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Os Genes de Fatores de
Crescimento codificam polipeptídeos que
promovem o crescimento celular através
da interação com receptores celulares
específicos e são geralmente produzidos
por genes ativamente expressos em outras
células ou órgãos, sendo por isso
denominados ligantes extra-celulares.
Por exemplo, os hormônios hipofisários,
tal como o hormônio tireotrófico - que
ocupa receptores catalíticos em células da
tireóide, estimulando a proliferação proliferação celular, com o conse-
celular - e o hormônio de crescimento, qüente crescimento descontrolado de
responsável pelo crescimento ósseo e pela células em um dado tecido ou órgão,
síntese protéica em diversos tecidos, o que resultará em displasias e/ou
durante a infância e puberdade – além de tumores malignos.
atuar na reparação de tecidos, durante
toda a vida do organismo. b. Oncogenes: Genes cujos produtos
Outros exemplos de fatores de respondem aos estímulos enviados
crescimento são: Fator de Crescimento por receptores ativados por hormônios
Epidérmico (Epidermal Growth Factor - ou por fatores de crescimento -
EGF), Fator de Crescimento de Fibro- promovendo o crescimento e a
blasto (Fibroblast Growth Factor - FGF), progressão do ciclo celular em direção
Fator de Crescimento Derivado de à mitose. São também considerados
Plaquetas (Plaquette-Derived Growth oncogenes aqueles cujos produtos
Factor - PDGF), Fator de Crescimento possuem a função de amplificar e
Semelhante à Insulina (Insulin-like sustentar o estímulo pró-mitótico,
Growth Factor - IGF). necessário para que uma das fases do
ciclo celular se complete.
Os assim chamados genes estruturais
codificam a estrutura primária de proteí- Inicialmente, os oncogenes eram
nas de membrana, enzimas, actina do considerados formas mutadas de proto-
citoesquelesto, colágeno, elastina e outros oncogenes, mas são atualmente reco-
produtos necessários à morfologia nhecidos como qualquer gene – mutado
estrutural/funcional de células, tecidos e ou não, super expresso ou não – capaz de
órgãos. induzir a formação de tumores, alterar os
padrões de expressão gênica ou inibir
Os Genes de Controle do Ciclo outros genes de regulação da proliferação.
Celular são de duas diferentes classes e Essas alterações podem incluir as
estão envolvidos diretamente no processo seguintes mudanças nos padrões de
de proliferação celular: expressão gênica: 1, aumento anormal
dos níveis de seus produtos na célula; 2,
a. Genes Supressores de Tumor: atuam a expressão do oncogene em tecidos nos
no controle da divisão celular, quais não deveria ser expresso; 3,
prevenindo a proliferação celular aumento do número de cópias do
excessiva, evitando assim a formação oncogene (amplificação gênica); 4,
de displasias e tumores. A perda de mutações estruturais no próprio
função desses genes ou a inibição de oncogene, causando ganho de função.
seus produtos por onco-proteínas
mutadas leva à desregulação da
como é o caso do gene gap Krupple e do
Qualquer gene que venha a causar gene fushi tarazu (ftz).
morte, quando a perda de heterozigose
ocorre é denominado gene letal. São Os genes associados com a regulação
também chamados genes letais zigóticos do ciclo circadiano e outros ciclos bio-
e podem estar expressos de forma lógicos em muitos organismos são
homozigótica mesmo no décimo ciclo denominados genes relógio (Clock
celular da formação do blastoderma, Genes). A identificação de um gene
relógio é feita através do estudo de
células em culturas e de embriões que ativados pela mesma seqüência regula-
perderam os ritmos circadianos normais. dora. Genes mestres são também
A inserção de um gene no DNA dessas denominados genes selecionadores, pois
linhagens ou embriões que restaure o “escolhem” entre duas vias embrio-
ciclo normal, identifica-o como um gene gênicas de desenvolvimento, através da
relógio repressão e ativação seletiva de grupos de
genes.
