PRODUCCIN BIOFOTOLTICA DE HIDRGENO La produccin fotobiolgica de H2 es un proceso tecnolgico prctico para la produccin de hidrgeno a partir de luz, agua, dixido

de carbono y algas, se plantea que pueda ser una de las mayores fuentes biolgicas de energa renovable y sustentable, sin emisiones de gases con efecto invernadero ni contaminacin medioambiental. Antes de poder cumplir esa meta, ser necesario profundizar en tpicos relacionados con el desarrollo de reactores biolgicos; de explotacin a alta escala (miles o millones de hectreas); de modificaciones genticas para mejorar eficiencias (despus de todo, las algas buscan su desarrollo), as como conocimientos cientficos pertinentes a la fotosntesis en condiciones extraas a la operacin tpica de estos microorganismos. INTRODUCCION El gas hidrgeno ser una de las principales energas transportables del futuro, por sus virtudes de: renovabilidad; por la limpieza de su combustin: por su enorme relacin energa a peso (39,4 Kw/h por Kg de H2); y por la simplicidad de su conversin a energa elctrica segn demanda instantnea (mediante celdas a combustible o "fuel cells"). La produccin de hidrgeno por biofotlisis, tambin citada como fotodisociacin biolgica del agua, se refiere a la conversin de agua y energa solar (utilizada) a hidrgeno y oxgeno usando microorganismos, comnmente microalgas y /o cianobacterias. Si bien la produccin biolgica (o por microorganismos) de hidrogeno ha sido un campo de activa investigacin tanto aplicada como bsica por al menos dos dcadas, su produccin industrial se realiza por hidrlisis elctrica de agua:

o por reacciones qumicas desde gas metano (que se obtiene como combustible fsil, aunque su produccin por microorganismos es muy comn):

Estas dos estequiometras (la segunda es solamente global; pues, en realidad, se trata de dos reacciones secuenciales) corresponden a procesos existentes, y muy bien caracterizados y conocidos, de modo que se pueden obtener mayores detalles en al mbito comercial. La produccin biofotoltica, en cambio, dista mucho an de expresarse comercialmente, pues requiere de un significativo avance cientfico (cmo ocurre) y tecnolgico (cmo intervenir la maquinaria bioqumica). Durante esta ltima dcada se han realizado significativos avances en este campo, tanto en la caracterizacin bioqumica de los microorganismos que producen hidrgeno (Melis et.al., 2000; Rocheleau et.al., 1999, Baroli et.al., 1998) bajo condiciones adecuadas (anaerobiosis y separacin temporal en la produccin de oxgeno e hidrgeno), como en el manejo fisiolgico de los cultivos (Melis et.al., 2000; Polle, J.E.W. et.al., 2000; Ghirardi M.L., 2000; Wykoff, D.D. et.al., 1998). Adems, se han propuesto diseos de fotobioreactores (reactores en que se

desarrollan reacciones biolgicas controladas, que son cerrados pero que permiten la interaccin del material biolgico con radiacin luminosa) ms eficientes para la obtencin de biomasa con rendimientos que bordean el 10 % (Morita, M. et.al., 2000; Morita, M. et.al., 2000; Janssen, M. et.al., 2000; Janssen M. et.al., 2000). La produccin de hidrogeno por microalgas fotoauttrofas (se producen a s mismas a partir de luz y CO2) se basa en la utilizacin de la energa solar para la fotodisociacin del agua y la consecuente transferencia de electrones en una cadena transportadora de ellos ubicada en estructuras como los tilacoides, tanto para cianobacterias como para microalgas, ilustrada en la figura 1. En la membrana de estas estructuras est la maquinaria fotosinttica. Esta "maquinaria" consiste de una serie de protenas y compuestos que en ltimo trmino transportan los electrones desde el agua hacia molculas como NADH y el H2. Las protenas (enzimas) que se encuentran en el proceso fotosinttico bajo condiciones aerbicas son: Fotosistema II (PSII) Complejo b6f Fotosistema I (PSI) Ferredoxina (Fd) NADH reductasa Transportadores asociados como: Plastoquinona (PQ) Plastocianina (PC). Pigmentos: clorofilas a y b Bajo condiciones anaerobias (sin oxgeno disuelto) se expresa la hidrogenasa (enzima que produce H2) que se une a la ferredoxina, para catalizar la conversin de dos protones (2H+) a hidrgeno gaseoso (H2).

La transferencia de electrones bajo las condiciones descritas anteriormente, realiza la produccin de hidrgeno mediante la enzima hidrogenasa, enzima reversible, la cual bajo ciertas condiciones anaerobias es capaz de reducir los protones a hidrogeno, oxidando ferredoxina en su estado reducido a su estado oxidado segn: En condiciones aerbicas (con oxgeno disuelto en el medio de cultivo), parte del flujo de electrones es utilizado para generar "poder reductor" (expresado en la molcula NADH) que es utilizado por el microorganismo para fijar CO2, con la consecuente produccin de

