INFORME DE CAMPO NOMBRE DEL PROYECTO: BIORREMEDIACIN DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS EN LA ESTACIN CIENTFICA PEDRO VICENTE MALDONADO,

MEDIANTE EL EMPLEO DE CEPAS MICROBIANAS ANTRTICAS, EN TERRARIOS. INVESTIGADOR: Miguel Gualoto (FUNDEMAR), Tania Oa (UTN). 1. ANTECEDENTES DEL PROYECTO/COMPONENTE. En el ao 2010, el FUNDEMAR (Fundacin para el Desarrollo Martimo, Fluvial y Lacustre), con el aval acadmico de la Universidad de las Amricas de Quito, present el proyecto Bsqueda y aislamiento de bacterias antrticas con capacidad para degradar hidrocarburos, el mismo que fue aprobado por el SENESCYT y form parte de la XIV Misin Cientfica del Ecuador a la Antrtida. Los primeros hallazgos de la diversidad morfolgica de los microorganismos y las particularidades de su crecimiento fueron presentados en la conferencia Ecuador en la Antrtida en la Universidad de las Amricas de Quito, el mes de abril del 2010. El equipo de investigadores aisl un total de 33 cepas microbianas. La investigacin continu con pruebas de biodegradacin de hidrocarburos; de las 33 encontradas, nueve demostraron capacidad para degradar hidrocarburos. Los resultados de este trabajo fueron presentados en las jornadas Ecuador en la Antrtida, Historia, Proyecciones y Perspectivas, organizado por el IAEN, INAE y SENESCYT, el 17 de noviembre del 2011. De igual forma se hizo un rastreo de microorganismos en las zonas nevadas del Ecuador, especficamente en el nevado Antisana a la altitud de 4200m. Se realiz un estudio comparativo de la diversidad morfolgica microbiana antrtica y andina, sus resultados se presentaron en las Jornadas Antrticas de la Universidad del Pacfico de Guayaquil, en el 2010. El proyecto fue considerado por el SENESCYT para el programa binacional EcuadorVenezuela, de investigaciones antrticas dirigido a resolver problemas comunes a las dos naciones, esto es, un programa de investigacin de Biotecnologa aplicada, que beneficie por igual a las partes. En la Actualidad la Universidad Tcnica del Norte UTN, de la ciudad de Ibarra avala acadmicamente al proyecto, mediante convenio de participacin con el FUNDEMAR son: Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas IVIC y Universidad Tcnica del Norte UTN. Los investigadores de ambas instituciones planificarn y realizarn las primeras actividades conjuntas para perfilar el proyecto binacional y asegurar su xito a mediano y largo plazo.

2. OBJETIVO GENERAL DEL PROYECTO/CUMPLIMIENTO Degradar hidrocarburos con las cepas microbianas aisladas in situ, mediante pruebas de biodegradacin (terrarios -bandejas de 20 kg), de suelos contaminados con hidrocarburos alifticos y aromticos, bajo condiciones locales de la Estacin Cientfica Pedro Vicente Maldonado. 3. OBJETIVOS ESPECFICOS DEL PROYECTO /CUMPLIMIENTOS Confirmar los datos obtenidos en la Misin XIV. Ampliar la bsqueda a otras zonas antes no muestreadas, tales como Barrientos y la isla Dee. Definir el tema, actividades y cronogramas de trabajo del proyecto binacional de biorremediacin, el mismo que estar sujeto a la aprobacin de las instituciones que brindan el soporte acadmico. Montar terrarios contaminados con hidrocarburos alifticos y aromticos, para evaluar la capacidad de los microorganismos para degradar hidrocarburos.

