RESUMEN En la reproduccin bovina existe la necesidad de contar con una tcnica diagnstica directa que provea mayor y ms precisa

informacin acerca de estructuras uterinas y ovricas fisiolgicas y patolgicas. La ecografa del tracto reproductivo puede mejorar o confirmar nuestro diagnostico y consecuentemente el tratamiento, especialmente cuando el diagnstico por palpacin rectal es dudoso. Introduccin Desde la incorporacin de la ultrasonografa a la reproduccin equina (19), los ecgrafos formaron parte del equipamiento estndar de muchos veterinarios. Como consecuencia, las aplicaciones en otras especies, especialmente en reproduccin, fueron ms frecuentes y ms intensamente investigadas (16, 34). En el rea de la reproduccin bovina, las tcnicas de imgenes ultrasonogrficas bidimensionales son usadas por veterinarios a tres niveles: Diagnstico en la prctica diaria, como control posparto del tero en condiciones patolgicas, control de la actividad folicular y luteal normal y patolgica de los ovarios (6, 14), determinacin temprana de preez (2, 5). Durante la seleccin, preparacin y control de donantes y receptoras en programas de reproduccin artificial, o para la recoleccin de ovocitos (Ovum Pick-Up) por parte de veterinarios ms especializados, sexado fetal (27). En proyectos de investigacin por parte de fisilogos y clnicos en reproduccin. Qu es la ultrasonografa y cmo funciona? En 1880 se descubri un efecto llamado cristales piezo-elctricos. Estos cristales hicieron posible transformar los pulsos elctricos en ondas de ultrasonido y subsiguientemente una conversin de la cantidad de energa a partir de las ondas reflejadas en pulsos elctricos (9). Durante la Segunda Guerra Mundial las ondas ultrasnicas fueron utilizadas para detectar submarinos, conocido como SONAR (SOund NAvigation and Ranging). Este principio ha sido adaptado para la visualizacin de tejidos y lquidos con diferentes densidades en seres humanos y animales (9). El primer sistema para inspeccionar el abdomen y la cavidad plvica se bas en una tcnica similar al sonar: un transductor de ultrasonido fue sumergido en agua. El paciente tuvo que entrar en una tanque con agua y el transductor fue movido en crculos alrededor de l. Gracias al desarrollo de la medicina actual, los transductores de contacto no estn hoy en uso. Este avance permiti colocar los transductores directamente sobre el paciente, evitando el uso de agua para la transmisin de las ondas de ultrasonido y sus ecos (9) Qu es un transductor? Un transductor es un instrumento que convierte energa de una forma en otra. Un transductor de ultrasonido con cristales piezo-elctricos convierte energa elctrica en energa mecnica para la produccin de ondas de ultrasonido y convierte la energa acstica que retorna en energa elctrica. Un transductor lineal de ultrasonido tiene los cristales piezo-elctricos ubicados en lnea recta. La imagen en la pantalla es rectangular. Un transductor sectorial muestra una imagen en tringulo (9). Los transductores ms utilizados en veterinaria son los de 3.5 MHz, 5 MHz y 7.5 MHz. La penetracin con un transductor de 7.5 MHz es de slo 4 5 cm, por lo tanto permite examinar con claridad estructuras muy cercanas (folculos, cuerpos lteos, embriones). Los transductores de 5 MHz tienen una penetracin de 8 a 10 cm, por lo que permiten visualizar ovarios, teros y preeces tempranas. La penetracin de los transductores de 3.5 MHz es de 12 a 15 cm. Esta frecuencia puede ser usada en preeces ms avanzadas y condiciones patolgicas del tero, tales como pimetra, momificacin y maceracin (14). A mayor frecuencia mejor imagen, pero menor penetracin. Debe tenerse en cuenta los siguientes aspectos al utilizar la ecografa en la prctica veterinaria: La eleccin del equipo de ultrasonido debe estar basada en las aplicaciones previstas. Si se van a realizar principalmente procedimientos diagnsticos de rutina, tales como control ovrico o diagnstico de preez, un equipo simple y pequeo con un transductor de 5 MHz ser suficiente. Este equipo permite realizar exmenes transrectales (en equinos, bovinos, pequeos rumiantes, cerdos) y transabdominales (pequeos rumiantes, cerdos, perros y gatos). El transductor de 5 MHz ofrece un balance entre profundidad de penetracin (hasta 10

