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INDICAO MDICA DO EXAME A determinao da -amilase em amostras de sangue, urina e outros lquidos biolgicos til no diagnstico da pancreatite aguda e suas complicaes. PRINCPIO A -amilase hidrolisa o substrato -(2-cloro-4-nitrofenil)--1,4-galactopiranosilmaltoside (Gal-G2--CNP), liberando 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) e 1,4-galactopiranosilmaltoside (Gal-G2). A velocidade de formao de 2-cloro-4-nitrofenol pode ser medida fotometricamente e proporciona uma medida direta da atividade da -amilase na amostra. Amilase Gal-G2--CNP + H2O Gal-G2 + CNP AMOSTRA Preparo do paciente No necessrio preparo especial. Tipos de amostra Usar soro ou plasma (colhido em heparina), urina (colhida em intervalo de 2 a 24 horas) e lquidos (asctico, duodenal ou pleural). Amostras com citrato, EDTA ou oxalato no devem ser usadas porque estes anticoagulantes reduzem a atividade da amilase, produzindo resultados falsamente diminudos. Quando se determina a amilase na amostra de uma mico, deve-se tambm determinar a creatinina na mesma amostra. O resultado dever ser reportado como Relao Amilase/Creatinina (U/g), com o objetivo de compensar as variaes da atividade da amilase em amostras obtidas em cada mico. Armazenamento e estabilidade da amostra A atividade enzimtica estvel 7 dias entre 15 25 C e 2 meses entre 2 8 C. As amostras de urina devem ser armazenadas entre 2 8 C. No adicionar preservativos. Outros lquidos biolgicos tambm devem ser colhidos sem preservativo. Volume mnimo (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise) Volume ideal (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise) Critrios para rejeio da amostra Presena de hemlise ou sinais de contaminao bacteriana. Fazer referncia ao manual ou POP de colheita, separao e distribuio de material. PRODUTO UTILIZADO Amilase CNPG, Catlogo 25-60 Labtest Diagnstica Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa, MG, 33400-000 ANVISA - 10009010053

Substrato: Armazenar entre 2 8 C. Contm tampo 50 mmol/L, -2-cloro-4-nitrofenil)--1,4-galactopiranosilmaltoside 3,0 mmol/L, cloreto de sdio 300 mmol/L, cloreto de clcio 5 mmol/L, tiocianato de potssio 900 mmol/L, azida sdica 14,6 mmol/L. Precaues e cuidados especiais 1. Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na manipulao do reagente. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 2. Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies indicadas so estveis at a data de expirao impressa no rtulo. Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos contaminao de natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da estabilidade. O laboratrio deve estabelecer a estabilidade em suas condies operacionais. 3. O substrato contm azida sdica, que txica. Deve-se tomar cuidado para evitar a ingesto e, no caso de contato com os olhos, lav-los imediatamente com grande quantidade de gua e procurar auxlio mdico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com tubulaes de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de gua para descartar o reagente. O reagente contm tambm tiocianato de potssio, que venenoso. No ingerir. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana.

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4. Pipetar o substrato com a boca, soprar no substrato, usar material contaminado com saliva e suor e conversar junto ao frasco destampado so aes que podem contaminar o reagente com quantidades microscpicas de saliva ou suor, capazes de deteriorar irreversivelmente o substrato. 5. Segundo estudos de estabilidade a absorbncia do substrato, medida contra a gua, apresenta um acrscimo de 0,006 por ms. Elevaes repentinas da absorbncia do substrato indicam contaminao com saliva ou suor, capazes de deteriorar irremediavelmente o substrato. 6. No utilizar o reagente quando sua absorbncia medida contra a gua em 405 nm, for igual ou maior que 0,300 ou quando mostrar-se turvo ou com sinais de contaminao. EQUIPAMENTOS Procedimento manual 1. Fotmetro com cubeta termostatizada a 37 C capaz de medir a absorbncia em 405 nm com exatido. 2. Pipetas para medir amostras e reagentes. 3. Cronmetro. Procedimento automatizado Indicar o nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento analtico; fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento alternativo Indicar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Enumerar as diferenas esperadas quando procedimentos manuais substituem procedimentos automatizados. CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais para controle interno e externo da qualidade (fabricante, nmero de catlogo), instrues de preparo e frequncia da utilizao dos mesmos. Limites de tolerncia Descrever o procedimento para definio dos limites de tolerncia, o sistema adotado para utilizao do mapa de Levey-Jennings e das regras de controle e as providncias a serem tomadas diante de valores que ultrapassem tais limites. Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao dos materiais de controle. Verificao de novo lote de controles e/ou reagentes Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e de reagentes. Gerenciamento dos dados Definir como os dados relativos ao controle da qualidade so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. PROCEDIMENTO Condies de reao: comprimento de onda de 405 2 nm, cubeta termostatizada a 37 C com 10 mm de espessura da soluo, banda de passagem de 8 nm ou menos e luz espria menor que 0,1%. Procedimento manual 1. Pipetar 1,0 mL de Substrato em um tubo 12x75 e adicionar 0,02 mL de amostra. 2. Homogeneizar. 3. Transferir imediatamente para a cubeta termostatizada e medir as absorbncias aos 30 (A30) e 90 segundos (A90). Procedimento automatizado Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. Precaues e cuidados especiais 1. Para manusear e descartar reagentes e material biolgico, aplicar as normas estabelecidas de segurana. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. A limpeza e secagem adequadas do material so fatores fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. Fazer referncia ao manual ou POP de limpeza e verificao da qualidade da limpeza dos materiais. 2. A gua utilizada no laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para preparar reagentes e usar nas medies, deve ter resistividade 1 megaohm ou condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos < 0,1 mg/L (gua tipo II). Para o enxge da vidraria a gua pode ser do tipo III, com resistividade 0,1 megaohms ou condutividade 10 microsiemens. No enxge final utilizar gua tipo II. Quando a coluna deionizadora est com