4. HIPTESIS DEL PROYECTO/COMPONENTE. Los microorganismos aislados de suelos antrticos de las Estaciones Pedro Vicente Maldonado y Arturo Prat, tienen la capacidad de biodegradar hidrocarburos bajo condiciones ambientales extremas y pueden ser empleados en la biorremediacin de amplias zonas andinas contaminadas por hidrocarburos. 5. REA DE ESTUDIO. El rea de estudio es Biotecnologa aplicada, con el proyecto de Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos con microorganismos antrticos. El estudio se limit geogrficamente a la Isla Greenwich: Base Maldonado, Estacin Arturo Prat y Punta Ambato. Isla de Barrientos e isla Dee. Posteriormente al retorno se tomar una muestra adicional en Belinshaussen. 6. CRONOGRAMA DEL TRABAJO DE CAMPO EFECTUADO FECHA 12/01/2012 ACTIVIDADES Arribo a Maldonado Descarga de contenedores, adecuacin de la estacin Reconocimiento del laboratorio, adecuacin e instalacin de equipos Salida de reconocimiento de la zona 2 OBSERVACIONES Trabajamos hasta la 3 am.

13/01/2012 14/01/2012

Asistencia de los tcnicos laboratoristas de la misin Charla de comportamiento y

15/01/2012

16/01/2012

17/01/2012

18/01/2012

19/01/2012

20/01/2012

21/01/2012

22/01/2012 23/01/2012

24/01/2012 25/01/2012

26/01/2012 27/01/2012

aledaa a Maldonado Reunin de planificacin de trabajos de campo con el director del INAE Reunin de trabajo con la contraparte venezolana. Definicin del tema de investigacin y presentacin de perfil al director del INAE Muestreo conjunto con Venezuela en la isla Barrientos Medicin de parmetros bsicos de las muestras Muestreo de suelos en Maldonado (proyecto ecuatoriano) Preparacin de materiales y medios de cultivo Medicin de parmetros bsicos de las muestras Muestreo de suelos en Maldonado, para proyecto venezolano. Siembras y cultivo de muestras de Barrientos y Maldonado Lavado y esterilizacin de materiales Muestreo en Punta Ambato Control de cultivos Muestreo de la zona B, para Venezuela Siembra e incubacin de muestra de Punta Ambato. Recuperacin de materiales, secado y etiquetado Preparacin de medios de cultivo Verificacin de crecimiento de cultivos Redaccin del informe de campo Muestreo pata Venezuela, sector A Preparacin de muestras Trabajo en el laboratorio. Esterilizacin de suelos. Resiembra de cultivos, obtencin de colonias individuales. Muestreo en la base chilena de Prat Preparacin de cultivos. Medio de inoculacin y cultivo para impregnacin de suelos y papel Impregnacin de suelos y papel con microorganismos. Muestreo en Dee Inicio de las pruebas de biorremediacin 3

normas de seguridad para los investigadores en la Isla Greenwich Documento de proyecto conjunto entregado al Comandante Jos Olmedo Se emplea cinco submuestras ubicadas a 25 metros en radio desde el punto central Se evidencias restos de hidrocarburo en el agua superficial en la zona de acceso a sala de mquinas

Se tom una bajo la metodologa acordada y otras seis al azar para Venezuela Pruebas de funcionamiento y calibracin del autoclave, esterilizador. Se recuperaron materiales dejados por expediciones anteriores aprovechando los equipos del laboratorio Recepcin del formato de informe Visita al glaciar Las colonias aisladas sern llevadas a Quito Invitacin a un almuerzo Secado dentro de la cmara de flujo laminar Transporte en tubos plsticos estriles Ubicacin en sitio libre de

28/01/2012

en terrarios. Lavado de materiales usados Secado de filtros impregnados. Visita y conferencia en Prat Ranchera Redaccin de informe de campo. Informe de actividades cumplidas Embalaje de materiales y equipos Salida en direccin a King George

29/01/2012 30/01/2012 31/01/2012 01/02/2012

inundacin Conferencia sobre el tema de Biorremediacin. Envo de muestras, cadena de fro. Cocina Presentacin pblica de resultados Equipos personales y de investigacin Rompe hielos Viel