cm a partir del transductor) y calidad de imagen (resolucin). En tanto el transductor sea lo suficientemente chico para permitir su manipulacin intrarectal, no hay ventajas evidentes del transductor lineal sobre el sectorial. La rutina de manipulacin del ecgrafo en las vacas requiere de "manos extra" y organizacin. Aunque muchos de los ecgrafos pequeos son porttiles, no todos los equipos pueden ser operados con batera. Por lo tanto, algunos tienen que ser conectados a una fuente de energa. Es preferible disponer de un lugar determinado, aislado, con una fuente de energa cercana. De esta manera, las vacas seleccionadas para examen ecogrfico pueden entonces ser sujetadas con cepo y el equipo estar seguro. Debe evitarse la luz solar directa, ya que realizar ecografas con mucha claridad disminuye considerablemente la calidad de la imagen. La menor claridad asegura el mejor uso de las escalas de grises, con lo cual, se una obtiene una mxima calidad de imagen. Luego de retirar la materia fecal que sea necesario, debe tenerse especial cuidado para asegurar que durante la introduccin del transductor no entre aire dentro del recto, lo que hace imposible el examen. El uso de gel en el transductor no es esencial, la lubricacin normal es suficiente. Cuando el procedimiento es prolongado, como por ejemplo los exmenes con propsito de investigacin, se recomienda el uso de anestesia epidural (2-5 ml de lidocana). Puede ser til para una breve relajacin de los intestinos una inyeccin adicional de Buscopan endovenoso (1 ml/100 kg de peso). Una inyeccin endovenosa o intramuscular de Domosedan (0.1 ml/100 kg de peso) puede ser muy efectiva. Domosedan no solamente tranquiliza al animal, sino que tambin induce una relajacin prolongada de las paredes del recto para una ms fcil manipulacin mientras el animal permanece en estacin. Rutina del examen ecogrfico Las estructuras ovricas y uterinas fisiolgicas y patolgicas pueden ser diagnosticadas en vacas mediante el examen ecogrfico transrectal (14). A diferencia de la yegua, el examen transrectal en vacas es ms difcil por la anatoma topogrfica de los rganos genitales, lo que crea un muy estrecho contacto entre el transductor y las partes del tracto genital. La manipulacin simultnea del transductor y tracto genital con la misma mano requiere de cierta prctica. El examen transvaginal, no tan frecuente como el transrectal, tambin ha sido reportado (21, 22, 24): los ovarios o el tero son rectalmente manipulados contra la pared vaginal anterior y el transductor se coloca a nivel del fornix, por detrs del orificio cervical externo. De esta manera, puede realizarse un procedimiento ms controlado, ya que el transductor y los rganos son manipulados independientemente. Sin embargo, el examen transvaginal requiere medidas higinicas extras y una pieza de extensin para el transductor, debido al largo de la vagina de la vaca. Es de eleccin el examen transrectal (22, 28). Ecografa de tero El tero no preado se reconoce por la visualizacin de una o varias secciones del cuerpo uterino y cuernos encorvados sin encontrar lquidos fetales. Especialmente durante la fase folicular del ciclo estral, los cuernos estn mas encorvados por lo cual el nmero de secciones de los cuernos que pueden ser vistas en el monitor es mayor. Las diferentes partes del tero pueden ser vistas con movimientos lentos del transductor de izquierda a derecha y girando a lo largo de su eje longitudinal. Para permitir un examen completo del tero es necesario la retraccin, y si es posible la reflexin del mismo, previo a que el transductor sea movido a lo largo de las diferentes estructuras. Durante el perodo alrededor del estro, la imagen de la pared uterina puede mostrar diferentes capas a causa de la distinta ecogenicidad (diferentes grises) entre el miometrio y el endometrio resaltada por el estrato vascular, visto como pequeos vasos sanguneos llenos de lquido (negro). Algunas veces pueden visualizarse pliegues del endometrio. El diagnstico temprano de preez se basa en el reconocimiento de lquido (imagen completamente anecognica, negra) dentro de la luz del tero. Sin embargo, la mayora de los estudios han mostrado que este diagnstico temprano (antes del da 25) no es del todo confiable, debido a que la presencia de pequeas cavidades de lquido pueden ser visualizadas

