Revista Brasileira de Zootecnia

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia ISSN impresso: 1516-3598 ISSN on-line: 1806-9290 www.sbz.org.br

R. Bras. Zootec., v.36, suplemento especial, p.235-249, 2007

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos
Aulus Cavalieri Carciofi1
1 - Departamento de Clnica e Cirurgia Veterinria, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista, campus de Jaboticabal. Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane, s/n. Jaboticabal - SP. CEP: 14.884-900. Tel.: (16) 3209-2631. Fax: (16) 3203-1226. E-mail: aulus.carciofi@gmail.com

RESUMO - Durante o processo de assimilao e uso dos alimentos, diferentes respostas metablicas podem ser desenvolvidas pelo organismo dos animais. Estas respostas so fruto da integrao de mecanismos complexos, que envolvem os sistemas neuro-endcrino e o funcionamento dos rgos, sendo influenciadas pela dieta, espcie animal, idade, condio fisiolgica e composio corporal. Este trabalho enfoca a importncia fisiolgica e os mtodos de estudo das respostas ps-prandiais aos carboidratos, bem como as alteraes fisiolgicas conseqentes ao balano eletroltico da dieta. A quantidade, estrutura qumica e processamento industrial do amido determinam boa parte da resposta ps-prandial de glicose e insulina de ces. Em gatos, outros mecanismos parecem ser mais importantes, como a ingesto de aminocidos. A fibra alimentar tambm altera a resposta ps-prandial ao alimento, devendo ser consideradas sua quantidade, solubilidade e fermentabilidade no desenvolvimento das dietas. Os mtodos de estudo destas respostas incluem avaliao das respostas glicmica e insulnca ps-prandiais, teste endovenoso de tolerncia glicose e arginina. O clmp euglicmico apresenta-se tambm como ferramenta de estudo, no entanto revela informaes mais relacionadas ao animal do que dieta. A compreenso do conjunto de alteraes metablicas aos carboidratos importante no estudo do controle da saciedade, composio corporal e inmeras doenas degenerativas e endcrinas. A concentrao e relao entre os macro-elementos da dieta (Na, Cl, K, P, Ca, Mg e S) e dos aminocidos sulfurados (metionina, cistina e taurina) interferem em inmeras funes orgnicas, como a cardiovascular, neuromuscular, metabolismo sseo, renal e pulmonar, refletindo-se no equilbrio hidro-eletroltico e cido-bsico orgnicos. De importncia prtica para ces e gatos encontram-se a relao destes nutrientes com cardiopatias, nefropatias, osteodistrofias e urolitases. A relao entre os macro-elementos estabelecida em mmol/kg de matria seca da dieta, calculando-se seu balano ction-nion (excesso de bases ou nions dietticos no determinados). Suas repostas orgnicas so medidas, dentre outros mtodos, pela hemogasimetria, balano hdrico, mensurao do volume dos espaos extracelular e vascular, supersaturao e pH urinrios. Palavras chave: carboidrato, glicose, insulina, metabolismo, pH, urina

Methods of study of metabolic responses of dogs and cats to different foods

ABSTRACT - During the assimilation and use of food process, the animals organism can develop different metabolic responses. These responses results of complex integration mechanisms, involving the neuro-endocrine systems and organs activity, were being influenced, besides the diet, for the animal species, age, physiologic condition and corporal composition. In this paper will be discussed the physiologic importance and study methods of carbohydrates post-prandial responses, as well as the physiologic alterations induced by diet electrolytic balance. Amount, chemical composition and industrial processing of starch determine treat part of post-prandial glucose and insulin responses in dogs. In cats other mechanisms seem to be more important, including the ingestion of aminoacids. Besides of starch, the dietary fiber also alters the post-prandial response to food. For fiber, it should be considered its amount, solubility and fermentability in development of the diets. Study methods of these responses include glycemic and insulinic meal response test, and intra-venous glucose and arginine tolerance teste. Euglycemic clamp comes, also, as a study tool, however this information says more about the animal than the diet. The understanding of carbohydrates metabolic alterations is important in the study of satiation control, corporal composition and in several degenerative and endocrine diseases. The concentration and relationship among the macro-elements of diet (Na, Cl, K, P, Ca, Mg and S) and of
Correspondncias devem ser enviadas para: aulus.carciofi@gmail.com

236

Carciofi, A.C.
sulfurated aminoacids (metionine, cistine and taurine) interfere in many organic functions, as cardiovascular, neuromuscular, bone, renal and lung metabolism, being reflected in organic hydro-electrolyte and acid-base balance. Of practical importance for dogs and cats are the relationship of these nutrients with heart diseases, kidney diseases, osteodystrophy and urolithiasis. The relationship among these macro-elements is established in mmol/kg of diet dry matter, being calculated its cation-anion balance (undetermined anion value). The organic responses is measured, among other methods, by the blood gas analysis, water balance, mensuration of extracelular and vascular spaces volumes, urine supersaturation and urinary pH. Key Words: carbohydrate, glucose, insulin, metabolism, pH, urine

Introduo
Vrios aspectos so importantes na avaliao de um alimento para ces e gatos. Maior nfase tem sido dada a seu teor de energia metabolizvel, digestibilidade, qualidade das fezes geradas mediante seu consumo e palatabilidade. No Brasil, os efeitos metablicos da dieta e seus possveis relacionamentos com a sade geral, no entanto, tm recebido menor ateno. Os efeitos metablicos do alimento esto relacionados com alteraes de sade a longo prazo, que podem se estabelecer ao longo de vrios meses ou anos de ingesto alimentar. Alguns exemplos incluem as urolitases, nefropatias, alteraes articulares, distrbios cardio-circulatrios, obesidade, intolerncia aos carboidrados (Diabetes Mellitus), dentre outras, todas relacionadas com a qualidade de vida e longevidade de ces e gatos. As respostas metablicas que mais tm merecido ateno dos pesquisadores so as conseqentes ingesto de carboidratos e ao excesso de bases do alimento. Desta forma, este texto traz uma breve reviso sobre a importncia e mtodos de avaliao das mesmas.

Excesso de bases do alimento e pH urinrio

O balano ction-nion da dieta importante em vrios aspectos do metabolismo, refletindo-se sobre o funcionamento neuromuscular, osteoarticular, funo respiratria, funo renal e cardiovascular (DiBartola, 1992; Kaneko et al. 1997). Situaes de doena, em algumas circunstncias, levam inclusive a alteraes nas necessidades de macro-elementos dietticos, para que a dieta se adapte melhor s alteraes metablicas por que passa o animal (Hand et al., 2000). Neste texto pretende-se abordar especificamente a relao entre ctions e nions dietticos e o pH da urina.

A urina uma soluo complexa e um meio eficiente para a eliminao de produtos de excreo do organismo. a principal rota pela qual se eliminam produtos do metabolismo protico (uria, amnia e creatinina), minerais e gua. O pH urinrio varia como conseqncia da manuteno homeosttica do equilbrio cido-bsico (DiBartola, 1992). Em funo disso, as caractersticas da dieta iro determinar em grande parte o pH urinrio de ces e gatos. A determinao e modulao diettica do pH urinrio, por sua vez, tornam-se importantes devido a seu estreito relacionamento com as urolitase (Davies, 1999; Osborne et al. 2000, Yamka et al., 2006). As urolitases so a causa mais comum de doena obstrutiva do trato urinrio inferior em ces e gatos (Wagner et al., 2006), sendo, a formao de clculos no trato urinrio, um problema clnico significativo para animais de companhia em muitos pases (Yamka et al., 2006). No Brasil no existem muitos dados publicados sobre a incidncia de desordens urinrias em felinos (Reche Jr et al., 1998). Os 774 ces e gatos atendidos no perodo de 1999 a 2003 pelo Servio de Nefrologia e Urologia do Hospital Veterinrio Governador Laudo Natel da FCAV- Unesp de Jaboticabal, 107 casos foram de urolitase (13,82%) (Camargo, 2004), demonstrando elevada morbidade proporcional. Em estudo realizado com felinos no Canadian Veterinary Urolith Center, mais de 22.000 casos foram analisados quantitativamente durante 5 anos. Destes, 4866 diagnsticos foram de urolitase vesical em gatos e 618 plugs uretrais. Aproximadamente 50% dos urlitos submetidos eram de oxalato de clcio e 44% de estruvita (Houston et al., 2003). A formao de urlitos de estruvita mais comum em gatos jovens e adultos (1 a 7 anos), j gatos velhos (7 a 9 anos) possuem maior tendncia para formar clculos de oxalato de clcio (Allen & Kruger, 2000). Em funo disso, as

