GCXGC EISEP 2011

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)
II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp
Grupo de Cromatografia Gasosa e Microtcnicas de Extrao Laboratrio de Cromatografia Gasosa (LCG / IQ Unicamp)
Cromatografia Gasosa
CROMATOGRAFIA GASOSA BIDIMENSIONAL ABRANGENTE (GCGC)

FABIO AUGUSTO
Instituto de Qumica - Unicamp
Caixa Postal 6154 - 13084-971 Campinas SP augusto@iqm.unicamp.br
Instituto de Qumica Universidade Estadual de Campinas augusto@iqm.unicamp.br / CP 6154 13084-971 Campinas SP, BRASIL
Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo (colunas capilares) tem sido extensivamente usada desde a dcada de 60, sendo aplicada rotineiramente e com sucesso a amostras ambientais, clnicas, petroqumicas, de indstria alimentar, etc
Porque precisaramos de capacidade de separao ainda maior ?

Anlise petroqumica: unresolved complex mixture, UCM
Porque precisaramos de capacidade de separao ainda maior ?

Fitoqumica: separao e caracterizao de leos essenciais
Cromatogramas (GCMS) de extratos de sedimentos marinhos contaminados por petrleo *
Cromatogramas (GCMS) de leo essencial de lavanda (Lavandula angustifolia) *
coluna = 5% fenilmetilsiloxano, 30 m x 0.25 mm x 0.25 um; Tcol: 3 min @ 50 C
5 C min-1
320 C
coluna = RTx-5MS, 30 m x 0.25 mm x 0.25 um; Tcol: 6 min @ 45 C * Shellie et.al., J.Chromatogr. A 2002, 970, 225
3 C min-1
250 C
* modificado de Frysinger et.al., Environ. Sci. Technol. 2003, 37, 1653

Como aumentar a capacidade de separao em GC ?

Qual o nmero mximo de picos cromatogrficos separveis por um determinado sistema cromatogrfico em um intervalo fixo de tempo ? CAPACIDADE DE PICO * (peak capacity), n

Em GC de alta resoluo (colunas capilares), a capacidade de pico n proporcional ao nmero de pratos tericos N (e, portanto, altura equivalente a um prato terico H):
n N
OU
n L H
(L = comprimento da coluna)
n = nmero mximo de picos

cromatogrficos perfeitamente resolvidos (Rs 1.5) e equiespaados que podem estar contidos em uma nica corrida cromatogrfica **:
Assim, existem duas formas de aumentar a capacidade de pico de um sistema: AUMENTAR O COMPRIMENTO DA COLUNA CROMATOGRFICA MINIMIZAR A ALTURA DO PRATO TERICO (= MAXIMIZAR EFICINCIA)
* Giddings, Anal.Chem. 1967, 39, 1027 ** figura modificada de Beens, Comprehensive Two-Dimensional Gas Chromatography (ebook)
Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Em GC de alta resoluo (colunas capilares), a capacidade de pico n proporcional ao nmero de pratos tericos N (e, portanto, altura equivalente a um prato terico H):
Em colunas capilares, H se relaciona a parmetros cromatogrficos e dimensionais do sistema atravs da Equao de Golay (modificao da Equao de van Deemter):
H=
n N
OU
n L H
2 DM d2 + 1 + 6 k + 11 k 2 u 2 k d2 u f + C + 2 2 u 96 (1 + k ) DM 3 (1 + k ) DS
Otimizar a velocidade linear do gs de arraste Empregar gs de arraste e FE com viscosidades adequadas (modifica coeficientes de difuso DM e DS) Usar colunas com filmes finos de FE (df pequeno) Usar colunas de baixo dimetro (dc pequeno)
(L = comprimento da coluna)
Assim, existem duas formas de aumentar a capacidade de pico de um sistema: AUMENTAR O COMPRIMENTO DA COLUNA CROMATOGRFICA MINIMIZAR A ALTURA DO PRATO TERICO (= MAXIMIZAR EFICINCIA) Para minimizar H:
IMPRATICVEL: provocar aumento inaceitvel no tempo de anlise !!!!!!

DM e DS = coeficientes de difuso do eluato no gs de arraste e na FE; k = fator de reteno do eluato (tR/tM ); dC = dimetro da coluna, df = espessura do filme de FE e = velocidade linear mdia do gs de arraste
Em colunas capilares, h se relaciona a parmetros cromatogrficos e dimensionais do sistema atravs da Equao de Golay (modificao da Equao de van Deemter):
Em sistemas cromatogrficos convencionais, o uso de colunas capilares com pequenos dimetros a nica sada praticvel para se obter altssima eficincia na separao:
H=
2 DM d2 + 1 + 6 k + 11 k 2 u 2 k d2 u f + C + 2 2 u 96 (1 + k ) DM 3 (1 + k ) DS
Otimizar a velocidade linear do gs de arraste
Relao entre Hmin (H nas condies otimizadas de eficincia para o sistema) e dC
H min = d C
1 + 6 k + 11 k 2 12 (1 + k )
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EFEITO SOBRE H LIMITADO E/OU

Para analitos com tempos de retano suficientementes grandes (k alto)
Para minimizar H:
MODIFICAO com viscosidades adequadas Empregar gs de arraste e FEDO PARMETRO ALTERA DESFAVORAVELMENTE (modifica coeficientes de difuso DM e DS) OUTROS ASPECTOS DO DESEMPENHO Usar colunas com filmes finos de FE (df pequeno) DO SISTEMA
Usar colunas de baixo dimetro (dc pequeno)
lim (H min ) d C
DM e DS = coeficientes de difuso do eluato no gs de arraste e na FE; k = fator de reteno do eluato (tR/tM ); dC = dimetro da coluna, df = espessura do filme de FE e = velocidade linear mdia do gs de arraste
Quanto menor o dimetro da coluna cromatogrfica capilar, maior a eficincia possvel e maior a capacidade de pico obtvel em condies timas !!!
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Colunas com dimetro muito pequeno = altssima eficincia !!!
n 320 picos
(mas apenas ~40 picos separados...)
Cromatograma (GC-FID) de leo essencial de lima * com coluna capilar de dC = 50 m e L=5m (N = 100.000 pratos)
Porqu ?
n 320 picos
* Mondello et al., J.Sep.Sci. 2004, 27, 699 Condies cromatogrficas: coluna 5 % difenilmetilsilicone, 5 m 50 m 0,05 m; programao de temperatura: 50 C 80 C min-1 150 C 70 C min-1 200 C 55 C min-1 250 C min-1; gs de arraste: H2 @ 880 kPa
Notar que n s seria alcanada se os analitos eluissem em intervalos absolutamente regulares, gerando picos equiespaados = praticamente IMPOSSVEL em uma amostra real !!! Devido possibilidade de co-eluies, para 95 % de certeza de que os picos de uma amostra com 100 componentes sejam separados preciso pelo menos 5108 pratos tericos (n 22.300 !!!) *
* Giddings, J.High Resolut. Chromatogr. 1987, 10, 319
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Existe limitao para incrementar a eficincia atravs da diminuio do dimetro de uma coluna ?
A capacidade de processamento de amostra de uma coluna com dimetro muito pequeno (e/ou filmes de FE muito finos) extremamente reduzida: Perda de sensibilidade / detectabilidade
Os recursos convencionais para aumentar a capacidade de separao em Cromatografia Gasosa chegaram ao limites mximo de aperfeioamento. Para incrementar o desempenho de sistemas cromatogrficos so necessrios NOVOS PARADIGMAS !!!!!
(Vi )MAX
2 dC
dC
(Vi)MAX
Necessidade de injetores especiais Preciso limitada em anlise quantitativa
A reduo do dimetro interno da coluna aumenta a resistncia ao fluxo de gs de arraste, demandando presses de operao cada vez mais altas:
p 1
d2 C
Presso necessria para = 30 cm s-1 (He) em uma coluna de 25 m dC
dC / mm
0,25 0,10 0,05
p / psi
22,4 140 562 INVIVEL !!!
(Vi )MAX = volume mximo de amostra processvel; p = diferena entre presso de entrada da coluna e de sada necessria para manter determinada vazo de gs de arraste
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Novo Paradigma = Cromatografia Gasosa Multidimensional