carbohidratos y biomasa. Simultneamente, este transporte de electrones permite el flujo, a travs de la membrana tilacoidal, de los protones que posteriormente son utilizados por una ATP-asa, generando ATP que ser utilizado para posteriores transfosforilaciones (figura 2). La figura 2 ilustra que el centro de reaccin de la clorofila capta los fotones y genera una transferencia de energa al PSII. La energa de luz absorbida es liberada como un electrn desde el PSII a un aceptor (plastoquinona, PQ). Esta plastoquinona acepta un segundo electrn liberado por el PSII seguido de un segundo fotn de luz, y se agregan dos protones desde el estroma (PQH2). El complejo que produce el oxgeno en el PSII remueve los electrones del agua uno a la vez y los transfiere al PSII, restaurando el centro de reaccin de la clorofila a un estado basal y generando oxgeno. Los protones resultantes de la disociacin del agua quedan en el lumen contribuyendo a la fuerza protomotriz. La PQH2 difunde a travs de la membrana hacia el citocromo b6f, donde ste simultneamente libera sus dos electrones a un sitio en la cara del lumen y sus dos protones dentro del lumen. Estos protones contribuyen a la fuerza protomotriz. Estos electrones pueden ser transportados a travs del complejo b6f durante un ciclo de PQ, transportando protones adicionales a travs de la membrana al lumen tilacoidal. En cuanto al Fotosistema I, cada electrn liberado, despus de la absorcin de luz, es transportado por una serie de transportadores en el centro de reaccin a la superficie del estroma, donde la ferredoxina soluble (protena Fe-S) transfiere los electrones al FAD y finalmente al NADP+. Dos electrones con un protn removido desde el estroma convierten cada NADP+ a NADPH. El PS I es entonces restaurado a su condicin inicial por la adicin de un electrn desde el PS II va plastocianina, un transportador (carrier) de electrn soluble que difunde a travs del lumen tilacoidal. El gradiente de protones es utilizado por la ATP-asa para generar ATP a partir de ADP y Pi. El NADPH y el ATP son generados en el estroma del cloroplasto y son utilizados para la fijacin de CO2, mediante el clsico ciclo de Calvin. PROCESOS DE PRODUCCIN DE HIDRGENO GASEOSO La produccin de hidrgeno gaseoso. a partir del agua, mediante esta fenomenologa requiere manipular la secuencia de reacciones bioqumicas, interactuando con la clula completa (pero sin modificarla en principio), en alguna modalidad que obligue la aparicin de gas hidrgeno que, de ser dejado al sistema natural, no sera producido en absoluto hacia el medio exterior a la clula. Se han popularizado dos alternativas tecnolgicas, a un nivel solamente de laboratorio y de algunos ensayos piloto. En el primer proceso, la produccin de oxgeno fotosinttico, con la consecuente acumulacin de carbohidratos, est separada de la produccin de gas hidrgeno, tanto temporal como espacialmente. Este es un proceso de dos estados: el CO2 es primero fijado a sustratos ricos en H2-endogeno durante fotosntesis oxignica normal (estado 1), seguido por generacin de hidrgeno molecular cuando las microalgas son incubadas en condiciones anaerbicas (estado 2). Este enfoque requiere, por ende, de un sistema de cultivo y de otro sistema aparte para la generacin de hidrgeno.

La segunda aproximacin esta relacionada con la produccin de oxgeno fotosinttico y gas hidrgeno simultneamente. En este caso los electrones son liberados de la oxidacin del agua y son conducidos a la hidrogenasa sin estar mediado la fijacin de CO2 ni el almacenamiento de energa como metabolitos celulares. Este mecanismo en el proceso de generacin de H2 ha resultado superior al proceso de dos estados, ya que se han obtenido eficiencias de conversin de energa (luminosa a gas hidrgeno) de un 5 a un10% (del orden de magnitud de la eficiencia de celdas fotovolticas. Sin embargo, este proceso "de un estado" tiene limitaciones principalmente por la inhibicin de la hidrogenasa por el oxgeno que es producido por la disociacin del agua por el PS II. PROCESO DE PRODUCCIN DE HIDRGENO DE DOS ESTADOS Como se mencion anteriormente, en la etapa 1 (fotosntesis oxignica) se busca conseguir una acumulacin de carbohidratos va ciclo de Calvin. Luego estas clulas son incubadas anaerbicamente por un cierto perodo para inducir la expresin de genes que codifican para la hidrogenasa reversible y de otros genes que pueden ser esenciales para la produccin de H2. En una segunda etapa, estas clulas son operadas bajo condiciones anaerbicas y en presencia de luz con la consecuente produccin de hidrgeno. Esta evolucin de H2 puede deberse a dos mecanismos: uno, producto de la fermentacin de carbohidratos va fermentacin de ribulosa 5-P y generacin de CO2 e hidrgeno; pero, tambin puede explicarse por el aporte de electrones directamente a la maquinaria fotosinttica modificada (tecnolgicamente) por las condiciones de anaerobias.

DISEO DE UN PROCESO BIOFOTOLITICO

CUESTIONARIO Queslaproduccinbiofotolticadehidrogeno? QuesunTilacoide? Qufuncintienenlascianobacteriasenlatransferenciadeelectrones? Culessonlasprotenasqueseencuentranenelprocesofotosintticobajocondiciones aerobias? CuleslareaccinquesellevaacaboparalageneracindeH2bajocondicionesanaerobias? CmosellamalaenzimaqueproduceH2? Describalos2estadosparalaproduccinbiofotolticadehidrgenogaseoso.