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

237

caractersticas das dietas variam para estas duas faixas etrias. Esta incidncia proporcional de urlitos de estruvita e oxalato de clcio, no entanto, no pode ser extrapolada para o Brasil. Temos no pas uma maior porcentagem de ces e gatos consumindo dietas caseiras, alm disso, a composio qumica dos alimentos industrializados para ces produzidos no Brasil inclui menos protena e mais clcio, fsforo e magnsio do que o verificado na Europa e Estados Unidos, como pode ser verificado em Carciofi et al. (2006). Esta composio nutricional, ao menos dos alimentos para ces, sugere que boa parte das raes brasileiras possivelmente leve os animais a produzirem urina alcalina, favorecendo a urolitase por estruvita. Esta hiptese reforada pelos achados de Camargo (2004), em estudo da casustica de urlitos verificada no Hospital Veterinrio da FCAV/UNESP. De um total de 105 casos, 24,14% dos urlitos de ces eram mistos de estruvita e oxalato de clcio, 24,14% mistos de estruvita, oxalato de clcio e hidroxiapatita, 14,94% urlito puro de oxalato de clcio e 12,64% urlitos de estruvita. Em gatos, 61,1% dos urlitos encontrados foram de estruvita, sendo o restante formaes mistas de estruvita com oxalato de clcio, urato de amnio e clcio apatita. Formao dos urlitos O risco de desenvolvimento de urolitase est relacionado a fatores dietticos e no dietticos (Zentek et al., 2004). A dieta pode contribuir no aparecimento, manejo ou preveno de recidivas de urolitases. Ingredientes da dieta, digestibilidade, composio qumica e mtodos de alimentao afetam o volume, pH e a gravidade especfica da urina (Markwell et al., 1998, Carciofi et al., 2005). Altas concentraes de soluto, com uma subseqente super saturao da urina e diminuio da freqncia de mico podem favorecer a formao de cristais e clculos, pois a precipitao de cristais ocorre quando a urina torna-se super saturada (Osborne et al., 2000). Estratgias dietticas e de manejo para preveno e dissoluo de urlitos so baseadas nos princpios de saturao da urina. Estas so direcionadas para criar um estado de sub saturao de minerais calculognicos. A urina contm uma variedade de substncias que podem inibir ou promover a formao e o crescimento de cristais.

O estado de saturao da urina o produto da concentrao de solutos presentes, pH, fora inica, temperatura e presena de complexos qumicos pr-formados. A formao de cristais influencia a precipitao qumica de ons e molculas que esto dissolvidos na urina, que se torna super saturada com esses elementos (Allen & Kruger, 2000). Na Figura 1 encontra-se um esquema da saturao urinria. A subsaturao alcanada pela reduo na quantidade de precursores de urlitos na dieta, diminuio da concentrao de minerais mediante aumento do volume urinrio e/ou diminuio de sua excreo urinria e, por fim, por modificao do pH urinrio, medidas estas que aumentam a solubilidade dos cristais. pH urinrio Em geral, os urlitos de estruvita se associam em um pH urinrio alcalino e os urlitos de oxalato de clcio, em pH urinrio cido (Allen & Kruger, 2000). A reduo do pH urinrio foi demonstrada como uma prtica eficaz na diminuio da incidncia de formao de cristais de estruvita, sendo mais importante que a reduo do magnsio da dieta (Markwell et al., 1998). Reduo de pH, no entanto, pode no ser apropriada para o manejo de outros tipos de urlitos. Dietas acidificantes, que induzem pH urinrio a valores inferiores a 6,29 e apresentam muito pouco magnsio, podem aumentar o risco de formao de cristais de oxalato de clcio (Markwell et al., 1998). interessante notar que o magnsio tem um papel protetor, diminuindo a formao de urlitos de oxalato de clcio (Osborne et al., 2000). O objetivo principal da manipulao diettica , portanto, atingir um equilbrio para reduzir o risco de formao destes dois tipos de precipitado. O pH urinrio apresenta variao circadiana devido influncia de vrios fatores como composio do alimento, horrio da alimentao e volume consumido (Buffington & Chew, 1996). Sabe-se que a alimentao ad libitum resulta em onda alcalina ps-prandial de menor magnitude quando comparada alimentao sob a forma de refeies dirias menos freqentes. Em conseqncia disso, a interpretao de apenas um valor de pH, especialmente quando no se leva em considerao o momento da alimentao e o tipo de alimento consumido fica bastante duvidosa (Allen & Kruger, 2000).

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

238

Carciofi, A.C.

Sobre saturao (soluo instvel) Nucleao espontnea Crescimento mximo Agregao mxima No h dissoluo de cristais Super saturao (soluo metaestvel) Nucleao heterognea Crescimento mnimo Agregao mnima No h dissoluo de cristais Sub saturao (soluo estvel) No h nucleao No h crescimento No h agregao de cristais Dissoluo de cristais

Contm sais no solubilizados

Contm mais soluto do que o esperado

Baixa concentrrao de soluto

Figura 1 - Eventos provveis na formao de cristais na urina. Vrios fatores influenciam a solubilidade de minerais na urina, incluindo a concentrao de minerais litognicos e no litognicos, concentrao de inibidores e promotores de cristalizao, temperatura, pH e fora inica (adaptado de Osborne et al., 2000). Figure 1 - Probable events in formation of crystials in urine (Adapted of Osborne et al., 2000).

A ao do alimento sobre o pH urinrio o efeito resultante de seus nutrientes e dos cidos derivados dos mesmos (Allen & Kruger, 2000). A maior contribuio de cidos da dieta dada pela oxidao de aminocidos sulfurados e pelo balano de nions (Cl, S, P) e ctions (Na, Ca, K, Mg) metabolizveis (Markwell et al., 1998). Alimentos para ces usados para preveno de urlitos de estruvita devem levar produo de urina com pH entre 6,2 e 6,4, enquanto que para a dissoluo deste urlito pH entre 5,9 e 6,1. Recomendaes para urlitos de oxalato de clcio so menos precisas em relao ao pH, devendo-se evitar dietas que superacidifiquem a urina (Osborne et al., 2000). Para felinos, recomendam-se alimentos que levem formao de urina com pH entre 6,2 e 6,4 para a preveno de formao e entre pH 5,9 e 6,1 para a dissoluo de urlitos de estruvita. Em relao aos urlitos de oxalato de clcio, estes no podem ser dissolvidos na vescula urinria, devendo as dietas de preveno manter pH urinrio entre 6,6 e 6,8 (Allen & Kruger, 2000). Estimativa do pH urinrio a partir da composio da dieta

Tendo em vista a grande influncia do pH urinrio na preveno da formao de urlitos, tem surgido interesse no desenvolvimento de mtodos de predio do pH da urina atravs da composio de macro-elementos e aminocidos, ou, mais especificamente, composio ction-inica do alimento (Kienzle et al., 1991; Zentek et al., 2004). Tais estimativas, se confiveis, reduzem a necessidade de estudos em animais e permitem otimizar o pH urinrio (para preveno de estruvita e/ou oxalato de clcio) desencadeado por produtos comerciais. Estas estimativas podem apresentar valor significativo para a indstria de alimentos para animais de companhia, proporcionando diminuio dos custos com testes de alimentos, permitindo ao formulador incluir este parmetro no desenvolvimento da frmula da dieta e a comercializao de produtos mais seguros e saudveis aos animais (Yamka et al., 2006). A importncia e relao da composio mineral da dieta com o metabolismo cido-bsico vem sendo estudada em humanos h mais de 30 anos, sendo apenas mais recentemente considerada para animais (Gevaert et al., 1991). A composio mineral da dieta influencia significativamente o

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

239

pH ps-prandial e, portanto, pode predispor ces fontes de enxofre em alimentos para ces e gatos, e gatos a desenvolverem cristalria ou urolitase como bissulfato de sdio, sulfitos (preservativos), (Kienzle et al., 1991; Zentek et al., 2004). Sais sulfato ferroso, sulfato de mangans, sulfato de minerais produzem efeito varivel sobre o pH condroitina, biotina, tiamina e taurina, que urinrio, pois so fontes potenciais de cido ou base. Excesso de bases (mmol/kg MS) = (49,9 x Ca) + (82,3 x Mg) + Os xidos e carbonatos so (43,5 x Na) + (25,6 x K) alcalinizantes enquanto os (64,6 x P) (86,8 x S) (28,3 x Cl*) cloretos, fosfatos e sulfa-tos * concentrao dos elementos em g/kg de MS produzem efeito acidificante. poderiam tambm interferir no pH urinrio (Yamka Um mtodo prtico para se prever o efeito de et al., 2006). Nesta alternativa, a frmula seria: um alimento sobre o pH urinrio pelo clculo Independentemente da equao empregada, do excesso de base (EB). J foi extensamente esta essencialmente caracteriza o contedo catidemonstrado que os ctions e nions contidos no nico alcalinizante, como de carbonatos e anions alimento apresentaram alta correlao com o pH orgnicos, que no foram neutralizados por comurinrio em gatos (Kienzle & Wilms-Eilers, 1994; postos acidificantes. Quando o enxofre diettico Markwell, 1998; Wagner et al., 2006; Yamka et (sulfato) e outros nions (cloro e fsforo) so al., 2006) e ces (Zentek et al., 1995). Em um absorvidos em maior quantidade, existe uma estudo com ces, Gevaert et al. (1991) verificaram, mudana no equilbrio ction-nion para um alm do efeito da composio macromineral de estado mais negativo, ou de acidose metablica. dietas no equilbrio cido bsico e no pH urinrio, Este estado leva tendncia de aumento da a possibilidade de se adicionar acidificantes para concentrao de hidrognio no sangue arterial. a correo de imbalanos minerais, relatando que Para que no ocorram diminuies do pH sanguessa adio pode gerar risco de acidemia crnica. neo, que permanece sempre levemente alcalino nos Concluram que valores de EB devem ser animais saudveis (pH 7,4), o organismo lana calculados e estabelecidos para a obteno de um mo de seus sistemas tampo (Kaneko et al., balano eletroltico fisiolgico em ces, sem o 1997). Reviso completa sobre estes mecanismos risco de acidemia crnica. Salientaram, ainda, que pode ser encontrada em DiBartola (1992). De experimentos in vivo so necessrios para avaliar incio atuam os sistemas tampo intracelular, sseo a exata importncia de cada macro-mineral no e respiratrio. A longo prazo, no entanto, o valor do excesso de base. equilbrio mantido pela maior reabsoro renal O EB calculado a partir das concentraes de bicarbonato e maior eliminao renal de ons dos compostos cidos e alcalinos do alimento, hidrognio, resultando em queda do pH da urina. sendo expresso em mmol/Kg de matria seca Carnvoros como ces e gatos so capazes de eliminar grande Excesso de bases (mmol/kg MS) = (49,9 x Ca) + (82,3 x Mg) + (43,5 x Na) quantidade de + (25,6 x K) (64,6 x P) (13,4 x metionina) cidos. A com (16,6 x cistina) (28,3 x Cl*) posio dos ali* concentrao dos elementos em g/kg de matria seca. mentos indus(Kienzle & Wilms-Eilers, 1994). trializados atuais, no entanto, em (Allen & Kruger, 2000). Seu clculo pode ser muitas ocasies impem uma carga catinica, realizado, pela frmula: levando estes animais a produzirem urina neutra Alternativamente, pode-se empregar a ou mesmo alcalina, situao natural para concentrao de enxofre total do alimento ao invs herbvoros, predispondo-os a urolitase por dos aminocidos metionina e cistina. Algumas estruvita (Gevaert, et al., 1991). Kienzle et al., vantagens deste procedimento incluiriam o menor (1991) estudaram o efeito de 10 alimentos custo da anlise de enxofre em relao de comerciais (secos e midos) e de alguns aditivos metionina e cistina e a quantificao de outras (carbonato de clcio, lactato de clcio, fosfato

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

240

Carciofi, A.C.

biclcico, cloreto de clcio, cido fosfrico e cloreto de amnia) sobre o pH urinrio de gatos. Os ctions, nions e aminocidos que demonstraram associao com o pH urinrio foram o clcio, magnsio, sdio, potssio, metionina, cistena, fsforo e cloro. Os autores encontraram alta correlao entre os excessos de base e o pH urinrio mdio dos gatos, podendo ser este estimado como: pH urina = 6,72 + 0,0021 x excesso bases (r = 0,90, p<0,01) Kienzle et al. (1991) Os autores tambm sugerem o uso da equao para se determinar o EB desejado para um alimento. Usando-se a equao transformada [EB = (pH 6,72)/0,0021 mmol/kg] pode-se prever, durante a formulao, qual EB seria necessrio para que o alimento levasse produo de urina com determinado pH. Em outro estudo, Kienzle & Wilms-Eilers (1994) verificaram o efeito do cloreto de amnio e dos carbonatos de clcio e de sdio no balano cido bsico em gatos. Os autores confirmaram os resultados do estudo anterior e demonstraram que com a reduo gradual do EB, o pH urinrio diminui de forma linear at alcanar o valor de 400 a -500 mmol/kg de matria seca, depois do qual no se observaram novas redues do pH, sendo este descrito por uma regresso quadrtica: pH = 7,1 + 0,0019 x excesso de bases + (9,7 x 10-7) x excesso de bases 2 (r=0,99, p<0,01) (Kienzle & Wilms-Eilers, 1994) Os autores tambm demonstram reduo de pH sanguneo em EB muito negativos (elevadas doses de cloreto de amnio) discutindo a importncia de se reduzir a apenas o nutricionalmente necessrio as concentraes de ctions alcalinizantes, como Ca, Mg, Na e K do alimento de modo a se trabalhar com uma mnima adio de nions. Desta forma, reduzir matria mineral, especificamente clcio e magnsio, importante na formulao da dieta. Vmito, apatia e anorexia foram relatados como efeitos secundrios em dietas com EB menor que 1000mmol/kg. A acidificao orgnica est correlacionada, tambm, com maior perda renal

de fsforo. Deste modo, dietas acidificantes no devem ter relao Ca:P maior que 1,1:1, sob pena dos felinos desenvolverem hipofosfatemia. Markwell et al. (1998) estudaram o efeito do balano entre ctions e nions sobre o pH urinrio de gatos alimentados com 32 diferentes dietas midas. Os ctions, nions e aminocidos que influenciaram o pH urinrio foram o clcio, sdio, potssio, fsforo, metionina e cloro. Em estudo mais recente, Wagner et al. (2006) tambm encontraram correlao positiva entre o excesso de base e o pH urinrio mdio ao alimentarem gatos com 8 diferentes alimentos industrializados secos. Alm disso, os autores correlacionaram o volume urinrio de forma positiva com o contedo de potssio e de forma negativa com o contedo de fsforo, clcio e magnsio. A equao de predio do pH urinrio encontrada pelos autores (pH=6,25 + 0,0023 x excesso de bases; r=0,74; p<0,01) foi semelhante descrita por Kienzle et al. (1991). Em estudo bastante extenso, Yamka et al. (2006) avaliaram 150 alimentos secos e midos para gatos. Encontraram, como nos estudos anteriores, que aumentos de pH urinrio estavam diretamente relacionados com o aumento da ingesto de clcio, potssio, sdio e magnsio e, a reduo do pH urinrio, com maiores teores de enxofre, fsforo e cloro na dieta. Discutem que o enxofre foi o nutriente chave para a diminuio do pH da urina, tanto para alimentos secos quanto para midos e que devem ser usadas frmulas separadas para alimentos secos e midos, com o intuito de se assegurar maior preciso nas estimativas alcanadas. Os autores propuseram uma frmula direta para a estimativa do pH, sem o calculo prvio do excesso de bases. A frmula proposta para alimentos secos foi: pH da urina = 7,03 + (1 x Na) + (1 x K) + (0,89 x Ca) + (1,58 x Mg) (0,93 x Cl) (1,61 x S) (1,04 x P*). * concentrao dos elementos em g/100g de MS Yamka et al. (2006) O modelo proposto por Yamka et al. (2006) respondeu por 45% da variabilidade individual de pH urinrios observados e por 70% da variabilidade mdia de pH de uma determinada dieta (mdia dos gatos que consumiram a dieta). Para o

