CURSO DE FORMACIN DE PERSONAL INVESTIGADOR USUARIO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACIN

MEMORIA DESCRIPTIVA DE PROCEDIMIENTO DE INVESTIGACIN

CURSO 2011-2012 DATOS DEL ALUMNO Nombre y apellidos: Tamara Cruz Santa Cruz Telfono de contacto: 650095424

DNI: 72754056L Direccin electrnica: tccruz_7@hotmail.com

1.- TTULO DEL PROCEDIMIENTO (Se entiende por procedimiento la utilizacin de un animal con finalidades experimentales, cientficas o educativas. No confunda proyecto con procedimiento. Un proyecto de investigacin puede tener diferentes procedimientos. Indicar la especie del modelo en el ttulo) Obtencin de anticuerpos policlonales en ratn.

2.- SIGUE ALGUNA LNEA DIRECTIVA OFICIAL? X S, especificar cual, y si es posible, adjuntar una fotocopia o documento PDF.: Commission on Life Sciences of the National Research Council and 16. Institute of Laboratory Animal Resources. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Washington, D.C.: National Academy Press; 1996.

No, pero se adjuntan referencias de publicaciones con un diseo similar (a ser posible accesibles por va Web o en su defecto fotocopias) No, ni existen publicaciones con un diseo similar 3.- OBJETIVOS (Describir los principales objetivos que se pretenden conseguir, ventajas y beneficios que se derivan utilizando un vocabulario no excesivamente tcnico. Indicar si el procedimiento est vinculado a un proyecto de investigacin, especificar cul) Se quiere determinar la localizacin celular de la protena lfk189 porque se piensa que est involucrada en la patognesis de la enfermedad gentica X. Para ello se desea obtener anticuerpos policlonales especficos, mediante la inmunizacin experimental de ratones Balb/c.

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4.- DEFINICIN DEL MODELO ANIMAL SELECCIONADO Y DEL NMERO DE ANIMALES QUE SE UTILIZARN 4.1. Definicin: Especie: Cepa: Sexo: Edad/ Peso: 4.2. Nmero de Animales: Nmero de animales utilizados en cada procedimiento Nmero de veces que est previsto realizar el procedimiento por ao 15 1

Mus musculus Balb/c Hembras 4-6 semanas/ 30g

Duracin del procedimiento* 60 *Tiempo que pasa, expresado en das, des de que comienza el procedimiento hasta que finaliza
5.

DECLARACIN SOBRE MTODOS ALTERNATIVOS:

Por mtodos alternativos se entienden aquellos que no impliquen la utilizacin de animales, permitiendo reducir el nmero de animales a utilizar o que comporten un menor grado de sufrimiento del animal. Indicar los motivos por los cules no se plantea aplicar un mtodo alternativo al procedimiento propuesto El mtodo propuesto es un mtodo alternativo x No existe ningn mtodo alternativo al procedimiento propuesto Existen mtodos alternativos, pero no estn validados Otros motivos: (Especifquelos detalladamente)

6. 6.1.

METODOLOGIA Y DISEO Descripcin del tipo de estudio o procedimientos quirrgicos previstos, especificando, si hace falta, el nmero de grupos experimentales i el nmero de animales que sern empleados en cada uno de ellos. Inmunizacin: Se realiza una inmunizacin de los ratones con protena heterloga fk189. A los 15 das se realiza la primera inmunizacin de refuerzo, a los 30 la segunda y a los 45 la tercera, todas con la mitad de la cantidad de antgeno que la inmunizacin inicial. Valoracin del desarrollo de la respuesta inmune: Una vez por semana se realiza una pequea extraccin de sangre del seno orbital para valorar los ttulos de anticuerpos producidos hasta el momento.

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Grupos experimentales: Se realizan 3 grupo experimentales cada uno de los cuales con 5 ratones a los que se les administra diferentes cantidades de antgeno (10, 50 y 100 g) a fin de determinar la cantidad ptima que minimice los daos al realizar la inmunizacin. Exanguinacin: Se realizar mediante puncin cardiaca para obtener el mximo volumen sanguneo a partir del cual purificar los anticuerpos. Para ello se anestesiar a los ratones previamente a la puncin que se realizar con agujas largas de 4-5 cm y 23-21 G. Inmediatamente obtenida la sangre se sacrificar al animal por sobredosis.