Duas colunas com FE de diferentes polaridades / seletividade (ortogonais) so conectadas em srie no mesmo cromatgrafo, unidas por um dispositivo para coleta e reinjeo de fraes

Amostra Coluna Primria (1a dimenso)

Dispositivo para coleta e reinjeo de fraes
Coluna Secundria (2a dimenso)
Uma ou mais fraes do eluato da primeira coluna so coletadas e reinjetadas na segunda coluna
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Cromatografia Gasosa Multidimensional por Fraes (Heart-cut Multidimensional Gas Chromatography, GC-GC)

Dispositivo para coleta e reinjeo de fraes
Coleta de fraes: vlvulas solenides com n vias (similares s usadas para injeo em HPLC) ou dispositivos pneumticos (chaves de Deans = Deans Switch)
Uma ou mais fraes do eluato da primeira coluna so coletadas, reconcentradas (focalizadas) e reinjetadas na segunda coluna Espcies que coeluiram na primeira coluna eventualmente podem ser separadas pela segunda coluna, por esta ter polaridade / seletividade diferente !!!
Aps uma corrida exploratria com o fluxo de sada da coluna #1 dirigido para o detector #1, numa segunda corrida o coletor de fraes programado para desviar a sada da coluna #1 para a coluna #2 durante um intervalo de tempo selecionado, onde ocorre co-eluio de espcies de interesse
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Determinao de volteis em queijos irradiados por HS-SPME + GC-GC-MS *
Incremento na Capacidade de Pico em GC-GC:

n1
Capacidade de pico da coluna #1
i
Nmero de fraes coletadas
ntotal = n1 + (i n2)
A capacidade de separao incrementada aritmeticamente
n2
Capacidade de pico da coluna #2
Instrumentao relativamente complexa: custo de instalao, manuteno e operao pode no compensar o ganho (modesto) de desempenho
* Barba et al., J. Agric. Food Chem. 2010, 58, 752 Coluna #1: 5 % fenilmetilsilicone, 30 m 0,25 mm 0,25 m; Coluna #2: Chirasil--Dex (quiral); programao de temperatura: 15 min @ 50 C 1 C min-1 70 C 2 C min-1 140 C 4 C min-1 200 C min-1
O tempo total de anlise muito mais elevado que o de uma separao convencional: pode ser inaceitvel para muitas aplicaes de rotina
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E se, em intervalos regulares de tempo, o material eluindo da Coluna #1 fosse fracionado e recromatografado na Coluna #2 de forma INTEGRAL e CONTNUA ?
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ntotal = n1 n2
A capacidade de separao incrementada GEOMETRICAMENTE !
ntotal = n1 n2 CROMATOGRAFIA A capacidade de separao GASOSA incrementada BIDIMENSIONAL GEOMETRICAMENTE ABRANGENTE

(Comprehensive Bidimensional Gas Chromatography)
GCGC
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GCGC: Instrumentao Bsica
Cromatgrafo a gs convencional, com injetor adequado para colunas capilares (splitsplitless, on column, etc.) e detector adequado para GCxGC (detector por ionizao em chama = FID; detector espectromtrico de massas RPIDO = MS, etc.)
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Conjunto de colunas (column set) = duas colunas capilares conectadas em srie

Coluna de 1a dimenso: coluna capilar com dimenses normais (p. ex., 30 m 0,25 mm 0,25 m)
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MODULADOR: dispositivo posicionado entre as colunas, que continuamente e em intervalos fixos de tempo ( = perodo de modulao, PM alguns segundos !!!) coleta o eluato da 1a coluna, concentra-o em uma banda estreita e reinjeta na 2a coluna Coluna de 2a dimenso: coluna capilar curta, com pequeno dimetro e alta eficincia, para separaes RPIDAS (p. ex., 60 cm 0,05 mm 0,10 m)
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Visualizao dos Cromatogramas em GCGC

Frao voltil de polpa de abacaxi fresco aps isolamento por HS-SPME e separao / deteco por GC-FID convencional e por GCGC-FID em condies similares:
Em alguns sistemas, a Coluna #2 colocada em um forno secundrio com temperatura independente daquela do forno principal da Coluna #1
GC-FID
GCGC-FID
A representao grfica dos cromatogramas de GCGC como registros simples Sinal Tempo no permite a interpretao adequada dos resultados obtidos
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Frao voltil de polpa de abacaxi fresco analisada por HS-SPME + GCGC-FID:
mais conveniente representar cromatogramas de GCGC na forma de superfcies tridimensionais Sinal 1tR (= tempo de Reteno na 1a coluna) 2tR (= tempo de Reteno na 2a coluna) ou projees bidimensionais dessas superfcies, similares s usadas em mapas cartogrficos (diagramas de contorno ou de cores)
* Dallge et al., J. Chromatogr. A 2003, 1000, 69
Em um cromatograma de GCGC representado como um diagrama de cores, cada analito eludo aparece como uma mancha no plano 1tR 2tR
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Existe realmente ganho aprecivel no poder de separao usando GCGC ?

Screening da composio de fumaa de cigarro por GCGC-ToFMS:
Existe realmente ganho aprecivel no poder de separao usando GCGC ?