Os genes associados a Sexo (Sex- Exemplos de genes controlados
linked Genes) são genes localizados nos pelos genes mestres são os genes HOX,
cro-mossomas sexuais, X ou Y, com uma primeiramente estudados na Drosophila
função específica na regulação de outros melanogaster sob o nome de genes
genes desses cromossomas, tal como o Homeóticos Seletores. Estes genes são
gene SRY, encontrado no cromossoma responsáveis pela morfologia de mem-
Y. O produto de SRY é um fator bros, órgãos, tecidos e pela diferenciação
transcricional de ligação ao DNA com célular. Genes HOX são encontrados em
função crucial no desenvolvimento dos todas as espécies animais e guardam uma
testículos e na determinação do gênero alta homologia, ao longo da cadeia
masculino. Mutação neste gene dá evolutiva. Esta homologia é caracterizada
origem a fêmeas XY, com disgênese por uma seqüência de nucleotídeos
gonádica. altamente conservada em todas as
espécies (peixes, lesmas, Drosophila
melanogaster e mamíferos) conhecida
Elementos Reguladores da Expressão como homeobox. Genes HOX ocorrem
Gênica em aglomerados nos diversos segmentos
do embrião e, quando ativados, guiam o
Relembrando, expressão gênica desenvolvimento morfogenético de um
significa a produção de RNA pelo gene determinado membro ou órgão. São
correspondente. O sítio no DNA ao qual a também indispensáveis durante a Reno-
enzima RNA-polimerase irá ligar-se para vação celular e na manutenção da
dar início à transcrição de um deter- diferenciação das células em cada tecido
minado produto gênico é denominado ao longo da vida do animal, assegurando
seqüência promotora ou promotor. Tal a correta diferenciação funcional e
região promotora é geralmente de difícil maturação de células recém replicadas, de
caracterização, podendo estar localizada acordo com a fisiologia específica do
próxima ou distante do gene em questão, tecido que constituem.
na maioria das vezes a montante do início
da sequência gênica (upstream). Os produtos de certos genes
modificam a função de outros genes,
Durante a embriogênese, genes sendo conhecidos como genes modifica-
denominados genes mestres (master dores (modifier genes), os quais parecem
genes) controlam a expressão ordenada de ser responsáveis pela variância feno-
aglo-merados inteiros de genes e/ou típica de certas doenças monogênicas,
grupos de genes, que atuam em cascata tais como a hemofilia, cardiomiopatias,
em uma determinada via de desen- fibrose cística e displasias. Tal variância
volvimento. Geralmente, um grupo de fenotípica não deve ser confundida com a
genes contíguos ou pertencentes à mesma penetrância de doenças hereditárias.
família, que se encontram organizados em Enquanto a variância fenotípica descreve
uma única unidade transcricional, são níveis de gravidade da doença, a pene-
trância define o percentual de indivíduos ao operador, impedindo a transcrição de
portadores de uma mutação que manifes- genes estruturais.
tam a doença. Quando a repressão enzimática
ocorre, o óperon inativa o gene estrutural;
Outro elemento regulador da porém, a introdução de uma substância
expressão gênica são os genes amplifi- indutora, como a lactose, que no caso da
cadores (enhancers). Os amplificadores E. coli, é o substrato alvo do produto dos
encon-tram-se em uma posição-cis três genes estruturais (enzimas), o locus
(mesmo cromossoma) do gene que do operador (ou óperon) é ativado,
amplificam e aumentam os níveis de produzindo um RNAm policistrônico,
transcrição basal. Ainda mais diver- que leva à síntese das três enzimas
sificados que os promotores, os genes necessárias à metabolização da lactose.
amplificadores podem estar localizados Quando os níveis de lactose baixam, a
praticamente em qualquer local do expressão do operador é novamente
cromossoma: - acima, abaixo, próximo ou supressa. Na E. coli, este conjunto
distante do gene alvo. Quando um gene operador foi denominado LAC-Operon.
recebe influência de outro gene localizado O RNAm policistrônico é um RNAm
em outro cromossoma, diz-se que tal bastante comum em procariotos,
elemento de influência encontra-se em contendo informações para a tradução de
posição-trans. mais de uma proteína, originadas de
transcritos de diferentes genes funcionais
Figura 4. Elementos àcima ou a montante (i.e., genes funcionais = cístrons).
(upstream) e abaixo (downstream) de um dado
gene.
