BIOTECNOLOGA

CONCEPTO DE BIOTECNOLOGA Es la ciencia que integra la microbiologa, la ingeniera gentica y la bioqumica y se basa en la utilizacin de seres vivos o de sus componentes para realizar determinados procesos qumicos con finalidad industrial. Determinados procesos biotecnolgicos son ya clsicos, como las fermentaciones alcohlicas, lcticas, etc. El trmino biotecnologa, en sentido actual, deriva de los importantes acontecimientos en el campo de la gentica molecular, que han hecho posible el desarrollo de complejos procedimientos, denominados en conjunto ingeniera gentica y que permite el aislamiento, la manipulacin, modificacin y expresin del material gentico. En la actualidad, la palabra biotecnologa se identifica, con la aplicacin industrial de la ingeniera gentica, que utiliza seres vivos modificados para producir compuestos como la insulina humana, la hormona del crecimiento humana, vacunas, interfern, antibiticos, etc., etc. El enorme inters industrial de los productos obtenidos mediante esta ingeniera, ha impulsado una carrera, con el objetivo de aislar y patentar genes que puedan tener una aplicacin teraputica. Los medicamentos del futuro sern, en buena medida, diseados especficamente. El conocimiento del genoma humano, pero tambin el de animales, plantas y otros organismos, permitir aislar productos gnicos implicados en la terapia frente a enfermedades, en la mejora en la produccin agrcola y ganadera o en la lucha contra la contaminacin. Bsicamente, el procedimiento empleado para aislar genes de inters es el siguiente: Se extrae el ARN de las clulas afectadas por una determinada patologa La protena producida mediante la traduccin de este ARNm se estudia para determinar cul es su posible papel en la patologa. A partir de los datos obtenidos se aborde la posible solucin teraputica. Entre otras, esta terapia puede implicar la clonacin del gen para la produccin masiva de la protena, por ejemplo la clonacin del gen de la insulina.

ORGANISMOS TRANSGNICOS Son plantas o animales que incorporan en su genoma, de forma estable, ADN clonado. Estos organismos pueden ser muy tiles en la produccin de medicamentos y en un futuro prximo ser una fuente de rganos para los trasplantes. Esta alternativa paliara el grave problema actual de la falta de rganos. Los animales transgnicos, que han incorporado determinados genes humanos, son buenos modelos de laboratorio para la investigacin sobre procesos fisiolgicos y enfermedades humanas. Cuando la clonacin se realiza en clulas embrionarias, el gen insertado se encontrar en todo el individuo ORGANISMOS TRANSGNICOS

INGENIERA GENTICA Los procedimientos de ingeniera suelen comenzar con la clonacin, mediante la cual se aslan y replican determinados genes. La finalidad de la clonacin es generar grandes cantidades de genes. La clonacin lleva implcita la formacin de ADN recombinante, que es una combinacin de segmentos de ADN que no se encuentran juntos de manera natural. Los productos obtenidos mediante estas tcnicas pueden ser modificados a voluntad, utilizando procedimientos de mutagnesis dirigida, que permiten construir in vitro un gen con una mutacin determinada y as estudiar cul es su efecto sobre la correspondiente protena. La estrategia bsica de la clonacin consiste en aislar el gen deseado y amplificarlo en sistemas bacterianos. Los conocimientos de la enzimologa del ADN permite separar y unir molculas de ADN in vitro. En este proceso se utiliza fundamentalmente ADN ligasa, ADN sinttico y enzimas de restriccin. Las enzimas de restriccin son naturales y cortan al ADN por sitios especficos, denominadas secuencias de reconocimiento. Posteriormente estos fragmentos de ADN se unirn a vectores de clonacin, mediante la ADN ligasa. La molcula de ADN fabricada in vitro se introduce en el organismo husped, donde se replicar. La ingeniera gentica consiste en la alteracin artificial y deliberada del genoma de un ser vivo, modificando directamente su ADN. En este proceso es necesario aplicar una serie de mtodos y tcnicas que, en conjunto, reciben el nombre de tecnologa del ADN recombinante. Esta nueva tecnologa ha abierto campos completamente nuevos en la investigacin y contribuye de forma esencial a la biotecnologa actual. El descubrimiento de las enzimas de restriccin fue el primer acontecimiento que posibilit el desarrollo de esta nueva tecnologa. TCNICAS DE MANIPULACIN DEL ADN La manipulacin gentica emplea varias tcnicas, que adecuadamente combinadas, permiten seleccionar fragmentos de ADN, modificarlos e introducirlos en otros organismos. Estas tcnicas son:
Secuenciacin del ADN Formacin de cadenas de ADN recombinante Sntesis de ADN complementario Hibridacin de cidos nucleicos