Screening da composio de fumaa de cigarro por GCGC-ToFMS:
~30.000 mil picos detectados em um cromatograma de 60 minutos !!!!
colunas = DB-1 (30 m x 0.25 mm x 0.25 um) + Carbowax (1,0 m x 0.10 mm x 0.10 um); Tcol: 50 C * Dallge et al., J. Chromatogr. A 2002, 974, 169
2 C min-1
250 C
colunas = DB-1 (30 m x 0.25 mm x 0.25 um) + Carbowax (1,0 m x 0.10 mm x 0.10 um); Tcol: 50 C * Dallge et al., J. Chromatogr. A 2002, 974, 169
2 C min-1
250 C
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Sensibilidade e Detectabilidade em GCGC

No processo de modulao (coleta, focalizao e reinjeo) a banda cromatogrfica relativamente larga eluindo da 1a coluna convertida em uma srie de bandas mais estreitas (wb 100 ms - 600 ms), gerando picos cromatogrficos tambm estreitos e altos na 2a dimenso
Sensibilidade e Detectabilidade em GCGC

Frao voltil de polpa de abacaxi fresco analisada por HS-SPME + GC-FID ou GCGC-FID:
GC-FID 24 picos com S/N = 3
GCGC-FID 75 picos com S/N = 3 Relaes Sinal / Rudo e Sensibilidade de 2 a 5 vezes melhores que GC convencional
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Estruturao dos Cromatogramas em GCGC

Picos correspondentes a compostos estruturalmente relacionados eluem prximos, em regies claramente distintas dos mera inspeo visual dos cromatogramas
Querosene por GCxGC-FID. HP-5 (30 x 0,25x 0,25) + DBwax (1,0 x 0,1 x 0,1)
Estruturao em GCGC: Derivados de Petrleo

Gasolina tipo C (regio de Campinas)
GC GC-FID, HP-5 (30 m 0,25 mm 0,25 m) + DBWax (1,0 m 0,10 mm 0,10 m) naphthalene
Diaromticos substitudos
Benz-C3 Benz-C4
PhC2 PhC3 PhC4 PhC5
PhC6
Benz-C2
Monoaromticos substitudos Alcanos, alcenos e dienos
ethanol
alkanes + olefins
* Pedroso et al., J. Chromatogr. A 2008, 1201, 176

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leo Lubrificante Leve 2T
GCGC-FID, DB-1 (25 m 0,25 mm 0,25 m) + OV1701 (1,5 m 0,10 mm 0,10 m)
Compostos de Enxofre em leo 2T Leve

GCGC-FPD, Rtx-5 (30 m 0,32 mm 0,25 m) + BPX-50 (1,0 m 0,10 mm 0,10 m)
* Beens et al., J. High Resolut. Chromatogr. 1998, 21, 47

* Cavagnino et al., Boletim de Aplicaes Thermo Electron Itlia
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Estruturao em GCGC: Lipdios (FAME, Fatty Acid Methyl Esters)

Microestruturao em FAMES de de leo de peixe metilado em GCGC-qMS possvel deduzir o grau de insaturao e posio das duplas ligaes pela anlise dos grupos estruturais
FAME de leo de arenque

GCGC-FID, HP-5 (9 m 0,20 mm 0,25 m) + CPWax-52 (0,3 m 0,10 mm 0,10 m)
* de Geus et al., J. Chromatogr. A 2001, 910, 95

GCGC-qMS Shimadzu QP2010+; conjunto de colunas: (30 m 0,25 mm 0,25 mm) HP-5 + (1,0 m 0.10 mm 0.10 mm) Supelcowax; Tcol = 170 C 3 C min-1 25 min @ 240 C; gs de arraste = H2 @ 0,6 mL min-1; faixa de varredura espectral = 40 a 284 uma
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Microestruturao em FAMES em cera de carnaba metilada em GCGC-qMS
Estruturao em GCGC: leos Essenciais
oxigenados
iso (i-CXX:Y)
anteiso (ai-CXX:Y)
-ramificado (br2-CXX:Y)
Isomeria de ramificao tambm pode ser decifrada por inspeo da estruturao (6) = i-C16:0 e (23) = i-C22:0; (7) = br2-C16:0 e (24) = br2-C22:0
GCGC-qMS Shimadzu QP2010+; conjunto de colunas: (30 m 0,25 mm 0,25 mm) HP-5 + (1,0 m 0.10 mm 0.10 mm) Supelcowax; Tcol = 170 C 3 C min-1 25 min @ 240 C; gs de arraste = H2 @ 0,6 mL min-1; faixa de varredura espectral = 40 a 284 uma
no-oxigenados monoterpenos sesquiterpenos
leo essencial de Aniba fragrans (macacaporanga), GCGC-FID

HP-5 (30 m 0,25 mm 0,25 m) + DB-Wax (1,0 m 0,10 mm 0,10 m)
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Aspectos Instrumentais de GCGC: Moduladores

Componente crtico em GCGC: desempenho do sistema depende de seu funcionamento
Modulador de Varredura Trmica (sortivo) OBSOLETO !

Entre as duas colunas instalado um capilar internamente revestido com um filme espesso de uma fase sorvente 1, 2 colunas capilares; 3 capilar de modulao; 4 aquecedor rotatrio; 5 eixo de cermica; 6 sensor de rotao conectado a controlador; 7 motor de passo; 8 injetor e 9 detector
* Phillips et al., J. High Resolut. Chromatogr. 1999, 22, 3
Deve coletar continuamente pequenas fraes do eluato da primeira coluna, reconcentr-las em uma banda estreita e reinjet-las na segunda coluna.
Largura de base na segunda dimenso diretamente do desempenho do modulador
(2w
b)
e capacidade de pico do sistema depende
Moduladores SORTIVOS
Ciclo de Modulao:
Trs conceitos bsicos de modulao j empregados
Moduladores por VLVULAS (pouco usados) Moduladores CRIOGNICOS (os mais populares)
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Modulador de Criognico de Duplo Jato

O eluato da primeira coluna mobilizado e refocalizado por jatos de fluidos frios alternados
Modulador de Criognico de Duplo Jato
* Beens et al., J. Chromatogr. A 2001, 919, 127

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Modulador de Criognico de Duplo Jato: Ciclo de Modulao


ETAPA 1 - COLETA: O jato frio #1 acionado. Uma pequena seo do comeo da coluna #2 resfriada e o eluato da coluna #1 vai sendo aprisionado criogenicamente nesse ponto.
ETAPA 2 - RECONCENTRAO: O jato frio #1 desligado e o jato frio #2 acionado. Ar quente do forno da coluna reaquece rapidamente o setor da coluna #2 com os analitos aprisionados, que voltam a eluir. Ao chegar na seo resfriada pelo jato #2, eles so reaprisionados na forma de uma banda estreita.
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Variantes do Modulador de Duplo Jato: Modulador Quad Jet (jato qudruplo)*