7. DESCRIPCIN DEL TRABAJO DE CAMPO / METODOLOGA PARA LA OBTENCIN DE LOS DATOS. 7.1. Trabajos de campo. Identificacin de zonas de muestreo. Con el propsito de reconfirmar los datos obtenidos en la primera misin, se decidi tomar las muestras en los mismos sitios antes muestreados, esto es: Maldonado (junto a sala de mquinas), Arturo Prat (junto a la zona de almacenamiento de combustibles), Belinshausen y Punta Ambato (testigo) Adems tomamos la decisin de ampliar los sitios de muestreo a otras zonas no afectadas por contaminacin por hidrocarburos, tales como: Barrientos y Dee. Toma de muestras Las muestras tomadas fueron muestras compuestas de cinco submuestras. El mtodo de toma fue mediante cuarteo. Se retir en lo posible el material ptreo y materia orgnica presentes. La cantidad de las muestra fue un 1kg, al efecto se emplearon sobres de papel aluminio dentro de fundas sifloc. Las muestras se preservaron dentro de un cooler, enterrado en la nieve a temperatura ambiente. Para la toma de las muestras se emple una pala metlica. La profundidad de las muestras fue de 12-15cm. Cada muestra fue georeferenciadas y etiquetada y transportada por los investigadores hasta el laboratorio. La toma de muestras e efectu con un saca bocados y una pala metlica de jardn.

Tomando muestras por cuarteo en Barrientos

7.2. Trabajos de laboratorio. Preparacin de materiales Los materiales se esterilizaron se lavaron, secaron y esterilizaron en el autoclave del laboratorio a la temperatura de 121C durante 15 minutos. Se recuper material usado por otras expediciones, en especial cajas petri de plstico, que fueron lavadas, secadas y desinfectadas mediante UV, de la cmara de flujo laminar del laboratorio durante 2 horas. Preparacin de medios. Los medios preparados disponibles fueron: Agar nutritivo, PDA y agar triple azcar con Fe. Los medios fueron preparados en frascos boeco, y autoclaveados, para su posterior vertido en las cajas petri experimentales. Realizacin de siembras. Las siembras se realizaron mediante diluciones, segn metodologa estndar, las diluciones destinadas a siembra fueron 10-1 y 10-2; no solo porque existe escases de materiales, sino tambin porque la cantidad de microorganismos presentes en suelos antrticos y del permafrost, son muy bajas. Las siembras se efectuaron dentro de la cmara de seguridad de flujo laminar ascendente, con la ayuda de una aza calibrada y una lmpara de alcohol para el flameado del aza. Tambin se hicieron siembras directas, para asegurar la posibilidad del surgimiento de colonias microbianas en los medios de cultivo.

Preparando materiales y medios

Cultivos Se realizaron cultivos a temperatura ambiente (la del laboratorio) y a 15 grados en un termostato calibrado. Las muestras a temperatura ambiental se introdujeron en un cooler, para proteccin del personal operativo e investigadores, as como de los cultivos. Identificacin morfolgica Anlisis morfolgico de colonias Por falta de materiales para identificacin gram no se hizo esta prueba ni tampoco pruebas bioqumicas bsicas como almidn, glucosa y gelatina. Preparacin de celdas de tratamiento Seleccionar seis bandejas de plstico, impermeabilizarlas con ayuda de lminas de polietileno. Tomar 20 kg de suelo de las inmediaciones de la Estacin Maldonado. No es factible por razones de tiempo y de logstica esterilizar los suelos, as que los microorganismos que estn presentes en l no sern eliminados. En consecuencia la adicin de microorganismos que haremos ser una bioaumentacin a los ya existentes en el suelo. Los suelos sern contaminados intencionalmente con 15000 ppm de TPHs, esto es con diesel, y gasolina y con 5000 ppm HAPs, esto es benceno. Para evitar la volatilizacin natural de los hidrocarburos las celdas experimentales se cubrirn con una lmina de polietileno. GASOLINA: 300ml x 2 = 600ml/2 celdas DIESEL: 300ml x 2 = 600ml/2 celdas BENCENO: 100ml x 2 = 200ml/2 celdas