SECUENCIACIN DEL ADN Actualmente se conoce la secuencia completa de miles de genes y el genoma completo de varios seres vivos, incluido el humano. Cuando se conoce la secuencia de bases de un gen se puede identificar las regiones que son secuencias codificadoras de protenas y las regiones que corresponden a secuencias reguladoras de la expresin del gen. Conociendo la secuencia codificadora del gen se puede deducir la secuencia de aminocidos de la protena codificada. FORMACIN DE MOLCULAS DE ADN RECOMBINANTE

Se denomina ADN recombinante a las molculas de ADN que resultan de la unin de un gen elegido y un vector adecuado para su transporte. Este proceso se realiza en tres etapas:
Corte de fragmentos de ADN Separacin de los fragmentos de ADN Unin al vector

Corte de fragmentos de ADN Las endonucleasas de restriccin son unos enzimas bacterianos, cuya finalidad es destruir el ADN procedente de bacterifagos y que tiene la propiedad de cortar el ADN solo en ciertas secuencias de nucletidos. Las diferentes especies bacterianas tienen diversas endonucleasas de restriccin y cada una de ellas corta el ADN por una secuencia diferente. Las secuencias de reconocimiento para cortar el ADN, son secuencias cortas de nucletidos, frecuentemente palindrmicas (se leen lo mismo de derecha a izquierda que de izquierda a derecha, por ejemplo dbale arroz a la zorra el abad Las enzimas de restriccin cortan las dos cadenas en lugares especficos, algunas lo hacen cortando las dos cadenas en el mismo lugar, originando extremos romos y otras cortan las dos cadenas en zonas diferentes, originando extremos cohesivos. Por ejemplo Lugar corte 5 GGCC GG CC Extremos romos 3 CCGG CC GG Lugar de corte 5 GAATTC G AATTC 3 CTTAAG CTTAA G Extremos cohesivos De esta forma escogiendo la enzima de restriccin adecuada los investigadores cortan las molculas de ADN como si emplearan tijeras moleculares, en los sitios que le interesan. Separacin de los fragmentos de ADN. Cuando se ha cortado una molcula de ADN con enzimas de restriccin se originan fragmentos de diferentes tamaos y estos se separan por una tcnica llamada electroforesis en gel, (campo elctrico y estos trozos se separan por el gel en funcin de su tamao). Unin al vector. Una vez obtenidos los diferentes fragmentos de ADN, no se pueden conservar sueltos, sino que hay que unirlos a otras molculas de ADN transportadoras, que se llaman vectores Frecuentemente, estos vectores son plsmidos bacterianos o genomas vricos de ADN, aunque tambin pueden ser molculas de ADN sintetizadas artificialmente. Esta unin del gen aislado al vector se hace mediante el enzima ADN ligasa. Este ADN resultante se llama ADN recombinante.

A continuacin, las bacterias se cultivan en un medio especial para que se exprese la informacin contenida en el plsmido y por tanto produzcan la protena deseada.

Entre los vectores de clonacin ms utilizados estn los plsmidos bacterianos y los bacterifagos. Los huspedes para estos vectores de clonacin tienen tambin que cumplir ciertas caractersticas: - Crecimiento rpido No ser patgeno Ser capaz de aceptar el ADN exgeno y que este permanezca estable. El husped tiene que tener los enzimas que permitan la replicacin del vector.

Los ms utilizados son la bacteria E. coli y la levadura Saccharomyces cerevisiae SNTESIS DEL ADN COMPLEMENTARIO La utilizacin del ARNm para aislar a un gen tiene la ventaja de no contener intrones que si estn presentes en el ADN de eucariotas y todas las secuencias son codificantes, pues tampoco hay regiones reguladoras. Se llama ADNc, a una secuencia de ADN sintetizada de forma artificial, utilizando como molde al ARNm, mediante el enzima transcriptasa inversa. El ADN monocatenario obtenido sirve de molde para formar el ADN bicatenario sin intrones, que luego podr ser insertado (clonacin) en un plsmido o en otro vector.