O eluato da primeira coluna mobilizado e refocalizado por jatos de fluidos frios alternados, e a desmobilizao por jatos de N2 aquecido a alta temperatura
ETAPA 3 - REINJEO: O jato frio #2 desligado e o jato frio #1 reacionado. O calor do forno fora a banda estreita de eluato reconcentrada a eluir, iniciando a sua separao na coluna #2. Uma nova frao de eluato da coluna #1 comea a ser aprisionada pelo jato frio #1.
No usando ar quente do prprio forno para desmobilizar os analitos, as bandas reinjetadas supostamente seriam mais estreitas (maior eficincia !)
* Purch et al., J. Chromatogr. A 2003, 1019, 43
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Variantes do Modulador de Duplo Jato: Modulador de loop *

A coleta e desmobilizao so feitas por um nico jato frio e por um nico jato quente, aplicados em pontos diferentes de um loop feito com um pedao do incio da segunda coluna
Variantes do Modulador de Duplo Jato: Modulador de loop *

A coleta e desmobilizao so feitas por um nico jato frio e por um nico jato quente, aplicados em pontos diferentes de um loop feito com um peda do incio da segunda coluna
* Ledford et al., J. High Resolut. Chromatogr. A 2000, 23, 202

* Ledford et al., J. High Resolut. Chromatogr. A 2000, 23, 202
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Modulador de Criognico de Duplo Jato e Variantes

Atualmente o conceito mais usado, em virtude do desempenho (bandas de reinjeo extremamente estreitas = 2wb de poucas centenas de milissegundos), robustez, ausncia de partes mveis, custo operacional e simplicidade de montagem, manuteno e de operao
Modulador LMCS (Longitudinally Modulated Cryogenic System)*

A coleta e refocalizao efetuada com auxlio de uma camisa de refrigerao mvel envolvendo a ponta da segunda coluna, resfriada por um fluxo de LCO2 :
CO2 lquido. Resfriamento por efeito Joule (evaporao + expanso). Caindo em desuso: espcies volteis no so aprisionadas + alto consumo e custo (1 cilindro CO2 6 h de uso) Fluidos criognicos empregados N2 lquido. O mais usado atualmente. Extremamente barato, possibilita modulao desde compostos altamente volteis at muito pesados. ar resfriado. Ar ambiente refrigerado por dispositivos eletrotrmicos (Peltier). Muito conveniente por dispensar suprimento de LN2 ou LCO2, mas com faixa de operao limitada.
Pouco robusto (contm partes mveis) e pode no ser efetivo para coletar e modular bandas resultantes de compostos mais volteis (P.E. < 120 C)
* Kinghorn e Marriott, J. High Resolut. Chromatogr. A 1998, 21, 620
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Modulador LMCS (Longitudinally Modulated Cryogenic System)

Solute breakthrough mais comum no incio do cromatograma (compostos mais volteis):
Aspectos Instrumentais de GCGC: Perodo de Modulao (PM )

Deve ser ajustado para que prefercialmente todos os analitos reinjetados na segunda coluna eluam antes da reinjeo da frao seguinte:
Querosene em GCxGC-FID
Colunas: HP-5 (30 m 0,25 mm 0,25 m) + DB-wax (1,0 m 0,10 mm 0,10 m)
PM = 4,0 s
Wrap around (picos fora de ciclo): picos com 2tR maior que o perodo de modulao, eluem junto com as prximas fraes reinjetadas
leo essencial de eucalipto; Colunas HP-5 (30 x 0,25 x 0,25) + BP-20 (1,5 x 0,1 x 0,1)
Valores tpicos para PM : entre 2,0 s e 10,0 s (IDEALMENTE cada pico eluindo da coluna #1 deve ser fracionado entre aproximadamente 5 perodos de modulao)
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Aspectos Instrumentais de GCGC: Conjuntos de Colunas

Dimenses das Colunas Coluna #1 (1D) coluna convencional, similar s usadas em GC unidimensional (p.ex. 30 m 0,25 mm 0,25 m)

Seleo de Fases Estacionrias Idealmente, os mecanismos de separao proporcionados pelas FE das colunas devem ser DIFERENTES
SEMPRE influenciam a reteno de analitos em qualquer FE
Caractersticas analtica bem conhecidas do seu uso rotineiro em GC, facilita a implementao de mtodos em GCGC
Fases Estacionrias ORTOGONAIS entre si
Coluna #2 (2D)
coluna curta, de pequeno dimetro e filme fino de FE (p.ex. 1,0 m 0,10 mm 0,10 m)
1 2
VOLATILIDADE Analitos menos volteis (menor presso de vapor) tendem a ser mais retidos INTERAO COM A FE: pontes de hidrognio, interaes -, efeitos estricos, etc...
Idealmente, deve possibilitar separao RPIDA das fraes reinjetadas (~150 vezes mais rpida que a coluna #1)
Conexo das colunas Conectores tipo press fit sem volume morto (zero dead volume)
FE Apolares
Apenas 1 relevante na reteno; 2 tem influncia quase negligencivel
FE Polares
Tanto 1 como 2 afetam de forma significativa a reteno
No existem duas fases estacionrias que sejam perfeitamente ortogonais entre si para quaisquer analitos !!!
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Seleo de Fases Estacionrias
Na prtica a combinao de FE que mais se aproxima da ortogonalidade consiste de:
1D 2D

1D 2D
Fase APOLAR ou POUCO POLAR

100 % metilsilicone (HP-1, DB-1, OV-1) ... ou 5 % fenilmetilsilicone (HP-5, DB-5,...)
FE Apolar
Fase POLAR ou SELETIVA

polietilenoglicol (Carbowax, DB-Wax,...); 50 % fenilmetilsilicone (HP-50, OV-17 ...) etc

FE Apolar

polietilenoglicol (Carbowax, DB-Wax,...); 50 % fenilmetilsilicone (HP-50, OV-17 ...) etc
PM segundos
Todos os eluatos contidos em uma frao coletada e reinjetada tem P.E. prximo
PM segundos
FE Polar
Reteno na 2D depende simultaneamente da volatilidade (= P.E.) E da interao com a FE
FE Polar
63
64

1D 2D

Com conjuntos normais, os analitos so ordenados no espao de separao segundo suas volatilidades e polaridades:

FE Apolar

POLARIDADE
polietilenoglicol (Carbowax, DB-Wax,...); 50 % fenilmetilsilicone (HP-50, OV-17 ...) etc Monoaromticos
Diaromticos
Querosene em GCxGC-FID
Colunas HP-5 (30 m 0,25 mm 0,25 m) + DB-wax (1,0 m 0,10 mm 0,10 m)
PM segundos
FE Polar

