DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E AMBIENTE

Ciclo de Calvin

Jos Gomes-Laranjo

Vila Real, 2009

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1. INTRODUO
"A FOTOSSNTESE o mecanismo mediante o qual se pode garantir que a vida sobre a Terra no chega ao fim por falta de energia" (TEIXEIRA e RICARDO, 1984). Na essncia consiste num processo biossinttico pelo qual as plantas sintetizam compostos orgnicos, a partir de materiais inorgnicos, utilizando a luz como fonte de energia. Pela fotossntese as plantas elaboram compostos orgnicos a partir de formas altamente oxidadas de carbono e hidrognio (na maioria dos casos CO2 e H2O), os quais so reduzidos at ao nvel dos acares. A energia necessria provm, em ltima instncia, da energia radiante absorvida. Os seres clorofilinos constituem a base da pirmide de qualquer cadeia alimentar, pelo que se pode considerar que todos os seres vivos, derivam mais ou menos indirectamente de um nico grupo de compostos carbonados, os ACARES. Estes formam-se nos seres fotossintticos atravs de um conjunto de reaces metablicas denominado CICLO DE CALVIN. O processo recebe a energia qumica formada na cadeia de transferncia de electres, incorporando-a no dixido de carbono recentemente entrado no ciclo, formando-se nova matria orgnica. Em suma, todos os tomos de carbono constituintes da matria viva, so oriundos do CO2 atmosfrico incorporado atravs do CICLO DE CALVIN. So inmeras as designaes que o ciclo de Calvin pode tomar. Em homenagem ao investigador e seus colaboradores que, pela primeira vez conseguiram em laboratrio, acompanhar as interconverses do CO2 fixado via fotossinttica, a rota ficou conhecida como o ciclo de Calvin, ciclo de Calvin-Benson ou ainda ciclo de Calvin-Benson-Bassham (TEIXEIRA e RICARDO, 1984). designam o ciclo como o ciclo redutor dos fosfatos de pentose ou"RPP pathway" pela terminologia em lngua inglesa, usada por FOYER
(1984). TEIXEIRA e RICARDO (1984),

Trata-se, como se ver mais adiante, de uma rota de interconverses biossintticas iniciada pela incorporao de CO2 numa pentose, seguida de reduo do produto resultante, pelo NADPH injectado nesta rota.
SARKEY (1985),

considera o ciclo como "PCRC" (Photosynthetic Carbon Reduction

Cycle),

ou numa forma ainda mais abreviada referida por LORIMER (1981) e RAWN (1989)

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por "PCR", atendendo ao estado de oxidao do carbono no CO2 e no composto orgnico produzido no ciclo. Para ALBERTS et al. (1990), o "carbon-fixation-cycle", omitindo o termo fotossinttico, provavelmente, por ter em considerao que outros organismos no fotossintticos podem fixar CO2, independentemente das reaces da fotossntese. Nesta lio consideraremos apenas o modelo fotossinttico apresentado pelas plantas superiores, i.e., em que a fotossntese leva libertao de O2 e onde o CO2 atmosfrico directamente incorporado no ciclo de Calvin.

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2. O

CICLO DE CALVIN NO PROCESSO FOTOSSINTTICO

Os cloroplastos e as mitocndrias tm a seu cargo a resoluo das necessidades

energticas no interior da clula. Na clula vegetal, embora se encontrem mitocndrias, os cloroplastos so os principais responsveis pelas converses energticas. Aqui tem lugar todo o processo de transformao energtica (fotossntese) que vai desde a captao da energia quntica e sua converso em energia qumica, at ao seu armazenamento em molculas derivadas do CO2 e H2O. O processo fotossinttico desenrola-se em duas grandes etapas (Figura 1):

Figura 1 - Panormica global do processo fotossinttico (adaptado de BERKALOFF et al., 1988).

a) "FASE

CLARA"

- Conjunto de reaces fotofsicas de

captao de energia quntica pelas unidades fotossintticas (PS.I e PS.II) e sua transformao fotoqumica pelos centros de reaco dos fotossistemas (P700 e P680) em energia electrnica destinada a ser usada na cadeia de transferncia electrnica (ESQUEMA EM Z). Ao longo desta cadeia produzida energia qumica potencial na forma de ATP (potencial energtico) e

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NADPH (potencial redutor). A principal limitao desta energia qumica a de ter transporte e armazenamento limitados, sendo, por isso, necessria uma segunda fase (TORRES-PEREIRA, 1984).

b) "FASE

ESCURA" - Conjunto de reaces que, atravs da

incorporao de carbono em elevado estado de oxidao (CO2), e da incorporao da energia qumica criada na "fase clara", vai originar compostos carboxilados com elevado grau de reduo (principalmente acares) de fcil mobilizao ou armazenamento. Esta fase pode ser dividida em trs etapas (COLL, 1980):

b.1) - Incluso de CO2 em determinado composto orgnico; b.2) - Reduo de intermedirios fotossintticos; b.3) - Regenerao de produtos.

As etapas b.2) e b.3) so iguais para todos os organismos fotossintticos, excepto algumas bactrias. A etapa b.1) bastante varivel, conforme o grupo de plantas. Assim, possvel distinguir trs modelos de fixao:

Modelo de fixao em que o CO2 atmosfrico directamente fixado na ribulose-1,5-bifosfato (RuBP) do ciclo de Calvin. o de maior representatividade quanto ao nmero de espcies. o modelo inicialmente descoberto por Calvin, Benson e Bassham. Modelo caracterstico das PLANTAS C3 e ainda algas, cianobactrias e bactrias autotrficas;

Modelo alternativo de fixao no qual o CO2 atmosfrico previamente fixado num cido dicarboxlico, que o transportar at ao ciclo de Calvin. o modelo caracterstico das PLANTAS C4.

Modelo nocturno de fixao e armazenamento de CO2 atmosfrico, para posterior utilizao diurna pelo ciclo de Calvin. o modelo das PLANTAS CAM.

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Deixa-se em suspenso, o problema da falsa dicotomia "fase clara"/"fase clara" que ser abordada no fim da lio. Poder o aluno nesta altura interrogar-se: "No seria mais fcil e mais rpido para as
plantas usarem exclusivamente o ciclo de Calvin"?

No querendo avanar antecipadamente com a resposta, direi apenas, que cada um dos modelos de fixao assume vantagens importantes em "habitats" caractersticos. As plantas do primeiro grupo (plantas C3) tm vantagens em climas temperados, as do segundo grupo (plantas C4) em climas tropicais e as do terceiro grupo (plantas CAM) em climas ridos. O objectivo desta lio, restringe-se somente apresentao do modelo de fixao directa do CO2 atmosfrico na RuBP, ou seja, do modelo de fixao fotossinttica nas
plantas C3.

Enfim, iremos falar das reaces que compom o ciclo de Calvin.