6.2. Anestesia: X No, en ningn momento S, indicar que tipo: Previamente a la exanguinacin X Ketamina + Xilacina Pentobarbital Uret Tiopental MS-222 Isoflurano Va: Intraperitoneal Va: Va: Va: Va: Va: Dosis: 100 mg/kg+10 mg/kg Dosis: Dosis: Dosis: Dosis: Dosis induccin: Dosis mantenimiento: Dosis:

Otras*: Va: *Indicar el nombre del principio activo, no el comercial 6.3. Administracin de productos

No, en ningn momento X S, en este caso indicar: Al realizar la inmunizacin; estos datos son para la inicial, en el resto de inmunizaciones la cantidad de antgeno empleado ser la mitad. Producto (nombre del principio activo, no el comercial) Va Volumen Dosis Administracin del antgeno Intraperitoneal 0,2 ml 100g/200l

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Concentracin Pauta administracin 6.4. Privacin de comida y/o bebida X No, en ningn momento S, en este caso indicar:

0,5 g/ml Cada 15 das

Comida

Bebida

En que momento del procedimiento: Hora de inicio Duracin (h)

6.5. Extraccin de sangre X No, en ningn momento S, en este caso indicar: Lugar de extraccin Volumen de cada extraccin Pauta de extracciones Seno orbital 100 l 4, cada 15 das

6.6. Riesgo de Zoonosis X No, en ningn momento S: En el caso de trabajar con agentes biolgicos, indicar el grupo o nivel de riesgo (I,II,III o IV, RD 664/1997) y las medidas de seguridad a seguir tanto por los investigadores como por el personal tcnico:

6.7. Utilizacin de Istopos radioactivos X No, ningn momento S: En caso de utilizar istopos radioactivos indicar el tipo de istopo, instalacin donde se llevar a cabo el procedimiento y las medidas de seguridad a seguir tanto por los investigadores como por el personal tcnico:

6.8 Utilizacin de sustancias qumicas citotxicas o citoestticas X No, ningn momento S: En caso de utilizacin indicar las medidas de seguridad a seguir tanto por los investigadores como por el personal tcnico:

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7. SUPERVISIN DE LOS ANIMALES 7.1. Describe en qu fases del procedimiento se prev que el animal pueda experimentar sufrimiento, dolor o angustia; qu protocolo de supervisin se utilizar (indicando parmetros i valoracin) y qu medidas correctoras estn previstas aplicar: No se prev que los animales experimenten sufrimiento no obstante sern supervisados. Peso: Sern pesados durante los tres das siguientes a las administraciones. Los animales con prdidas superiores al 25% sern sacrificados. Aspecto fsico: Se observarn alteraciones de la conducta

7.2. Analgesia: X No, en ningn momento S, en este caso indicar: Previamente a la puncin cardiaca.

Producto (nombre del principio activo, no el comercial) Va Volumen Dosis Concentracin Pauta de administracin 7.3. Criterios de punto final Indique, si es el caso, los motivos y/o criterios de aplicacin de eutanasia antes de finalizar el procedimiento si el grado de bienestar del animal as lo requiere. Cuando la puntuacin de los criterios del bienestar animal llegue a un valor de 6 sern sacrificados mediante sobredosis anestsica.

7.4. Tipo de eutanasia en caso de proceder al sacrificio del animal por aplicacin de los criterios del punto final. Asfixia por atmsfera de CO2 Dislocacin cervical X Sobredosis de anestesia

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Otros (especificar y justificar): 8. DESTINACIN DE LOS ANIMALES 8.1. Est previsto: Mantener los animales vivos con la finalidad de (explicar los motivos): X Sacrificar los animales 8.2. Protocolo de eutanasia: Asfixia por atmsfera de CO2 Dislocacin cervical X Sobredosis de anestesia Decapitacin La realizacin del procedimiento implica la muerte del animal Otros (especificar y justificar):

OBSERVACIONES O COMENTARIOS:

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9 . Consideras que podra aplicarse alguna modificacin al procedimiento con el objetivo de refinar o reducir el nmero de animales? : X NO SI En caso afirmativo, describe las modificaciones y explica en qu consistiran esas mejoras: