Cromatografia em Contracorrente

Marcelo A. Silva Wagner Vilegas Lourdes C. dos Santos

Cromatografia em ContraCorrente

ISBN 978-85-60322-03-9

Marcelo Aparecido da Silva Wagner Vilegas Lourdes Campaner dos Santos

Cromatografia em Contracorrente

1 Edio

Instituto de Qumica de Araraquara

Araraquara

2008

Sobre os Autores

Marcelo Aparecido da Silva

Farmacutico com habilitao em Frmacos e Medicamentos, formado pela Escola de Farmcia e Odontologia de Alfenas MG. Mestre em Cincias Farmacuticas: rea de concentrao Pesquisa e Desenvolvimento de Frmacos e Medicamentos pela Faculdade de Cincias Farmacuticas de Araraquara-Unesp. Doutor em Qumica, rea de concentrao Qumica Orgnica de Produtos Naturais pelo Instituto de Qumica de Araraquara IQ-Unesp.

Wagner Vilegas
Qumico formado pela Universidade de So Paulo. Mestre em Qumica Orgnica: rea de concentrao Qumica Orgnica de Produtos Naturais, pelo Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo. Doutor em Qumica Orgnica: rea de concentrao Qumica Orgnica de Produtos Naturais pelo Instituto de Qumica da Universidade de So Paulo. Ps-Doutorado na Universit Degli Studi Di Salerno, UDSS, Itlia. Livre docncia obtida na Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, IQ-UNESP. Professor de Qumica Orgnica do Departamento de Qumica Orgnica do Instituo de Qumica de Araraquara IQ-Unesp.

Lourdes Campaner dos Santos

Qumica formada pela Faculdade Auxilium de Filosofia Cincias e Letras-FAL. Graduada em Pedagogia pela Faculdade Auxilium de Filosofia Cincias e Letras-FAL. Mestre em Qumica: rea de concentrao Qumica Orgnica de Produtos Naturais, pelo Instituto de Qumica de Araraquara IQ-Unesp. Doutora em Qumica: rea de concentrao Qumica Orgnica de Produtos Naturais, pelo Instituto de Qumica de Araraquara IQ-Unesp. Professora de Qumica Orgnica do Departamento de Qumica Orgnica do Instituo de Qumica de Araraquara IQ-Unesp.

Apresentao

Nos ltimos anos, os mtodos cromatogrficos tornaram possveis as separaes de misturas complexas, tanto em escala preparativa como em escala analtica. A cromatografia em contracorrente (CCC) se baseia na partio lquido-lquido, na qual a fase lquida estacionria retida dentro da coluna do aparelho usado no processo cromatogrfico. A CCC, portanto no usa suportes slidos como fase estacionria, sendo assim, evita adsores irreversveis de compostos polares. Esta a principal caracterstica da CCC. Na maioria das cromatografias em contracorrente, uma das fases do sistema de solvente bifsico permanece fixa na coluna do aparelho. J a outra fase passada atravs da fase fixa. Atualmente, a CCC vem sendo uma tcnica preparativa amplamente aplicada em laboratrios de universidades e indstrias. No campo dos produtos naturais, pode ser usada para fracionar extratos brutos, assim como fraes semipuras, em quantidades que variam de miligramas a gramas. A CCC muito utilizada nas separaes de substncias com polaridade elevada. Alm destas aplicaes, a tcnica bastante promissora na obteno de padres qumicos de alta pureza, com rapidez, eficincia e economia de solventes. Diante deste cenrio, percebemos a necessidade de um livro, em portugus, que trate da tcnica de cromatografia em contracorrente, no apenas voltado ao ensino terico da CCC, mas que pudesse conter as necessidades do dia a dia de um laboratrio de separao de produtos naturais. com essa perspectiva que vemos a importncia deste livro por abordar aspectos prticos e tericos da cromatografia em contracorrente. Uma obra que ajudar muito o ensino da CCC em aulas para a graduao e ps-graduao das universidades brasileiras.