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3. APONTAMENTO HISTRICO
Os primeiros estudos efectuados sobre o metabolismo fotossinttico do CO2 datam de 1938, e foram conduzidos por RUBEN, KAMEN e HASSID na Universidade da Califrnia. Usando CO2 isotopicamente marcado com 11C, utilizando folhas de cevada e suspenses de algas verdes, e recorrendo a tcnicas de cromatografia, tentaram descobrir os compostos em que aparecia o carbono radioactivo. No entanto, as tcnicas da altura no permitiram mais, do que verificar o aparecimento deste carbono num grupo carboxlico (-COOH). Uma grande limitao cifrava-se na curta semivida do 11C, que ao fim de 20 minutos desaparecia (TEIXEIRA e RICARDO, 1984). Este problema ficou solucionado com a descoberta do 14C, cuja semivida de 5.000 anos. Infelizmente a guerra, e a morte de RUBEN num acidente de laboratrio, interromperam estes trabalhos. S mais tarde, em 1946, voltaram a ser retomados por MELVIN CALVIN e seus colaboradores, nomeadamente BASSHAM e BENSON (BENSON e CALVIN, 1950; BASSHAM,
1962 e MEYER, 1983).

Usando tcnicas e materiais como:

- marcao com carbono radioactivo 14C; - tcnicas de cromotografia bidimensional em papel, que permitiam a distino pelas diferenas relativas de solubilidade de compostos muito semelhantes; - tcnicas de autorradiografia, pois como os produtos eram incolores, havia que localiz-los no papel da cromatografia mediante tcnicas especiais. Para isso, colocavam uma folha de papel de raios X sobre o papel de cromatografia durante vrios dias; - suspenses de algas verdes unicelulares Chlorella ou Scenedesmus (de mais fcil fixao), pois era importante controlar-se com preciso o tempo que levava a "matar" (fixar) a planta, posto que j se tinha percebido que o processo era muito rpido e poucos segundos seriam o suficiente para desorganizar todo o quadro de estudo;

aplicadas a trs tipos de experincias baseadas na determinao de:

tempos de exposio variveis; determinao da posio relativa dos 14C fixados nas molculas; alterao de factores externos;

conseguiram chegar forma hoje conhecida do ciclo de Calvin (Figura 2).

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Figura 2 - Forma simplificada do ciclo de Calvin, onde se apresentam os passos chave (adaptado de TEIXEIRA e RICARDO, 1984).

Estes trabalhos valeram a MELVIN CALVIN o Prmio Nobel da Cincia em

1961.

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4. O CICLO DE CALVIN NO CLOROPLASTO

Socorrendo-nos da Figura 1, podemos observar que o conjunto das reaces da "fase clara", ocorre nas membranas tilacides do cloroplasto. A mesma figura revela, que todo o conjunto das reaces metablicas do ciclo de Calvin, se desenrola no estroma (matriz) do cloroplasto.

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5. REACES METABLICAS DO CICLO DE

CALVIN
Um aspecto que mais uma vez desejamos relembrar e realar, que este um ciclo de interconverses de ACARES. No h uniformidade na forma de diviso do processo em etapas. Se para uns so quatro etapas (SALISBURY e ROSS, 1978 e FOYER, 1984), para outros so trs (COLL, 1980; LENHINGER, 1982; TEIXEIRA e RICARDO, 1984 e RAWN, 1989). Enfim, qualquer que seja a diviso, as reaces so sempre as mesmas: varia o critrio de apresentao global do ciclo. A diviso em trs fases parece-nos mais adequada, pois a referida quarta fase no mais do que uma subdiviso da terceira fase:

FASE DE CARBOXILAO - compreende a reaco de fixao do CO2 pelo aceitador, a ribulose-1,5-bifosfato (RuBP).

FASE DE REDUO - grupo de reaces que tm como objectivo o enriquecimento energtico do acar resultante da carboxilao. No final desta fase encontra-se "a porta de sada" do ciclo.

FASE DE REGENERAO DA RuBP - engloba um conjunto de reaes de interconverso que se realizam no sentido de originar novamente o aceitador do CO2.

Por fim, salienta-se que devem ser fixadas trs molculas CO2, antes que uma molcula de acar possa ser exportada do ciclo (ou seja, numa proporo de trs para uma), sem desiquilibrar estequiometricamente as restantes reaces do ciclo, logo so necessrios trs CO2 para que uma volta completa do ciclo se realize (RAWN, 1989).

5.1. FASE DE CARBOXILAO

Foi fcil a identificao por CALVIN e seus colaboradores do primeiro acar formado aps a incorporao do 14CO2. Ao fim de cinco segundos, 90% de todo o 14CO2 fixado, aparecia no acar-cido (de trs carbonos)
CIDO-3-FOSFOGLICRICO

(PGA), 10

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constituindo o grupo carboxlico (como tinha sido verificado por RUBEN) de uma das duas molculas formadas. Os restantes 10% do 14CO2 fixado era encontrado em aminocidos (possivelmente uma rota alternativa). Mais difcil, foi descobrir o composto no qual era fixado o 14CO2. Levou cinco anos, at que se descobrisse que poderia ser um acar de 5C e no 2C, como seria lgico esperar (2C + 1C = 3C). BENSON e
CALVIN (1950)

embora fossem dando conta nos seus trabalhos que eventualmente seria um acar de 2C, faziam-no sempre com fortes reservas. Investigaes subsequentes revelaram que o composto aceitador de CO2 era uma pentose (5C), a RIBULOSE-1,5BIFOSFATO (RuBP), (BASSHAM, 1962).

Com efeito, a RuBP ao receber o CO2 converte-se num composto intermedirio de seis carbonos, extremamente instvel (Figura 3) e rapidamente convertvel, razo pela qual, s muito recentemente se descobriu que, se tratava do 2-CARBOXI-3-CETOARABINITOL-1,5-BIFOSFATO (TEIXEIRA e RICARDO, 1984 e RAWN, 1989).

CH 2 O P CH2 O P C H H C C O OH OH H
*

CH 2 O P CO2 HO C C C
*

C
*

OH

COOH H2 O O

COOH COOH

OH

OH

CH2 O P
Ribulose-1,5-bifosfato (RuBP)

CH 2 O P
2-Carboxi-3-cetoarabinitol-1,5-bifosfato

CH 2 O P
2 x cido-3-fosfoglicrico

(PGA) Figura 3 - Reaco de carboxilao da RuBP, em que o CO2 transformado em carbono orgnico. Pelo facto de se formarem trioses, no seria forosamente necessrio que o composto aceitador tivesse 2 carbonos.