Preparando las celdas experimentales

Inoculacin de microorganismos. Preparacin del medio de propagacin. Extracto del suelo: 100g en 900 ml de agua destilada. Autoclavear y retirar el sobre nadante. Adicionar 30 ml de solucin de glucosa al 10%, 20ml de almidn al 10%, 5ml de cido ctrico al 5%, 1,5 ml de solucin de MgSO4, MnSO4, al 1% por cada 1000ml de solucin. Acidular con HNO3 hasta un pH 6,5. Inocular 1ml de cada colonia seleccionada, con una concentracin estimada de 108 Ufcs. Incubar durante 24 h a 15C e inocular a razn de 15ml/kg de suelo, en cada una de las celdas experimentales.

Adicionando el cultivo microbiano

Bioaumentacin. La inoculacin se har en cantidad proporcional a 25 litros/m3, obtenido en base a trabajos de biorremediacin de campo en el Ecuador y/o en base a las pruebas de biorremediacin experimentales con bacterias antrticas realizadas en el Ecuador, esto es 15ml/kg de suelo contaminado. (Collerman 1997, Coulon y Delille 2003,

Cuningham y Philp 2000); aunque otros consideran innecesaria la aplicacin de tcnicas de biomagnificacin (Ruberto y col. 2003). Bioestimulacin. Esta alternativa, no se la consider, esto es, no se adicionaron nutrientes adicionales por cuanto se estima que los suelos antrticos con actividad biolgica de musgos y lquenes disponen de dichos nutrientes. El mismo hecho de adicionar el hidrocarburo al suelo es ya una Bioestimulacin. Preservacin de microorganismos y transportacin a Ecuador. Metodologa de preservacin de microorganismos antrticos y transportacin hasta el ecuador en suelo Las bacterias formadoras de esporas se pueden preservar exitosamente durante aos en suelo estril, secado al aire [10]. Los suelos se esterilizan por autoclaveado por varias horas durante dos das. El inoculo de suspensin de esporas (1 ml) se introduce en un tubo que contiene el suelo estril y se lo deja a temperatura ambiente, hasta que se seque. Despus los tubos se tapan con una tapa estril y se conservan en refrigeracin. En papel Es un mtodo relativamente fcil de conservacin de bacterias es el secado sobre tiras o discos de papel filtro estril. Este mtodo es ideal para el control de la calidad del cultivo. El papel puede conservarse dentro de un tubo estril de tapa rosca. Cuando se lo necesita con ayuda de una pinza estril, se los deposita en el medio lquido de cultivo correspondiente. Los representantes de la familia Enterobactenaceae, as como muchas otras bacterias se pueden conservar en el papel por el transcurso de varios aos. La tcnica de este mtodo consiste en: El papel estril es impregnado con una suspensin de bacterias, que contiene 108 clulas/mg y se secan al aire o al vaco [2]. Las bacterias sobreviven ms y mejor en el secado en vaco. Las cintas o discos de papel se conservan en tubos cerrados en extractores o entre hojas de plstico transparente estril [7] Si el desecador se introduce en la refrigeradora, el tiempo de conservacin se prolonga.

Realizando la impregnacin microbiana en el papel estril

8.- DATOS OBTENIDOS 8.1. Trabajos de campo.