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

241

conjunto de dados observados (150 raes), as formulas propostas por Kienzle et al. (1991), Kienzle & Wilms-Eilers (1994) e Markwell et al. (1998) responderam por apenas 25% a 13% da variabilidade de pH urinrios, valor considerado baixo. Esta baixa preciso das frmulas anteriores, segundo os autores, pode ser conseqente limitada base de dados empregada nos estudos ou ao fato de outras fontes de enxofre, alm da metionina e cistina, no terem sido consideradas nas equaes. O pH urinrios de 12 alimentos secos para gatos produzidos no Brasil foram determinados no Laboratrio de Pesquisa em Nutrio e Doenas Nutricionais de Ces e Gatos do DCCV-FCAV/ UNESP. Os resultados obtidos in vivo foram comparados com os previstos por frmulas publicadas na literatura. Tanto a frmula preconizada por Yamka et al. (2006) como a de Kienzle & Wilms-Eilers (1994) apresentaram uma correlao intermediria com os valores in vivo, de respectivamente r= 0,50 e r=0,49, como pode ser visto nas Figuras 2 e 3.
7,6 7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 5,5 6 6,5 V alores estimados

estimativa inicial e serem bastante teis durante a formulao de um alimento, os resultados in vivo com ces e gatos so, ainda, fundamentais no processo de desenvolvimento e avaliao das raes. Em seu Guia Nutricional Pet a Associao Nacional dos Fabricantes de Alimentos para Animais de Estimao (2007) traz um protocolo mnimo para a determinao do pH urinrio em gatos e recomenda que este seja empregado na avaliao dos produtos. Este mesmo protocolo pode e deve ser utilizado para ces. No anexo 1 apresentamos o protocolo resumido utilizado no Laboratrio de Pesquisas em Nutrio e Doenas Nutricionais de Ces e Gatos Prof. Dr. Flvio Prada do DCCV-FCAV/UNESP, campus de Jaboticabal. Este visa a coleta de urina sem conservantes. Alem do pH urinrio, de rotina so mensurados o volume dirio produzido e a densidade urinria. Protocolos experimentais podem incluir inmeras outras determinaes, a depender das necessidades e objetivos propostos.
7,6 Valores encontrados 7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 R2 = 0,4876

Valores encontrados

R = 0,5065

6 5,5 6 6,5 Valores estimados 7 7,5

7,5

Figura 2 - Correlao entre o pH urinrio de gatos encontrado in vivo (n=12 alimentos) com os estimados pela frmula de Yamka et al. (2006). Figure 2: Correlation between urinary pH verified in vivo with urinary pH estimated according Yamka, et al. (2006). Para ces, menos estudos foram localizados. As equaes de pH urinrio em funo do EB, no entanto, no diferem consideravelmente das de felinos. Zentek et al. (1995) sugeriram a seguinte equao para ces: pH urinrio = 6,61 + 0,002 x excesso de bases Zentek et al. (1995) Medida in vivo do pH urinrio Apesar das equaes elencadas servirem de

Figura 3 - Correlao entre o pH urinrio de gatos encontrado in vivo (n=12 alimentos) com os estimados pela frmula de Kienzle & WilmsEilers (1994). Figure 3: Correlation between urinary pH verified in vivo with urinary pH estimated according Kienzle & Wilms-Eilers (1994). No existe consenso sobre a melhor metodologia para estudo do pH urinrio, o que pode ser verificado pela variao dos protocolos experimentais de diferentes autores. Aspectos importantes a serem considerados so um tempo suficiente de adaptao dieta, que tem variado de 2 (Kienzle et al., 1991) a 14 dias (Zenteck & Schultz, 2004). A ocorrncia de vmito ou diarria inviabiliza a avaliao da dieta no animal pois nestes processos a perda de eletrlitos intensa e alteraes no equilbrio cido-bsico e hidro-eletroltico se refletem em alteraes urinrias importantes.

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

242

Carciofi, A.C.

O perodo e a forma de colheita de urina tambm tm variado entre os experimentos. Perodos de coleta de 14 dias (Wagner et al.,2006), 4 dias (Kienzle et al.,1991) e mesmo 3 dias (Zentek et al., 1995; Yamka et al., 2006) so descritos. No se localizou estudo que abordasse a variabilidade de pH urinrio entre dias e que determinasse os melhores perodos de adaptao e coleta. Quanto forma de coleta, a maioria dos estudos realiza coleta total de urina no perodo de 24 horas, com exceo de Yamka et al. (2006) que trabalharam com o pH mdio de duas mices de cada felino no perodo de 24 horas. Variaes circadianas no pH urinrio so importantes, principalmente no perodo ps-prandial, como demonstrado por Kienzle & Wilms-Eilers (1994). Alimentando os gatos uma nica vez ao dia, por 30 minutos, os autores demonstraram no tratamento controle (EB = - 224mmol/kg) elevao do pH urinrio > 1 pH 4 a 6 horas aps a refeio. Demonstraram, tambm, que estas alteraes dependem do EB do alimento, pois a dieta suplementada com carbonato de clcio (EB = +305mmol/kg) apresentou elevao > 1,5 pH, enquanto a suplementada com cloreto de amnia (EB = -1079mmol/kg) reduo do pH urinrio 2 a 4 horas aps ingesto alimentar. Em funo disso, para muitos tratamentos o pH da urina produzida no perodo noturno foi significativamente menor que o da urina produzida durante o dia (p<0,05). Por fim, a conservao da urina tem sido feita de diferentes maneiras. Enquanto alguns autores praticam a coleta freqente, a intervalos de 2 horas, outros a conservam com soluo de Thimol (antissptico) e vaselina ou leo mineral (evita evaporao), procedimentos que demonstraramse eficazes (Kienzle & Wilms-Eilers, 1994). Em nossos estudos colhemos a urina diretamente em recipientes plsticos colocados em isopor com gelo, em intervalos regulares, o que reduz a evaporao e o crescimento bacteriano.

Ingesto de carboidratos e respostas glicmica e insulnica

O estudo das respostas glicmicas e insulncas aos alimentos se remete, em ltima instncia, ao estudo do metabolismo de carboidratos. Caractersticas intrnsecas aos prprios carboidratos, como amidos e fibras, bem como dos alimentos, incluindo composio qumica e processamento,