Este composto intermedirio imediatamente hidrolisado, formando-se duas molculas em C3, uma de PGA e outra, que aps sofrer uma dismutao (transformao, por oxidao, do grupo carbonilo em carboxilo), origina a segunda molcula de PGA. No fim desta reaco registamos o ganho de mais um tomo de carbono ligado a um composto orgnico (o PGA). Dado que o primeiro composto estvel formado aps a fixao do CO2 atmosfrico, um composto em C3, chamam-se s plantas que seguem este tipo de fixao, "PLANTAS C3" (TEIXEIRA e RICARDO, 1984; BAZZAZ e FAJER, 1992, entre outros). Em termos estequiomtricos, por cada trs CO2 so necessrios trs RuBP, que vo originar, aps a carboxilao, seis PGA. 11

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Resta referir que esta reaco catalisada pela ribulose-1,5-bifosfato(RuBisCO), uma das protenas mais abundantes no mundo vivo. Uma abordagem, mais completa, sobre a aco desta enzima ser feita frente no ponto 8.4.
carboxilase/oxigenase

Parece-nos importante, nesta fase inicial do ciclo, fazer um parntesis para recordar ao aluno, os tipos de reaces promovidas por algumas classes de enzimas, sobretudo aquelas que entram no ciclo. Ser assim mais fcil perceber qual o tipo de enzima que em determinada altura vai actuar. Em ANEXOS I, poder-se-o consultar figuras demonstrativas, da forma de actuao das classes de enzimas intervenientes no ciclo:
carboxilases, transcetolases, cinases, aldolases e desidrogenases (TORRES-DE-CASTRO, 1987)

5.2. FASE DE REDUO

Como j anteriormente se referiu, o PGA enceta nesta fase um processo de
"enriquecimento energtico",

custa do ATP e NADPH formados na "fase clara" (Figura 4). Com efeito, numa primeira fase, o ATP vai ser necessrio para fornecer a energia extra requerida para a reduo do grupo carboxlico do PGA, formando-se o CIDO-1,3BIFOSFOGLICRICO (ABPG). Esta uma reaco bastante endergnica ( G=+4,5 Kcal/mol). Na segunda fase vai ocorrer a reduo do grupo carboxlico do ABPG (transformado num grupo aldedo) originando GLICERALDEDO-3-FOSFATO (G3P).

Passamos de um acar-cido para uma aldose (bastante mais energtica). Esta reaco , ligeiramente exergnica ( G=-1,5 Kcal/mol) e portanto espontnea (TEIXEIRA e RICARDO, 1984; STRASBURGER, 1988; DARNELL et al., 1990 e RAWN, 1989). O balano lquido desta fase , portanto, positivo, conferindo um carcter bastante endergnico ( G'=+3 Kcal/mol) a esta etapa.

COOH H C OH

ATP

ADP

CH 2 O P H C OH

NADPH

NADP+

CHO H C OH

Pi

CH 2 O P
PGA

COO P
cido-1,3-bifosfoglicrico

CH 2 O P
Gliceraldedo-3-fosfato (G3P)

(ABPG) Figura 4 - Enriquecimento energtico do PGA. O objectivo do ciclo fica cumprido - o armazenamento da energia qumica criada na "fase clara". Nota: Pi = H2PO4-.

A primeira reaco de fosforilao catalisada pela fosfoglicerato-cinase, enquanto a reaco de reduo (a segunda) catalisada pela fosfogliceraldedodesidrogenase.

12

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E eis-nos, nesta altura, perante os mais elevados potenciais energticos que se atingem ao longo do ciclo. portanto, a altura ideal para o aparecimento da "porta de sada" do ciclo, i.e., o momento em que ocorrer a exportao da "nova" energia qumica formada. Das seis trioses fosfato que temos nesta altura, uma ser exportada do ciclo, permanecendo as outras cinco no ciclo, cujas transformaes vamos estudar ao longo da fase de regenerao. O destino da triose exportada, ser estudado mais para a frente, logo depois de completarmos o estudo do ciclo.

5.3. FASE DE REGENERAO

Depois de cumprido o objectivo do processo fotossinttico, i.e., a produo de uma nova forma de energia qumica (transportvel para os tecidos no fotossintticos a fim de assegurar as funes vitais ou, ento, em situaes de excedente, ser facilmente armazenvel, quer nos tecidos de reserva, quer no prprio cloroplasto) mais no resta a este processo, que a sua reorganizao para uma nova carboxilao. Com efeito, atravs de um vasto conjunto de reaces de isomerizao, hidrlise, transcetolizao, transaldolizao e fosforilao; as cinco trioses-fosfato (5C3) converter-se-o em trs pentoses-fosfato (3C5 - Ribulose-5-bifosfato). Dado serem vrias reaces, parece-nos aconselhvel, nesta altura, fornecermos um suporte mais completo (Figura 5) que o fornecido inicialmente (Figura 2), para que, com mais facilidade, o aluno possa abarcar o mecanismo de regenerao.
C3 + C3 C6 C3 + C6 C5 + C4 C3 + C4 C7 C3 + C7 C5 + C5 Global: 5C3 3C5 Figura 5 - Balano carbonado do ciclo de Calvin.

O primeiro passo, trata-se da ocorrncia de uma reaco de isomerizao do G3P. Com efeito, como se pode observar pela Figura 6, a referida reaco consiste numa modificao dos grupos funcionais (isomerizao do grupo funcional), originando o aparecimento de uma cetose a partir de uma aldose. Esta isomerizao apenas protagonizada por duas das cinco trioses-fosfato, implicadas a reconstituio da RuBP. O G3P manter-se- em equilbrio com o seu ismero DI-HIDROXIACETONA-FOSFATO (DHAP).

13

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CHO H C OH

CH 2 OH C O

CH 2 O P
G3P

CH 2 O P
Di-hidroxiacetona-fosfato (DHAP)

Figura 6 - Isomerizao do grupo funcional de uma aldose numa cetose.

Esta reaco catalisada pela triose-fosfato-isomerase. A partir daqui, trata-se de administrar correctamente o emprego das cinco trioses-fosfato (G3P e DHAP) que vamos considerar, por hiptese, que se encontram num "reservatrio". Numa primeira e brevssima anlise da fase de regenerao podemos verificar, na Figura 5, a seguinte evoluo da estrutura carbonada dos compostos intervenientes:
a) Por condensao, duas molculas em C3 originam uma em C6; b) esta molcula em C6 com outro em C3 d origem a uma em C4 e uma em C5; c) a molcula em C4 condensa-se com nova em C3 dando uma em C7; d) esta molcula em C7 com outra em C3 origina duas em C5.

molculas em C3 originam 3 molculas em C5

Passemos agora a uma anlise em pormenor: o processo de regenerao, comea por ir ao "reservatrio" buscar duas trioses-fosfato (1G3P + 1DHAP), as quais iro sofrer um processo de condensao (Figura 7). Acabou de se formar a FRUTOSE-1,6-BIFOSFATO (FBP), que uma cetose. Chama-se a ateno para o facto de esta condensao (e as outras), ser feita entre uma aldose e uma cetose, e no entre duas aldoses ou duas cetoses. Esta reaco catalisada pela aldolase.

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CH 2 O P C O

HOCH
G3P

DHAP

HCOH H C OH

CH 2 O P
Frutose-1,6-bifosfato (FBP)
Figura 7 - Reaco de condensao para formaco de uma hexose do grupo das cetoses.

De seguida, atravs de uma hidrlise a FBP vai perder um grupo fosfato (Figura 8), numa reaco catalisada pela frutose-1,6-bifosfatase. O novo composto formado a FRUTOSE-6-FOSFATO (F6P).
CH 2 OH C
FBP

HOCH
H2 O

HCOH H C OH

Pi

CH 2 O P
Frutose-6-fosfato (F6P)
Figura 8 - Subtraco de um grupo fosfato FBP.

Para a reaco seguinte, preciso mais uma triose-fosfato que temos em reserva (a terceira). A F6P (cetose) e a aldose G3P vo sofrer uma transcetolizao (Figura 9), formando-se
XILULOSE-5-FOSFATO (Xu5P)

ERITROSE-4-FOSFATO (E4P).