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sua capacidade saturada ocorre a produo de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da gua. Fazer referncia ao manual ou POP de gua reagente. 3. Como ocorre com toda reao enzimtica, a rigorosa observao do tempo e da temperatura de incubao de grande importncia para a qualidade dos resultados obtidos. CLCULOS Ver Linearidade. A Teste = A90 - A30 Atividade da Amilase (U/L) = A Teste x 3953 O fator 3953 foi calculado segundo as condies da reao propostas acima. Recalcular o fator quando for efetuada qualquer modificao (Ver Mtodo para clculo do fator). Amilase Urinria/Hora Amilase (U/L) x volume urinrio (mL) Amilase urinria (U/h) = 1000 x tempo de coleta (h) Relao Amilase/Creatinina Amilase (U/L) x 100 Relao Amilase/Creatinina (U/g) = Creatinina (mg/dL) Relao depurao da amilase / depurao da creatinina Determinar a atividade da amilase e a concentrao da creatinina no soro e em uma amostra de urina e aplicar os resultados na seguinte frmula: Amilase na urina (U/L) x Creatinina no soro (mg/dL) Relao (%): Amilase no soro (U/L) x Creatinina na urina (mg/dL) Mtodo para clculo do fator VT x 1000 Fator = x VA x d VT = volume total do ensaio (1,02 mL) VA = volume da amostra (0,02 mL) 1000 = converso de U/ml para U/L d = espessura da soluo (1 cm) = absortividade milimolar do 2-cloro-4-nitrofenol em 405 nm, pH 6,0 a 37 C (12,9) RESULTADOS Unidade de medida U/L Converso de U/L para Unidade SI: kat = U/L x 0,0167 Valores de referncia Soro: 25 a 125 U/L Urina: at 30 U/h Relao Amilase urinria/Creatinina urinria: at 400 U/g Depurao da Amilase/Depurao da Creatinina: 1,0 a 4,0% Valores de referncia no so aplicveis aos outros lquidos biolgicos, uma vez que a presena de atividade da amilase, em qualquer quantidade, considerada anormal. Valores crticos Valores maiores que 3 vezes o limite superior de referncia indicam aumento considervel da atividade da amilase srica. Incluir o procedimento a ser adotado diante de um resultado crtico. x 100

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LIMITAES DO PROCEDIMENTO Linearidade O resultado da medio linear at 2000 U/L. Para valores maiores, diluir a amostra com NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova determinao e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se situe entre 100 e 1500 U/L. Sugerimos a verificao da linearidade metodolgica e fotomtrica no mnimo semestralmente utilizando amostras com valores at 2000 U/L. Indicar o procedimento de diluio utilizado no laboratrio. Interferncias 1- Valores de bilirrubina at 20 mg/dL e Hemoglobina at 180 mg/dL no interferem na reao. Valores de triglicrides at 1800 mg/dl no interferem nos resultados. Valores entre 1800 e 3500 mg/dL produzem interferncia negativa de aproximadamente 10%. 2- Medicamentos colinrgicos, narcticos (morfina) e analgsicos anlogos, lcool e diurticos tiazdicos produzem resultados falsamente elevados da amilase srica. A presena de macroamilase na amostra de soro, que resultante da complexao da amilase com protenas de elevado peso molecular, tais como imunoglobulinas, pode produzir resultados falsamente elevados na ausncia de pancreatite. 3- Para reviso das formas fisiopatolgicas e medicamentosas de interferncia nos resultados e na metodologia, consultar Clin Chem 1975; 21:1D-432D. SIGNIFICADO CLNICO A amilase sangunea provm de duas fontes principais: pncreas e glndulas salivares. Outras fontes potenciais de amilase srica so os rgos de reproduo e o fgado. A elevao da amilase srica no um achado especfico da pancreatite e causas no pancreticas de hiperamilasemia podem dificultar a interpretao dos resultados em alguns casos. Estes incluem leses inflamatrias envolvendo as glndulas salivares, tais como a parotidite epidmica, lcera pptica perfurada, envolvendo ou no o pncreas, infarto ou obstruo intestinal, colelitase, peritonite, apendicite aguda, cetoacidose diabtica, carcinoma extrapancretico (especialmente de esfago, pulmo e ovrio), gravidez ectpica rota, insuficincia renal e macro-amilasemia. Nesta ltima condio, a amilase no se encontra elevada na urina. A determinao da amilase srica e urinria so os testes mais teis para o diagnstico da pancreatite e em muitos casos a relao entre as depuraes da amilase e da creatinina pode ser til no diagnstico da pancreatite aguda e pancreatite recorrente. Neste caso, o valor da relao se encontra entre 7,0 e 15,0%. REFERNCIAS 1. Toyobo Bioche. Study on determination of Amylaseactivity using 2-chloro-4-nitrophenylgalactosylmaltoside (Gal-G2--CNP), 1999. 2. Kaufman RA, Tietz NW. Clin Chem 1980; 26: 846-853. 3. Pesce AJ, Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V. Mosby Co., 1987; 817-830. 4. Rosenblum JL. Clin Chem 1992; 38:920. 5. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981; 27: 493-501. 6. Amilase CNPG, Instrues de Uso, Labtest Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___