Embora o modelo óperon tenha sido
desenvolvido com base no estudo de
Elemento àcima ⇒ Gene ⇐ Elemento abaixo
5’..!!!……"""""""""…888..3’
procariotos, a idéia geral foi incorporada
Sentido da Transcrição: 5’⇒ 3’ ao processo de diferenciação celular de
células eucariótas, no qual a repressão
seletiva de alguns genes e a indução
O óperon é um grupo de genes que forma
alternada da expressão de outros genes
um conjunto regulador da expressão de
leva ao desenvolvimento embrionário
genes estruturais, que foi primeiramente ordenado.
estudado por Jacob e Monod na bactéria
Escherichia coli. Eles demonstraram que
Famílias de Genes
a produção de lactato ocorre apenas na
presença das enzimas beta-galactose,
Famílias gênicas são formadas
lacpermease e transacetilase - o que é
por genes que exibem seqüências
uma exemplo de indução enzimática –
nucleotídicas semelhantes. Tais genes
pois a oferta de lactose induz a expressão
podem derivar de um gene ancestral
dos genes codificadores dessas três
comum e ter adquirido suas
enzimas. O modelo óperon Jacob-Monod
características atuais por meio dos
é composto por um gene regulador, uma
processos de divergência e recombinação
região promotora e uma região operadora,
gênicas.
além de pelo menos um gene estrutural
codificador da estrutura primária de uma
As principais causas de diver-
enzima. O modelo sugere a presença de
um gene regulador sintetizando um pro- gência gênica são as mutações espon-
duto com atividade repressora que se liga tâneas, que levam à variabilidade genética
entre as espécies e em diferentes
populações de uma mesma espécie. A Outra família de genes
divergência gênica pode também resultar importantes no controle do ciclo celular
da migração dessas mutações em uma são os Genes de Reparo do DNA que
população, por meio do fluxo genético ou codificam enzimas que atuam em várias
da transdução de material gênico viral ou fases do ciclo celular (G1, S e G2),
bacteriano no DNA de seus hospedeiros. interrompendo a transcrição da nova fita
quando encontram adutos químicos, erros
A recombinação gênica pode ser de pareamento de bases, etc, retirando-os
homologa ou não-homóloga (i.e., da fita e substituindo-os por seqüências
heteróloga), promovendo a migração de corretas.
genes nos organismos eucariotos. A
recombinação gênica ocorre nas primeiras Durante a intérfase (fases G0, G1,
horas da embriogênese entre os alelos S, G2) as células que não se encontram
maternos e paternos herdados pelo em processo proliferativo, permanecem
embrião. em G0 (por ex., a maioria dos neurônios),
enquanto as que devem se dividir passam
Exemplos de famílias gênicas são pelas fases G1, S e G2, entrando a seguir
as histonas, genes HOX, Citocromo P450, em mitose. Os tecidos de renovação
oncogene ras, receptores de proteínas G, rápida permanecem menos tempo em G1
receptores de Fatores de Crescimento, do que os de renovação lenta, ao passo
entre outros. que as fases S e G2 parecem ter durações
semelhantes, independente da velocidade
Em 1999 foi descoberta uma nova proliferativa tecidual.
família de genes, primeiramente identi-
ficada em camundongos e posteriormente No final da fase G1, o ciclo é
em nematódios, plantas, mofo e peixe interrompido para verificação e reparo de
zebra, o que indica uma alta conservação possíveis erros de transcrição ou na
evolucionária. Em camundongos, esta presença de adutos químicos em bases
família de genes denominada MORC, nucleotídicas, o que é conhecido como
regula a produção e maturação de ponto de restrição (R). Uma vez
espermatozóides. O papel desempenhado realizados os reparos necessários, o ciclo
pelos genes MORC em outras espécies prossegue para a fase S, iniciando a
ainda não está esclarecido. síntese do DNA. No caso de danos
irreparáveis, a via que induz a apoptose
Genes Envolvidos no Controle do Ciclo ou morte celular programada é ativada,
Celular evitando a formação de clones mutados
nas gerações seguintes de células. Ao
Os dois principais grupos de final de cada fase, os produtos gênicos
genes envolvidos no controle do ciclo que a regularam são degradados ou
celular são aqueles que estimulam e os inativados, de forma que, uma vez feita a
que inibem o ciclo celular: - os oncogenes transição para a fase seguinte, torna-se
e os genes supressores de tumor, anterior- impossível regredir à fase anterior. Uma
mente descritos. Estas duas classes de vez ultrapassado o ponto de restrição, o
genes controlam redes de sinalização ciclo celular progredirá pelas fases S e G2
intracelulares e modulam a expressão de em direção à mitose.
