico. Los virus adenoasociados son muy pequeo no autnomos y con ADN lineal de cadena sencilla. Para la replicacin de estos virus es necesaria la confeccin con adenovirus. La insercin del material genetico de los adenovrus asociados se suele producir en regiones del cromosoma 19. Los vectores que se forman con este tipo de virus son muy simples, no pueden exceder en mucho la longitud del ADN viral, aproximadamente 4.680 nucletidos, y son capaces de expresarse a largo plazo en las clulas que no se dividen; sin embargo, la respuesta que producen en la clula hospedadora es menor que la que se ocasiona con el tratamiento con adenovirus y es difcil la produccin de este vector en grandes cantidades. Los herpesvirus poseen un material gentico compuesto por ADN de doble cadena lineal, con un tamao aproximado de 100 a 250 Kb. Presentan variaciones en cuanto al tamao y organizacin del genoma, contenido gentico o clulas sobre las que actan. Pero por regla general, este tipo de de virus son muy tiles, pues es posible insertar en su genoma grandes cantidades de ADN extrao y llevar a cabo durante largos periodos de tiempo infecciones latentes en la clula hospedadora, sin ningn efecto aparente sobre sta. En la clase de los gamma-herpesvirus como el virus de Epstein-Barr, se pueden producir infecciones latentes en clulas en divisin, de modo que el material gentico que lleva insertado el virus se replica conjuntamente a la divisin celular y se hereda en toda la nueva progenie de clulas. El inconveniente que presentan estos virus es que estn asociados a daos linfoproliferativos, con lo cual, para su uso como vectores es necesario identificar estos genes y eliminarlos, manteniendo nicamente aquellos que permitan la replicacin del virus y el mantenimiento del plsmido viral. Hasta la fecha, el uso fundamental de los herpesvirus en la terapia gnica se limita al empleo in vivo del herpes simples (HSV) Vectores no virales El bombardeo de partculas constituye una tcnica efectiva de transferir genes tanto in vitro como in vivo. En este mtodo fsico el plsmido o porcin de ADN es recubierto en su superficie por gotas de oro o tungsteno, de 1 a 3 micras de dimetro. Estas partculas, aceleradas por una descarga elctrica de un aparato o por un pulso de gas son disparadas hacia el tejido. El xito de esta tcnica puede estar asegurado en los procesos de vacunacin. Otra alternativa es la inyeccin directa del ADN o ARN puro circular y cerrado covalentemente, dentro del tejido deseado. Este mtodo econmico, y un procedimiento no txico, si se compara con la entrega mediante virus. Como desventaja fundamental hay que sealar que los niveles y persistencia de la expresin de genes dura un corto periodo de tiempo. Esta

tecnologia puede tener potencial como un procedimiento de vacunacin y como e genes a un nivel bajo. Los liposomas catinicos consisten en la mezcla de un 1 lipido catinico de carga positiva y varias molculas de ADN con carga negativa debido a los fosfatos de la doble hlice. Este tipo de vectores se han usado en el tratamiento de la fibrosis sistica y en las enfermedades vasculares. Se pueden realizar transferencias de estos va catter, aunque su uso es limitado, dedido a la baja eficacia de transfeccin del material gentico contenido en este complejo a la clula hospedadora ya su relativa toxicidad. Un problema que se plantea con las tcnicas anteriores es que el vector alcance realmente su objetivo y no quede diseminado por el organismo. Por ello existe un procedimiento que consiste en introducir, junto al material gentico que queremos transferir, molculas que puedan ser reconocidas por los receptores de la clula diana. Estas molculas pueden ser azucares, pptidos, hormonas, etc. y su ventaja respecto a otros modelos es que se establece una interaccin muy especfica, como la interaccin transportador/clula, y no muy inespecfica como la que se verifica entre las cargas inicas. Experimentos en animales Los experimentos con animales conforman una parte fundamental en el estudio de cualquiera de las aplicaciones de terapia gnica; sus dos objetivos principales son el anlisis de la seguridad del sistema de vectores y el estudio de la eficacia de la transferencia de genes. El efecto de la dosis y su duracin es comprobado en varias especies, incluyendo primates y otros animales que sean hospedadores para el virus salvaje (por ejemplo, las ratas del algodn se usan para el estudio de adenovirus). Se analiza la difusin de secuencias vitales, especialmente a las gnadas, y cualquier efecto adverso, como la inflamacin tras la administracin del vector. El propsito de estos ensayos no es mostrar que el vector no produce efectos adversos cualquier clase de droga tiene esa capacidad en determinada dosis, sino precisar el tipo de suceso adverso que podra esperarse si los humanos estuvieran expuestos al vector, y fijar las posibles dosis que pueden acarrear estos sucesos. Para una enfermedad gentica, un ratn con un gen eliminado o un animal con el fenotipo apropiado sera vlido en este tipo de estudio.