PRACTICA N7.

AISLAMIENTO Y EXTRACCIN DE MERISTEMOS Amanda Doria1, Dilieth Goez1, Kelly Molano1, Linda Vergara1 & Yulena Guerra1 1. Universidad de sucre facultad de educacin y ciencias, programa de biologa. Sincelejo 2012.

Resumen Con el objetivo de aislar y extraer meristemos a partir de primordios jvenes de un rbol de ceiba de leche encontrado en las instalaciones de la universidad. Se procedi a la preparacin de microagujas y microcuchillas a partir de una aguja de 5 cc y de una cuchilla de uso comercial. En primer lugar se removi la base externa de las hojas primarias del explante y cuidadosamente se eliminaron los primordios foliares hasta observar detalladamente el meristemo con la ayuda del estereoscopio. Con lo anterior se concluye que la extraccin de meristemos es un mtodo fcil de implementar y lo importante accesible econmicamente. Palabras claves: meristemas, primordios, extraccin, microagujas y microcuchillas. INTRODUCCION La tcnica de cultivo de meristemos ha sido tradicionalmente utilizada en la iniciacin de los cultivos in vitro y a la vez se ha sealado su uso en la obtencin de plantas sanas, o sea libres de patgenos (Morel y Martin, 1955). Se fundamenta en la distribucin no uniforme de los microorganismos en los tejidos de las plantas y su disminucin progresiva hacia el pice del

tallo. Un meristemo puede retener su carcter embrionario indefinidamente, probablemente durante miles de aos en el caso de rboles. Esta capacidad es debida a que algunas clulas meristemticas no quedan determinadas a diferenciarse y retienen su capacidad para la divisin celular, en cuanto los meristemos permanecen vegetativos. (Cubero J. 2003) . La propagacin in vitro de material vegetal mediante meristemas como material inicial, fue implementado por primera vez en el ao 1952 por Morel y Martin, y es ideal porque sta se desarrolla en el medio de cultivo de una manera genticamente estable. Adems, sta tcnica reduce el nivel de infeccin por virus en la planta y, bajo condiciones apropiadas, puede ser utilizada en para la erradicacin completa de patgenos (ESPINOZA, N. y et. al. 1992.). El aislamiento bajo condiciones aspticas del pice meristemtico y su posterior cultivo en un medio asptico adecuado, conduce al desarrollo de plntulas gracias a que las clulas del meristema se dividen y diferencian en tejidos continuamente (ESPINOZA, N. y et. al. 1992.). METODOLOGIA Para la preparacin de a microagujas y microcuchillas en la extraccin de meristemos utilizando materiales de fcil adquisicin, partir de una chuchilla y agujas de jeringas de 5 cc respectivamente. La extraccin de meristemos se hizo a partir de plantas jvenes de una especie de ceiba de leche, primeramente, se removi la base externa de las hojas primarias del explante y escrupulosamente se eliminaron los primordios foliares hasta observar detalladamente el meristemo con la asistencia del estereoscopio.

RESULTADOS Y DISCUSION.

FIG 1. Proceso de recoleccin de pices de planta joven de ceiba y preparacin de las microcuchillas. A. recoleccin de parte apical de la ceiba de leche. B. elaboracin de microcuchilla.
A B

FIG 2. Visualizacin de meristemos al estereoscopio, luego del aislamiento y posterior extraccin. A, B, C y D. vistas desde el estereoscopio de meristemos de ceiba de leche. Entre las tcnicas del cultivo de tejidos vegetales se encuentra el cultivo de meristemas, que se utiliza en muchas especies vegetales para la erradicacin de virus (Ashmore 1997). Esta tcnica se fundamenta en que la distribucin de los virus no es uniforme y que su concentracin tiende a disminuir progresivamente hacia

el meristema apical del tallo, donde las clulas se encuentran en constante y rpida divisin. Otros mtodos como la termo y la quimioterapia, solos o en combinacin con el cultivo de meristemas, tambin se utilizan para el saneamiento de plantas infectadas con virus (Nacimiento et l. 2003). El cultivo de meristemas consiste en utilizar como material inicial para la micropropagacin el domo meristemtico y el par de primordios foliares (0,2 a 0,5 mm) que lo acompaan. Existe mayor posibilidad de xito en la erradicacin de virus si se cultiva solamente el domo apical, pero la probabilidad de que este sobreviva sin los primordios es menor; por lo tanto, la composicin del medio de cultivo es crtica para su desarrollo (Kyte 1987). En la prctica, solo se adquirieron destrezas para el aislamiento y extraccin de los meristemos, conocimiento que puede ser aplicado en prximos estudios para micropropagacion y erradicacin de virus en cultivos. Herramienta de vital importancia social y econmicamente. Un aspecto a analizar es la implementacin de instrumentos para el aislamiento de meristemos fabricados con materiales comnmente conocidos, como jeringas, cuchillas, palillos, entre otros, lo cual proporciono facilidad econmica para el aislamiento de meristemos, puesto que los instrumentos usados normalmente en laboratorio suelen ser costosos. CONCLUSION Se realiz una extraccin exitosa de los meristemos de la ceiba de leche, adquiriendo destrezas y comprendiendo la vital importancia que tiene este protocolo en los cultivos infectados con virus.