outros genes durante a progressão do
ciclo celular. No final da fase G2 o ciclo será
novamente pausado para nova verifi-
cação das recém sintetizadas seqüências mente isto é possibilitado pela expressão
que constituirão as novas fitas de DNA, de uma enzima específica, não expressa
realização de reparos e nova tomada de em mamíferos, ligada a um promotor
decisão (mitose ou apoptose?), através da ativo nas células tumorais, desta forma
regulação de expressão do gene p21. A convertendo dentro da célula tumoral um
enzima topoisomerase III confere as substrato inofensivo em um molécula
seqüências de nucleotídeos recém sinte- tóxica para a célula. A transfecção de
tizadas, elimina as incorretamente células tumorais com o gene tirosina-
transcritas e permite reparos no ponto de cinase do vírus Herpes Simplex (HSVtk)
verificação do final da G2, antes que os torna-as sensíveis à droga antiviral,
diversos segmentos sintetizados sejam ganciclovir. A expressão do gene HSVtk
ligados entre si pela enzima DNA-ligase, na célula tumoral induz a fosforilação do
para formar a nova fita de DNA. ganciclovir em monofosfato que, seguida
pela fosforilação mediada por cinases
Uma vez duplicado o DNA, com celulares a trifosfato, leva à inibição da
cada fita recém sintetizada e pareada a DNA polimerase em células tumorais em
uma das duas fitas de DNA parental proliferação, induzindo a apoptose. Um
complementar (replicação semi-conser- efeito residual potente persiste, induzindo
vadora), o ciclo progride para mitose, também as células adjacentes à apoptose.
dando origem aos núcleos das duas Testes realizados em tumores ovarianos
células-filhas idênticas, que serão for- irradiados, demonstraram que o efeito
madas através da citocinese (divisão do residual é eficaz. Células expressando
citoplasma). HSVtk foram injetadas na cavidade
peritoneal das pacientes, as quais
Genes Experimentais receberam a seguir ganciclovir. Através
Na busca de soluções terapêuticas do efeito residual, as células que sobrevi-
ou de novas estratégias de identificação veram à radiação gama foram induzidas à
de genes, vários genes e cromossomas apoptose. Em camundongos murinos
modificados foram desenvolvidos, como transgênicos com tumores cerebrais, o
ilustram os exemplos a seguir. efeito residual induziu a apoptose de 30 a
60% das células tumorais e o efeito
Gene Reporter: Genes utilizados em residual levou à remissão completa em
laboratório para avaliar a expressão de 80% dos animais testados.
outros. São geralmente utilizados de uma
maneira artificial. Por exemplo, ao se YAC (Yeast Artificial Chromosome): Um
clonar o promotor do gene X justaposto dos organismos utilizados como modelo
ao gene da beta-galactosidase, pode-se para o estudo do ciclo celular são os
avaliar a ativação do gene X, sob fungos utilizados em fermentos, tal como
diferentes condições - ou até mesmo o Saccharomyces, pertencente à classe
durante o desenvolvimento embrionário - dos Hemascomycetes. YAC é um
através da presença de cor azul nas cromossoma artificial de levedura, que
células, gerada pelo “gene reporter” beta- permite a clonagem de fragmentos de
galactosidase. DNA humano nele inseridos de até um
milhão de pb (pares de base). Este
Gene Suicida: Uma estratégia tera- cromossoma auto replicante inclui três
pêutica que visa tornar o tumor mais seqüências de DNA e dois sítios de
vulnerável à quimioterapia, ou a uma reconhecimento para enzimas de res-
outra droga, como o ganciclovir. Geral- trição que permitem a replicação e
transmissão do genoma às células filhas. enzimas de restrição EcoRI e BamHI,
Essas três seqüências e os sítios de recebendo telômeros em cada
restrição são descritos abaixo: extremidade, for-mando assim um
cromossoma linear. O fragmento de
• Telômeros – localizados em cada DNA humano é então recombinado com
extremidade do cromossoma, prote- este cromossoma linear nos sítios de
gendo o DNA contra a degradação EcoRI, sendo ambos covalentemente
por nucleases; unidos pela enzima DNA ligase. Desta
• Centrômero – o local de ligação do forma, um vetor YAC é produzido e pode
fuso mitótico que segrega cada cópia ser utilizado para infectar células de
de cromossoma para um polo celular levedura em cultura, produzindo um
oposto; número ilimitado de cópias.