Os Autores

ndice
Histria da cromatografia lquido-lquido................................................................................ Classificao dos instrumentos de cromatografia em contracorrente...................................... Sistema de equilbrio hidrosttico............................................................................................ Sistema de equilbrio hidrodinmico....................................................................................... Cromatografia em contracorrente de alta velocidade HSCCC............................................. Escolha do sistema de solvente................................................................................................ Sistemas de solventes usados em CCC.................................................................................... Figuras e esquemas dos equipamentos de CCC....................................................................... 01 05 05 05 08 10 12 15

Bibliografia................................................................................................................................ 29

Histria da cromatografia lquido-lquido

Em meados da dcada de 40, dois qumicos ingleses, Archer John Porter Martin e Richard Laurence Millington Synge, elaboraram um aparelho capaz de manter em contato uma mistura de lquidos imiscveis (Maciuk, 2005). O contato entre os lquidos acontecia de forma que as duas fases apresentavam, durante o processo de anlise, fluxo contrrio entre si. Este equipamento foi desenvolvido com o objetivo de separar aminocidos de misturas complexas. No entanto as separaes no foram muito promissoras, pois o aparelho era muito complexo, as fases saiam muito facilmente do sistema de separao e os processos de separaes exigiam um longo tempo. Sendo assim, este equipamento foi rapidamente abandonado devido aos resultados no muito promissores apresentados. Lyman Creighton Craig (1906-1974), durante seu trabalho, o qual buscava substncia antimalrica, resgatou a idia j abordada por Martin & Synge, de colocar dois lquidos no miscveis em contato entre si, mas agora de uma forma mais eficiente. O aparelho de Craig, (Fig. 2.1A), assim denominado, consiste de um aparato de vidro organizado de tal nodo que ele se encontra interconectado entre si ao longo de um eixo. Esta ampola de vidro, quando agitada, proporciona um maior contato entre os dois lquidos imiscveis. Aps a separao das fases, basta uma rotao para que haja a transferncia de uma das fases para a ampola seguinte ou para fora do aparelho (Fig. 2.1B) (JBC, 2005; From et al, 1974). A

Figura 2.1. (A) Foto do aparelho de Craig tipo tubo. (B) Esquema do funcionamento do aparelho de Craig.

Os pesquisadores Martin & Synge, usaram o aparelho de Craig para separar diferentes tipos de N-acetil-aminocidos, preparados por acetilao. Durante os experimentos, a transferncia manual dos lquidos das ampolas, gerava dificuldades, dentre elas a perda de grande quantidade de solvente alm do longo tempo gasto nas separaes. Sendo assim, os pesquisadores comearam a pensar na possibilidade de fixar uma das fases em um suporte slido, tentando com isso evitar os

transtornos ocasionados durante as anlises. No decorrer do desenvolvimento, foram testados vrios suportes slidos como fibra, slica, celulose entre outros. O suporte slido, neste caso, destinado a reter a fase estacionria (constituda pela fase aquosa de um sistema imiscvel), enquanto que a fase orgnica entra em contato com o liquido que se encontra retido no suporte slido. Com este mecanismo, h um aumento na superfcie de contato entre as duas fases lquidas, e soluciona os problemas ocasionados pelo uso do aparelho de Craig (Maciuk, 2005). Com os experimentos descritos acima, o termo cromatografia de partio comeou a ser empregado (Tab. 2.1). Por esta nova abordagem do mecanismo de separao cromatogrfica, os pesquisadores Martin & Synge foram agraciados com o Prmio Nobel de Qumica em 1952 (JBC, 2005; Maciuk, 2005). Concomitantemente aos experimentos de Martin & Synge, Lyman C. Craig desenvolveu um aparelho no qual apresentava 20 ampolas acopladas em srie, chamado de extrator quantitativo. O mecanismo de separao deste equipamento seria como se fossem colocados 20 funis de separao acoplados em srie simultaneamente (Fig. 2.2). Dezenove funis possuam somente fase inferior enquanto que um apresentava as duas fases. O processo de agitao decantao transferncia se repetia para todos os funis. Mas somente a fase superior era transferida para o funil subseqente. Este processo descontinuo, pois as fases passam pelas etapas de agitao decantao transferncia durante todo o tempo necessrio para o experimento. O processo descontinuo causa a perda de fases durante as transferncias e proporciona um longo tempo de separao. Estes so os dois problemas ocasionados neste tipo de aparelho. A maior aplicao que Craig fez deste equipamento, foi em conjunto com Vincent du Vigneaud em 1947, onde eles extraram e caracterizaram a Penicilina, alm de estimaram o grau de pureza da Benzilpenicilina. Estas anlises foram feitas em um sistema de solvente composto por ter e por uma soluo aquosa tamponada (JBC, 2005).