so importantes. Seu estudo necessrio para ces e gatos pois relaciona-se com a manuteno da composio corporal e a incidncia de doenas degenerativas. Ces e gatos, animais carnvoros, no tm uma dieta natural rica em amido. Alimentos industrializados secos, entretanto, apresentam de 40 a 55% de carboidratos na matria seca (Kronfeld, 1975). No entanto, quando adequadamente processados por extruso e moagem, ces e gatos apresentam boa capacidade de digerir o amido (de-Oliveira et al., 2006a). Dentre os fatores do alimento que influenciam a onda ps-prandial de glicose e insulina tem-se: natureza qumica dos amidos (Goddard et al., 1984; Behall et al., 1989); protena e gordura da dieta (Nguyen et al., 1994); fibra diettica (Nishimune et al., 1991) e o processamento do alimento (Holste et al., 1989). Em relao natureza qumica, o grau de cristalizao, a presena de substncias associadas, como protenas, e as propores de amilose e amilo-pectina dos grnulos de amido, afetam sua taxa e velocidade de digesto (Nguyen et al., 1994). Adicionalmente, a quantidade de amido ingerido , provavelmente, um aspecto tambm fundamental. Para humanos, Wolever & Bolognesi (1996) determinaram que a quantidade de amido ingerido corresponde de 46% a 64% da variao da glicemia, sendo por vezes inclusive mais importante que o tipo de amido. A quantidade ingerida tem sido imprecisamente descrita em experimentos com ces e gatos, tendo sido pouco explorada sua influncia sobre as respostas metablicas. A absoro de monossacardeos resultantes da digesto do amido da dieta constitui uma fonte de glicose sangnea importante, embora varivel. As taxas digestivas e absortivas podem apresentar uma variao alta, mesmo entre animais da mesma espcie e sob regimes dietticos semelhantes. Aps uma refeio rica em carboidratos, as concentraes sangneas de glicose podem ficar muito acima daquelas do estado de jejum, mas, num espao de tempo varivel entre espcies, voltam a uma concentrao pr-alimentao. Uma segunda fonte contnua de glicose sangunea, resulta de sua sntese endgena no fgado a partir de aminocidos gliconeognicos e glicerol (Beitz, 1996). Alguns estudos sugerem que a gliconeognese mantm-se permanentemente ativa em espcies carnvoras estritas como o gato (Case et al., 2000).

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

243

Dados experimentais sugerem que gatos apresentem resposta glicmica ps-prandial de 18 horas, o que a torna mais prolongada que a de ces e humanos, que apresentam respostas que se completam entre 4 e 6 horas (Bouchard & Sunvold, 2000; Appleton et al., 2004). As variaes das respostas ps-prandiais observadas para gatos indicam que diferenas entre dietas no so to evidentes. Para essa espcie, ainda no se sabe ao certo qual a participao do amido na determinao das respostas ps-prandiais glicmicas e insulnicas, parecendo este ter menos contribuio (Kienzle, 1994; Bouchard e Sunvold, 2000; Appleton et al., 2004; de-Oliveira, 2006b). Esse fato se deve, provavelmente, s diferenas metablicas dos felinos, dentre elas a utilizao prefe-rencial de aminocidos como fonte de energia e menor habilidade enzimtica para digerir e aprovei-tar a glicose diettica, o que torna sua absoro mais lenta e prolongada (Washizu et al., 1999; Kienzle, 1993, 1994; Morris, 2001). Isso tambm pode ser evidenciado pela observao do tempo de eliminao de glicose aps testes orais e intravenosos de tole-rncia, sendo este mais prolongado em gatos quando comparados a humanos e ces (Kienzle, 1994; Bouchard e Sunvold, 2000; Appleton et al., 2004). Alteraes do controle glicmico Sabe-se hoje que o controle glicmico relaciona-se com a expectativa de vida e a incidncia de doenas degenerativas. Larson et al. (2003) realizaram um estudo de expectativa de vida em dois grupos de ces. Notaram que os ces que tinham alimentao restrita possuam menores concentraes de glicose e insulina basal e melhores resultados no teste de tolerncia glicose. Esses achados foram correlacionados positivamente com maior expectativa e qualidade de vida dos ces e com menor incidncia de doenas, como a osteoartrite. Estudos com seres humanos demonstram que a resposta exagerada de insulina plasmtica aps o consumo de glicose pode estar associada com obesidade, diabetes insulino-independente e doenas cardiovasculares. Alimentos que causam baixa resposta glicmica ps-prandial foram considerados benficos em diversos estudos com animais e humanos (Bouchard & Sunvold, 1998). No entanto, estas informaes so bastante

escassas para ces e gatos na literatura cientfica. O controle glicmico pode estar prejudicado em alguns estgios fisiolgicos e condies de sade, como diabetes melitus, obesidade, gestao, estresse, infeco, cncer e idade avanada (Nelson et al., 1990; Kahn et al., 2001). A utilizao de dietas que minimizem e estendam a onda glicmica ps-prandial proporcionaria, para animais nestas condies, um restabelecimento mais rpido e fcil da glicemia (Brand-Miller, 1994; Bouchard & Sunvold, 1999). Protocolos de avaliao das respostas metablicas ps-prandiais so fundamentais execuo destas pesquisas. Teoricamente, se prope que dietas que estimulem uma maior e mais duradoura secreo de insulina contribuam para a excessiva demanda de insulina induzida pela obesidade e que, potencialmente, poderiam contribuir para o desenvolvimento desta doena (Appleton et al., 2004). Alm disso, considera-se, em humanos, que dietas que induzem pequenas variaes na glicemia e insulinemia aumentam a percepo de saciedade, prevenindo dessa forma a obesidade e podendo ser utilizadas no manejo de pacientes obesos ou diabticos. Porm, pouco se sabe sobre o uso de carboidratos para animais obesos com problemas no controle glicmico (Appleton et al., 2004). Estimativas apontam que a obesidade a doena nutricional mais comum em ces e gatos, com um prevalncia mundial de 35 a 40% (Scarlett et al.,1994; Bouchard & Sunvold, 2000). A obesidade, por sua vez, esta fortemente relacionada intolerncia a glicose em gatos (Nelson et al.,1990, Gonalves, 2006) e ces (Larson et al., 2003). Em dietas para controle de peso recomendase, alm do emprego de fontes de amido de digesto lenta, o emprego de concentraes aumentadas de fibra. O aumento da fibra tem como argumentos: controle da glicemia e lipidemia, reduo na digestibilidade dos lipdeos e carboidratos, estimulao dos mecanismos de saciedade, reduo na densidade calrica do alimento, manuteno das funes normais do trato gastrintestinal, incluindo qualidade das fezes, tempo de trnsito e absoro da gua e eletrlitos no intestino grosso (Burton-Freeman, 2000). Nesta situao deve-se empregar fibras de baixa fermentabilidade, tanto as solveis como as insolveis, pois estas podem ser empregadas em

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

244

Carciofi, A.C.

maior quantidade sem ocasionar efeitos digestivos adversos (Butterwick & Markwell, 1996). Outros fatores dietticos que interferem na secreo de insulina e resposta glicmica A interpretao das respostas glicmicas depende de uma avaliao integrada da dieta, incluindo os fatores intrnsecos ao amido, como velocidade de digesto e relao amilose: amilopectina, e os extrnsecos ao amido, como a quantidade ingerida, seu processamento e a composio da dieta (Wolever & Bolognesi, 1996; Heaton et al., 1988; Brand et al., 1985; Nguyen et al., 1998). Gulliford et al. (1989) demonstraram que as respostas de glicose sangunea a alimentos podem ser modificadas pelas ingestes de gordura e protena. Dietas ricas em gordura retardam o esvaziamento gstrico (Thomas, 1957), reduzindo o aumento da glicose plasmtica ps-prandial no homem (Nguyen et al., 1994). Collier et al. (1984) mensuraram o efeito da ingesto da gordura sobre a resposta de glicose a carboidratos de absoro rpida e lenta em indivduos normais. A ingesto de gordura reduziu a resposta de glicose sangunea para os dois tipos de carboidratos, embora tenha sido quantitativamente menor para o carboidrato de absoro mais lenta. Nguyen et al. (1994) demonstraram que os mesmos fatores que contribuem para respostas glicmicas e insulnicas ps-prandiais em seres humanos influenciam estas respostas nos ces. Contedos de protena e gordura foram determinantes na cintica das respostas glicmicas e insulnicas nesta espcie. Estes dados, no entanto, no esto disponveis para a espcie felina. Mtodos de estudo das resposta ps-prandiais de glicose e insulina No anexo 2 so descritos resumos dos protocolos para determinao das respostas psprandias de glicose e insulina empregados no Laboratrio de Pesquisas em Nutrio e Doenas Nutricionais de Ces e Gatos Prof. Dr. Flvio Prada do DCCV-FCAV/UNESP, campus de Jaboticabal. Protocolos mais complexos esto disponveis na literatura, podendo ser empregados de acordo com os objetivos experimentais.