• Seqüências promotoras na origem de
cada forquilha de replicação, que Mutações Gênicas, Mutações Cromos-
promovem a replicação de seqüências sômicas e Impressão Epigenética
específicas de DNA
• Sítio de reconhecimento para duas As mutações gênicas e as recombinações
enzimas de restrição: EcoRI e BamHI. são as principais fontes de variabilidade
genética, proporcionando a diversidade de
Marcadores selecionáveis são também características individuais em cada
inseridos, o que permite que as células espécie, bem como a multiplicidade de
que incorporaram o vetor contendo o espécies, ao longo da evolução biológica.
fragmento de DNA humano sejam
facilmente isoladas das demais células da A diversidade genética permite a
cultura. evolução da espécie, visto que indiví-
duos que herdaram diferentes variações
A clonagem de DNA humano em YAC gênicas respondem diferentemente às
tornou possível a análise de longas mudanças ambientais, tais como mudan-
seqüências, tais como as encontradas em ças climáticas, poluição, aumento de
genes humanos. A clonagem de material radiação UV, etc. Tais diferenças de
genético de mamíferos pode ser também resposta às pressões ambientais favore-
feita através da inserção dessas seqüên- cerão a adaptabilidade e sobrevivência de
cias em plasmídeos bacterianos. Porém, o certos grupos de indivíduos daquela
plasmídeo não comporta mais do que mesma espécie em detrimento de outros,
10.000 pb, tornando evidente a vantagem aumentando, porém, a chance de sobre-
do YAC. vivência da espécie em si. Este é o
conceito moderno de seleção natural.
A clonagem de DNA humano em YAC
tem início com a digestão parcial do Mutações podem ocorrer em dois
DNA pela enzima de restrição EcoRI, diferentes níveis: cromossomas ou genes.
obtendo-se assim fragmentos muito As mutações cromossômicas são carac-
grandes. Por sua vez, um plasmídeo terizadas por alterações suficientemente
bacteriano circular é modificado, grandes para serem detectadas pelas
recebendo centrômero e elementos técnicas de citogenética clássica
promotores de replicação, de forma a (cariotipagem), incluindo cópias extras ou
permitir a replicação do material a ser faltantes de um cromossoma; deleção de
clonado pelas células de levedura. A fragmentos grandes; translocações;
seguir, o plasmídeo é digerido pelas duplicações e inversões. Quando um
cromossoma perde seu centrômero, não (Loss Of Imprinting - LOI), podem
pode ser copiado para as células-filhas, ambas causar doença, dependendo do
causando a perda de todos os alelos tecido e das circuntâncias. Um número
localizados naquele cromossoma. A crescente de doenças, até hoje atribuído a
presença de uma terceira cópia de um mutações hereditárias, tem recentemente
cromosoma constitui uma trissomia, revelado evidências que apontam para a
como no caso da síndrome de Down desregulação de processos de impressão
(trissomia do cromossoma 21). epigenética. Exemplos são as síndromes
de Prader-Willi (PWS), síndrome de
As mutações gênicas são peque- Angelman (AS), síndrome de Beckwith-
nas e passam despercebidas durante a Wiedemann, Tumor de Wilms, mola
cariotipagem, consistindo de adições, hidatiforme, teratoma ovariano completo,
perdas ou substituições de nucleotídeos. hepatoblastoma e rabdo-miossarcoma.