Figura 2.2. Foto do aparelho de Craig tipo tubo com 20 ampolas acopladas em srie.

Em 1950, Craig acoplou 200 ampolas em srie no aparelho de extrao. No ano de 1958, fez o acoplamento de 1000 ampolas em srie. A partir de ento, o aparelho de Craig foi utilizado para extrair e examinar vrias substncias como, gramicidina, bacitracina, insulina, cidos biliares, albumina srica, hormnios da tireide, RNA, ribonucleases, oxitocinas, vasopressina, adenocorticotropicos e hormnios lactognicos (JBC, 2005). O aparelho de Craig foi usado por Robert Halley na Universidade de Cornell para o fracionamento do extrato bruto de RNA, obtendo aps o fracionamento, tRNA puro. O tempo de fracionamento do RNA foi reduzido, implicando, assim, em uma reduo do tempo gasto para o subseqente sequenciamento do tRNA (JBC, 2005). Desde ento a cromatografia em contracorrente vem sofrendo avanos siguinificativos. Estes avanos sempre buscaram a melhora da resoluo cromatogrfica e a diminuio do tempo das separaes. As tabelas 2.2 e 2.4 descrevem a evoluo dos aparatos usados nas extraes lquidolquido, passando pelas cromatografias em contracorrente e chegando nas atuais tcnicas de separaes cromatogrficas (Marston & Hostettman, 1991; Conway, 1989; Mandava & Ito, 1988).

Tabela 2.1. Cronograma do desenvolvimento das tcnicas cromatogrficas. Sistema de separao Autores que desenvolveram Ano do desenvolvimento Cromatografia de partio Martin & Synge 1941 Cromatografia de papel Consden & Gordon & Martin 1944 Distribuio em contracorrente Craig 1944 Cromatografia por troca inica Mayer & Thompkins 1947 Eletroforese Haugaard & Kroner 1948 Cromatografia em camada delgada Ismailov & Shraiber 1951 Cromatografia de excluso molecular Barrer 1945 Cromatografia em fase gasosa Claesson 1946 Cromatografia lquida de alta eficincia James & Martin 1952

Tabela 2.2. Desenvolvimento das tcnicas de separaes cromatogrficas lquido-lquido. Equipamento Autores que Ano do Nmero desenvolveram desenvolvimento da figura U Tube cascade unit Jantzen 1932 01 Partition chromatography Martin & Synge 1941 --Cascade percolator train Kies & Davis 1951 2A e 2B Compartmental perculator column Keppes 1954 03 High efficiency continuous mix settle Hietala 1960 04 Coil planet centrifuge Ito e colab. 1966 05 Countercurrent distribution centrifuge Tavel & Bollinger 1968 06 Helix CCC Ito & Bowman 1970 07 Dopler CCC Tanimera e colab. 1970 08 e 09A a 09C Locular CCC rotation and gyration Ito & Bowman 1970 10A a 10C Flow-through coil planet centrifuge-pelley Ito & Bowman 1971 11A e 11B drive Eluition centrifuge-planetary pulley drive Ito e colab. 1972 12A a 12C Angle rotor CCC Ito & Bowman 1975 13 Preparative CCC-slow rotating helix Ito & Bowman 1977 14 Horizontal flow-through cail planet Ito & Bowman 1978 15A a 15C centrifuge Nonsynchronous coil planet centrifuge Ito e colab. 1979 16A e 16B Toroidal coil planet centrifuge Ito 1980 17A e 17B Rotating coil assembly Ito & Bhatnagar 1981 18 Centrifugal partition chromatography Ito e colab. 1981 19A a 19C cartridge High-speed CCC Ito 1982 20A e 20B

Classificao dos instrumentos de cromatografia em contracorrente (Fig. 2.3) I) Em sistema de equilbrio hidrosttico (HSES). II) Em sistema de equilbrio hidrodinmico (HDES).

Sistema de equilbrio hidrosttico

No sistema de coluna esttica (com campo gravitacional constante), a coluna preenchida de fase estacionria, obtida de um sistema de solvente imiscvel (Fig. 2.4). A fase mvel, obtida do mesmo sistema de solvente imiscvel, bombeada para a coluna com uma vazo adequada. Com o bombeamento da fase mvel para a coluna, h uma sada de fase estacionria. Esta sada ocorre at um determinado momento, isto acontece quando aproximadamente 50 % das duas fases se encontram dentro da coluna (Hostettmann et al, 2001; Foucault, 1994; Conway, 1989; Mandava & Ito, 1988). Neste momento o aparelho esta apto para receber a amostra. Desvantagens deste tipo de tcnica: - Processos lentos de separaes. - Pouca reteno da fase estacionria dentro da coluna. - Baixa resoluo nas separaes. - Alto consumo de solventes.

Sistema de equilbrio hidrodinmico

Para solucionar as desvantagens causadas pelo sistema hidrosttico, foram desenvolvidas tcnicas de sistema de equilbrio hidrodinmico (Fig.2.4). Neste sistema, atravs de um campo gravitacional varivel, consegue-se reter uma maior quantidade ( 80 %, depende do sistema de solvente) de fase estacionria dentro da coluna cromatogrfica. Com o aumento da reteno de fase estacionria, h uma melhora siguinificativa na resoluo das separaes. Alm do tempo de anlise ser reduzido, quando o equipamento utiliza este sistema de equilbrio. Neste tipo de sistema h uma fora centrfuga atuando na coluna do aparelho. E justamente esta fora centrfuga que evita a perda excessiva da fase estacionria (Ito, 2005; Hostettmann et al, 2001; Conway, 1989; Mandava & Ito, 1988). Alm deste processo proporciona uma contnua partio do soluto entre as duas fases imiscveis.

CCC
Campo gravitacional constante Campo gravitacional varivel

Gravidade

Fora centrfuga

DCCC

RLCCC

Movimento planetrio

CPC

HSCCC
Figura 2.3. Classificao dos diferentes instrumentos de CCC segundo Hostettmann et al, 2001. DCCC: Cromatografia em contracorrente de gotejamento. RLCCC: Cromatografia em contracorrente de rotao locular HSCCC: Cromatografia em contracorrente de alta velocidade. CPC: Cromatografia de partio centrifuga.

Coluna gira

Figura 2.4. Sistemas de cromatografia em contracorrente baseado em Hostettmann et al, 2003.

O sistema de equilbrio hidrodinmico, onde a fora centrifuga pode ser variada (Fig. 2.4), recebe o nome de cromatografia em contracorrente de partio centrfuga CPC. As colunas utilizadas pelos equipamentos deste sistema podem ser de duas maneiras: Em espiral (Coil Planet Centrifugal) ou em cartucho (Centrifugal Partition Chromatography) (Fig. 2.5). Na coluna em espiral, dos equipamentos mais modernos, o equilbrio hidrodinmico dos solventes ocorre devido ao movimento planetrio. J nas colunas em cartucho o equilbrio se da pelo movimento axial central (Fig. 2.5), (Conway, 1989).

CCC
Campo gravitacional varivel Fora centrfuga Coluna Cartucho "Centrifugal Partition Chromatography" Espiral "Coil Planet Centrifugal"

Figura 2.5. Classificao do aparelho segundo o tipo de coluna. (A) Aparelho FCPC Kromaton Technologis, velocidade de rotao 200-2000 rpm, capacidade da coluna 200 mL, (B) Detalhe da coluna do Kromaton, (C) Esquema do sistema de partio da coluna do equipamento, (D) Aparelho de HSCCC P.C.Inc, capacidade da coluna 325 mL, velocidade de rotao 0-1200 rpm, (E) Detalhe da coluna e do contra peso do equipamento de HSCCC, onde ocorre o movimento planetrio, (F) Esquema do sistema de partio da coluna do equipamento de HSCCC. >>

Entre os equipamentos que usam o sistema hidrodinmico, como principio de separao, o mais utilizado nas separaes de produtos oriundos de plantas, fungos e organismos marinho, a cromatografia em contracorrente de alta velocidade (High Speed Countercurrent Chromatography, HSCCC).

Cromatografia em contracorrente de alta velocidade - HSCCC

Cromatografia em contracorrente de alta velocidade (HSCCC), uma tcnica baseada na partio de um soluto entre dois lquidos imiscveis. A proporo do soluto que passa para cada uma das fases determinada pela constante de distribuio (KD) de cada uma das substncias presentes na amostra. A constante de distribuio uma constante fsica, caracterstica de cada substncia, e dada pela formula:

(KD)S =

[S] da substncia [S] da substncia

de interesse na fase orgnica de interesse na fase aquosa

Cada substncia dissolvida reparte-se em equilbrio entre as duas fases lquidas no miscveis de uma forma constante e reprodutvel. Nas condies ideais, esta constante depende, alm do sistema de solvente, da temperatura. Da a importncia da constante de distribuio na cromatografia lquido/lquido, pois a constante de distribuio pode ser considerada a principal ferramenta usada nas otimizaes dos sistemas de solventes utilizados nas separaes cromatogrficas (Hostettmann. et al, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Thomas & Kleiman, 1991). O HSCCC um mtodo de separao que emprega apenas lquidos durante as separaes, com ausncia de suporte slido e, por isso, tem algumas vantagens em comparao com outras tcnicas cromatogrficas: - No ocorre adsoro irreversvel da amostra. - H recuperao total da amostra introduzida na coluna do aparelho. - Reduo do risco de degradao das substncias. - Rapidez e eficincia do mtodo. - Apresenta uma versatilidade na escolha dos sistemas de solventes usados nas separaes. - Economia de solventes e colunas. - Boa resoluo em separaes semi-preparativa. - Aumento da rea de interfase entre as duas fases.

No equipamento de HSCCC, a bobina (coluna) construda com tubos de PTFE (polytetrafluoroethylene) enrolados em torno de um suporte central para formar camadas mltiplas (Fig. 2.6) (Ito, 2005)

Figura 2.6. Esquema de distribuio dos tubos PTFE em torno de um eixo central (Shinomiya et al, 2002).

A coluna gira em torno do eixo central da centrfuga e, simultaneamente, gira ao redor do seu prprio eixo (Fig. 2.7). O movimento da coluna provoca uma agitao vigorosa das fases do sistema de solvente, provocando um processo de mistura repetitiva, alm de proporcionar zonas de mistura e separao das fases (Foucault & Chevolot, 1998; Mandava & Ito, 1988). Este intercmbio rpido explica porque so possveis separaes eficazes com pequeno volume de solvente. Um dos parmetros experimentais mais importante () definido como a proporo entre o raio da coluna (r) e o raio do giro da coluna no movimento planetrio (R), (Fig.2.7).

Figura 2.7. Esquema do movimento da coluna e a distribuio dos solventes em HSCCC (Hostettmann et al, 2003).

Atualmente, o HSCCC tem sido uma tcnica preparativa amplamente aplicada em laboratrios de universidades e indstrias. No campo dos produtos naturais, o HSCCC pode ser usado para fracionar extratos brutos, assim como fraes semipuras, em quantidades que variam de miligramas a gramas (Hostettmann. et al, 2001; Marston et al, 1990). O HSCCC muito utilizado nas separaes de substncias com polaridade elevada. Isto possvel, pois a tcnica evita a adsoro irreversvel da amostra na fase estacionria, como acontece freqentemente na slica, causando com isso uma perda de massa ou at mesmo a perda total da amostra. Alm destas aplicaes, a tcnica bastante promissora na obteno de padres qumicos de alta pureza, com rapidez, eficincia e economia de solventes (Leito, 2005; Zhang et al, 2003).

Escolha do sistema de solvente

A correta escolha dos sistemas de solventes crucial para o xito das separaes no HSCCC. As combinaes de solventes mais eficazes so aquelas que proporcionam uma constante de distribuio prxima de 1 (Foucault & Chevolot, 1998; Conway, 1989). A escolha tem que obedecer alguns pr-requisitos para que a separao seja eficiente, estes so: - As misturas tm que formar sistemas imiscveis. - O sistema de solvente tem que solubilizar a amostra. - As duas fases tm que se separar rapidamente aps agitao (< 30 seg.). - Se possvel, formar volume igual de fase superior e inferior. - Proporcionar uma constante de distribuio prxima de 1. - No formar emulso. - Formar mistura pouco viscosa. - Apresentar pequena diferena de densidade entre a fase aquosa e a fase orgnica. As misturas de solventes podem ser binria (pouco usada, por causa da grande diferena de polaridade dos solventes), terciria, quaternria entre outras. A adio de um terceiro ou de um quarto solvente, miscvel com os outros componentes da mistura, diminui a diferena de polaridade entre as duas fases (Hostettmann et al, 1984). Assim consegue-se aumentar a seletividade do sistema, permitindo as separaes de substncias com Rfs prximos. A adio de um solvente auxiliar provoca, ainda, uma diminuio da tenso interfacial e da viscosidade do sistema (Ito, 2005; Mandava & Ito, 1988). A figura 2.8 apresenta alguns solventes auxiliares usados nas otimizaes de sistemas de solventes para HSCCC. A constante de distribuio pode ser facilmente determinada analisando a fase superior e inferior de uma mistura de solventes, aps a dissoluo da amostra. Para isso devem ser seguidas as etapas resumidas na figura 2.9.

Figura 2.8. Solventes auxiliares usados nas otimizaes de sistemas de solventes aplicados em HSCCC.

Figura 2.9. Etapas para a determinao da constante de distribuio de uma amostra no sistema de solvente escolhido (Conway, 1989).

Aproximadamente 1 mg da amostra dissolvido no sistema de solvente escolhido. Aps agitao e separao das fases (decantao), as duas fases so analisadas separadamente, em propores iguais. Vrias tcnicas podem ser utilizadas para esta anlise, sendo a mais comum e menos onerosa, a cromatografia em camada delgada (CCD). A fase inferior e superior so aplicadas em propores iguais na placa. Em seguida feito a eluio da placa em um sistema de solvente que proporcione uma boa resoluo. Ocorrido a eluio, a placa analisada em luz ultravioleta e revelada com um reagente qumico adequado. A constante de distribuio obtida comparando-se as propores das substncias em cada fase. Utilizando a formula (KD)S = [S] na fase orgnica / [S] na fase aquosa. A situao ideal obter um (KD)S igual ou prximo de 1 para cada substncia (Fig. 09), (Ito, 2005; Hostettmann. et al, 2003; Foucault & Chevolot, 1998). A tabela 03 arrola vrios exemplos de sistemas de solventes usados em CCC, com destaque para as fases usadas em DCCC, RLCCC e HSCCC. Tabela 2.3. Exemplos de sistemas de solventes usados em CCC para as separaes de produtos naturais e outras amostras, transcritas segundo as literaturas: Ito, 2005; Hostettmann. et al, 2001; Conway, 1989. Amostras Agliconas de flavonides Sistema de solvente (propores)* CHCl3:MeOH:H2O (4:3:2)1 CHCl3:MeOH:H2O (13:7:4)3 CHCl3:MeOH:n-BuOH:H2O (10:10:1:6)2, 3 EtOAc:n-PrOH:H2O (140:8:80)1 CHCl3:MeOH:H2O (7:13:8)2, 3 EtOAc:EtOH:H2O (5:1:5)1 EtOAc:n-BuOH:EtOH:H2O (30:6:10:50)1 Hex:EtOAc:n-BuOH:MeOH:AcOH:H2O (1:2:1:1:1:5)1 CHCl3:MeOH:H2O (7:13:8)2 CHCl3:MeOH:iso-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 CHCl3:MeOH:n-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 CHCl3:MeOH:n-BuOH:H2O (10:10:1:6)2 EtOAc:n-PrOH:H2O (140:8:80)1 EtOAc:n-PrOH:H2O (4:2:7)3 EtOAc:n-BuOH:H2O (3,5:1,5:5)1 EtOAc:n-BuOH:H2O (1:4:5)1 EtOAc:n-BuOH:H2O (2:1:3)1 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (1:3:2:4)1 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (1:4:3:4)1 Hex:n-BuOH:MeOH:H2O (1:4:2:6)1 n-BuOH:AcOH:H2O (4:1:5)2 CHCl3:MeOH:iso-PrOH:H2O (8:7:1:6)3 CHCl3:MeOH:H2O (7:13:8)2, 3 EtOH:n-PrOH:H2O (4:2:7)3

