ARS VETERINARIA ,Jaboticabal,SP ,v.25, n.1, 032-037, 2009.

ISSN 0102-638

HISTOLOGIA, HISTOQUMICA E MORFOMETRIA DA EPIDERME E DUCTOS SUDORPAROS DO TEGUMENTO DE EQINOS.

HISTOLOGY, HISTOCHEMISTRY AND MORPHOMETRY OF THE EPIDERMIS AND DUCTS SUDORIFEROUS OF THE TEGUMENT OF HORSES.

N. A. ANDRIO1, M. L. ARAJO2, A. F. IBRAHIM3, J. W. CATTELAN4, C. CRUZ5

RESUMO Com o objetivo de fornecer dados para futuras pesquisas sobre aclimatao de equinos criados em clima tropical, um estudo sobre os aspectos histolgicos e morfomtricos do tegumento de equinos foi realizado. Foram retiradas amostras do tegumento de 12 equinos (seis machos e seis fmeas), em trs regies corporais distintas (cervical, torcica e gltea). As amostras foram submetidas ao processamento histolgico de rotina. O tegumento dos animais apresentou constituio histolgica semelhante, nas trs regies analisadas. Nas reaes histoqumicas, nas fmeas foi encontrada maior quantidade de glicosaminoglicanas neutras quando comparada com os machos. Foram realizadas as contagens de ductos sudorparos, calculadas as reas dos ductos e medida a espessura da epiderme. No houve diferena significativa entre o nmero e a rea de ductos sudorparos entre os parmetros sexo e regies do corpo; no entanto, a espessura da epiderme apresentou-se mais espessa em machos do que em fmeas, nas regies torcica e gltea. PALAVRAS-CHAVE: Eqinos. Morfometria. Histoqumica. Epiderme. Ductos sudorparos.

SUMMARY Aiming to provide data for future research on acclimation of horses raised in tropical climate, we carried out this work on the histological and morphometric aspects of the tegument of horses. Skin samples were taken from 12 horses (six males and six females) in three different body regions (cervical, thoracic and gluteal). The samples went through routine histological processing. The skin of the animals showed similar histological constitution in all three regions. Histochemical reactions in females showed higher amount of neutral glycosaminoglycans when compared to males. Sudoriferous duct counts areas were calculated and the epidermis thickness was measured. There was no significant difference between the number and area of sudoriferous ducts between the parameters sex and regions of the body; however, skin was found thicker in males than in females, in thoracic and gluteal regions. KEY-WORDS: Horses. Morphometry. Histochemistry. Skin. Duct sudoriferous

Mdica Veterinria Mestranda do Programa de Ps Graduao em Medicina Veterinria FCAV-Unesp-Jaboticabal-SP. Rua: Chile, 1649. Jardim Canad. CEP:14020-610- Ribeiro Preto-SP. End.Eletrnico: nicoleandriao@yahoo.com.br 2 Professor Assistente Doutor do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal.- FCAV-Unesp-Jaboticabal-SP. 3 Biloga Mestranda em Aqicultura -FCAV-Unesp-Jaboticabal-SP. 4 Professor Adjunto do Departamento de Clnica e Cirurgia Veterinria. FCAV-Unesp-Jaboticabal-SP. 5 Bilogo Doutor. FCAV-Unesp-Jaboticabal-SP.

32

INTRODUO Os eqinos so bastante sensveis s mudanas bruscas de temperatura e s precipitaes pluviomtricas exageradas, no se estabelecendo bem em regies onde predominem os ventos sul (GIANNONI, 1971). O tegumento comum constitui a cobertura natural do corpo. Formado pela pele, com seus estratos e alguns anexos, como plos, glndulas sudorparas e sebceas, entre outros, constitui uma barreira entre o meio ambiente e o meio interno do organismo animal, protegendo-o contra agentes fsicos, qumicos e microbianos (LAVIELLE et al. 1985, BOUWSTRA et al.1998). Os pigmentos de melanina, presentes na epiderme, oferecem proteo contra a radiao ultravioleta, sendo indicadores de adaptao s altas temperaturas climticas (AMAKIRI, 1979). A espessura da pele do eqino varia de 1 a 5 mm, nas diferentes regies do corpo; as glndulas sudorparas so de cor amarelada ou marrom, aparecendo em quase toda a superfcie corprea, sendo mais numerosas e maiores nas narinas, regio do flanco, glndulas mamrias e prepcio (SISSON, 1981). As glndulas sudorparas so muito desenvolvidas nos eqinos e no homem, com papel importante no mecanismo de resfriamento do corpo. A sudorese resulta do bom funcionamento das glndulas sudorparas, localizadas na pele, cuja secreo eliminada por grande nmero de pequenos ductos, contribuindo assim, para regular a temperatura corporal e participar do bom funcionamento cutneo. Embora estudos tenham sido realizados, como: quantificar o deslocamento da pele da parte proximal dos membros no cavalo, durante a marcha (VAN WEEREN et al., 1990); investigar a histologia da pele da glndula mamria de gua (LUDEWIG et al. 1997); anatomia microscpica da pele do eqino com referncia especial derme (WAKURI et al. 1995); anatomia microscpica da pele de eqinos (TALUKDAR et al. 1972); e estudar a histologia da juno derme-epiderme da pele do cavalo (TALUKDAR et al. 1973), no foram encontrados trabalhos abordando as diferenas morfolgicas, aspectos morfomtricos e histoqumicos do tegumento de equinos. Assim os objetivos do presente trabalho foram: avaliar os aspectos histolgicos e histoqumicos da epiderme e dos ductos sudorparos e realizar a morfometria dos ductos sudorparos e da epiderme de trs regies corporais (cervical, torcica e gltea) do tegumento desta espcie animal. MATERIAL E MTODOS Para realizao desta pesquisa foram utilizados 12 eqinos sem raa definida, adultos, sendo 6 machos e 6 fmeas, provenientes do Hospital Veterinrio da FCAV da UNESP, Campus de Jaboticabal. As bipsias de tegumento foram realizadas na regio cervical (27 cm cranial crista da escpula); regio torcica (8. costela a 30 cm ventralmente s apfises espinhosas das vrtebras torcicas) e regio gltea

(15 cm lateral coluna vertebral), aps anestesia local por infiltrao (Xilocana 2%), com o auxlio de uma trefina com 1 cm de dimetro na rea de corte (ARAUJO, 1990). Os fragmentos do tegumento foram fixados em soluo de Bouin, por 48 horas. A seguir, o material foi transferido para o lcool 70 %, at a retirada do excesso de fixador. Aps a retirada do fixador, os fragmentos de bipsia foram desidratados em srie crescentes de etanol (70 100%), diafanizados em xilol, embebidos e emblocados em parafina plstica (HistosecMerck). Aps a incluso foram realizados a microtomia em micrtomo automtico (Leica RM 2155), obtendo-se cortes de 5 m em seqncia semiseriada (1corte/100m desprezados). Aps a microtomia os cortes foram corados em Hematoxilinaeosina. As reaes histoqumicas foram realizadas para a deteco de mucosubstncias cidas (AB pH 0,5; AB pH 2,5) e para deteco de glicosaminoglicanas neutras (PAS) e conjugadas (PAS+AB pH 2,5). O processamento histoqumico e o histolgico das amostras foram realizados no setor de Tcnicas Morfolgicas do Laboratrio de Anatomia da FCAV/UNESP. Utilizando-se um Sistema de Anlises de Imagens (Image Pro-Plus Media, Cybernetcs, USA), foram realizadas as medidas morfomtricas da espessura da epiderme (camada celular), em micrmetros (m), quantificados os ductos sudorparos e calculado a rea destes ductos em m2. Os dados obtidos nas anlises morfomtricas foram submetidos verificao de distribuio normal e anlise de varincia (ANOVA) e suas mdias foram testadas pelo teste de Tukey 5 %. RESULTADOS E DISCUSSO O tegumento do eqino apresentou constituio histolgica semelhante, nas trs regies analisadas. A epiderme apresentou - se composta por um epitlio estratificado pavimentoso queratinizado, formado por trs estratos (Figura 1B), As clulas da camada mais externa apresentaram ncleos achatados e estas em processo de queratinizao e descamao. O segundo estrato apresentou-se constitudo por duas camadas de clulas(espinhosa e granulosa) com ncleos arredondados em vrias alturas. O estrato basal exibiu clulas com ncleos arredondados com colorao mais intensa. A epiderme continha algumas invaginaes revestindo o folculo piloso e as glndulas sebceas, como concluiu Watson et al (1990), em seus estudos com sunos. Na epiderme no houve reao com PAS (Figura 3A), AB 0,5 (Figura 2C), AB 2,5 (Figura 2B) e PAS + AB (Figura 3D). A derme apresentou-se constituda por tecido conjuntivo frouxo composto por fibras elsticas e colgenas, fibroblastos e fibrcitos. Nesta regio, observou-se a presena de folculos pilosos e das glndulas sebceas, envoltas pelo tecido epitelial de revestimento proveniente da invaginao da epiderme, alm dos ductos sudorparos (Figura 1A). Os ductos sudorparos, localizados na regio mais profunda da derme e em grupos, apresentaram um epitlio cbico simples formado pelo arranjo das 33

clulas epiteliais semelhantes s clulas das glndulas sebceas, porm seus ncleos ocuparam a regio mais basal da clula (Figura 1C), semelhante a ROMUALDO (2003). Tais ductos reagiram fortemente ao PAS nas fmeas (Figura 3B) e medianamente nos machos (Figura 3C), no apresentaram reao ao AB 0,5 (Figura 2A), ao AB 2,5 (Figura 2B) e ao PAS + AB (Figura 3E). No se observou tecido adiposo na derme do eqino, diferentemente de RomualdO (2003), que observou tecido adiposo na derme de sunos. O tegumento do eqino apresentou caractersticas histolgicas semelhantes s estruturas observadas em outros mamferos, porm possuindo uma epiderme mais delgada e ausncia de tecido adiposo, o que possivelmente, contribua na perda, sob forma direta, de grande quantidade de gua e eletrlitos para o ambiente atravs da pele, proporcionando a diminuio da temperatura corporal. Isso demonstra que o mecanismo de termorregulao do eqino parece estar intimamente ligado s caractersticas histolgicas do tegumento, abrindo perspectivas para futuras pesquisas sobre aclimatao desta espcie em clima tropical.

Quanto s anlises morfomtricas, os valores mdios da rea dos ductos sudorparos, o nmero desses ductos e a espessura da epiderme, esto apresentados nas tabelas 2 e 3. Quanto rea dos ductos sudorparos no houve diferena significativa entre os parmetros sexo (macho e fmea) e regio (cervical, torcica, gltea). Romualdo (2003), estudando a epiderme de sunos, encontrou diferenas significativas no permetro dos ductos sudorparos entre dois diferentes tipos de cruzamentos. Na quantificao dos ductos sudorparos, no houve diferena significativa entre os parmetros sexo e regio, diferentemente do observado por Romualdo (2003), em que foi encontrada diferena significativa de nmero de ductos entre dois diferentes tipos de cruzamentos. Aps a anlise estatstica foi encontrada diferena significativa na espessura da epiderme entre eqinos machos e fmeas e entre as regies cervical, torcica e gltea. Romualdo (2003) estudando a epiderme de sunos de dois diferentes tipos de cruzamentos tambm encontrou diferenas significativas de espessura entre essas.

Figura 1- Fotomicrografia do tegumento de eqino evidenciando: A. Epiderme (EP), com suas invaginaes, a derme (DE) constituda de tecido conjuntivo frouxo, com folculos pilosos (FP), glndulas sebceas (GS) e ductos sudorparos (DS). Colorao H.E. 100x. B. Epitlio pavimentoso queratinizado da epiderme (EP), formado por trs estratos. Colorao H.E. 200x. C. Ductos sudorparos (DS), localizados na derme e em grupos, apresentando um epitlio cbico simples. Folculos pilosos (FP). Colorao H.E. 200x.

34

Figura 2- Fotomicrografia do tegumento de eqino evidenciando: A. Reao negativa ao AB pH 0,5 nos ductos sudorparos (DS) da pele de eqino. 200x. B. Reao negativa ao AB pH 2,5 na epiderme (EP) e nos ductos sudorparos da pele de eqino. 200x. C. Reao negativa ao AB pH 0,5 da epiderme (EP) da pele de eqinos. 200X.

Figura 3- Fotomicrografia do tegumento de eqino evidenciando: A. Reao negativa ao PAS na epiderme (EP) da pele de eqino. 100x. B. Reao positiva ao PAS nos ductos sudorparos (seta) da pele de eqino fmea. 200x. C. Reao positiva ao PAS nos ductos sudorparos (seta) da pele de eqino macho. 200x. D. Reao negativa ao PAS + AB na epiderme da pele de eqino. 200x. E. Reao negativa ao PAS + AB nos ductos sudorparos da pele de eqino. 200x. 35

Tabela 1 - Resultado das reaes de histoqumica aplicada aos ductos sudorparos e a epiderme do tegumento de eqinos. . Jaboticabal, FCAV-UNESP, 2005. Reao de Histoqumica Macho AB 0,5 AB 2,5 PAS ++ Fmea +++ Macho Fmea Ductos sudorparos Epiderme

PAS+AB (+++) Fortemente corado; (++) Corado; (+) Fracamente corado; (-) Negativo.