FECHA OESTE (DD/MM/AA) SUR OBJETO ATRIBUTO PROYECTO DE INSTITUCIN INVESTIGADOR EQUIPOS METODOLOGA INESTIGACIN UTILIZADOS punto Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin) 1 Muestra compuesta

16/01/2012 357658 3077181 suelo ISLA BARRIENTOS

16/01/2012 358545 3072758 suelo ISLA BARRIENTOS

punto

UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin)

1 Muestra compuesta

17/01/2012 358549 3072760 suelo SALA DE MAQUINAS ESTACION PVM 19/01/2012 356045 3073434 suelo PUNTA AMBATO

punto

UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin)

1 Muestra compuesta

punto

UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin)

1 Muestra compuesta

24/01/2012 362706 3069648 suelo ESTACION ARTURO PRAT 26/01/2012 355663 3074871 suelo ISLA DEE

punto

UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin)

1 Muestra compuesta

punto

UTNDr. Miguel GPS map 76 FUNDEMARGualoto CSx INAE Ing. Tania Oa (Garmin)

1 Muestra compuesta

8.2. Trabajos de laboratorio No CDIGO LUGAR PBR-EV-B1 Barrientos 1 PBR-EV-B2 Barrientos 2 PBR-EV-M3 Maldonado 3 PBR-EV-PA4 Punta Ambato 4 PBR-EV-PR5 Arturo Prat 5 PBR-EV-D6 Dee 6

TEMPERATURA 9,2 C 9,6C 3,2C 2,7C 5,4C 4,3C

pH 6,15 7,10 7,95 7,11 7,32 7,.27

De las siembras realizadas en tres medios de cultivo, se obtuvieron los siguientes resultados. Tabla No1 Resultados de las siembras
MEDIO BAJO 15 C DE INCUBACIN AN PDA CANTIDAD No 1 CODIGO -1 DILUCIN -2 CODIGO -1 2 DILUCIN -2 CODIGO -1 3 DILUCIN -2 CODIGO -1 4 DILUCIN -2 TOTAL 0 19 0 27 1 47 SIEMBRAS DIRECTAS 5 6 7 8 9 CODIGO CODIGO CODIGO CODIGO CODIGO TOTAL SD-M3 SD-B1 SD-B2 SD-PA SD-M 8 36 100 13 37 194 75 37 100 6 0 218 7 16 100 8 0 131 90 89 300 27 37 5 6 7 8 9 CODIGO CODIGO CODIGO CODIGO CODIGO TOTAL SD-M3 SD-B1 SD-B2 SD-PA SD-M 2 24 0 0 0 26 0 0 0 11 0 11 0 0 0 0 0 0 2 24 0 11 0 1 TOTAL 1 0 3 4 CODIGO 6 7 8 4 DILUCIN -2 0 17 0 9 0 33 0 -1 0 PBR-EV-PA4 1 0 2 0 1 3 CODIGO 9 31 35 3 DILUCIN -2 6 3 PBR-EV-PA4 0 0 0 0 4 13 -1 3 PBR-EV-M3 5 17 2 2 2 6 CODIGO 14 19 22 2 DILUCIN -2 2 1 PBR-EV-M3 5 13 21 34 1 4 -1 4 PBR-EV-B2 5 0 PBR-EV-B1 3 8 11 22 28 1 DILUCIN -2 2 0 PBR-EV-B2 0 8 12 16 0 2 No CODIGO -1 0 TS TOTAL TEMPERATURA AMBIENTE AN MEDIO PDA CANTIDAD PBR-EV-B1 0 7 7 9 TS TOTAL

Fuente: Dr. Miguel Gualoto. Trabajo de campo Estacin Cientfica Pedro Vicente Maldonado

10

El nmero de colonias identificadas en las dos diluciones, deja en evidencia que la cantidad de microorganismos presentes es baja. Siendo la primera dilucin de de mayor abundancia. Este hecho es similar tanto para los microorganismos cultivados a 15C, as como para los cultivados a temperatura ambiente (laboratorio). Anlisis por medio de cultivo. El medio que presenta mayor abundancia de colonias en las diluciones es TS para las cultivadas bajo 15C, con 47 para todas las muestras; en tanto que AN es el de menor abundancia con 9 colonias. Para las siembras directas, el medio que presenta ms abundancia es PDA con 218 colonias y la de menor abundancia TS con 131 colonias. Para las muestras sembradas a temperatura ambiente (5C), el medio de mayor abundancia es TS con 33 colonias y el de menor PDA con 9 colonias. Las muestras de siembra directa a temperatura ambiente, presentan un ligero incremento del nmero de colonias, siendo la ms abundante AN con 26 colonias y TS la de menor con cero colonias. Anlisis por muestra En relacin a la muestra de mayor abundancia a temperatura de 15C, es la de Maldonado M3, con un total de 35 colonias en los tres medios testeados. La de menor abundancia es B2, con 22 colonias. El medio de mayor abundancia en siembra directa a 15C es, La siembra directa de mayor abundancia en los tres medios es B2, con ms de 300 colonias y la de menor abundancia PA con 27 colonias El nmero de colonias en las pruebas cultivadas a temperatura ambiente en relacin a las muestras, presenta los siguientes resultados. Por diluciones; M3 con 34 colonias, y la de menor abundancia PA4 con cero colonias. Las siembras directas al ambiente, sealan a B1 como la ms abundante con 24 colonias y a B2 como la menor con cero colonias. Comparacin del crecimiento de colonias de cada muestra en los tres distintos medios, para siembras cultivadas a 15C. Tabla No2. Nmero de colonias por medio y por muestra a 15C, diluciones 10-1 y 10-2.
15c MUESTRA B1 B2 M3 PA AN 5 7 6 1 MEDIO PDA 10 0 17 0 TS 13 15 12 7

11

ABUNDANCIA DE COLONIAS POR MEDIO Vs MUESTRA

20 15 AN 10 5 0 1 2 3 4 PDA TS

Grfico No1. Crecimiento comparativo de microorganismos en los tres medios elegidos a la temperatura de 15C siembra por diluciones

Tabla No3. Nmero de colonias por medio y por muestra a temperatura 15C
S. DIRECTA MUESTRA B1 B2 M3 PA AN 36 100 8 13 MEDIO PDA 37 100 75 6 TS 16 100 7 8

ABUNDANCIA DE COLONIAS POR MEDIO Vs MUESTRAS SD

120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 4 AN PDA TS

Grfico No2.Comparacin del crecimiento de colonias de cada muestra en los tres distintos medios, para siembras cultivadas a la temperatura de 15C.

12

Tabla No4. Nmero de colonias por medio y por muestra a temperatura de 5C, por diluciones.
AMBIENTE MUESTRA B1 B2 M3 PA AN 2 6 9 0 MEDIO PDA 0 1 8 0 TS 7 9 17 0

ABUNDANCIA POR MEDIO Vs MUESTRA AMBIENTE

20 15 AN 10 5 0 1 2 3 4 PDA TS

Grfico No3. Crecimiento comparativo de microorganismos en los tres medios elegidos a la temperatura ambiente de 5C siembra diluciones 10-1 y 10-2

Tabla No5. Nmero de colonias por muestra y por medio a 5C, siembra directa
S. DIRECTA MUESTRA B1 B2 M3 PA MEDIO PDA 2 24 0 0 0 0 0 11

AN

TS 0 0 0 0

13

ABUNDANCIA DE COLONIAS POR MEDIO Vs MUESTRA AMBIENTE SD

30 20 10 0 1 2 3 4 Grfico No4. Crecimiento comparativo de microorganismos en los tres medios elegidos a la temperatura ambiente de 5C siembra directa. AN PDA TS

Tabla No6. Crecimiento comparativo de las siembras directas a las temeprsaturas de 15C y 5C. Siembras directas
MUESTRA B1 B2 M3 PA 15C 89 300 90 27 AMBIENTE 2 24 0 11

CRECIMIENTO COMPARATIVO
350 300 Ttulo del eje 250 200 150 100 50 0 1 2 3 4 15C AMBIENTE

Grfico No5. Crecimiento comparativo a 15C y 5C por muestra, siembras directas.