Para

que esta reaco ocorra necessria a presena de uma transcetolase. Nesta converso a tiamina-pirofosfato (TPP) actua como cofactor implicado na transferncia do grupo C2 da F6P para o G3P.

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CH2 OH CHO C O

F6P

TPP, Mg G3P

2+

HCOH HCOH CH2 O P

HOCH

HCOH CH 2 O P
Xilulose-5-fosfato (Xu5P)

Eritrose-4-fosfato (E4P)

Figura 9 - Reaco de transcetolizao entre F6P e G3P, originando mais uma aldose e uma cetose.

Com esta reaco forma-se a primeira das trs pentoses-fosfato necessrias o restabelecimento do equilbrio estequiomtrico do ciclo. Vamos deix-la por enquanto, retomando o processo com a E4P que, uma aldose com quatro carbonos. Nova condensao ocorre nesta fase. tetrose vai juntar-se uma DHAP oriunda da reserva (a quarta), para se formar a SEDO-HEPTULOSE-1,7-BIFOSFATO (SHBP).

Esta condensao catalisada pela sedo-heptulose-1,7-

bifosfato-aldolase

(Figura 10).

CH 2 O P C O

HOCH HCOH
E4P

DHAP

HCOH HCOH CH2 O P

Sedo-heptulose-1,7-bifosfato (SHBP)

Figura 10 - Reaco de condensao para formao da heptose SHBP.

De seguida a SHBP, atravs de uma hidrlise catalisada pela sedo-heptulose-1,7bifosfatase,

transforma-se em SEDO-HEPTULOSE-7-FOSFATO (SH7P), libertando o grupo fosfato que se encontra ligado ao C1 (Figura 11).

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CH 2 OH C O

HOCH
SHBP

HCOH
H2 O

HCOH HCOH CH 2 O P
Sedo-heptulose-7-fosfato (SH7P)

Pi

Figura 11 - Hidrlise da SHBP.

Uma ltima transcetolizao (Figura 12) ocorre. Enfim, gasta a ltima triosefosfato do "reservatrio", numa reaco catalisada pela transcetolase, formando-se as duas ltimas pentoses: uma Xu5P e uma RIBOSE-5-FOSFATO (R5P). CHO
TPP, Mg G3P
2+

HCOH HCOH HCOH CH2 O P

Ribose-5-fosfato (R5P)

SH7P

Xu5P

Figura 12 - Transferncia de um grupo C2 da SH7P para o G3P e consequente formao das duas ltimas pentoses.

Finalmente, alcanaram-se as trs pentoses que referimos, no incio como meta do processo. A etapa de regenerao vai agora prosseguir, com simples reaces de isomerizao, para dar a forma adequada a estas trs pentoses-fosfato. Relativamente s duas xilulose-5-fosfato, tero que sofrer uma epimerizao (rotao de um carbono assimtrico). Esta reaco catalisada pela ribulose-5-fosfatoepimerase (Figura 13). Esto regeneradas a primeiras duas RIBULOSE-5-FOSFATO.

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CH 2 OH C O

CH 2 OH C O

HOCH HCOH CH 2 O P
Xilulose-5-fosfato (Xu5P)

HCOH HCOH CH2 O P

Ribulose-5-fosfato (Ru5P)

Figura 13 - Formao da ribulose, atravs da epimerizao da Xu5P.

Falta a R5P, que ir passar de aldose a cetose por isomerizao do seu grupo funcional, numa reaco catalisada pela ribose-5-fosfato-isomerase (Figura 14). CHO HCOH HCOH HCOH CH2 O P
Ribose 5-fosfato (R5P)
Figura 14 - Transformao de uma aldose numa cetose.

CH2 OH C O

HCOH HCOH CH 2 O P
Ribulose 5-fosfato (Ru5P)

falta a etapa de fosforilao (Figura 15), considerada por alguns autores (COLL, 1980 e FOYER, 1984), j como uma pr-fase da carboxilao (Figura 3). Esta fosforilao catalisada pela Ribulose-fosfato-cinase

Por ltimo,

CH2 O P C
Ru5P

ATP

HCOH HCOH CH2 O P

Ribulose-1,5-bifosfato (RuBP)

ADP

Figura 15 - Formao final das trs RuBP.

18

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Recapitulando:

3 molculas de CO2 so fixadas por 3 molculas de ribulose-1,5-bifosfato (RuBP: 3 x 5 = 15 tomos de carbono), produzindo 6 molculas de cido-3-fosfoglicrico (PGA: 6 x 3 = 18 tomos de carbono). Esta reaco catalisada pela ribulose-1,5-bifosfato-carboxilase/oxigenase (RuBisCO). A cada molcula de cido-3-fosfoglicrico (PGA), -lhe adicionado potencial energtico (6 ATP) e redutor (3 NADPH), transformando-a em gliceraldedo-3-fosfato (G3P: 6 x 3 = 18 tomos de carbono). Daqui preciso retirar os carbonos necessrios (15 tomos de carbono) para regenerar 3 novas molculas de RuBP, pelo que sobram 3 tomos de carbono, o correspondente a uma molcula de G3P. Este G3P (ou DHAP, o seu enantemero) o ganho lquido de matria orgnica por cada volta. E assim fica cumprido o objectivo do ciclo, criar um tipo diferente de energia qumica (transportvel e armazenvel), a partir da originada na "fase clara". Isto tudo, pode ser observado na Figura 16.

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Acrnimos: RuBP- Ribulose-1,5.bifosfato PGA- cido-3-fosfoglicrico ABPG- cido-1,3-bifosfoglicrico G3P- Gliceraldedo-3-fosfato DHAP- Di-hidroxiacetona-3-fosfato FBP- Frutose-1,6-fosfato F6P- Frutose-6-fosfato E4P- Eritrose-4-fosfato Xu5P- Xilulose-5-fosfato SHBP- Sedo-heptulose-1,7-bifosfato SH7P- Sedo-heptulose-7-fosfato R5P- Ribose-5-fosfato ATP- Adenosina-trifosfato NADP- Nicotinamida-adenina-dinucleti- do-fosfat

Figura 16 - O ciclo de Calvin (adaptado de RAWN, 1989).

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ciclo de calvin21

6. BALANO ENERGTICO
Estamos agora em condies de efectuarmos o balano energtico do conjunto das reaces do ciclo.

Assim:

3 RuBP + 3 CO2 + 9 ATP + 6 NADPH + 6 H+ + 5 H2O

3 RuBP + 1 triose-fosfato + 9 ADP + 9 Pi + 6 NADP+

so necessrias 2 voltas:

6 RuBP + 6 CO2 + 18 ATP + 12 NADPH + 12 H+ + 10 H2O

6 RuBP + 1 glucose + 18 ADP + 18 Pi + 12 NADP+

ENERGIA QUMICA

Energia solar

Em resumo:

:
Consumo de 3 ATP + 2 NADPH

:
Consumo de 18 ATP + 12 NADPH

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ciclo de calvin22

7. DESTINO
EXPORTADA

FINAL

DA

TRIO-SE-FOSFATO

Coloquemo-nos novamente na "porta de sada" do ciclo. Convm aqui salientar o sentido figurado do termo "porta de sada", uma vez que todo o ciclo ocorre no estroma e no h evidentemente uma porta de sada, no sentido restrito da palavra. Acontece que, para que todo o ciclo se desenrole, necessrio a existncia no meio, de propores mnimas dos vrios intermedirios. Dessa forma "por

cada volta", haver entre as molculas de G3P e DHAP uma molcula excedentria, no reciclvel. Vamos ver qual o destino da triose-fosfato.
O fim destinado triose-fosfato subtrada ao ciclo, em grande parte a entrada na constituio de outros acares mais complexos SACAROSE (acar de transporte) e
AMIDO

(acar de reserva). Em menor proporo, a partir de outros intermedirios do

AMINOCIDOS, CIDOS CARBOXLICOS

ciclo, a entrada noutras rotas biossintticas de

CIDOS GORDOS (COLL, 1980).