1D
Mesmo que seja usada programao linear de temperatura no forno da coluna, sendo PM curto a temperatura na segunda coluna fica aproximadamente isotrmica durante a eluio das fraes, e tendo os analitos volatilidades prximas apenas sua interao com a FE determina a reteno
Alcanos, alcenos
Apolar + 2D Polar / Seletiva = Conjunto de colunas NORMAL

VOLATILIDADE 65
66
11

Conjuntos de colunas INVERSOS (1D = Polar + 2D = Apolar) tambm podem ser usados:
Compostos com baixa polaridade (alcanos) tem 2tR maior

Comparao: volteis de abacaxi em conjuntos de colunas normal e inverso:
Grupos com maior polaridade / polarizabilidade so menos retidos na 2D
Normal: HP-5 + SP-Wax colunas = Carbowax 58 (30 m x 0.25 mm x 0.25 um) + BPX35 (1,35 m x 0.10 mm x 0.10 um) * Adachour et al., J. Chromatogr. A 2004, 1054, 47
Inverso: HP-5 + SP-Wax
Tanto o conjunto de colunas normal quanto o inverso proporcionam boas separaes, com agrupamento de compostos assimilados
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Comparao: volteis de abacaxi em conjuntos de colunas ortogonal e no-ortogonal:
Aspectos Instrumentais de GCGC: Detectores

Os detectores de sistemas GCGC devem ter resposta MUITO rpida ! Picos na 2D so extremamente estreitos (wb a partir de 100 ms) Para registrar um pico so necessrias pelo menos 20 medidas de sinal Os detectores devem ter volumes internos desprezveis (alguns L) !!!
2w b
= 100 ms
Ortogonal / Normal: HP-5 + SP-Wax
No-Ortogonal: HP-5 + HP-50
No conjunto no-ortogonal, a diferena entre os 2tR muito pequena, e a separao pode ser insuficiente ocorrendo muitas co-eluies no plano de separao
IDEALMENTE, o tempo de resposta do detector deve possibilitar pelo menos 100 medidas de sinal por segundo (100 Hz) !
69
70

Mesmo com detectores adequados para GCGC, se a eletrnica de condicionamento, amplificao e digitalizao de sinal for lenta ocorre deformao dos picos registrados
Gasolina tipo C em GCxGC-FID (sistemas idnticos mas mdulos eletrnicos diferentes)

Detectores mais populares para GCGC
Detector por Ionizao em Chamas (FID, Flame Ionization Detector) Detector Espectromtrico de Massas por Tempo de Vo (ToFMS, Time of Flight Mass Spectrometric Detector) Detector Espectromtrico de Massas Quadrupolar (qMS, Quadrupolar Mass Spectrometric Detector) Detector por Captura De Eletrons (ECD, Electron Capture Detector) Detector de Nitrognio e Fsforo (NPD, Nitrogen Phosphorous Detector) Detector por Quimiluminescncia de Enxofre (SCD, Sulphur Chemiluminescence Detector) Detector por Emisso Atmica (AED, Atomic Emission Detector)
Usados apesar de suas limitaes:
picos na 2D muito alargados (2wb 1,0 s - 1,5 s)
Eletrnica Lenta
picos na 2D estreitos (2wb 80 ms - 300 ms) 71
Eletrnica Rpida
Adequados, usados apenas eventualmente:
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12

Detectores Espectromtricos de Massas em GCGC
MS Quadrupolar (convencional) MS de Tempo de Vo

GC-qMS versus GCGC-ToFMS
leo essencial de Eucaliptus dunnii (picos do Z--terpineol e nopinona)* Relao S/N: baixa em GC-qMS, adequada em GCGC-ToFMS Identificao: qualidade do matching espectral: qMS terpineol: nopinona: 873 n.i. TOFMS 980 951
* Mlhen et al., J. Chromatogr. A 2008, 1200, 34
~ 5 a 10 espectros completos por segundo
at 500 espectros completos por segundo !!!
INADEQUADO PARA GCGC
MS preferencial para GCGC
CUSTO Sistema completo custa US$ 275 mil !!! Problemas com GCGC-ToFMS OPERAO Muito mais complexa que qMS DISPONIBILIDADE Poucos (um) fornecedores
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GCGC-ToFMS representa o estado-da-arte em termos de sensibilidade, detectabilidade e capacidade de separao,

Alternativa a -ToFMS: detectores de massa quadrupolares rpidos
Frao voltil de polpa de abacaxi fresco analisada por HS-SPME + GCGC-qMS
Shimadzu QP2010+ 10.000 uma / s (~ 30 espectros / s) Drogas em urina por HS-SPMEGCGC-ToFMS (250 ng mL-1 cada) *
Colunas Rxi-5MS (30 m 0,25 mm 0,25 m) + RTX-200 (1,5 m 0,18 mm 0,18 m)
LIMITES DE DETECO dA ORDEM DE ng L-1 !!!
Possvel registro do cromatograma sem deformao significativa ou perda de picos estreitos
* Leco Corp., nota de aplicao 357

Para muitos problemas analticos, onde a faixa de varredura de massas pode ser reduzida, sistemas quadrupolares rpidos de nova gerao podem substituir -ToFMS com vantagens
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Ajuste do intervalo de varredura espectral em GCGC-qMS durante a corrida
Algumas aplicaes selecionadas de GCGC

40-284 uma 40-284 uma at 15 min, 70-314 at 20 min, 100-344 uma at 25 min e 130-374 at o fim
FAME de leo de peixe metilado; GCGC-qMS Shimadzu QP2010+; conjunto de colunas: (30 m 0,25 mm 0,25 mm) HP-5 + (1,0 m 0.10 mm 0.10 mm) Supelcowax; Tcol = 170 C 3 C min-1 25 min @ 240 C; gs de arraste = H2 @ 0,6 mL min-1
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13
METABOLOMICS OF EUCALYPTUS INFECTED BY FUNGI BY COMPREHENSIVE TWO-DIMENSIONAL GAS CHROMATOGRAPHY AND CHEMOMETRICS
Marcio P. Pedroso1, Luiz A.F. de Godoy Jr.1, Leandro W. Hantao1, Edson l. Furtado2, Fabio Augusto1 and Ronei J. Poppi1
2 1 Institute of Chemistry, State University of Campinas - UNICAMP, 13084-110, Campinas, SP, Brazil. State University Julio de Mesquita Filho, Faculty of Agronomic Sciences, Laboratory of Phytopatology, Botucatu, SP, Brazil.
Os volteis de folhas de Eucalyptus (infectadas ou no infectadas e resistentes ou no resistentes) a Puccinia psidii foram isolados por Microextrao em Fase Slida (SPME) e analisados por GCGC
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RESULTADOS
Os cromatogramas foram analisados por PCA (Principal Components Analysis) para verificar a existncia de padres que permitiriam o seu agrupamento
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Application: Volatiles from Roasted Cocoa by HS-SPME-GCGC-ToFMS

