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estn insertadas las florecillas, separadas por pequeas pleas transparentes. Las caractersticas macroscpicas y microscpicas se describen en los ensayos de identificacin A y B. IDENTIFICACIN A. Los captulos tienen un dimetro de 8 mm a 20 mm; el receptculo es macizo; la base del receptculo est rodeada por un involucro formado por 2 a 3 filas de brcteas apretadas e imbricadas, escariosas en los bordes. La mayora de las florecillas son liguladas; algunas florecillas amarillo-pardas del centro son tubuladas. Las florecillas liguladas son blancas, plidas, lanceoladas y flexionadas, con ovario nfero pardo oscuro, estilo filiforme y estigma bfido; las florecillas tubuladas tienen una corola con 5 dientes, androceo con 5 estambres epiptalos y gineceo semejante al de las florecillas liguladas. B. Separar el captulo en sus diferentes partes. Examinar al microscopio utilizando disolucin de hidrato de cloral R. Los captulos estn completamente recubiertos por numerosos tricomas glandulares pequeos, brillantes y amarillos. Las brcteas del involucro y las pleas presentan clulas epidrmicas alineadas esclerificadas en la base y recubiertas de tricomas cnicos, de 500 m aproximadamente de longitud, compuesto cada uno por 3 4 clulas basales muy cortas y una clula curva grande terminal de aproximadamente 20 m de ancho. Las corolas de las florecillas liguladas estn compuestas de clulas papilares con estras cuticulares. Los ovarios de ambos tipos de florecillas tienen en su base un anillo escleroso que consta de una fila nica de clulas. El receptculo y los ovarios contienen pequeas maclas de oxalato de calcio. Los granos de polen tienen un dimetro de 35 m aproximadamente, son redondeados y triangulares y presentan 3 poros germinales y una exina espinulosa. C. Examinar por cromatografa en capa fina (2.2.27), utilizando gel de slice adecuado. Disolucin problema. Aadir 10 ml de metanol R a 0,5 g de la droga a examinar pulverizada (710). Calentar la mezcla en bao de agua a 60 C agitando durante 5 min. Dejar que se enfre y filtrar. Disolucin de referencia. Disolver 2,5 mg de apigenina R y 2,5 mg de apigenina-7-glucsido R en 10 ml de metanol R. Depositar por separado en la placa 10 l de cada disolucin, en bandas. Proceder a un desarrollo de 10 cm con una mezcla de 17 volmenes de cido actico glacial R, 17 volmenes de agua R y 66 volmenes de butanol R. Secar la placa a 100-105 C durante 5 min. Sobre la placa an caliente, pulverizar una disolucin de 10 g/l de difenilborato de aminoetanol R en metanol R, a razn de 10 ml para una placa de 200 mm de lado. Pulverizar el mismo volumen de una disolucin de 50 g/l de macrogol 400 R en metanol R. Dejar reposar durante 30 min aproximadamente. Examinar a la luz ultravioleta a 365 nm. El cromatograma obtenido con la disolucin de referencia presenta, en el tercio superior, una banda con fluorescencia verde-amarilla (apigenina) y, en su tercio central, una banda de fluorescencia amarillenta (apigenina-7-glucsido). El cromatograma obtenido con la disolucin problema presenta una banda con fluores-
Canela de Ceiln
cencia verde-amarilla y una banda con fluorescencia amarillenta correspondientes respectivamente, en posicin y en fluorescencia, a las bandas debidas a la apigenina y a la apigenina-7-glucsido en el cromatograma obtenido con la disolucin de referencia; tambin presenta, por encima de la banda de la apigenina-7-glucsido, una banda de fluorescencia parduzca (luteolina) e, inmediatamente por debajo de la banda debida a la apigenina-7-glucsido, una banda de fluorescencia parda clara (apiina); inmediatamente por debajo de la banda correspondiente a la apiina, aparece una banda con fluorescencia azul brillante y, por debajo de esta banda, otra de fluorescencia azul brillante. Puede presentar igualmente otras bandas con dbil fluorescencia. ENSAYOS Dimetro de los captulos florales. La sustancia a examinar no contiene ms del 3 por ciento de captulos florales de dimetro inferior a 8 mm. Captulos alterados. La sustancia a examinar no contiene captulos pardos o negruzcos. Agua (2.2.13). No ms del 10,0 por ciento, determinado por arrastre a partir de 20,0 g de flor de camomila romana completa. Cenizas totales (2.4.16). El residuo no es superior al 8,0 por ciento. VALORACIN Efectuar la determinacin de aceites esenciales en drogas vegetales (2.8.12). Utilizar 20,0 g de droga entera, un matraz de 500 ml y 250 ml de agua R como lquido de arrastre. Introducir 0,50 ml de xileno R en el tubo graduado. Destilar a un ritmo de 3-3,5 ml/min durante 3 h. CONSERVACIN Protegida de la luz.