Em algumas plantas (v.g. Rosaceas lenhosas) em lugar da sacarose predomina o

SORBITOL,

ao passo que noutras a

RAFINOSE

o principal oligossacrido de transporte

(FOYER, 1984).

7.1. UMA FRONTEIRA ENTRE O CLOROPLASTO CITOPLASMA DA CLULA - BREVE REVISO.

Dado que alguns importantes processos metablicos derivados do ciclo ocorrem no citoplasma, o invlucro desempenha importante papel na regulao das trocas. imprescindvel um adequado conhecimento dos mecanismos de transporte existentes ao nvel da membrana interna do invlucro (a principal barreira), que interfiram nas trocas dos produtos do ciclo. Embora este assunto tenha j sido abordado em aulas anteriores, parece-nos oportuno relembrar algumas noes bsicas relacionadas com este ponto. Julgamos, ser assim mais fcil, compreender as converses moleculares existentes ao nvel deste organito, com vista sada de certas molculas, nomeadamente a nova energia qumica criada. Sendo o cloroplasto uma das centrais energticas da clula, bvia a necessidade de exportao de energia para as partes no produtoras (tecidos no 22

ciclo de calvin23

fotossintticos). Esta exportao deve ser facilitada ao mximo, mas ao mesmo tempo deve ser rigorosamente controlada, para que o cloroplasto no perca a sua identidade, comprometendo as suas funes. A
MEMBRANA EXTERNA

do invlucro, no constitui propriamente uma barreira,

na medida em que permite a difuso de todas as molculas at um peso molecular de

aproximadamente 8.000 daltons, como por exemplo sacarose, intermedirios do ciclo como ATP, NADPH (FOYER, 1984).

MEMBRANA INTERNA

apresenta, por conseguinte, uma permeabilidade muito

selectiva. Tem muito baixa permeabilidade a molculas com carga ou molculas com peso molecular superior a 200 daltons. Por isso, molculas como ATP, NADPH, PPi, Pi, HCO3-, compostos intermedirios do ciclo e outras macromolculas, no passam por difuso passiva, ou fazem-no a muito baixa velocidade. Tem permeabilidade para molculas sem carga, de baixo peso molecular (menor que 200 daltons), como a H2O, O2 e CO2 que entram por difuso passiva (DOUCE, 1977; HEBER e HELDT, 1981 e FOYER, 1984). A membrana interna, possui tambm um tipo de difuso facilitada (para algumas pequenas molculas com carga), efectuada com o recurso a translocadores: o
TRANSLOCADOR FOSFATO

e o

TRANSLOCADOR CARBOXLICO (FOYER, 1984; TEIXEIRA e

RICARDO, 1984).

Para esta lio tem interesse rever o translocador fosfato, porque o que est directamente envolvido com os intercmbios de trioses-fosfato do ciclo de Calvin entre o estroma e o citoplasma da clula.

7.1.1. O translocador fosfato

Mecanismo de natureza proteica, codificado pelo DNA nuclear, tem um peso molecular de cerca de 30.000 daltons, representando cerca de 10% do teor em protena da membrana interna, FLGGE e HELDT (1991). Este mecanismo, funcionando como uma espcie de "roda dentada", possibilita um conjunto de trocas equimoleculares (uma por uma) de G3P, DHAP e PGA com o fosfato inorgnico (Figura 18) (FOYER, 1984; TEIXEIRA e
RICARDO, 1984).

Com base neste translocador funciona um sistema de transporte indirecto - a

"lanadeira" PGA/DHAP que permite colocar equivalentes de reduo (NADPH) e ATP no citoplasma a expensas do cloroplasto (Figura 17). Tambm pode funcionar inversamente
colocando no cloroplasto as mesmas formas de energia, no caso de fazer falta para assegurar a manuteno das suas actividades vitais durante a noite.

23

ciclo de calvin24

Figura 17 - Funcionamento da "lanadeira" PGA/DHAP acoplada ao translocador fosfato. Notar a libertao de ATP e NADH no citoplasma (adaptado de FOYER, 1984).

A "lanadeira" capaz de assegurar que trioses-fosfato s sejam exportadas para o citoplasma, quando estiver a ocorrer a sua mobilizao activa para a rota de sntese da
SACAROSE,

libertando fosfato inorgnico (Pi), que funciona como composto

regulador deste processo. A reciclagem do Pi do citoplasma para o cloroplasto importante para a continuidade da fotofosforilao. Se a rota da sacarose estiver saturada, no se liberta tanto Pi, pelo que as trioses-fosfato ficaro retidas no cloroplasto (o translocador no pode funcionar), entrando para a rota de sntese do
(FOYER, 1984; TEIXEIRA e RICARDO, 1984).
AMIDO PRIMRIO

7.2. A SNTESE DE SACAROSE E AMIDO A PARTIR DE TRIOSESFOSFATO

Em condies de boa luminosidade a sacarose e o amido so os principais produtos da fixao fotossinttica do CO2. A exportao de acares para o citoplasma d-se sob a forma fosforilada onde podero ser utilizados, em primeiro lugar, para suprir necessidades energticas da clula e, o remanescente, transformado em formao de mais biomassa (Figura 18). A sacarose s se forma no citoplasma das clulas, no ocorrendo a sua sntese no estroma do cloroplasto. 24
SACAROSE.

Com

efeito, este dever ser o principal destino dos produtos da fotossntese, necessrios

ciclo de calvin25

A triose-fosfato originar F6P e glucose que, na forma activada de

DIFOSFOGLUCOSE (UDP-G)

URIDINA

produziro

SACAROSE-FOSFATO,

por aco da sacarose-fosfato-

sintetase: F6P

+ UDP-G

sacarose-P + UDP + PPi

donde, por aco da fosfatase: sacarose-P A

SACAROSE

sacarose + Pi

possui algumas caractersticas especiais que lhe permitem

desempenhar as funes de transporte (FOYER, 1984):

um dissacrido

constitudo

por

glucose

frutose

(a-D-glucopiranosilo--D-

frutofuransido); uma molcula sem carga no possuindo propriedades redutoras, pelo que a sua passagem no provocar interaces com grupos funcionais de outras molculas; muito solvel, podendo acumular-se em concentraes considerveis, sem causar inibio aos outros processos metablicos; facilmente hidrolisvel por cidos muito diludos ou pela enzima invertase, originando glucose e frutose. A ruptura desta ligao glicosdica fornece uma energia livre de -7,0 Kcal/mol (a maior parte das outras ligaes glicosdicas tm energias muito inferiores); um regulador da presso osmtica e das relaes hdricas na planta; Tem fcil difuso atravs das membranas biolgicas, movendo-se a uma velocidade de 0,5 a 1,0 m.h-1 no floema.