Cocoa tree (Theobroma cacao L.)
Application: Volatiles from Roasted Cocoa by HS-SPME-GCGC-ToFMS
CHOCOLATE Very complex aroma mix, even compared to other foodstuff *
47 hydrocarbons 28 alcohols 53 acids 7 phenols 24 aldehydes 41 ketones 57 esters
Pods with beans & pulp
14 pyrrols 9 pyridines 80 pyrazines 7 thiazoles 11 oxazoles 34 furanes, pyrones, lactones 21 other Ni compounds 15 other S compounds
Roasted & fermented beans
* Data from 1988 !!! = Biehl and Ziegleder in Linskens, H.F. et al.: Modern Methods of Plant Analysis, New Series, Vol.8. Springer, 1988, pp. 321-393
CHOCOLATE Important commodity for several tropical and sub-tropical countries

Alkylpyrazines: most relevant species determinant of the quality of cocoa flavour

2,4-dimethyl-3-ethylpyrazine
Formed by Maillard reactions during roasting of fermented cocoa nibs
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14
EXPERIMENTAL *
1.00 0.05 g ground roasted cocoa nibs
Typical HS-SPME+GCGC-ToFMS for roasted cocoa nibs
Stir (500 rpm) for S/H equilibration 15 min @ 45 C
45 min HS extraction (65 m PDMS/DVB fiber)
GCGC-ToFMS
10.0 mL saturated aqueous NaCl
Instrumental: Pegasus 4D GCGC-ToFMS + Gerstel Multipurpose Sampler; SLB-5MS (30 m 0.25 mm 0.25 m) + SUPELCOWAX 10 (1.3 m 0.1 mm 0.1 m) column set; Oven temperature = 60/65 C C min-1 250/255 C (1st / 2nd), 200 spectra s-1 @ m/z = 30 to 400 3
Identification of Eluates: Mass spectra similarity search + comparison of 1st dimension LTPRI + visual inspection and evaluation of chromatographic structuration * Extraction conditions according Pini et al., J. Braz. Chem. Soc. 2004 (15) 267.
Addopting S/N = 100: 2890 detected / 139 identified peaks

(PRELIMINARY RESULTS !!!) 85
86
Chromatographic Structuration Pyrazine Substituents & Isomers

6,000
Chromatographic Structuration Pyrazine Substituents & Isomers

6,000
5,000 5,000 4,000 4,000 3,000 2,000

Saturated Alkylpyrazines
3,000
2,000
Unsaturated Alkylpyrazines Acetylpyrazines
1,000 0,000 0
1,000
C1
C2
C3
0,000 500 1000 1500 2000

87
450
550
650
750
850
950
88
Application: Volatile Fraction of Honey by HS-SPME-GCGC According to the FLORAL ORIGIN honeys can be monofloral (bees collect polen mostly from a single species of flower) or multifloral
Determination of floral origin of honey

Melissopalinological Analysis GC Analysis of Honey Volatiles
Microscopical examination of diluted honey and manual determination and counting of
The composition of the blend of aroma-related volatiles from honey depends on the nature of the polen collected by the bees, and therefore its chromatographic fingerprint can be used to assess the floral origin of the samples
Monofloral honeys have much higher market value !!!
polen grains associated to different flowers
How a specific sample of honey can be unequivocally assigned as a monofloral and associated to a determined vegetable?
Official method for EU & US
HS-SPME + GCGC-MS / FID
89
90
15
EXPERIMENTAL *
1.00 0.05 g mix of mono- & multifloral honey
GC-MS
45 min HS extraction (65 m PDMS/DVB fiber)
Conventional GC-MS
~40 detected peaks
GCGC-FID
1.0 mL saturated aqueous NaCl
GCGC-FID
GCGC-ToFMS
~300 detected peaks (S/N = 5)
Instrumental: GCGC-FID: Agilent 6890 with self-made cryogenic modulator; GCGC-ToFMS: Pegasus 4D GCGCToFMS + Gerstel Multipurpose Sampler; HP-5MS (30 m 0.25 mm 0.25 m) + SUPELCOWAX 10 (1.0 m 0.1 mm 0.1 m) [FID] or SLB-5MS (30 m 0.25 mm 0.25 sets; Oven temperature = 60/65 C 3 C min-1 m) + SUPELCOWAX 10 (1.3 m 0.1 mm 0.1 m) [ToFMS] column 250/255 C (1st / 2nd), 200 spectra s-1 @ m/z = 30 to 400
Identification of Eluates: Mass spectra similarity search + comparison of 1st dimension LTPRI + visual inspection and evaluation of chromatographic structuration
GCGC-ToFMS
5967 detected peaks ! (S/N = 50)
* Extraction conditions optimized after Doehlert Matrix-based factorial design experiments

91
92
But how many of those peaks are really representative of the sample ?
The increment on the sensitivity & peak capacity may lead to the detection of previously disregarded artifacts and contaminants !!!
Study of possible storage & extraction artifacts on honeys

Effect of prolonged heating of honey
(intentional generation of storage / thermal treatment artifacts)

1.00 0.05 g honey blend 48 h @ 45 C
HS-SPME-GCGC-FID
GCGC-FID
~300 detected peaks (S/N = 5)
Effects of extended heating of aqueous solutions of honey
(intentional generation of extraction artifacts)

1.00 0.05 g honey blend
GCGC-ToFMS
5967 detected peaks ! (S/N = 50)
1.0 mL satd. aqueous NaCl
Stirring for zero to 240 min @ 45 C and 60 C
HS-SPME-GCGC-FID
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94
Heated x Raw Honey
Heated x Raw Honey

Several other minor peaks either disappear, appear or have their intensities notably changed during thermal treatment
Assigned Peak
RAW HONEY
5-Hydroxymethylfurfural (HMF)
RAW HONEY
Those changes would not be noticed when using conventional GC, and could be enough significant to disturb chemometric pattern recognition / classification algorithms !!!
an already well-know and regularly monitored marker of (illegal) thermal treatment of honey
HEATED HONEY
HEATED HONEY
95
96
16
Hydrolisis + Thermolisis Artifacts

MAJOR IDENTIFIED PEAKS
1 n-hexane 2 ethyl acetate 3 2-methyl-1-butanol 4 furfural 5 isoamyl acetate 6 benzaldehyde 7 5-methylfurfural 8 benzeneacetaldehyde 9 cis-linalool oxyde 10 trans-linalool oxyde 11 hotrienol 12 phenylethyl alcohol 13 isophorone 14 oxoisophorone 15 lilac aldehyde B 16 diethylsuccinate 17 decanaldehyde 18 5-hydroxymethylfurfural 19 ethyl benzeneacetate 20 p-anisaldehyde 21 ethyl p-anisate
97
98
As cincias micas
GENMICA
= = = =
Caracterizao completa, quantitativa e qualitativa do conjunto de genes de um ser vivo Caracterizao completa, quantitativa e qualitativa do dos transcriptores (RNA) gerados pelos genes Caracterizao completa, quantitativa e qualitativa do conjunto de protenas expressadas por um ser vivo Caracterizao completa, quantitativa e qualitativa de todos os metablitos produzidos por um ser vivo
Aplicaes Avanadas: Lipidmica e GCGC
TRANSCRIPTMICA PROTEMICA METABOLMICA
Para muitos, as cincias micas so o estado-da-arte da produo de conhecimento, integrando medicina, biologia, qumica, fsica e matemtica/estatstica/informtica
Instituto de Qumica Universidade Estadual de Campinas augusto@iqm.unicamp.br / CP 6154 13084-971 Campinas SP, BRASIL Instituto de Qumica Universidade Estadual de Campinas augusto@iqm.unicamp.br / CP 6154 13084-971 Campinas SP, BRASIL
99
100
METABOLMICA
Caracterizao completa, quantitativa e qualitativa de todos os metablitos produzidos por um ser vivo
O que so - e quem so - os lipdios ?

Grupo extremamente heterogneo, compreendendo substncias com funcionalidades diferentes e diversas funes biolgicas Molculas biolgicas anfipticas (estruturas moleculares abrangem regies hidroflicas e hidrofbicas) Pouco solveis em gua, solveis em solventes orgnicos menos polares (diclorometano, hexano, tetracloreto de carbono)
O conjunto de metablitos gerados por um ser vivose divide em dois sub-grupos:
Metablitos Primrios
Substncias essenciais ao crescimento, desenvolvimento e reproduo do ser vivo

aminocidos, acares, ...
Metablitos Secundrios
Substncias no envolvidas diretamente no processos acima, mas importantes para a manuteno da vida
feromnios, antibiticos, pigmentos ...
Constituem frao significativa da massa celular (at ~70 %) e da dieta (~15 %) de muitos seres vivos Estudos sistemticos para a deteco, identificao, quantificao e caracterizao de TODOS os lipdios em determinada clula ou organismo, para determinar os mecanismos pelos quais eles operam
O grupo dos LIPDIOS compreende uma importante frao dos metablitos primrios, alm de alguns metablitos secundrios importantes (sinalizadores)
LIPIDMICA
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102
17
Lipidmica: para que ?

Muitas doenas humanas envolvem a interrupo de rotas metablicas envolvendo lipdios e enzimas associadas
O que so - e quem so - os lipdios ?

Famlias mais significativos de lipdios biologicamente ativos:
cidos Graxos Triacilgliceris Glicerofosfolipdios Esfingolipdios Ceras
Uma clula animal tpica pode conter mais de mil lipdios diferentes, com funes estruturais e de sinalizao
O completo conhecimento da funo de cada um desses lipdios requer sua identificao e quantificao nas diversas partes da clula
Para isso necessria a aplicao de tcnicas sensveis, que possibilitem a deteco confivel e rpida do maior nmero de espcies possvel
Esterides e Lipdios Isoprnicos

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CIDOS GRAXOS (Fatty Acids, FA)

Monocidos orgnicos alifticos, tipicamente com cadeias longas cido lurico, C12 (12:0) cido mirstico, C14 (14:0) cidos Graxos Saturados (cadeias carbnicas sem duplas ligaes) cido palmtico, C16 (16:0) cido esterico, C18 (18:0) cido araqudico, C20 (20:0) cido behnico, C22 (22:0) cido lignocrico, C24 (24:0) ...
CIDOS GRAXOS (Fatty Acids, FA)

Monocidos orgnicos alifticos, tipicamente com cadeias longas cido palmitoleico (16:1) cido oleico (18:2)
cidos graxos relevantes sob o aspecto biolgico tem cadeias carbnicas com nmeros pares de tomos de carbono
cidos Graxos Insaturados (cadeias com uma ou mais duplas ligaes)
cido linoleico (18:2) cido -linolnico (18:3) cido -linolnico (18:3) cido araquidnico (20:4) cido araquidnico (24:1)
... Todas as ligaes duplas so cis
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Estrutura de alguns FA saturados tpicos

Estrutura de alguns FA insaturados tpicos

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cidos Graxos Poliinsaturados (PUFA, Poly-Unsaturated Fatty Acids)

Nomeclatura: carboxila = carbono #1 = ; carbono #2 = ; ... ; ltimo carbono =
cidos Graxos Insaturados transPequenas quantidades de cidos graxos trans podem ser encontradas em TAG de laticnios e carne de animais ruminantes (bovinos) Concentraes altas em gorduras e leos parcialmente hidrogenados disponveis comercialmente
cido Estearidnico (18:4 -3) 18 carbonos, 4 insaturaes conjugadas (todas cis) comeando no 3 carbono a partir do final da cadeia (carbono )
Alguns PUFA -3 e -6, livres ou presentes como constituintes de triacilgliceris (TAG), so nutrientes essenciais para muitos seres vivos
Dietas ricas em TAG com cidos graxos insaturados trans provocam aumento dos nveis plasmticos de colesterol leve (LDL) = maior risco de doenas cardiovasculares e AVC
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TRIACILGLICERIS ou TRIGLICRIDES (Triacylglycerols, TAG) steres de cidos graxos e glicerol (propanotriol)
GLICEROFOSFOLIPDIOS (Glycerophospholipids, GPL) Similares aos TAG, mas com um grupo organofosfato ligado ao carbono 3 do esqueleto de glicerol ao invs de um radical de cido graxo:
Sob o aspecto formal, seriam derivados do cido fosfatdico:
A simple triacylglycerol (UNUNSUAL)
TAG formalmente so constitudos por 3 molculas de cidos graxos esterificados com glicerol, podendo ser lquidos (leos) ou slidos (gorduras) temperatura ambiente ( insaturao e/ou tamanho da cadeia dos FA = ponto de fuso)
Na verdade, os GLP so um subconjunto da famlia dos fosfolipdios (PL)

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GLICEROFOSFOLIPDIOS (Glycerophospholipids, GPL) Similares aos TAG, mas com um grupo organofosfato ligado ao carbono 3 do esqueleto de glicerol ao invs de um radical de cido graxo:
Sob o aspecto formal, seriam derivados do cido fosfatdico:
2 grupos acila (FA)
GLICEROFOSFOLIPDIOS (Glycerophospholipids, GPL) GPL so os blocos de construo essenciais das membranas celulares
fosfato
Na verdade, os GLP so um subconjunto da famlia dos fosfolipdios (PL)

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GLICEROFOSFOLIPDIOS (Glycerophospholipids, GPL) GPL so os blocos de construo essenciais das membranas celulares
Consequncias estruturais da insaturao dos cidos graxos em GPL As cadeias de cidos graxos de GPL e TAG se acomodam mais organizado, rgido e empacotado se elas forem completamente saturadas
LECITINA
As foras intermoleculares so altas, resultando estruturas extremamente rgidas e muito pouco permeveis
Cauda Cabea
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Consequncias estruturais da insaturao dos cidos graxos em GPL Se parte dos fragmentos de cidos graxos no GPL for insaturado cis as cadeias se dobram, impedem empacotamento rgido da membrana e causam desordenamento interno
Croamtografia Gasosa e Lipidmica

GC: tcnica comparativamente mais simples e bem estabelecida, altamente sensvel e robusta porm limitada a analitos com presses de vapor > 0,1 mmHg na temperatura de trabalho
INADEQUADA PARA ANLISE SISTEMTICA DIRETA DE LIPDIOS !!!
Ainda assim, ela extensivamente usada na caracterizao de perfis de distribuio de cidos graxos de TAG e outros lipdios aps metanlise
OR1
OR2
OR3
OH
OH
Foras intermoleculares mais fracas, resultando uma membrana mais permevel: transporte de biomolcular essenciais de e para a clula / organela facilitado
CH2 CH2 CH2 + CH3OH (excesso) catalisador

steres metlicos de cidos graxos (FAME)
CH2 CH2 CH2 + CH3OR1 CH3OR2 CH3OR3
Catalisadores tpicos: BF3, KOH, metxido de sdio, cido sulfrico ...

117
OH
118
Lipidmica GCGC-MS
S. Bogusz Jr. et al.: Phospholipid fatty acid profiling on infants by SPME and comprehensive GC; Anal.Bioanal.Chem no prelo
Lipidmica GCGC-MS
S. Bogusz Jr. et al.: Phospholipid fatty acid profiling on infants by SPME and comprehensive GC; Anal.Bioanal.Chem no prelo A avaliao do estado nutricional pode ser feita pelo perfil de cidos graxos poliinsaturados dos fosfolipdios das membranas celulares Amostra: clulas da mucosa bucal coletadas por frico de um swab no interior da bochecha
Food habits of mother
LOW intake of AA, EPA, DHA
suspenso em soluo isotnica isolamento das clulas por centrifugao descarte da soluo salina
Brest milk intakes Nutritional state
Adequate intake of AA,EPA, DHA
Derivatizao dos cidos graxos nos GPL das clulas = metilao seletiva direta por KOH + MeOH: Clulas intactas
Metilao Seletiva KOH+MeOH
LPME
(200 L isooctano)
Evapora Retoma com 10 L isooctano
GCGC
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20
Lipidmica GCGC-MS
Lipidmica GCGC-MS
Porqu no simplesmente usar GC-MS convencional ????
Resoluo e sensibilidade inadequadas para monitoramento de rotina !!!

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Lipidmica GCGC-MS
COMENTRIOS FINAIS
GCGC ainda uma tcnica relativamente nova (descrita pela primeira vez em 1991, mas os primeiros sistemas e aplicaes realmente prticos apareceram apenas por volta de 1998-2000). Representa o estado-da-arte em Separaes Analticas: no existe tcnica que proporcione simultaneamente a capacidade de separao, sensibilidade e abrangncia de GCGC. Ainda no uma tcnica madura: ainda existe espao para desenvolvimentos fundamentais. Nenhum dos dispositivos atualmente disponveis chega ao desempenho previsto pela teoria. Mesmo assim, certamente sua otimizao e uso e sempre sera mais complexa do que GC convencional, deven ser empregada em casos onde realmente ela trar benefcios.
123
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GCXGC EISEP 2011

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Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

CROMATOGRAFIA GASOSA BIDIMENSIONAL ABRANGENTE (GCGC)

Porque precisaramos de capacidade de separao ainda maior ?

Porque precisaramos de capacidade de separao ainda maior ?

Cromatogramas (GCMS) de extratos de sedimentos marinhos contaminados por petrleo *

Cromatogramas (GCMS) de leo essencial de lavanda (Lavandula angustifolia) *

coluna = 5% fenilmetilsiloxano, 30 m x 0.25 mm x 0.25 um; Tcol: 3 min @ 50 C

* modificado de Frysinger et.al., Environ. Sci. Technol. 2003, 37, 1653

Como aumentar a capacidade de separao em GC ?

Como aumentar a capacidade de separao em GC ?

n = nmero mximo de picos

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

Como aumentar a capacidade de separao em GC ?

IMPRATICVEL: provocar aumento inaceitvel no tempo de anlise !!!!!!

Relao entre Hmin (H nas condies otimizadas de eficincia para o sistema) e dC

EFEITO SOBRE H LIMITADO E/OU

Colunas com dimetro muito pequeno = altssima eficincia !!!

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

Necessidade de injetores especiais Preciso limitada em anlise quantitativa

Presso necessria para = 30 cm s-1 (He) em uma coluna de 25 m dC

Novo Paradigma = Cromatografia Gasosa Multidimensional

Novo Paradigma = Cromatografia Gasosa Multidimensional

Amostra Coluna Primria (1a dimenso)

Amostra Coluna Primria (1a dimenso)

Coluna Secundria (2a dimenso)

Coluna Secundria (2a dimenso)

Novo Paradigma = Cromatografia Gasosa Multidimensional

Amostra Coluna Primria (1a dimenso)

Coluna Secundria (2a dimenso)

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

Determinao de volteis em queijos irradiados por HS-SPME + GC-GC-MS *

Incremento na Capacidade de Pico em GC-GC:

ntotal = n1 n2 CROMATOGRAFIA A capacidade de separao GASOSA incrementada BIDIMENSIONAL GEOMETRICAMENTE ABRANGENTE

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

GCGC: Instrumentao Bsica

GCGC: Instrumentao Bsica

GCGC: Instrumentao Bsica

GCGC: Instrumentao Bsica

Conjunto de colunas (column set) = duas colunas capilares conectadas em srie

GCGC: Instrumentao Bsica

GCGC: Instrumentao Bsica

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)

II Escola de Inverno de Separaes IQ / Unicamp

GCGC: Instrumentao Bsica

Visualizao dos Cromatogramas em GCGC

Visualizao dos Cromatogramas em GCGC

Visualizao dos Cromatogramas em GCGC

* Dallge et al., J. Chromatogr. A 2003, 1000, 69

Existe realmente ganho aprecivel no poder de separao usando GCGC ?

Existe realmente ganho aprecivel no poder de separao usando GCGC ?

~30.000 mil picos detectados em um cromatograma de 60 minutos !!!!

Fabio Augusto (augusto@iqm.unicamp.br) 2010 - 2020

Cromatografia Gasosa Bidimensional (GCGC)