Tcnica do clamp para determinao da resistncia insulina Mais recentemente, em Medicina Veterinria, tem-se empregado a tcnica de clamp eulgicmico para o estudo da resistncia insulina. A resistncia insulina (RI) uma anormalidade metablica caracterstica de indivduos com diabetes tipo 2, diabetes tipo 1 descontrolado, cetoacidose diabtica e obesidade. Em populaes de no-diabticos, a reduo da ao insulnica pode estar acompanhada de um grupo de alteraes metablicas/cardiovasculares que compreende: hipertenso arterial, hipertrigliceridemia, reduo do HDL, colesterol, intolerncia aos carboidratos, obesidade centrpeta, aumento de inibidor-1 do ativador do plasminognio, hiperuricemia e doena cardiovascular aterosclertica. Este conjunto de alteraes da RI conhecido como sndrome de resistncia insulina ou sndrome metablica. O desenvolvimento e aplicao da tcnica do clamp de glicose representam seguramente o maior avano no estudo in vivo da resistncia insulina. Esta tcnica permite ao investigador examinar a sensibilidade tecidual insulina, tanto em msculo como em fgado, bem como a resposta de clula beta glicose em situaes de constncia de glicemia e insulinemia. DeFronzo et al. (1979) desenvolveram a tcnica do clamp de glicose com suas duas principais variaes. A determinao da sensibilidade insulina pelo clamp baseada no conceito de que, em condies constantes nas concentraes de glicemia e hiperinsulinemia, a quantidade de glicose consumida pelos tecidos seria igual quantidade de glicose infundida durante um teste no qual a glicemia mantida dentro de limites constantes e normais. O teste pressupe a completa supresso da produo heptica de glicose (Geloneze & Tambascia, 2006). A tcnica consiste em inserir trs cateteres no animal. Em cada veia ceflica inserido um catter: um para a infuso contnua de insulina, outro para a infuso de glicose. Na veia jugular inserido um cateter para colheita de sangue venoso central. A glicemia basal determinada e ento inicia-se a infuso contnua de insulina (2mU/kg/ min), com o auxlio de uma bomba de infuso para que a velocidade possa ser controlada. Aps 4 minutos do incio, inicia-se a infuso contnua de

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

245

glicose a 20% para que a glicemia basal seja mantida (euglicemia). Para isso, amostras de sangue so colhidas a cada 5 minutos por 1 hora e ento a cada 10 minutos para a dosagem de glicemia. A quantidade de glicose injetada a medida da sensibilidade tecidual insulina. Para se prevenir hipocalemia, concomitantemente injeta-se fosfato dipotssico na soluo de glicose (3mmol/L). O procedimento dura 180 minutos e amostras de sangue para determinao de insulina so colhidos em tubos heparinizados, centrifugados e armazenados a -20C at a determinao (Baillanche et al., 2003).

Literatura citada
ANFAL PET [Associao Nacional dos Fabricantes de Alimentos para Animais de Estimao]. Guia Nutricional de Ces e Gatos. Informativo Tcnico. So Paulo, 2007, 72 p. APPLETON, D.; RAND, J.S.; PRIEST, J. et al. Carbohydrate source affects glucose concentrations, insulin secretion, and food intake in overweight cats. Nutr. Res., v.24, p.447-467, 2004. BAILLANCHE, E; NGUYEN, P; KREMPF, M. et al. Lipoproteins abnormalities in obese insulin-resistant dogs. Metabolism, v.52, n.5, p.559-564, 2003. BEHALL, K.M.; SCHOFIELD, D.J.; YUHANIAK, I. et al. Diets containing high amylose vs amylopectin starch: Effect on metabolic variables in human subjects. Am. J. Clin. Nutr., v.49, p.337-344, 1989. BEITZ, D.C. Metabolismo dos carboidratos. In: SWENSON, M.J.; REECE, W.O. (Ed). Dukes fisiologia dos animais domsticos. 11. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1996. p.398-411. BOUCHARD, G.F.; SUNVOLD, G.D. Improving canine glycemic response to a meal with dietary starch. In: THE NORTH AMERICAN VETERINARY CONFERENCE, 1999, Orlando. Proceedings... Orlando, 1999. p. 16-19. BOUCHARD, G.F.; SUNVOLD, G.D. Effect of dietary carbohydrate source on postprandial plasma glucose and insulin concentration in cats. In: IAMS NUTRITION SYMPOSIUM, 2, 1998, Wilmington. Proceedings... Wilmington, 2000. p. 91-101. BRAND MILLER, J.C. Importance of glycemic index in diabetes. American Journal of Clinical Nutrition, v.59S, p.747-752, 1994. BRAND, J.C. et al. Food processing and the glycemic index. American Journal of Clinical Nutrition, v.42, p.1192-1196, 1985. BUFFINGTON, C.A.T.; CHEW, D.J. Intermittent alkaline urinein a cat fed and acidifying diet. Journal of the American Veterinary Medical Association. p.103-104, 1996. BUTTERWICK, R.F.; MARKWELL, P.J. Changes in the body composition of cats during weight reduction by controlled dietary energy restriction. The Veterinary Record, V.138, Issue 15, 354-357. 1996. CAMARGO, C.P. Aspectos clinicos e epidemiolgicos de urolitases em ces e gatos assistidos pelo servio de nefrologia e urologia da UNESP de Jaboticabal. Dissertao (Mestrado) - Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal, 55p., 2004. CARCIOFI, A.C.; VASCONCELLOS, S.; BORGES, N.C. et al. Composio nutricional e avaliao de rtulo de raes

secas para ces comercializadas em Jaboticabal-SP. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinria e Zootecnia, v.58, n.3, p.421-426, 2006. CARCIOFI, A.C.; BAZZOLI, R.S.; ZANNI, A. et al. Influence of water content and the digestibility of pet foods on the water balance of cats. Brazilian Journal Veterinary Research Animal Science. v. 42, n.6, p. 429-434, 2005. CASE, L.P.; CAREY, D.P.; HIRAKAWA, D.A. Carbohydrates. In: CASE, L.P.; CAREY, D.P.; HIRAKAWA, D.A. Canine and feline nutrition: a resource for companion animal professionals. St. Louis: Mosby-Year Book, 2000. p. 17-94. COLLIER, G.; MCLEAN, A.; ODEA, K. Effect of the coingestion of fat on the metabolic responses to slowly and rapidly absorbed carbohydrates. Diabetologia, v.26, p.5054, 1984. DAVIES, M. Tratamiento de la urolitases canina y feline. In: BAINBRIDGE, J. & ELLIOTT, J. Manual de nefrologia y urologia en pequeos animals. Barcelona: Romanya/Valls, S.A., p.275-289, 1999. DEFRONZO, R.A.; TOBIN, J.D.; ANDRES, R. Glucose clamp technique: a method for quantifying insulin secretion and resistance. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., v. 237, p. E214-E223, 1979. DIBARTOLA, S.P.; Fluid therapy in small animal practice. Philadelphia: W.B. Saunders Company, 1992. 719p. GELONEZE, B.; TAMBASCIA, M.A. Avaliao laboratorial e diagnstico da resistncia insulnica. Arq. Bras. Endocrinol. Metab., v.50, n.2, p. 208-215, 2006. GEVAERT, D.M.; KLOOSTER, A.T.V.; DE WILDE, R.O. et al. Effect Of Macromineral Composition Of Diets On Blood Acid-Base Equilibrium And Urinary Acidity In Dogs. American Institute Of Nutrition. The Journal of Nutrition, v.121, p.S93-S94, 1991. GODDARD, M.S.; YOUNG, G.; MARCUS, R. The effect of amylose content on insulin and glucose response to ingested rice. Am. J. Clin. Nutr., v. 42, p.495-503, 1984. GONALVES, K.N.V. Efeito do tratamento da obesidade sobre a glicemia e insulinemia de gatos. Dissertao (Mestrado) - Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista, Jaboticabal. 85p, 2006. GULLIFORD, M.C.; BICKNELL, E.J.; SCARPELLO, J.H. Differential effect of protein and fat ingestion on blood glucose responses to high and low-glycemic index carbohydrates in noninsulin-dependent diabetic subjects. Am. J. Clin. Nutr., v.50, p.773-777, 1989. HAND, M.S.; THATCHER, C.D.; REMILLARD, R.L. et al. Small Animal Clinical Nutrition. 4.ed. Kansas: Mark Morris Institute, 2000. 1192p. HEATON, K.W.; MARCUS, S.N.; EMMETT, P.M. et al. Particle size of wheat, maize, and oat test meals: effects on plasma glucose and insulin responses and on the rate of starch digestion in vitro. American Journal of Clinical Nutrition, v.47, p.675-682, 1988. HOLSTE, L.C.; NELSON, R.W.; FELDMAN, E.C. et al. Effect of dry, soft moist, and canned dog foods on postprandial blood glucose and insulin concentrations in healthy dogs. Am. J. Vet. Res., v.50, p.984-989, 1989. HOUSTON, D.M.; MOORE, A.E.P.; FAVRIN, M.G. et al. Feline urethral plugs and bladder uroliths: A review of 5484 submissions 1998-2003. Can Vet J., v. 44, 2003. KAHN, S.E.; PRIGEON, R.L.; ROBERT, S.S. et al. Obesity, body fat distribution, insulin sensitivity and islet b-cell function as explanations for metabolic diversity. Journal of Nutrition., v. 131, p. 354S-360S, 2001. KANEKO, J.J.; HARVEY, J.W.; BRUSS, M.L. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. 5. ed. London: Academic Press, 1997. 932p. KIENZLE, E. Carbohydrate metabolism of the cat 1. Activity of amylase in the gastrointestinal tract of the cat. J. Anim. Physiol. Anim. Nutr., v. 69, p. 92-101, 1993.

