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Replicao do DNA
Cultivo em meio
14NH 4Cl
Apenas a hiptese semiconservativa condiz com os resultados da experincia de Meselson & Stahl.
Cadeias originais
Cadeias neosintetizadas
forquilha de replicao
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As origens de replicao
Observaes de cromossomas bacterianos em replicao: duplicao a partir de um nico ponto e avanando nas duas direces
Observaes de cromossomas eucariticos em replicao: duplicao a partir de vrios pontos avanando nas duas direces Esse ponto de partida da replicao dum cromossoma chamada origem de replicao.
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As origens de replicao
O cromossoma bacteriano tem uma nica origem de replicao constitui um nico replicon
As origens de replicao
O cromossoma eucaritico tem muitas origens de replicao constitudo por muitos replicons.
Todos so activados uma nica vez no ciclo celular ainda que no simultaneamente.
Definio de replicon: segmento de cromossoma replicado a partir de uma nica origem de replicao
Em cada origem formam-se duas forquilhas que procedem nas duas direces at encontrarem a forquilha de um replicon adjacente
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tempo
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A origem de replicao funciona apenas se estiver devidamente metilada (nas As das sequncias GATC, em E. coli). Nos 10 min a seguir replicao uma origem fica num estado refractrio (no funciona) devido a falta de metilao da cadeia nova.
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(SSBP)
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Helicase
Ao desenrolar das cadeias, produzida toro na regio a jusante. A tenso resultante na molcula eliminada pela aco da topoisomerase I que produz uma interrupo temporria numa das cadeias (nick) deixando esta cadeia livre de rodar volta da ligao fosfo-ster da outra. Existem modelos de forquilha com dmeros de polimerase a sintetizar as duas cadeias ao mesmo tempo (filme). Nos eucariotas a maquinaria envolvida mais complexa, mas o esquema o mesmo com funes anlogas.
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Fidelidade na replicao
A replicao um processo vital porque produz as novas cpias do genoma para as novas geraes de clulas. de fundamental importncia que a sntese de novo DNA seja o mais correcta possvel.
Os sistemas in vivo atingem nveis de erro to baixos como 1 erro em cada 109 nucleotdeos inseridos (10-9). Esta fidelidade to elevada conseguida por mecanismos de correco de erros que aumentam a fidelidade de base da polimerase.
Passo 5 3 polimerizao taxa de erro 10-5
contribuio para diminuio da taxa de erro 3 5 exonucleolytic proofreading mismatch repair Final 10-2 10-2 10-9
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Fidelidade na replicao
proofreading
As prprias DNA polimerases tm uma regio do complexo enzimtico com funo de correco de erros (proofreading): se o segmento de DNA que funciona como primer acaba com uma base que no emparelha correctamente, a polimerase retira um n suficiente de nucleotdeos para trs at obter uma extremidade 3-OH funcional. Esta funo aumenta a fidelidade de base da polimerase de duas ordens de grandeza. Alm disso existem outros mecanismos para manter baixa a taxa de erro. Um mecanismo encontrado em E. coli, e sucessivamente descoberto em eucariotas, o chamado mismatch repair system.
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Fidelidade na replicao
mismatch repair
Existem vrios sistemas de reparao de erros no DNA. O sistema mismatch repair serve para corrigir os eventuais raros erros que ainda escapam ao proofreading. Existem protenas especficas (MutS) que reconhecem locais com uma base no emparelhada (mismatch) e outras (MutL) removem o segmento de DNA flanqueante e promovem a sua re-sntese. Mas fundamental que seja removida a cadeia nova e no a cadeia molde. Em E. coli a cadeia molde est metilada enquanto a cadeia nova demora algum tempo para ficar metilada: MutH reconhece um stio GATC onde uma das duas adeninas no esteja ainda metilada e nicka essa cadeia o que leva sua remoo por MutL seguida por re-sntese.
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mismatch repair
Em outras bactrias e em eucariotas o reconhecimento da cadeia nova no se baseia na falta de metilao, mas possivelmente na presena ainda de descontinuidades (nicks) devidas ao facto que acabou de ser sintetizada.
MutL ou suas homlogas procuram uma interrupo e removem essa cadeia e no a outra.
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Escherichia coli
nome
funo
Reconhece a origem de replicao e abre a dupla hlice num stio especfico Desenrola o DNA Auxilia a ligao da helicase origem
DnaG
SSBP RpoABC TopA HsdM
primase
single stranded DNA binding protein RNA polimerase Topoisomerase I Dam metilase
DNA polimerase I
DNA ligase
LigAB
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Parece ser a modalidade de replicao do genoma mitocondrial humano (circular). As duas novas cadeias so iniciadas em locais diferentes.
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outros organismos (adenovrus, poliovrus) produzem uma protena que fornece um OH que a DNA polimerase pode usar como primer para produzir a partir da a cadeia cpia (no precisam de primase) noutros organismos ainda (vertebrados) existem os telmeros e a telomerase: equilbrio entre eroso das extremidades e nova sntese.
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