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Disolucin problema. Agitar 0,1 g de droga pulverizada (500) con 2 ml de cloruro de metileno R durante 15 min. Filtrar y evaporar el filtrado con precaucin en bao de agua, casi hasta sequedad. Disolver el residuo en 0,4 ml de tolueno R. Disolucin de referencia. Disolver 50 l de aldehdo cinmico R y 10 l de eugenol R en tolueno R y completar hasta 10 ml con el mismo disolvente. Depositar por separado en la placa 10 l de cada disolucin, en bandas de 20 mm por 3 mm. Proceder a un desarrollo de 10 cm con cloruro de metileno R. Dejar secar la placa al aire. Examinar bajo luz ultravioleta, a 254 nm, y sealar las bandas de atenuacin de fluorescencia. Posteriormente, examinar bajo luz ultravioleta a 365 nm y sealar las bandas fluorescentes. Observados a la luz ultravioleta a 254 nm, los cromatogramas obtenidos con las disoluciones problema y de referencia presentan en el centro una banda de atenuacin de fluorescencia (aldehdo cinmico) e, inmediatamente por encima, una banda de atenuacin de fluorescencia menos pronunciada (eugenol). Examinado bajo luz ultravioleta a 365 nm, el cromatograma obtenido con la disolucin problema presenta, inmediatamente por debajo de la banda correspondiente al aldehdo cinmico, una banda de fluorescencia azul clara (aldehdo o-metoxicinmico). Pulverizar con disolucin de floroglucinol R. La banda correspondiente al aldehdo cinmico se colorea de pardo amarillento y la correspondiente al aldehdo o-metoxicinmico de violeta. ENSAYOS Cenizas totales (2.4.16). por ciento. VALORACIN Efectuar la determinacin de aceites esenciales en drogas vegetales (2.8.12). Utilizar un matraz de 500 ml y 200 ml de cido clorhdrico 0,1 M como lquido de destilacin. Introducir 0,50 ml de El residuo no es superior al 6,0
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La sustancia a examinar.
Disolucin de referencia. Disolver 10 l de cineol R, 10 l de linalol R, 10 l de -cariofileno R, 10 l de safrol R, 100 l de aldehdo trans-cinmico R, 10 l de eugenol R, 20 mg de cumarina R, 10 l de aldehdo trans-2-metoxicinmico R y 10 l de benzoato de bencilo R en 1 ml de acetona R. La cromatografa se puede llevar a cabo utilizando: una columna capilar de slice fundida de una longitud de 60 m y de un dimetro interno aproximado de 0,25 mm, rellena con macrogol 20.000 R, como fase estacionaria, helio para cromatografa R como gas portador, a un caudal de 1,5 ml/min, un detector de ionizacin en llama, una relacin de divisin de 1:100, con el siguiente programa de temperatura:
Tiempo Temperatura Gradiente (min) (C) (C/min) Comentario
menor del 0,5 por ciento del 55 por ciento al 75 por ciento menor del 7,5 por ciento menor del 0,5 por ciento del 0,1 por ciento al 1,0 por ciento menor del 1,0 por ciento
Columna
0 -10 10 - 75 75 - 200
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1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
cineol linalol -cariofileno safrol aldehdo trans-cinmico eugenol aldehdo trans-2-metoxicinmico cumarina benzoato de bencilo
Monografas A-C