25

ciclo de calvin26

Figura 18 - Principais rotas das trioses-fosfato exportadas do ciclo.

A sacarose transporta a energia fotossinttica, atravs dos vasos condutores, a todas as partes da planta alcanando, em ltima instncia, os rgos de reserva (Figura
18),

onde se vai acumular sob a forma de amido o AMIDO DE RESERVA (STRASBURGER,

1989).

Outra importante via aquela que se processa, quando a taxa de produo de trioses-fosfato, excede a capacidade de mobilizao do cloroplasto. Neste caso, o excesso (at 30% dos produtos da fotossntese) canalizado para uma rota biossinttica de amido que ocorre no estroma (Figura 18). o chamado
AMIDO PRIMRIO

ou de

assimilao (polmero de glucose). uma forma de reserva temporria, que impede uma eventual inibio do processo fotossinttico, bem como um perigoso aumento da presso osmtica do estroma por excesso de trioses-fosfato. O comando da direco da sntese para a produo de sacarose ou amido centra-se no efeito regulador exercido pelo Pi ao nvel do translocador fosfato (CRAFTS-BRANDNER, 1992). O processo de sntese para o amido (primrio e reserva) idntico ao da sacarose at formao da glucose-1-fosfato. A partir daqui: 26

ciclo de calvin27

Glucose-1-fosfato + ATP

ADP-glucose + PPi

A reaco catalisada pela ADP-glucose pirofosforilase, sendo este passo um dos pontos de regulao deste processo. Requer Mg2+ para o seu funcionamento. activada pelo aumento da concentrao de PGA e F6P e inibida pela diminuio de Pi (FOYER, 1984;
TEIXEIRA e RICARDO, 1984).

Logo que as rotas de exportao de trioses-fosfato deixem de estar saturadas (normalmente noite), inicia-se o processo de remoo do amido primrio, para fornecer energia necessria a todas estruturas celulares e canalizar os excedentes para os rgos de reserva. O processo comea por uma hidrlise deste, formando-se novamente as trioses-fosfato, que seguiro ento o percurso normal.

Smula:

O cloroplasto tem necessidade de exportar os produtos recm formados no ciclo de Calvin, a fim de levar a energia fotossinttica s partes no verdes da planta. A membrana interna do cloroplasto, constitui uma barreira extremamente selectiva s trocas de materiais com o citoplasma, sendo um garante da individualidade do cloroplasto. Os translocadores fosfato asseguram, em volume adequado, as trocas necessrias de trioses-fosfato destinadas formao de sacarose (acar de transporte). H no cloroplasto, um sistema de armazenamento temporrio de trioses sob a forma de amido primrio, que ocorrer nas situaes em que a capacidade de produo fotossinttica exceda a capacidade de exportao.

27

ciclo de calvin28

8. REGULAO ENZIMTICA DO CICLO DE

CALVIN
O ciclo de Calvin fundamentalmente controlado pela luz, pelo que no escuro nfima a fixao de CO2, ou mesmo nula. A regulao levada a cabo pela luz por aco de dois tipos de mecanismos
(COLL, 1980; RAWN, 1989 e CHUECA, 1991):

Atravs da fotomodulao de enzimas chave do ciclo, sobretudo as das etapas irreversveis do ciclo; - Via tiorredoxina; - Pelo pH e Mg2+ do estroma.

Atravs do fluxo electrnico, que controla o fornecimento de NADPH e ATP, necessrios para fixao de CO2 interferindo tambm nas concentraes dos diferentes intermedirios.

8.1. REDUO DAS PONTES BISSULFETO

O mecanismo de regulao efectuado pela luz, via tiorredoxina, idntico para todas as enzimas controladas por este processo (COLL, 1980; DIETZ e HEBER, 1984 e RAWN,
1989):

Gliceraldedo-3-fosfato-desidrogenase; Frutose-bifosfatase; Sedo-heptulose-bifosfatase; Ribulose-5-fosfato-cinase.

Como bem conhecido, a estrutura terciria das protenas bastante frgil, pelo que bastaro pequenas modificaes no meio, para que isso se reflicta na sua conformao estrutural.

28

ciclo de calvin29

Durante a activao efectuada pela luz, as pontes bissulfeto establecidas entre os

resduos das enzimas sulfuradas da superfcie das enzimas inactivas, so reduzidas a grupos sulfidrilo.

Esta reduo vai ser responsvel por alteraes ao nvel da estrutura terciria das enzimas, induzindo a sua actividade. O estado de inactividade novamente atingido pela reoxidao destes grupos. A fonte de electres para as redues vem, em ltima anlise, da gua (Figura
19).

Com efeito, a absoro de energia radiante pelos pigmentos antena das unidades

fotossintticas e a sua transformao fotoqumica pelos centros de reaco dos fotossistemas (P700 e P680) em energia electrnica, destina-se a ser usada na cadeia de transferncia electrnica, cujos electres so oriundos da fotlise da gua. Este facto, vai levar a um aumento da concentrao dos intermedirios da cadeia, nomeadamente de ferrredoxina reduzida. Precisamente neste passo, h um desvio de electres, da cadeia para a
TIORREDOXINA,

uma protena de baixo peso molecular. Esta reaco catalisada

pela ferredoxina-tiorredoxina-reductase.

Figura 19 - Reduo das pontes bissulfeto ocorrida em certas enzimas do ciclo de Calvin.

A tiorredoxina reduzida, transfere o poder redutor para as pontes bissulfeto, activando a formao de grupos sulfidrilo (-SH) (COLL, 1980 e RAWN, 1989).

8.2. MODULAO PELO Mg2+ E PELO pH

H algumas enzimas do ciclo cuja entrada em actividade depende da existncia
de Mg2+ do estroma e pH alcalino (COLL, 1980 e RAWN, 1989):

Ribulose-1,5-bifosfato-carboxilase/oxigenase (RuBisCO); Frutose-bifosfatase;

29

ciclo de calvin30

Sedo-heptulose-bifosfatase; Fosfoglicerato-cinase.

Na presena de luz, h um bombeamento de protes do estroma para o lmen dos tilacides, gerando um gradiente indispensvel fotofosforilao. Com o fim de manter o equilbrio electrosttico, idnticas quantidades de cargas positivas passam para o estroma atravs do Mg2+. Como consequncia destas trocas, advm um empobrecimento do estroma em H+ e concomitante alcalinizao e enriquecimento em
Mg2+.