Mutações em células germinativas (game-
tas) são transmitidas aos descendentes, Mutações gênicas autossômicas
enquanto as que ocorrem em células dominantes são as que apresentam um
somáticas podem causar doença ou morte fenótipo patológico dominante a nível
apenas no próprio indivíduo que as celular, sendo a causa de diversas doenças
adquiriu. Portanto, as mutações podem monogênicas. Um caso intrigante é o
ser herdadas ou adquiridas (esporádicas). câncer hereditário, onde a mutação
autossômica é na maioria das vezes
Além disso, durante a fertilização recessiva a nível celular, mas o fenótipo é
ou a embriogênese, mutações de novo herdado de maneira dominante. A
podem ocorrer, principalmente durante a mutação de um dos alelos parentais é
recombinação gênica, as quais, embora herdada em todas as células do indivíduo,
presentes ao nascimento, não são mas somente as que sofrem alteração do
encontradas nos genomas materno e segundo alelo desencadearão o processo
paterno. de tumorigênese. Contudo, devido ao
fator temporal e ao grande número de
A metilação de histonas é um células com uma alteração de base, o
dos processos de controle da expressão fenótipo "câncer" é herdado de maneira
gênica, denominados controles epige- dominante, visto que estes indivíduos
néticos, possuindo um papel crucial no desenvolvem tumores com freqüência,
desenvolvimento ordenado do embrião. geralmente múltiplos e em idade precoce.
Ela é também essencial na diferenciação
celular, mantendo silenciados os genes Em tumores malignos e benignos
que não devem ser expressos em um são comuns os rearranjos cromossô-
determinado tecido. Outro controle micos, tais como a translocação, recom-
epigenético é a acetilação de histonas, binações promovidas por transposons,
que induz a expressão de genes da região inversões e deleções, que podem alterar a
acetilada. taxa de expressão de um gene ou
inibir/abolir a função de sua proteína.
O silenciamento de um gene por
metilação ou por desacetilação é Tipos de Mutações Gênicas
denominado impressão epigenética
(imprinting). Portanto, a impressão epi- Single Nucleotide Polymorphisms -
genética anormal de um gene ou a perda (SNPs): mutações de ponto, que ocorrem
de uma impressão epigenética normal em um único nucleotídeo, através da
substituição de uma base. Polimorfismos ACg CTT ACC GTT AGC C (mutação)
em genes envolvidos no biometabolismo UAG
celular são responsáveis pelas variações
individuais na taxa metabólica de res- Este tipo de mutação pode causar uma
posta a medicamentos e pelos diferentes das seguintes alterações: perda de função,
graus de susceptibilidade a poluentes e truncagem de leitura, perda de códon de
efeitos adversos a medicamentos. SNPs terminação com possível fusão de duas
podem ocorrer das seguintes formas: proteínas, efeito polar (no caso de grandes
• Transição: uma purina (A ou G) inserções).
substitui outra purina; ou uma piri-
midina (C ou T) substitui outra Mutação por Deleção: uma parte do
pirimidina; DNA é perdida, causando também
• Transversão: uma purina substitui mudança no quadro de leitura, com as
uma pirimidina ou vice-versa; mesmas conseqüências da inserção.
Assim, a mutação de ponto pode produ- Geralmente, as mutações de ponto e as
zir os seguintes resultados: inserções podem ser revertidas; as
deleções, porém, não são reversíveis.
a) redundância de bases (AA ou GG;
CC ou TT), que leva a uma mutação Inserção ou Deleção de 3 Nucleotídeos
silenciosa de mesmo sentido (ou mais): não modifica o quadro de
(samesense); leitura, embora a perda de função do
b) bases diferentes produzindo a subs- produto traduzido seja comum.
tituição do códon de um aminoácido
por outro, produzem uma mutação Grandes inserções ou deleções
missense ou de sentido errôneo. Se o podem ocorrer e geralmente resultam em
novo aminoácido possui proprie- mutações sem sentido, até que um códon
dades semelhantes ao original (wild de terminação seja encontrado nas adja-
type), a mutação pode ser neutra; cências do locus. Grandes inserções
caso contrário, pode originar uma podem também resultar no efeito polar,
proteína mutante e modificar o onde um gene mutado passa a afetar
fenótipo; outros genes abaixo e costuma ocorrer
c) a mutação de ponto pode originar um com genes operons.
códon de terminação da tradução no
meio do quadro de leitura, causando Supressão Intragênica: Ocorre quando
uma mutação sem sentido, com a uma segunda mutação mascara a presença
da primeira, sendo, portanto, uma
tradução protéica terminando preco-
cemente e dando assim origem a um mutação compensadora, que preserva
produto truncado. desta forma a função da proteína.