Isoflavonas

Flavonides glicosilados

Catequinas

EtOAc:n-PrOH:H2O (140:8:80)1 EtOAc:n-PrOH:H2O (4:2:7)3 EtOAc:EtOH:H2O (25:1:25)1 Hex:EtOAc:H2O (1:10:10)1 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (1:1:1:1)1 n-BuOH:n-PrOH:H2O (2:1:3)2 cido glico CHCl3:MeOH:H2O (7:13:8)2 EtOAc:n-BuOH:H2O (5:1,8:6)1 CHCl3:MeOH:H2O (7:13:8)2 CHCl3:MeOH:H2O (5:5:3)3 CHCl3:MeOH:NaAc pH 3,6 (9:12:8)2 CHCl3:MeOH:HCl 5% (5:5:3)2 CHCl3:MeOH:HCl 0,3M (4:1,5:2)1 CHCl3:NaP 0,07M pH 6,4 (1:1)1 CHCl3:NaP 0,07M pH 5,08 (1:1)1 Hex:EtOH:H2O (6:5:5)1 Hex:EtOH:MeOH:H2O (1:1:1:1)1 Hex:EtOH:MeOH:H2O (3:7:5:5)1 (C2H5)2O:(CH3)2CO:H2O (2:2:1)3 CHCl3:MeOH:n-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 CHCl3:MeOH:H2O (4:3:2)1 Hex:EtOH:MeOH:H2O (9:1:5:5)1 Hex:EtAOc:EtOH:H2O (5:2:4:1)2 CHCl3:MeOH:n-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 Hex:EtOH:MeOH:H2O (10:5:5:1)1 Hex:EtOH:MeOH:NaCl 0,5% (7:3:5:5)1 Hex:CHCl3:MeOH:NaCl 1,2% (1:4:4:2)1 EtOAc:n-PrOH:H2O (6:6:1)3 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (5:1:5:1)1 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (12:24:16:9)1 Hex:EtOH:H2O (6:5:2)1 Hep:C2H4Cl2:MeOH (47:6:72)2 Hep:Me2CO:MeOH (5:1:4)2 Hep:CH2Cl2:CH3CN (10:3:7)2 CH2Cl2:MeOH:H2O (8:13:7)2 CHCl3:MeOH:NH3 1% (7:12:8)2 CHCl3:MeOH:n-BuOH:H2O (5:6:1:4)1 CHCl3:MeOH:iso-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 CHCl3:MeOH:n-PrOH:H2O (5:6:1:4)2 CHCl3:MeOH:n-PrOH:EtOH:H2O (9:6:1:8:8)2 EtOAc:n-BuOH:H2O (1:1:2)1 EtOAc:EtOH:H2O (2:1:2)3 EtOAc:EtOH:H2O (50:1:50)1