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

246

Carciofi, A.C.
OLIVEIRA, L.D.; TAKAKURA, F.S.; VASCONCELLOS, R.S. et al. Digestibility of starch sources for dogs and cats. In: CONGRESS OF THE EUROPEAN SOCIETY OF VETERINARY AND COMPARATIVE NUTRITION, 10, 2006, Nantes. Congress of the European Society of Veterinary and Comparative Nutrition, 10, 2006. v. 2006. p. 101-101. OSBORNE, C.A.; BARTGES, J.W.; LULICH, J.P. et al. Prevalence of cystine and urate uroliths in bulldogs and urate uroliths in dalmatians. Journal of the American Veterinary Medical Association, v.204, n.12, p.1914-1918, 2000. OSBORNE, C.A.; KRUGER, J.M.; LULICH, J.P. et al. Afeces do trato urinrio inferior dos felinos.In: ETTINGER, S.J., FELDMAN, E.C. Tratado de Medicina Interna Veterinria Molstias do co e do gato. 4.ed. So Paulo: Manole, p. 1618-1705, 1997. RECHE Jr., A.; HAGIWARA, M.K.; MAMIZUKA, E. Estudo clnico da doena do trato urinrio inferior em gatos domsticos de So Paulo. Braz. J. vet. Res. Anim. Sci., v. 35, n.2, p.69-74, 1998. SCARLETT, J.M.; DONOQHUE, S.; SAIDLA, J. et al. Overweight cats: Prevalence and risk factors. Int. J. Obes., v.18, suppl. 1, p.22-28, 1994. THOMAS, J.E. Mechanics and regulation of gastric emptying. Physiol. Rev., v.37, p.453-474, 1957. WAGNER, E.; KEUSCH, C.; IBEN, C. Influence of the Feed Base Excess on Urine Parameters in Cats. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, v.90, p.19-24, 2006. WASHIZU, T.; TANAKA, A.; SAKO, T. et al. Comparison of the activities of enzymes related to glycolysis and gluconeogenesis in the liver of dogs and cats. Res. Vet. Sci., v.67, p.205-206, 1999. WOLEVER, T.M.S.; BOLOGNESI, C. Prediction of Glucose and Insulin Responses of Normal Subjects after Consuming Mixed Meals Varying in Energy, Protein, Fat, Carbohydrate and Glycemic Index. Journal of Nutrition, v.126, n.11, p.2807-2812. 1996. YAMKA, R.M.; FRIESEN, K.G.; SCHAKENRAAD, H. The Prediction of urine pH Using Dietary Cations and Anions in Cats Fed Dry and Wet Foods. Intern J Appl Res Vet Med, v.4, n.1, 2006. ZENTEK, J; MEYER, H; BEHNSEN, K. Einfluss der Futterzusammentzung auf den Harn-pH beim Hund [Influence of food composition on the urine pH in the dog]. Kleintierpraxis, v.40, n.1, p. 9-18, 1995. ZENTEK, J; SCHULZ, A. Urinary Composition of Cats is affected by the Source of Dietary Protein. American Institute Of Nutrition, v.134, p.2162s-2165s, 2004.

KIENZLE, E. Effect of carbohydrates on digestion in the cat. J. Nutr., v.124, p.2568S-2571S, 1994. KIENZLE, E.; SCHUKNECHT, A.; MEYER, H. Influence Of Food Composition On The Urine pH in Cats. American Institute Of Nutrition. The Journal of Nutrition, v.121, p. S87-S88, 1991. KIENZLE, E; WILMS-EILERS, S. Struvite Diet in Cats: Effect of Ammonium Chloride and Carbonates on Acid Base Balance of Cats. American Institute of Nutrition. The Journal of Nutrition, v.124, p.2652S-2659S, 1994. KRONFELD, D.S. Nature and use of commercial dog foods. J. Am. Vet. Med. Assoc., v.166, p.487-493. 1975. KRUGER, J.M.; ALLEN, T.A. Feline lower urinary tract disease. In: HAND, M.S.; TATCHER, C.D.; REMILLARD, R.L.; ROUDEBUSH, P. Small animal clinical nutrition. Missouri: Mark Morris Institute, ed. 4, p.689-724, 2000. LARSON, B.T.; LAWLER, D.F.; SPITZNAGEL, E.L. et al. Improved Glucose tolerance with lifetime diet restriction favorably affects disease and survival in dogs. Journal of Nutrition, v.133, pp.2887-2892, 2003. les parmetres fcaux, la digestibilit des nutriments et les mtabolites sanguins. Tesis de doctorado. Univ. de Lige, Blgica. MARKWELL, P.J.; BUFFINGTON, C.T.; SMITH, B.H.E. The Effect of Diet on Lower Urinary Tract Diseases in Cats. The Journal of Nutrition, v.128, n.12 , pp.2753S-2757S, 1998. MARKWELL, P.J.; STEVENSON, A.E.; SMITH, B.H.E. A System to Monitor Urinary Tract Health in Dogs. American Society for Nutritional Sciences. The Journal of Nutrition, v.128, p.2761S-2762S, 1998. MORRIS, J.G. Unique nutrient requirements of cats appear to be diet-induced evolutionary adaptations. Recent Adv. Anim. Nutr. Aust., v.13, p.187-194, 2001. NELSON, R.W.; HIMSEL, C.A.; FELDMAN, E.C. et al. Glucose tolerance and insulin response in normal weight and obese cats. Am. J. Vet. Res., v.51, p.1357-1362, 1990. NGUYEN, P.; DUMON, H.; BUTTIN, P. et al. Composition of meal influences changes in postprandial incremental glucose and insulin in healthy dogs. J. Nutr., p.2707S-2711S, 1994. NISHIMUNE, T.; YAKUSHIJI, T.; SUMIMOTO, T. et al. Glycemic response and fiber content of some foods. Am. J. Clin. Nutr., v.54, p.414-419, 1991. OLIVEIRA, L.D.; TAKAKURA, F.S.; BAZOLLI, R.S. et al. Dogs and cats postprandial glycemic and insulinemic responses to different starch souces. In: CONGRESS OF THE EUROPEAN SOCIETY OF VETERINARY AND COMPARATIVE NUTRITION, 10, 2006, Nantes. Congress of the European Society of Veterinary and Comparative Nutrition, 10, 2006. v.2006. p.107-107.