Las clulas meristemticas se multiplican a mayor velocidad que los virus y bacterias que infectan la planta, por lo que la planta que resulta de un cultivo in vitro de meristemo est limpio. Es necesario para una buena extraccin mantener las condiciones de asepxia y desinfeccin del rea y material de trabajo, gracias a la desinfeccin superficial de los explantes durante el proceso de establecimiento in vitro y al cultivo en condiciones aspticas en envases cerrados, se obtienen plantas libres de contaminantes externos que puedan causar enfermedades. BIBLIOGRAFIA Ashmore, SE. 1997. Status report on the development and application of in vitro techniques for the conservation and use of plant genetic resources. International Plant Genetic Resources Institute, Rome, Italy. 67 p. Kyte, L. 1987. Plants from test tubes. An introduction to micropropagation. Timber Press. Oregon, USA. p. 64-65. Morel G y Martin C (1955) Guerison de pomme de terre de maladie a virus. C.R. Acad. Sci. Paris. 1315-1324 Nascimiento, LC; Pio-Ribeiro, G; Willadino, L; Pereira, G. 2003. Stock potato virus Y elimination from potato plants cultivated in vitro. Scientia Agricola. 60(3):525530. CUESTIONARIO 1. Cul es la importancia del cultivo de meristemos? Permite hacer germinar semillas que son muy difcil de hacer en condiciones normales. Ejemplo: algunas Orqudeas tienen en los campos unos parsitos obligados

y en viveros no se pueden reproducir; se inoculan esos parsitos o in vitro. Eliminar la inhibicin de germinacin de las semillas. El cultivo in vitro es lo ms eficaz porque tiene determinados inhibidores y algunos huesos de frutales no son capaces de germinar ya que no tiene desarrollado el embrin. Prevencin del aborto embrionario como resultado de incompatibilidad. Se da en cruces de inters cientfico o intergenticos, sobre todo en plantas herbceas. Los cruces incompatibles dan abortos. Aplicacin en mejora gentica para obtener hbridos, para introducir material gentico, etc. Acortar los ciclos de mejora gentica. No hay que esperar que pase el periodo juvenil del rbol para ver resultados. Produccin de haploides. Cruzamientos o cultivo de polen (anteras). Ventajas: - Obtencin rpida de homocigotos. - Produccin de hbridos (frutos puros). 2. Qu factores hay que tener en cuenta para optimizar el cultivo y desarrollo de los meristemos? El medio de cultivo empleado. El estado fisiolgico del explanto. La concentracin de hormonas endgenas del explanto. Las contaminaciones internas o externas producidas durante el desarrollo del cultivo. El tamao y localizacin del explanto. Esterilizar adecuadamente todos los instrumentos con los que trabajara. Mantener los materiales progenitor tan limpio como sea posible mediante el uso de programas para el control de patgenos sistmicos.

Evitar que le meristemo sufra dao fsico durante el procedimiento de excisin. Evitar que el explante se deshidrate durante la traslacin a medio de cultivo.

Cules son los reguladores de crecimiento utilizados en el cultivo de meristemos? Cinetina Zeatina Acido indolactico Acido giberelico
3.

ms

4. Investigue y describa otros mtodos utilizados para sanear el material vegetal contaminado. Termoterapia: Es la tcnica utilizada para la liberacin de patgenos en plantas. No obstante, es difcil la obtencin de plantas libres de virus con el empleo de altas temperaturas solamente. Una prctica muy usada es la combinacin de la termoterapia y el cultivo de meristemas. Esto implica mantener las plantas en termoterapia por un perodo variable de tiempo y temperatura (generalmente entre 34 y 38C desde una a varias semanas), luego se realiza la extraccin del meristema, se siembra en el medio de cultivo y se contina con los pasos convencionales para su desarrollo. Quimioterapia: Es el uso de antivirales sera la solucin definitiva para estas enfermedades; sin embargo, hasta ahora no se ha encontrado un producto que por s solo cumpla esta funcin. Algunas sustancias qumicas ocasionan una disminucin en la concentracin de virus existentes en la planta y atenan, o suprimen, los sntomas tpicos de los virus, pero, una vez suspendido el tratamiento se recupera la

concentracin original. Han sido evaluadas diferentes sustancias pero la ms utilizada es el Ribavirin o Virazole (1--Dribofuranosyl- 1, 2, 4 triazole 3- carboxamide). Electroterapia: El mtodo consiste en aplicar corriente elctrica a yemas por un perodo variable de tiempo para obtener plantas libres de patgenos. Se menciona que la aplicacin de electricidad produce degradacin de las partculas y prdida de infectividad. Esta tcnica ha sido citada para liberar del mosaico al almendro cv Caetanuccia. Para ello los brotes fueron sometidos a 500V por tiempos variables y luego injertados sobre pies sanos (obtenidos por semilla). Se seal que con 5 minutos de tratamiento los resultados fueron buenos y con 20 minutos se obtuvo completa inactivacin. El mtodo tambin ha sido empleado para eliminar bacterias de caa de azcar, Potato leaf roll virus de papa, Dasheen mosaic virus de araceas y Banana streak virus de banana, entre otras.