8.3. REGULAO ESTEQUIOMTRICA

Deve ter-se em conta, os efeitos estequiomtricos exercidos sobre a actividade das enzimas, tanto pelo ATP, como pelo NADPH, como por alguns intermedirios do ciclo. Com efeito, na presena de luz, h maiores concentraes de ATP, NADPH e de intermedirios do ciclo, nomeadamente a RuBP. Este facto, induzir a um maior ou menor grau de actividade das enzimas envolvidas. Se a concentrao de Pi no estroma fr muito baixa, pode vir a limitar a taxa de formao de ATP pelo que, a relao PGA/Pi, desempenha um importante papel como elemento regulador do ciclo. Se o valor da relao fr alto, sinal da existncia de pouco
Pi

no estroma, ocorrer um efeito alostrico de activao da ADP-glucose-pirofosforilase

(enzima implicada na formao de amido no estroma), para evitar a sada de mais fosfato do cloroplasto. O CO2 tem uma aco mais independente da luz, exercendo regulao ao nvel da velocidade de carboxilao em funo da sua concentrao (COLL, 1980 e HUDSON et
al., 1992).

A reter:
A luz exerce um efeito regulador, a vrios nveis, das enzimas do ciclo de Calvin: De uma forma mais directa, atravs do mecanismo da reduo das pontes bissulfeto. De uma forma mais indirecta atravs do aumento do pH e da concentrao de Mg2+ no estroma e pelo efeito estequiomtrico de alguns compostos presentes no estroma.

30

ciclo de calvin31

8.4. CARACTERIZAO MODULATIVA DA RUBISCO

8.4.1. Importncia biolgica da enzima
Aparecendo frequentemente com a designao de RuBisCO, a enzima que catalisa a reaco de carboxilao no ciclo. Alm desta actividade, promove tambm, de forma competitiva, a oxigenao da RuBP para a fotorrespirao. Encontra-se normalmente no estroma, podendo tambm aparecer associada quer s membranas tilacides, quer membrana interna do invlucro cloroplstico. Nas plantas superiores pode alcanar 50-65% da protena total solvel (300 mg.ml-1) de um extracto de folhas (FOYER, 1984; STRASBURGER, 1990 e RAWN, 1989). Estes valores s podem ser tomados como um indicador geral do grau de presena desta enzima nas folhas, dado que, de facto, h alguma variao. Assim as folhas mais expostas ao sol possuem mais enzima que as menos expostas, o mesmo acontecendo com as plantas em C3 relativamente s C4 e CAM. As plantas C3 tm maior afinidade para o CO2 que as C4 e CAM, presumivelmente por estas ltimas possuirem um sistema de bombeamento do CO2 para a vizinhana da RuBisCO, tornando esta enzima mais "preguiosa" (FOYER, 1984). A RuBisCO a protena mais abundante na natureza, o que no de estranhar, tendo em conta a biomassa formada pelos seres fotossintticos (BERKALOFF, 1988 e RAWN, 1989).

8.4.2. Substratos para a RuBisCO

Juntamente com a RuBP, os outros substratos da RuBisCO so o CO2 e o O2. Relativamente ao CO2 h que sublinhar a selectividade por este, em detrimento do HCO3-. Com efeito, estas duas formas carbonadas inorgnicas (em elevado grau de oxidao) encontram-se em equilbrio no meio celular, como se pode verificar pela Figura 20:

Substrato para a RuBisCO CO2 gasoso

+ -

CO2 dissolvido + H

2O

H + HCO 3

Figura 20 - Reaces de equilbrio entre o CO2 e o HCO3- (adaptado de STRASBURGER, 1990).

31

ciclo de calvin32

Esta reaco catalisada pela cido carbnico-anidratase ao nvel da interconverso CO2 e HCO3-. O ponto de equilbrio depende do pH do meio
(STRASBURGER, 1990).

Sabe-se tambm que a membrana interna do cloroplasto -, como j foi dito. impermevel ao HCO3 Segundo COOMBS (1987), RAWN (1989) e STRASBURGER (1990) a afinidade da

RuBisCO

(traduzida por uma constante, designada constante de Michaelis-Menton que,

ser tanto maior quanto menor fr a afinidade da enzima para o substrato) para os seus substratos a seguinte:

RuBP: Km = 20 - 50 M;

CO2: Km = 12 - 25 M;

O2: Km = 250 M.

8.4.3. Estrutura molecular

Nos eucariota, o peso molecular desta enzima de aproximadamente 500.000550.000

daltons (FOYER, 1984; BERKALOFF, 1988; RAWN, 1989 e STRASBURGER, 1990). Relativamente sua estrutura (Figura 21), sabe-se hoje, que composta no seu

nvel estrutural quaternrio, por 8 unidades grandes (L: 56.000 daltons) mais 8 unidades pequenas (S: 14.000 daltons). Esta forma de enzima (8L8S) chamada de T enzima
(FOYER, 1984 e KNAFF, 1989).

Figura 21 - Estrutura molecular da RuBisCO. Associao das unidades grandes e pequenas (adaptado de COOMBS, 1987).

32

ciclo de calvin33

Em alguns procariota (v.g. Chlorobium thiosulphatophilum), pode encontrar-se uma outra forma de enzima, s possuindo unidades grandes (6L) qual MC FADDEN, citado por FOYER (1984), chamou O enzima. Dada a maior importncia da T enzima, propomo-nos por isso fazer uma breve abordagem a esta forma. A sntese das unidades grandes ocorre no estroma sendo da responsabilidade do
DNA

cloroplstico e dos plastorribossomas (70S). A sntese das unidades pequenas da

responsabilidade do DNA nuclear e dos ribossomas citoplasmticos (80S) que sintetizam tambm um precursor adicional (de peso molecular aproximadamente 5.000 da) para assegurar a translocao atravs do invlucro do cloroplasto (FOYER, 1984 e COOMBS,
1987).

Cada unidade grande possui um centro activo, responsvel pela carboxilao pelo que, cada molcula de RuBisCO possui 8 centros activos. A funo das unidades pequenas julga-se que seja de regulao e de estabilizao estrutural dos centros catalticos da molcula (MIZIORKO e LORIMER, 1983 e FOYER, 1984).

8.4.4. Mecanismo de activao

O processo de activao relativamente lento, sendo regulado pelo pH, Mg2+ e intervindo tambm o CO2. O pH do estroma deve situar-se entre 7-8,5 para que se desencadeie o processo de activao (Figura 22), condies s possveis, em presena de luz. Ento, uma molcula de CO2 vai ligar-se ao grupo amino de um resduo de lisina da superfcie do stio activo da enzima, formando-se um grupo
CARBAMATO.

Esta

reaco, como se pensava at h algum tempo, no espontnea. Necessita de ser catalisada pela RuBisCO-activase, que, por sua vez, precisa de ATP (ROBINSON et al., 1988;
KNAFF, 1991; LAN e MOTT, 1991).

uma etapa relativamente lenta, podendo demorar

segundo FOYER (1984), cerca de 1 minuto ou mais.

33

ciclo de calvin34

H Enz-Lys-NH
3 +

(inactiva)

Enz-Lys-NH

(inactiva)

lento (inactiva) Enz-Lysrpido Enz-Lys-NH

CO2 + H
-

RuBisCO activase

NHCOO (grupo carbamato) Mg

++

COO Mg RUBP
-

++

(activa)

2 PGA

Enz-Lys-NH

COO Mg

++

RUBP

CO 2

Figura 22 - Mecanismo de activao da RuBisCO. Envolve uma primeira complexao com CO2 e depois com Mg2+, para finalmente se poder ligar devidamente aos substratos (adaptado de COOMBS, 1987).