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Tabla No7. Crecimiento comparativo siembras mediante diluciones a 15C y a 5C, por muestra.
MUESTRAS B1 B2 M3 PA 15C 28 22 35 8 5C 9 16 34 0

COMPARATIVO CRECIMIENTO POR DILUCIONES

40 Ttulo del eje 30 20 10 0 1 2 3 4 15C 5C

Grfico No6. Crecimiento comparativo a 15C y 5C por muestra, mediante diluciones.

Pruebas de biorremediacin mediante terrarios. Los terrarios, con 20kg de suelos contaminados con hidrocarburos, fueron dispuestos tras de la estacin Maldonado, junto a las rocas en un sitio alto para evitar su inundacin durante el deshielo. Cada terrario fue etiquetado y cubierto con plstico para evitar la evaporacin del hidrocarburo por accin del viento. El plstico ser retirado un da antes de nuestra partida, para que ingres aire y garantizar un proceso aerbico de biodegradacin.

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Rotulando los terrarios. Sitio de ubicacin para invierno

9.- TRABAJOS PENDIENTES RELACIONADOS CON EL PROYECTO. Una vez concluidos los trabajos de campo en la isla Greenwich, los trabajos continuarn en la Universidad tcnica del norte. Tabla No8. Actividades pendientes a realizarse en Ecuador
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 ACTIVIDAD Pruebas bioqumicas Tincin de gram Identificacin morfolgica Pruebas API Confirmacin de resultados Cintica de crecimiento Publicacin de resultados preliminares Pruebas de biodegradacin de hidrocarburos en laboratorio Pruebas de biodegradacin de campo Publicacin de resultados Rastreo de microorganismos andinos Identificacin morfolgica y bioqumica Pruebas de biodegradacin de hidrocarburos Publicacin de resultados Hibridacin de microorganismos afines Envo de microorganismos a Venezuela. Gentica I x x x II III IV V MES VI VII VIII IX X XI

x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x x

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10.- CONCLUSIONES Los microorganismos antrticos pueden crecer a temperaturas superiores a 5C, as lo muestran los resultados, donde el crecimiento microbianos a 15C es superior al obtenido a 5C. En las siembras mediante diluciones, a temperatura ambiente 5C y a 15C, la muestra de Maldonado M3, fue la de mayor poblacin, confirmndose parcialmente la influencia de la permanente afluencia de materia orgnica (micro derrames de hidrocarburos), que los mantiene activas. Punta Ambato por ser una zona libre de contaminacin, con espordica presencia humana, presenta la menor poblacin en siembras mediante diluciones a ambas temperaturas. De las siembras directas a 15C, la muestra de Barrientos B2, es la ms abundante en colonias, en tanto que la muestra M3 de Maldonado ocupa el segundo lugar por abundancia de colonias. Con la muestra M3 no existe problema la interpretacin, pero en relacin a B2 s, porque, es una zona libre de pinginos y el acceso a ella por parte de turistas es casi nulo. Estimamos que se requieren confirmar estos datos mediante siembras en Ecuador. El medio que presento mayor abundancia de colonias fue TS, para siembras por diluciones a 15C, en tanto que para siembras directas fue PDA. El medio de mayor abundancia para siembras a temperatura ambiente en siembras por diluciones fue TS, en tanto que para siembras directas AN. Se aislaron seis colonias morfolgicamente distintas por su pigmentacin: Crema. Blanca, amarilla, anaranjado, violeta, verde. Para la Antrtida la pigmentacin constituye un mecanismo protector contra la radiacin UV.

11. RECOMENDACIONES. Entre las recomendaciones que consideramos pertinentes estn: Realizar siembras en medios: Agar-sangre; agar chocolate, que fueron los medios utilizados en la primera misin. Ampliar la gama de temperaturas de cultivo de los microorganismos, para establecer los ptimos y rangos de crecimiento. Mantener contacto permanente con la contraparte venezolana, dentro del programa binacional. Incorporar a especialistas de otras ramas cientficas: Bilogo molecular, Microbilogo, Ambientalista, especialista en Bioseguridad, Ing. Qumico y genetista.

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12. BIBLIOGRAFIA 1. Aislabie, J., Fraser, R., Duncan, S. y Farrell, R.L., 2001. Effect of oil spills on microbial heterotrophs in Antarctic soils. Polar Biology, 24, 308-313. 2. Lapage S. P., Shelton J. E., Mitchell . G, Mackenzie A. R. Culture collections and the preservation of bacteria, p. 135228. In: J. R. Norris and D. W. Ribbons (eds.), Methods in microbiology, vol. , Academic Press, London, 1970. 3. Onions A. H. S. Preservation of fungi, p. 113159. In: 4. Rinfret A. P., LaSalle . (eds.). Round Table Conference on the Cryogenic Preservation of Cell Cultures, p. 178, National Academy of Sciences, Washington, D. C, 1975. 5. Collerman, E., 1997. Uses of bacteria in bioremediation. In SHEENAN, D., ed.Bioremediation protocols. New Jersey: Humana Press, 3-22. 6. Coulon, F., y Delille, D., 2003. Effects of biostimulation on growth of indigenous bacteria in sub-Antarctic soil contaminated with oil hydrocarbons. Oil & Gas Science and Technology, 58, 469-479. 7. A. W., Clark S. P. Mon. Bull. Min. Health Public Health Lab. Serv., 25, 97 100 (1966). 8. Cunningham, C. J. y Philp, J.C., 2000. Comparison of bioaugmentation and biostimulation in ex situ treatment of diesel contaminated soil. Land Contamination & Reclamation, 8, 261-269. 9. Gualoto Miguel, Informe de Auditora a trabajos de Biorremediacin en la Laguna de Papallacta. Juicio EMAAPQ- Ecuavital. 2006. Perito; Miguel Gualoto. Pag: 712. 10. Gordon R. E., Rynearson T. K. In: S. M. Martin (ed.), Culture collections: perspectives and problems, p. 118128, University of Toronto Press, Toronto, 1963. 11. Gualoto Miguel. Informe Preliminar de la investigacin Aislamiento e identificacin de bacterias con capacidad de degradar hidrocarburos. FUNDEMARUDLA. 2010. Pag: 32 PDF. 12. Mac Cormack, W.P. 1999. Seleccin, caracterizacin y evaluacin del potencial biotecnolgico de bacterias sicrotrficas degradadoras de hidrocarburos. Ph.D thesis, University of Buenos Aires, 192 pp. 13. Margesin, R. y Schinner, F., 1997. Efficiency of indigenous and inoculated coldadapted soil microorganisms for biodegradation of diesel oil in Alpine soils. Applied and Environmental Microbiology, 63, 2660-2663. 14. Ruberto, L., Vazquez, S.C. y Mac Cormack, W.P., 2003. Effectiveness of the natural bacterial flora, biostimulation and biodegradation on the bioremediation of a hydrocarbon contaminated Antarctic soil. International Biodeterioration &.Biodegradation, 52, 115-125. 15. Ruberto, Lucas1; Vazquez, Susana1; Lo Balbo, Alfredo2; Mac Cormack, Walter, pad: Biorremediacin de suelos contaminados con hidrocarburos utilizando bacterias antrticas sicrotolerantes. 32-34. 18

16. Whyte, L.G., Goalen, B., Hawari, J., Labbe, D., Greer, C.W. y Nahir, M., 2001. Bioremediation treatability assessment of hydrocarbon-contaminated soils from Eureka, Nunavut. Cold Regions Science and Technology, 32, 121-132. (Registrar la bibliografa existente en la que se fundamento la presentacin del perfil de proyecto) 17. Baraniecki, C.A., J. Aislabie, and J.M. Foght. 2002. Characterization of Sphingomonas sp. Ant 17, an aromatic hydrocarbon-degrading bacterium isolated from Antarctic soil. Microbial Ecology 43(1):4454. 13. Fecha: 31 de Enero del 2012

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