APOPTOSI

Morte cellulare programmata (PCD) Cos Perch importante Com controllata Qual il suo ruolo in patologia Processo vitale per gli organismi multicellulari tanto quanto la divisione cellulare

Due forme di morte cellulare

Necrosi
Passiva Patologica Rigonfiamento, lisi Dispersione Infiammazione ? In vivo, colpito tutto il tessuto

Apoptosi
Attiva Fisiologica-patologica Condensazione Fagocitosi No infiammazione Intrinseca o estrinseca In vivo, sono colpite singole cellule

Perch lapoptosi meglio della necrosi?

Corpi apoptotici catturati dai fagociti Non c dispersione del contenuto cellulare Nessuna risposta infiammatoria

Ringofiamento cellulare e nucleare Rottura e dispersione del contenuto cellulare Risposta infiammatoria

APOPTOSI
Conservata Evolutivamente Avviene in tutti gli animali studiati (anche nelle piante) Stadi e geni conservati dai nematodi alluomo

IN ASSENZA DI OPPORTUNI STIMOLI PER CRESCERE, UNA CELLULA VA INCONTRO AD APOPTOSI, OSSIA A MORTE CELLULARE PROGRAMMATA

NEL CORSO DELLAPOPTOSI IL DNA SI FRAMMENTA, LA CROMATINA SI CONDENSA, LA CELLULA SI CONTRAE, FORMA UNA SERIE DI BOLLE (BLEBS) CHE, SEPARANDOSI DALLA CELLULA, FORMANO I CORPI APOPTOTICI. I CORPI APOPTOTICI VENGONO FAGOCITATI DA FAGOCITI CIRCOLANTI PROFESSIONALI O DA CELLULE EPITELIALI CONTIGUE (FAGOCITI OCCASIONALI)

Membrane blebbing Frammentazione del DNA: Perch si hanno frammenti di 180 bp?

Cambi Cellulari associati con l apoptosi La cromatina si aggrega in masse dense e compatte
Normal cell Apoptotic cell

Il DNA digerito da endonucleasi

Apoptotic cell

JIANG et al., Cell Research (2000), 10, 221--232

Le cellule sono in bilico tra la vita e la morte

DANNI Segnali di morte fisiologici

DEATH SIGNAL

PROAPOPTOTIC PROTEINS

ANTIAPOPTOTIC PROTEINS

Apoptosi
Importante normalmente in processi fisiologici e di sviluppo. Sviluppo: maturazione sistema immune, morfogenesi, sviluppo neurale Adulto: DNA damage e riparo delle ferite Eccesso di apoptosi
Malattie Neurodegenerative Deficienza di apoptosi

Tumori Autoimmunit

Importanza dell Apoptosi

1) Cruciale per lo sviluppo embrionale -Errori nell Apoptosi possono causare difetti di nascita 2) Importante per mantenere lomeostasi - la mitosi bilanciata dallapoptosi per regolare il numero cellulare totale. 3) regolazione impropria contribuisce a malattie umane -Malattie neurodegenerative
- Parkinsons - Alzheimers - Spinal Muscular Atrophy -Cancer -Malattie autoimmuni - diabetes type I

Troppa apoptosi

Poca apoptosi

APOPTOSI: importante nell embriogenesi

Morfogenesi (eliminare cellule in eccesso):

Selezione (elimina cellule non-funzionali):

LAPOPTOSI GIOCA UN RUOLO IMPORTANTE NELLA MORFOGENESI

ES.: FORMAZIONE DELLA ZAMPA DI UN POLLO

APOPTOSI: importante nell embriogenesi

1) Immunit (elimina cellule pericolose): Apoptosi critica nel rimuovere linfociti che riconoscono il self-difetti nell apoptosi possono portare a malattie auto-immuni

Self antigen recognizing cell

Apoptosi nel sistema immune

2) Cellule infettate da virus sono eliminate dal corpo con linduzione dellapoptosi

Organ size (elimina leccesso cellulare):

APOPTOSI: importante nella vita adulta

Rimodellamento Tissutale (elimina le cellule che non servono pi)

Virgin mammary gland

Late pregnancy, lactation

Apoptosis

Involution (non-pregnant, non-lactating)

- Testosterone

Apoptosis
Prostate gland

APOPTOSI: importanza nella vita adulta

+ cell division

Apoptosis

Le cellule perse per apoptosi sono rimpiazzate dalla divisione cellulare

(ricorda- potenziale replicativo limitato delle cellule)

APOPTOSI: Ruolo nelle patologie

Troppa: atrofia Tissutale
Neurodegenerazione Thin skin etc

Poca: iperplasia
Tumori Arteriosclerosi

APOPTOSI: Ruolo in patologia

Neurodegenerazione
Neuroni sono post-mitotici (non possono essere rimpiazzati) Morte neuronale causata dalla perdita di connessioni corrette, Perdita di fattori di crescita (e.g. Nerve Growth Factor), DNA damage (danno da stress ossidativo) Disfunzione o danno Neuronale determina la perdita di sinapsi PARKINSON'S DISEASE ALZHEIMER'S DISEASE HUNTINGTON'S DISEASE etc.