A activao da enzima finalmente conseguida com, a reaco do grupo carbamato com o Mg2+. Est formado o chamado "complexo ternrio" Enzima-CO2-Mg2+, pronto a complexar-se com os seus substratos (RuBP e CO2 ou O2) (TEIXEIRA e RICARDO,
1984; FOYER, 1984; PIERCE, 1986 e RAWN, 1989).

necessria grande quantidade de enzima no estroma, para assegurar razoveis taxas de fixao de CO2, pois a enzima tem uma taxa de renovao relativamente lenta
(FOYER, 1984 e COOMBS, 1987).

A capacidade mxima de fixao de CO2, por cada stio

cataltico e por minuto, segundo este autor, de aproximadamente 200 molculas.

8.4.5. A duplicidade carboxilativa/oxidativa

A RuBisCO uma enzima bifuncional que tanto pode catalisar a reaco de
carboxilao como a de oxigenao, da RuBP.

Estas duas reaces usam o mesmo centro cataltico, sendo por isso
COMPETITIVAS

(Figura 23).

A carboxilao da RuBP origina 2 molculas de PGA.

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ciclo de calvin35

cido Fosfogliclico

CH2 O P O2 CH2 O P C O Mg2+ H Mg2+ CO2 , H 2 O

RuBP

COOH

FOTORRESPIRAO

COOH C OH
FOTOSSNTESE

HCOH HCOH CH2 O P

PGA

CH 2 O P COOH

OH

CH2 O P
Figura 23 - Reaces catalisadas pela RuBisCO (adaptado de JENSEN e BAHR, 1977).

A oxigenao da RuBP, conduz produo de uma molcula de PGA e outra de fosfoglicolato, i.e., guia o processo para a chamada FOTORRESPIRAO. Ser conveniente relembrar o menor rendimento energtico desta funo oxigensica, que ser objecto de estudo em aula prxima. Limitar-nos-emos, a fazer um balano das "preferncias" da enzima por um ou outro substrato no caso das plantas C3. Apesar de a afinidade ser bastante mais elevada para o CO2 (Km=12-25 M) do que para o O2 (Km=250 M), verifica-se que ambos contribuem de forma significativa para a actividade da enzima (RAWN, 1989; COOMBS, 1987 e STRASBURGER, 1990).
Perguntar-se- porqu?!

A explicao reside no facto de a concentrao atmosfrica de O2 (cerca de

21%)

ser muito maior que a de CO2 (cerca de 0,035%), pelo que, a relao CO2/O2 do meio

determinante para a via a ser catalisada pela RuBisCO (RAWN, 1989 e STRASBURGER,
1990).

Em condies normais, a relao carboxilao/oxigenao oscila entre 3:1 e 4:1

(RAWN, 1989).

A possibilidade de se vir a conhecer com mais exatido a eficincia carboxilativa, e porventura vir a melhor-la modificando a afinidade relativa da RuBisCO para o CO2 e CO2, tem sido objecto de numerosos estudos (HUDSON et al., 1992 e ZHU et al.,
1992).

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ciclo de calvin36

A terminar, refora-se uma vez mais, a ideia do duplo papel do CO2, como
regulador e como substrato.

Resumo:
De entre todos os factores de regulao do ciclo, sobressai a RuBisCO, a enzima que catalisa a reaco de carboxilao no ciclo de Calvin. activada por condies de pH alcalino e elevada concentrao de Mg2+ no estroma, que promovem a carbamilao da enzima, reaco que catalizada pela RuBisCO-activase. O estdio final de activao alcanado pela complexao com o Mg2+. A RuBisCO tanto pode catalisar uma reaco de carboxilao como alternativamente uma reaco de oxidao da RuBP.

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ciclo de calvin37

9. A

FALSA DICOTOMIA CLARA"/"FASE ESCURA""

perceber que, efectivamente, no h uma fase que se realize de dia e outra de noite.

"FASE

Depois da leitura atenta dos captulos precedentes, estamos em condies de

O estudo dos mecanismos de regulao, mostrou-nos que, na realidade, uma fase precisa tanto de luz como a outra. A diferena estar em que a chamada "fase

clara" necessita da luz de forma directa a cadeia de transferncia de electres (esquema

em Z). J a segunda fase necessita da luz de uma forma indirecta, dado que so as condies do meio favorecidas pela presena de luz, que vo influenciar a actividade das enzimas, logo o desenrolar do ciclo.

Conceito a reter:

incorrecta a diviso da fotossntese nas clssicas "fase clara"/"fase escura", na medida em que ambas necessitam de luz para ocorrerem. A dita "fase escura" necessita da luz pois parte das enzimas que aqui intervm so moduladas indirectamente pela luz via tiorredoxina; ou via pH, CO e Mg2+.
2

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ciclo de calvin38

10. BIBLIOGRAFIA
ALBERTS, B. D.BRAY, J.LEWIS, M.RAFF, K.ROBERTS e J.D.WATSON (1990). Molecular biology of the cell, 2 edio. Garland Publishing, Inc., Nova Iorque. ANDERSSON, I., S.KNIGHT, G.SCHNEIDER, Y.LINDQVIST, T. LUNDQVIST, C.-I.BRNDN e G.H.LORIMER (1992). Crystal structure of the active site of ribulose-bisphosphate carboxylase. Nature 337: 229-234. BASSHAM, J.A. (1962). The path of carbon in photosynthesis. Scientific American:206(6): 88-100 (Separata 122). BAZZAZ, F.A. e E.D.FAJER (1992). Plant life in a CO2-rich World. Scientific American Janeiro: 18-24. BENSON, A.A. e M.CALVIN (1950). Carbon dioxide fixation by green plants. Ann. Rev. Plant Physiol. 1:25-40. BERKALOFF, J.BOURGUET, P.FAVARD e J.C.LACROIX (1988). Biologia y fisiologia celular. Ediciones Omega, Barcelona. CAMPOS, L.S. (1987). Guia dos compostos orgnicos e bioqumicos - Estruturas e nomenclatura. Europress, Odivelas. CHUECA, A., J.L.CARRASCO, R.HERMOSO e J.LPEZ GORG (1991). Aislamiento y caracterizacion em cDNA de guisante de um clon que codifica la frutosa-1,6-bisfosfatasa fotossinttica., Livro de resumos, pg. 89. II Congreso Hispano-Luso de Fisiologia Vegetal. ICONA, Madrid. COOMBS, J. (1987). Carbon metabolism. In: Techniques in Bioproductivity and photosynthesis, 2 edio (COOMBS, J., D.O.HALL, S.P.LONG, e J.M.O.SCURLOCK Eds.), Cap. XI, pg. 139-157. Pergamon Press, Oxford. COLL, J.B., G.N.RODRIGO, B.S.GARCA e R.S.TAMS (1980). Fisiologia vegetal. Ediciones Pirmide, S.A., Madrid. CRAFTS-BRANDNER, S.J. (1992). Phosphorus nutrition influence on starch and sucrose accumulation, and activities of ADP-glucose pyrophosphorylase and sucrose-phosphate synthase during the grain filling period in soybean. Plant Physiol.98: 1133-1138.

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