LA BIOTECNOLOGA EN MEDICINA Fabricacin de productos farmacuticos. Muchas protenas de mamferos tienen una gran importancia como productos farmacuticos, como la insulina, el interfern, los factores de coagulacin. Sin embargo estas protenas estn en cantidades pequeas en los tejidos normales y su purificacin resulta muy costosa. Por ello desde hace tiempo se ha intentado su produccin en microorganismos. Una de las primeras aplicaciones fue la utilizacin de bacterias para producir insulina Produccin de vacunas mediante ingeniera gentica, como ya sabemos las vacunas son suspensiones de patgenos muertos, atenuados o modificados, o fracciones especfica aisladas de los mismos, que cuando se inyectan en un animal producen inmunidad frente a ese determinado agente patgeno, debido a la fabricacin de anticuerpos especficos. Dado que el componente ms inmunognico de un microorganismo, son las protenas de la cubierta (pared bacteriana o cpsida vrica), es deseable producir solo estos componentes. Mediante ingeniera se puede clonar los genes de las protenas de la cubierta y expresarlos en bacterias no patgenas, haciendo posible el desarrollo de vacunas seguras, de esta forma se obtienen vacunas recombinantes (como la vacuna de la hepatitis B), ms seguras que las vacunas clsicas. Terapia gnica, algunas aplicaciones de la ingeniera gnica estn dirigidas al tratamiento de enfermedades genticas humanas. Mediante el uso de la tecnologa del ADN recombinante junto con estudios genticos convencionales, es posible localizar en los cromosomas los genes causantes de dichas enfermedades. La terapia gnica consiste en amplificar la accin de un gen que no es funcional totalmente o bien en cambiar ese gen por otro funcional. La primera enfermedad gentica para la que se utiliz la terapia gnica fue en una grave enfermedad inmunitaria, causada por la deficiencia de una enzima implicada en el metabolismo de las purinas en la mdula sea. El procedimiento implica el uso de un retrovirus como vector para insertar una copia correcta del gen de esta enfermedad en linfocitos recogidos del paciente y luego, devolver de nuevo al cuerpo estas clulas corregidas. Esto se denomina terapia gnica somtica. La sustitucin del gen en las clulas de la lnea germinal, que dan lugar a los gametos, no pueden aplicarse fcilmente en los humanos, ya que se plantean muchos problemas ticos y cuestiones sociales que van ms all de las cuestiones tcnicas que suponen los experimentos.

Como se ha comentado anteriormente LA TERAPIA GNICA consiste en la insercin de una copia funcional normal de un gen defectuoso o ausente en el genoma de un individuo, en las clulas del tejido daado, con el objetivo de restaurar la funcin normal de estos y de esta forma eliminar los sntomas de la enfermedad. Es una tcnica en desarrollo y por ello su aplicacin se lleva a cabo dentro de ensayos clnicos controlados. A pesar de que en un principio fue una tcnica planteada exclusivamente con el fin de tratar enfermedades genticas, lo cierto es que en la actualidad se propone para casi cualquier enfermedad como por ejemplo EL CNCER. En 1990 se realiz el primer procedimiento de terapia gnica en una nia de 4 aos que presentaba una enfermedad gentica rara llamada Inmunodeficiencia combinada severa, 5

caracterizada por la ausencia de un sistema inmunitario, por lo que la nia era vulnerable a cualquier infeccin, lo que determinaba una muerte en edad temprana. El procedimiento de la terapia consisti en extraer los glbulos blancos, dejar que las clulas crecieran en el laboratorio, insertando el gen que faltaba en ellos y despus introdujeron estos glbulos blancos modificados dentro de la circulacin sangunea del paciente. La nia mejor, pudiendo asistir a la escuela, puesto que la terapia consolid el sistema inmune. Este sistema no era curativo, ya que los glbulos blancos tienen un tiempo limitado de vida por lo que el proceso debe de ser repetido. Posteriormente los cientficos han intentado introducir genes en clulas humanas, centrndose en enfermedades causadas por un solo gen, como la fibrosis qustica (afecta a los pulmones, intestinos, pncreas..), la anemia falciforme, la hemofilia. En esta insercin se utiliza UN VECTOR QUE ENTREGA EL GEN TERAPETICO A LAS CLULAS DIANA DEL PACIENTE. Los vectores ms comunes en la actualidad son los virus (genticamente alterados) y las bacterias (sus plsmidos). Los genes teraputicos, son como ya hemos comentado anteriormente los genes de inters que se obtienen de ARNm maduros de las clulas que se aslan y se copian en molculas de ADNc (ADN complementario) utilizando los enzimas retrotranscriptasas

BIOTECNOLOGA EN AGRICULTURA Y GANADERA La biotecnologa permite el desarrollo de plantas y animales modificados genticamente, introduciendo ADN clonado en vulos fecundados de animales o bien directamente en clulas vegetales creciendo en cultivo de tejidos. La aplicacin de este tipo de tcnicas en la agricultura tiene como objetivos: Conseguir plantas resistentes a herbicidas. Conseguir plantas resistentes a los insectos. Proteccin de plantas frente a infecciones microbianas y vricas. Mejora del producto, por ejemplo un retraso en el deterioro de los frutos. Habitualmente se administran sustancias proteicas al ganado, por ejemplo hormonas, que provocan artificialmente su engorde. Mediante la alteracin gentica del animal se podra mejorar la eficacia y quiz reducir los inconvenientes, de este tipo de prcticas, ya que el objetivo es incrementar la produccin hormonal propia del animal.