Figura 1501.-1.Perfil cromatogrfico del aceite esencial de canela de Ceiln La cumarina puede eluirse antes o despus que el aldehdo trans-2-metoxicinmico dependiendo de las condiciones de operacin y del estado de la columna. 01/2002, 1608 A. Cromatografa en capa fina (2.2.27). Disolucin de referencia. Diluir 1 ml de la muestra problema en acetona R y completar hasta 10 ml con el mismo disolvente. Disolucin de referencia. Diluir aproximadamente 50 l de aldehdo trans-cinmico R, 10 l de eugenol R, 10 l de linalol R y 10 l de -cariofileno R en alcohol R y completar hasta 10 ml con el mismo disolvente. Placa: placa de gel de slice para CCF R. Fase mvil: metanol R, tolueno R (10:90 V/V). Aplicacin: 10 l, en bandas. Desarrollo: hasta una distancia de 15 cm. Secado: al aire. Deteccin: pulverizar la placa con disolucin de aldehdo ansico R. Examinar la placa a la luz del da mientras se calienta a 100-105 oC durante 5-10 min. Resultados: las bandas obtenidas con la disolucin problema son semejantes en cuanto posicin y coloracin a las bandas del cromatograma obtenido con la disolu-
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Deteccin: ionizacin de llama. Inyeccin: 0,2 l. Orden de elucin: el orden dado para la preparacin de la disolucin de referencia. Registrar los tiempos de retencin de estas sustancias. Idoneidad del sistema: disolucin de referencia:
Monografas A-C
Disolucin de referencia. Disolver 10 l de cineol R, 10 l de linalol R, 10 l de -cariofileno R, 10 l de safrol R, 10 l de aldehdo trans-cinmico R, 10 l de acetato de cinamilo R, 100 l de eugenol R y 10 mg de cumarina R en acetona R. Columna: material: slice fundido, dimensiones: l = 60 m, = 0,25 mm, fase estacionaria: macrogol 20.000 R. Gas portador: helio para para cromatografa R. Caudal: 1,5 ml/min.
resolucin: como mnimo 1,5 entre los picos correspondientes al linalol y al -cariofileno. Con la ayuda de los tiempos de retencin determinados a partir del cromatograma obtenido con la disolucin de referencia, localizar los componentes de la disolucin de referencia en el cromatograma obtenido con la disolucin problema. Determinar el contenido en porcentaje de estos componentes: El siguiente cromatograma se da slo a ttulo de informacin. 1. 2. 3. 4. cineol linalol cariofileno safrol 5. aldehdo trans-cinmico 6. acetato de cinamilo 7. eugenol 8. cumarina
Figura 1608.-1. Cromatograma del aceite esencial de las hojas del canelero de Ceiln
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Monografas A-C
Densidad relativa (2.2.5): de 1,052 a 1,070. ndice de refraccin (2.2.6): de 1,600 a 1,614. Rotacin ptica (2.2.7): El ngulo de rotacin ptica es de 1 a + 1. Perfil cromatogrfico. gases (2.2.28). Disolucin problema. Examinar por cromatografa de
La sustancia a examinar.
Disolucin de referencia. Disolver 100 l de aldehdo trans-cinmico R, 10 l de acetato de cinamilo R, 10 l de eugenol R, 20 mg de cumarina R y 10 l de aldehdo trans2-metoxicinmico R en 1 ml de acetona R. La cromatografa se puede llevar a cabo utilizando: una columna capilar de slice fundida de una longitud de 60 m y de un dimetro interno aproximado de 0,25 mm, rellena con macrogol 20.000 R como fase estacionaria, helio para cromatografa R como gas portador, a un caudal de 1,5 ml/min, un detector de ionizacin en llama, una relacin de divisin de 1:100, con el siguiente programa de temperatura:
Tiempo (min) Columna 0 -10 10 - 75 75 - 160 Cmara de inyeccin Detector Temperatura Gradiente (C) (C/min) Comentario 60 60 190 190 200 240 2 Isoterma Gradiente lineal Isoterma
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El siguiente cromatograma tipo se incluye solamente a ttulo de informacin. 1. aldehdo trans-cinmico 2. acetato de cinamilo 3. eugenol 4. aldehdo trans-2-metoxicinmico 5. cumarina
Monografas A-C
La cumarina puede eluirse antes o despus que el aldehdo trans-2-metoxicinmico dependiendo de las condiciones de operacin y del estado de la columna.
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