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

247

Anexo 1: Protocolo resumido para a determinao do efeito da dieta no pH urinrio de ces e gatos

Preparo dos animais para o teste

Empregar um mnimo de 6 animais adultos para o teste. Antes do teste os animais devero ser submetidos ao exame clnico e amostras de sangue e urina devero ser colhidas para a realizao do hemograma e urinlise. Todos os animais empregados no teste devero estar devidamente desverminados e vacinados. imprescindvel que a avaliao fsico-qumica e do sedimento urinrio de cada animal (urinlise) constate, antes do incio do teste, perfeita sade do trato urinrio. Dosagens sricas de uria e creatinina so recomendadas. A quantidade de alimento fornecida a cada animal pode ser baseada na quantidade necessria para manter o peso corporal ou estimada segundo as necessidades energticas de manuteno (NRC, 2006). O alimento dever permanecer disponvel durante as 24 horas do dia. Durante o ensaio importante que a quantidade fornecida de alimento aos animais permanea constante. gua dever estar disponvel vontade aos animais durante toda fase experimental. Os animais devero permanecer alojados em gaiolas metablicas individuais em inox ou outro ambiente/material que no interfira com o pH da urina, e que permita a coleta total e quantitativa segura de urina sem contaminao com fezes ou alimento.

Protocolo experimental
O estudo divide-se em duas fases, adaptao e colheita. O perodo de adaptao tem durao

mnima de sete dias. O perodo de colheita tem durao mnima de 72 horas. Nesta fase, aps sua higienizao normal, os ambientes devero ser lavados ao menos uma vez ao dia e a superfcie/ utenslio que ter contato direto com a urina lavado com gua destilada e seco com papel toalha. A urina excretada pelos animais dever ser colhida em recipiente apropriado, identificado, devidamente limpo, enxaguado com gua destilada e seco. Estes recipientes devero permanecer imersos em gelo sob o funil coletor de urina. Outros mtodos de conservao da urina podem ser empregados, desde que no haja interferncia no pH. A urina deve ser recolhida sempre que eliminada pelos gatos, ou no mnimo quatro vezes ao dia. Este procedimento minimiza a deteriorao da amostra e alcalinizaes do pH da mesma resultantes do crescimento de microorganismos. Imediatamente aps seu recolhimento a urina deve ser resfriada entre 4 e 8C em geladeira. A produo urinria individual de cada intervalo de 24 horas dever ser homogeneizada e ter seu volume quantificado e pH e densidade determinados. No deve-se utilizar fitas reagentes para estimativa do pH, deve-se empregar pHmetros digitais de boa procedncia. Este procedimento repetido nos dias seguintes de experimento, tendose ao final no mnimo trs valores de volume, pH e densidade de cada um dos seis animais do ensaio. O pH final das 72h (mnimo) de colheita de urina ser obtido pela mdia aritmtica desvio padro do valor obtido para cada animal e, conseqentemente, para o grupo

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

248

Carciofi, A.C.

Anexo 2: Protocolo resumido para a determinao das respostas ps-prandiais de glicose e insulina
Ces
A determinao das respostas ps-prandiais de glicose e insulina de ces podem ser realizadas segundo Holste et al. (1989). Recomenda-se adicionar, no entanto, pelo menos mais 2 observaes, s 5 e 6 horas aps a ingesto do alimento de forma a se abranger efeitos prandiais mais longos. So utilizados, no mnimo, 6 ces por dieta a ser testada, por causa das grandes variaes individuais. De preferncia utilizam-se ces da mesma raa e idade, sendo fundamental selecionar-se animais com escore corporal entre 4 e 5 (em escala de 1 a 9; Laflamme, 1997a), portanto no obesos. Um perodo de 3 dias de adaptao dieta parece ser suficiente (Nguyen et al., 1994), sendo os animais condicionados a se alimentar em 15 minutos, uma nica vez ao dia. O clculo da quantidade de alimento a ser administrado pode ser feito de acordo com o NRC (2006). Para incio do teste, os ces so submetidos a jejum de 24 horas. Na manh seguinte os ces so cateterizados na veia ceflica cranial, com cateter perifrico (Angiocat ou Jelco, 22GA), posteriormente fixado com bandagem, sendo os animais mantidos com colar Elizabetano para no retirarem os cateteres. Aps 1 hora de descanso (no mnimo), so colhidas duas amostras de sangue, cuja mdia ser considerada glicemia e insulinemia basais. Aps isso, o animal ser alimentado com a quantidade de alimento estipulada. O alimento ficar disponvel durante 15 minutos. Aquele que no consumir a quantidade total diria de alimento neste perodo ser excludo do teste naquele dia, sendo testado no dia seguinte. Amostras de sangue so colhidas aos 5, 10, 20, 30, 45, 60, 120, 180, 240, 300, 360 e 420 minutos aps o consumo total do alimento, sendo submetidas s anlises das concentraes plasmticas de glicose e insulina. Como as concentraes de glicose e insulina sofrem variaes circadianas, importante que os horrios de coleta de sangue sejam os mesmos para todos os ces.

Gatos
Para felinos pode-se seguir os procedimentos propostos por Appleton et al. (2004). So colhidas duas amostras de sangue em jejum (tempo 0) e aps 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 15 e 18 horas aps a ingesto da dieta. So utilizados, no mnimo, 8 gatos por dieta, por causa das grandes variaes individuais. De preferncia utilizar gatos da mesma raa, idade e com escore corporal entre 4 e 6 (em escala de 1 a 9; Laflamme, 1997b), compatvel a um animal normal, no obeso. Como as concentraes de glicose e insulina sofrem variaes circadianas, importante que os horrios de coleta de sangue sejam os mesmos para todos os gatos. O experimento inicia-se por um perodo mnimo de 7 dias de adaptao dieta, quando os gatos so condicionados a se alimentar em 15 minutos, uma nica vez ao dia. O clculo da quantidade de alimentos pode ser conduzido de acordo com NRC (2006). No 5 dia do perodo de adaptao, os animais so cateterizados na veia jugular, com cateter central (Intracath, 19 GA (1,1 mm) 8 IN (20,5 cm), Becton Dickinson Vascular Acess, Utah, USA.), mediante anestesia dissociativa. Nos dois dias seguintes os animais so alimentados normalmente, uma vez por dia, sem nenhuma colheita. No terceiro dia aps a cateterizao (oitavo dia experimental), procedese a determinao das respostas ps-prandiais. So colhidas duas amostras de sangue, cuja mdia ser considerada glicemia e insulinemia basais. Aps isso, o animal ser alimentado com a quantidade de alimento estipulada. O alimento ficar disponvel durante 15 minutos. Aquele que no consumir a quantidade total diria de alimento neste perodo ser excludo do teste naquele dia, sendo testado no dia seguinte.

Manejo das amostras de sangue

Dos ces se retira cerca de 3 mL por colheita. Dos gatos, so retirados cerca de 1,5 mL de sangue por colheita. Essa quantidade imediatamente dividida em 2 tubos de vidro, um com anticoagulante (Fluoreto), para separao do plasma para mensurao da glicose, e o outro sem anti-

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia

Mtodos para estudo das respostas metablicas de ces e gatos a diferentes alimentos

249

coagulante, para separao do soro para determinao da insulina. Os tubos so imediatamente centrifugados, sendo o plasma ou soro pipetados e acondicionados em eppendorfs. Para a anlise de glicose, os eppendorfs podem ser mantidos em geladeira (2 C) por 1 dia ou congelados (-15 C) por 1 semana. Para a anlise de insulina, os eppendorfs podem ser congelados (-70 C) por at 2 meses. A determinao da glicose , normalmente, realizada pelo sistema enzimtico GOD ANA para analisadores automticos. A Insulina normalmente dosada por radioimunoensaio, utilizando kits Coat a Count com padres humanos. importe verificar junto ao fornecedor do kit se os anticorpos foram testados e validados para felinos, sob pena de se inutilizar os resultados do ensaio.

2007 Sociedade Brasileira de Zootecnia