Alcalides

Antraquinonas

Lignanas

Esterides

Saponinas

Estilbenos glicosilados

Lipdios

Hex:EtOH:H2O (6:5:4)1 Hex:MeOH:H2O (6:5:3)1 Hex:CHCl3:CH3CN (5:1:4)1 Hex:EtOAc:MeOH:H2O (6:5:5:5)1 Hex:EtOAc:EtOH:H2O (3:5:3:4)1 Hep:C2H4Cl2:MeOH (47:6:72)2 Hep:CH3CN:AcOH:MeOH (4:5:1:1)1 n-BuOH:AcOH:H2O (4:1:5)1 n-BuOH:EtOH:H2O (4:1:4)1 Hex:CH2Cl2:CH3CN (20:7:13)1 Hex:CHCl3:CH3CN (10:3:7)1 n-BuOH:EtOH:KH2PO4 0,15M (8:3:8)1 iso-octano:MeOH (1:1)1

Acares

Vitaminas

*Fases usadas em HSCCC1 ,DCCC2 e RLCCC3

Tabela 2.4. Esquemas e fotografias dos aparelhos de CCC e suas evolues *.

01. Esquema do equipamento de contracorrente distribuio de Jantzen.

02. (A) Esquema do aparato de Kies e Davis, no modo ascendente. (B) O mesmo equipamento no modo descendente.

04. Aparelho de contracorrente de distribuio de Hietala.

03. Esquema do equipamento de Keppes.

Tabela 2.4. Continuao

06. Esquema do funcionamento do equipamento de Tavel e Bollinger. 05. Equipamento de coil planet centrifuge. (1) Eixo responsvel pelos diferentes angulos e velocidades das colunas. (6) Local da coluna.

Tabela 2.4. Continuao

07. Esquema do equipamento de helix CCC.

Tabela 2.4. Continuao

08. Equipamento de DCCC.

C
09. (A) Colunas do equipamento de DCCC. (B) Detalhes das fases nas colunas do equipamento de DCCC. (C) Esquema geral do equipamento de DCCC nos modos ascendente e descendente. Tabela 2.4. Continuao

C B

10. (A) Esquema do equipamento de CCC locular de rotao. (B) Equipamento de CCC de rotao locular. (C) Esquema do equipamento de CCC de rotao locular, onde se pode variar a inclinao da coluna.

Tabela 2.4. Continuao

11. (A) Princpio do funcionamento do flow through coil planet centrifuge. (B) Equipamento de flow through coil planet centrifuge.

Tabela 2.4. Continuao

C
12. (A) Princpio do funcionamento do elution centrifuge. (B) Esquema do equipamento. (C) Trs diferentes tipos de colunas usadas no equipamento de elution centrifuge. Tabela 2.4. Continuao

13. Esquema do equipamento de angle CCC.

14. Equipamento de preparative CCC-slow rotating helix.

Tabela 2.4. Continuao

15. (A) Aparelho horizontal flow-through cail planet centrifuge. (B) Aparelho horizontal compacto de flow-through cail planet centrifuge. (C) Detalhes das colunas usadas no equipamento horizontal flow-through cail planet centrifuge. Tabela 2.4. Continuao

16. (A) Princpio do funcionamento do equipamento de nonsynchronous coil planet centrifuge. (B) Fotografia do equipamento de nonsynchronous coil planet centrifuge. Tabela 2.4. Continuao

B
17. (A) Fotografia do aparelho de toroidal coil planet centrifuge. (B) detalhe da coluna do equipamento. Tabela 2.4. Continuao

18. Fotografia do aparelho de rotating coil assembly.

B A C

19. (A) Esquema do funcionamento de centrifugal partition chromatography cartridge. (B) esquema do rotor com 12 cartuchos. (C) Imagem do aparelho de centrifugal partition chromatography cartridge. Tabela 2.4. Continuao

20. (A) Fotografia do high-speed CCC com a coluna na vertical. (B) Fotografia do high-speed CCC com a coluna na horizontal. * Fonte das figuras 01 a 20 da tabela 2.4: Conway, 1989; Mandava, N. B.; Ito, Y, 1988.

Referncias
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