Tabela 2 - Mdia desvio-padro do nmero de ductos sudorparos, por campo (2.281.700 m2 )e da rea dos ductos sudorparos em m2, de eqinos adultos sem raa definida de acordo com o sexo e a regio corprea. Jaboticabal, FCAV-UNESP, 2005. Nmero de ductos sudorparos

Regio Corprea Gltea Sexo Fmea Macho Mdia 22,104,93 23,137,46 22,620,73 29,646,54 23,124,36 26,384,61 22,737,29 19,084,11 20,912,58 24,823,41 21,781,91 23,302,15 Cervical Torcica Mdia

rea dos ductos sudorparos

Regio Corprea Gltea Sexo Fmea Macho Mdia 415,5634,51 392,3943,13 403,9716,38 367,4929,65 372,8239,15 370,163,77 382,2262,46 377,8438,20 380,033,10 388,4220,11 381,0210,29 384,725,24 Cervical Torcica Mdia

Tabela 3 - Mdia desvio-padro da espessura da epiderme em m, de eqinos adultos sem raa definida de acordo com o sexo e a regio corprea. Jaboticabal, FCAV-UNESP, 2005. Espessura da epiderme Gltea Sexo Fmea Macho 23,833,13a 60,1520,45c 52,5717,03b 28,960,92d 32,040,35a 32,371,89d Regio Corprea Cervical Torcica

Mdias no seguidas de mesma letra diferem pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade

36

CONCLUSES O tegumento do eqino apresentou caractersticas histolgicas semelhantes s estruturas observadas em outros mamferos, porm possuindo uma epiderme mais delgada e ausncia de tecido adiposo, o que possivelmente, contribua na perda sob forma direta, de grande quantidade de gua e eletrlitos para o ambiente, proporcionando a diminuio da temperatura corporal, confirmando que o mecanismo de termorregulao do eqino est intimamente ligado s caractersticas histolgicas do tegumento. De um modo geral, histoquimicamente, o no apresentou tegumento do eqino glicosaminoglicanas conjugadas e muco substncias cidas, indicando a ausncia de secreo cida pelas glndulas sudorparas e ausncia de conjugao entre protenas cidas e neutras na constituio do tecido. Foi constatada apenas a presena de glicosaminoglicanas neutras em suas estruturas. Nas fmeas foi encontrada maior quantidade de glicosaminoglicanas neutras quando comparada com os machos. Os achados morfomtricos obtidos nesta pesquisa podem servir como valores de referncia e subsidiar novas investigaes sobre o tegumento de eqinos, abrindo perspectivas para pesquisas adicionais sobre aclimatao desta espcie em clima tropical. AGRADECIMENTOS Fapesp (Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo) pelo apoio financeiro. Proc. n:04/13979-6 Profa. Dra. Marcia R.F. Machado, pela disponibilidade do setor de tcnicas morfolgicas.

BOUWSTRA, J. A., GOORIS, G. S., DUBBELAAR, F. E. R., WEERHEIM, A. M., Role of ceramid in molecular organization of stratum corneum lipids. J. Lipid Research, v.39, n.1, p. 186-196, 1998. GIANNONI, M. A. Eqinocultura, alimentao. Jaboticabal, 1971. p. 1-120. manejo e

LAVIELLE, R. E., GODOY, A. M. F., SANCHEZ, J. T. Comparison of the numbers of mast cells ,eosinophils and melanocytes in the skin of indoBrazilian and F1(Zebu x Holstein). Vet. Medicin. v.16, p.143-149. 1985. LUDEWIG, T. Histological investigations on the skin of the mammary gland of mares. Dtsch Tierarztl Wochensch. v. 104, n.11, p. 471-474, 1997. ROMUALDO, L. M. Contribuio ao estudo morfolgico do tegumento de sunos: epiderme e ductos sudorparos. Jaboticabal. p.1-50, 2003. SISSON, S. Anatomia dos animais domsticos tegumento comum. In GETTY, R. (Ed.), 5. ed., Rio de Janeiro, Interamericana, v.1, p. 1134, 1981. TALUKDAR, A. H. A histological study of the dermoepidermal junction in the skin of horse. Res. Vet. Sci. v. 15, n. 3, p. 328-32, 1973. TALUKDAR, A. H., CALHOUN, M. L., STINSON A. W. Microscopic anatomy of the skin of the horse. Am. J. Vet. Res. v. 33, n. 12, p. 2365-90, 1972. VAN WEEREN, P. R., van den BOGERT, A. J., BARNEVELD, A. Quantification of skin displacement in the proximal parts of the limbs of the walking horse. Equine. Vet. J. (Suppl), n. 9, p. 110-8, 1990. WAKURI, H., MUTOH, K., LIU, B. Microscopic anatomy of the equine skin with special reference to the dermis. Okajimas. Folia. Anat. Jpn. v. 72 n. 2-3, p. 177- 83 1995. WATSON, S. A. J., MOORE, P. M. Postnatal development of the hair cycle in domestic pig. Journal of Anatomy, Cambridge, v.170, p.1-9, 1990.

REFERNCIAS AMAKIRI, S. F. Melanin and dopa-positive cells in the skin of tropical cattle. Acta Anatmica. v.103, p. 434444, 1979. ARAUJO, M. L. Contribuio ao estudo morfolgico do tegumento de bovinos das raas Holands Preto e Branco e Jersey, 109 f. Tese (Doutorado em morfologia) Instituto de Biocincias, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, 1990.

37