APOPTOSI: Ruolo nelle patologie

Cancro
Apoptosi elimina normalmente le cellule danneggiate danno=> apoptosi soppressore della crescita p53 controlla senescenza e la risposta apoptotica al danno Molte cellule tumorali sono diffettive nella risposta apoptotica Danno => mutazione in p53 =>tumore Alti livelli di proteine anti-apoptotiche o bassi livelli di proteine pro-apoptotiche

Segnali di Morte
estrinseci
FAS (FasL , vir inf cells) TNFR TRAIL receptors (TR1-4)

Tutti hanno un dominio death domain (DD), intrinseci (p53 mutato)

ER (unfolded proteine) nucleus (DNA damage) cytosol (ROS)

Inizio dell apoptosi

Pathway Estrinseco Death Ligands Death Initiator Receptors Caspase 8 Effector Caspase 3 Initiator Caspase 9 R.I.P.

Pathway Intrinseco DNA damage & p53

Mitochondria /Cytochrome c

APOPTOSI: il controllo
Receptor pathway (fisiologico):
FAS ligand TNF

Death receptors: (FAS, TNF-R, etc)

Death domains Adaptor proteins

Pro-caspase 8 (inactive)

Caspase 8 (active)

MITOCHONDRIA

Pro-execution caspase 3 (inactive)

Execution caspase 3 (active)

Death

Morte cellulare indotta da ligandi

The death receptors FasL Trail TNF Ligand-induced trimerization

Death Domains Death Effectors Induced proximity of Caspase 8 Activation of Caspase 8

APOPTOSI: il controllo
pathway intrinseci (damage): Mitochondria
Cytochrome c release Pro-caspase 9 cleavage

Pro-execution caspase (3) cleavage

Caspase (3) cleavage of cellular proteins, Nuclease activation, Etc.

Death

APOPTOSI: controllo
Physiological receptor pathway Intrinsic damage pathway

mitocondri
Caspase cleavage cascade inattivazione di proteine e DNA CROSSLINKING OF CELL CORPSES; ENGULFMENT (no inflammation)

I pathways intrinseci ed estrinseci convergonosulla Caspasi-3

Caspasi
Identificate inizialmente come gli enzimi che attivano linterleuchina 1B

Cystein proteasi che tagliano dopo Asp - acido aspartico Attivate per proteolisi Substrati? se stesse ed altre caspasi Quindi, cascata con amplicazione dello stimolo iniziale

Punti salienti nell apoptosi

Apoptosi richiede l attivit di cistein proteasi (caspasi 1-9). Apoptosi pu essere iniziata estrinsecamente da death ligands (e.g. TRAIL, FasL) che attivano initiator caspase 8 attraverso induced proximity. Apoptosi pu essere iniziata intrinsecamente da DNA damage (via cytochrome c) che attiva initiator caspase 9 attraverso oligomerization. Initiator caspasi 8 and 9 tagliano proteoliticamente e attivano effector caspase 3, che porta alla morte cellulare.

Apoptosi e sviluppo- C. elegans

-C. elegans ha 1090 cellule somatiche - 131 cellule muoiono per apoptosi e 959 cellule vivono e si sviluppano nei diversi tessuti -

-Il Nobel Prize 2002 in Fisiologia e Medicina fu dato a Brenner, Horvitz & Sulston per i loro studi sull apoptosi in C. elegans.

PCD in C. elegans
131 cellule di 1090 totali eliminate- apoptosi Primo gene apoptotico identificato Ced mutants - cell death abnormal mutanti ced identificano I componenti del pathway

ced-3 e ced-4- cellule vive che invece dovrebbero morire ced-9- tutte le cellule muoiono CED-3, CED-4, CED-9 omologhi in mammiferi, drosophila
CED-3(Caspasi 3) caspasi, proteasi di effettori di morte cellulare CED-4 (APAF) attivatore apoptotico: si lega alle caspasi e promuove la loro attivazione CED9- Bcl2- inibisce lattivazione delle caspasi, regolatore