Actualmente a partir de animales transgnicos se producen protenas de utilidad farmacolgica y protenas humanas que necesitan modificaciones despus de la traduccin, ya que las bacterias estas modificaciones no pueden hacerlas. Por ejemplo se sintetiza una protena que acta en los procesos de cicatrizacin, impidiendo la formacin de cogulos. Este producto podra tener una gran importancia en la prevencin de formacin de embolias pulmonares. La clonacin de animales a partir de una clula somtica diferenciada. Esta tcnica permite la seleccin mantenida de animales con caractersticas interesantes para el ganadero y el consumidor. Entre otros riesgos est el de una infeccin que afecte a todos los animales, por ser genticamente idnticos. LA BIOTECNOLOGA EN LA INDUSTRIA Adems de los nuevos procesos industriales desarrollados en el campo de la ingeniera gentica, el dominio de la biotecnologa abarca otros ya clsicos, como la fermentacin. El trmino fermentacin se emplea para definir procesos microbianos a escala industrial, en grandes recipientes denominados fermentadores. En estos recipientes se obtienen productos comerciales tiles, como bebidas alcohlicas (cerveza, vino, licores, etc.), compuestos farmacuticos (antibiticos), conservantes, aditivos alimentarios, alimentos. BIOTECNOLOGA EN EL MEDIO AMBIENTE Los microorganismos tambin son tiles en la lucha frente a la contaminacin. Actualmente se utilizan microorganismos capaces de consumir diversas sustancias txicas que pueden utilizarse para descontaminar reas de la superficie, del subsuelo o de las aguas subterrneas Dentro de la biotecnologa aplicada al medio ambiente tenemos: biorremediacin, fitorremediacin y biodegradacin.

Biorremediacin .- Es el proceso en el que se emplean organismos biolgicos para resolver problemas especficos medioambientales, como es el caso de la contaminacin. Es un proceso iniciado por el hombre, generalmente con el propsito de subsanar el medio ambiente. Se utiliza bacterias y hongos que pueden degradar con facilidad petrleo, benceno, pesticidas, herbicidas. Los metales pesados como el cadmio, el mercurio, etc, no se pueden degradar y por ello no pueden ser eliminados Fitorremediacin.- Es el proceso en el que se usan plantas para limpiar ambientes contaminados. Aunque es una tcnica en desarrollo constituye una estrategia muy interesante, debido a la capacidad que tienen algunas especies vegetales de absorber, acumular y/o tolerar altas concentraciones de contaminantes como pueden ser los metales pesados, compuestos orgnicos, etc, etc. La ventaja que ofrece este mtodo frente a la biorremediacin es el bajo costo y la rapidez con que se lleva a cabo ciertos procesos degradativos. Por ejemplo las semillas poseen grupos funcionales capaces de secuestrar metales y compuestos orgnicos y posteriormente se dar una distribucin acumulada en el

resto de la planta en su proceso de germinacin y crecimiento que habr que evaluar. Biodegradacin.- Es un proceso natural por el que determinadas sustancias orgnicas pueden ser descompuestas con cierta rapidez en sus ingredientes bsicos debido a la accin de bacterias, hongos y otros organismos. Este proceso se basa en un principio bsico Todo compuesto sintetizado biolgicamente, (por ejemplo la basura), puede ser descompuesto biolgicamente. Hay muchos factores que intervienen en este proceso, por ejemplo la temperatura y humedad del suelo, la acidez del medio, ya que un pH cido limita el crecimiento de los microorganismos implicados en el proceso, la disponibilidad o no de oxgeno, ya que hay determinados procesos de biodegradacin que necesariamente son aerobio y otros son anaerobios, la cantidad de basura, ya que la cantidad de materia que estos microorganismos pueden digerir es limitada, la naturaleza de los microorganismos, ya que puede ser que en una zona determinada no se pueda dar la biodegradacin y en otra si.