tan temprano como a los 12-14 das posteriores a la inseminacin artificial, especialmente con transductores de 7.5 MHz. No obstante, uno podra pensar que la acumulacin de algo de lquido puede existir en ausencia de preez, especialmente durante el celo y durante la primera mitad de la fase luteal del Ciclo(4, 19). La acumulacin de lquido tambin puede ocurrir en condiciones patolgicas del tracto genital tales como pimetra o mucmetra. Un fluido ecognico nuboso ("cloudy") en el tero es siempre patolgico, indica endometritis, pimetra o mortalidad embrionario-fetal temprana (6, 14). La endometritis puede ser tratada con aplicaciones intrauterinas de antibiticos o con inyecciones intramusculares de prostaglandinas cuando un cuerpo lteo es palpado o visualizado con el ecgrafo. Despus del da 25, los fluidos fetales en el tero pueden ser identificados fcilmente, vistos como una lnea negra o estrella, dependiendo de la direccin del ecgrafo. El embrin mismo, aunque a veces es difcil, puede ser visualizado luego del da 30 de preez. En este estadio el lquido embrionario alcanz ambos cuernos uterinos. El diagnstico de preez con un transductor lineal de 5 MHz tiene una sensibilidad del 97.7% y una especificidad del 87.8% entre los das 26 y 33. Entre los das 30 y 40 la membrana amnitica alrededor del feto y el latido cardaco fetal se hacen claramente visibles. El corazn ahora es visto como un punto blanco que aparece y desaparece rtmicamente. En este estadio temprano puede realizarse el diagnstico de gestacin doble. Despus del da 40 de preez puede hacerse una buena diferenciacin de cabeza, grupa, extremidades y cordn umbilical. Las mediciones por ultrasonido, como por ejemplo largo cabeza-cola del feto, dan una estimacin de la edad fetal cuando no se conoce el da del servicio (11, 12). El sexado fetal puede ser hecho con transductor de 5 MHz entre los das 55 y 70 de gestacin (18, 27). Los placentomas pueden ser vistos desde los 2 meses en adelante. No son difciles de visualizar (15). En la preez avanzada, el volumen de los lquidos fetales aumenta y el tero crece. Como el transductor de 5 MHz penetra solamente 10 cm desde su superficie, son necesarios los transductores con menor frecuencia (3.5 MHz) para ver el feto en crecimiento. La retraccin parcial del tero hacia la cavidad plvica, la que es posible hasta los 2 meses de gestacin, podra ser de utilidad. Se han obtenido diagnsticos de preez confiables desde el da 26 en adelante (transductores de 5 MHz), con sensibilidades superiores al 90% (que significa que la ocurrencia de falsos negativos en detectar animales preados fue menor al 10%) y especificidades de entre 80 y 95% (5-20% de diagnsticos falsos positivos al detectar animales vacos) (35). Estos estudios tambin demostraron que los errores dependen del transductor utilizado y la experiencia del operador. Un estudio reciente (33) encontr que despus del da 24 de preez, cuanto ms craneal est el tero con respecto a la entrada de la pelvis, ms frecuencia de diagnsticos de no-preez falsos negativos. Obviamente es ms difcil en esos animales revisar todo el tero, siendo necesaria la retraccin previa del mismo. Falta an conocer qu proporcin de los diagnsticos inicialmente positivos que fueron encontrados negativos en un nuevo examen, corresponda, de hecho, a casos identificados inicialmente en forma correcta y que luego fueron negativos por mortalidad embrionaria. Aunque es posible realizar un diagnstico ecogrfico de preez confiable alrededor de 2 semanas antes que por medio del tacto rectal, permanece la duda si el mismo se justifica rutinariamente a esta edad tan temprana en todos los animales inseminados. Podra ser que no brindara una ventaja econmica para los productores cuando las visitas veterinarias al establecimiento se hicieran a intervalos de 3 4 semanas. En la prctica bovina, parece ser preferible el uso ms selectivo de la ecografa, por ejemplo en animales inseminados en los que se desea un diagnstico temprano de preez, o cuando el diagnstico de preez es dudoso por tacto rectal o cuando existen dudas acerca de la viabilidad del embrin. Es bien conocido que en los casos de mortalidad embrionario-fetal, el cuerpo lteo puede permanecer funcional por varias semanas antes de que tenga lugar su regresin, la expulsin del conceptos y la nueva ovulacin (16,17).

El reconocimiento ultrasonogrfico de la mortalidad embrionario-fetal se basa en la ausencia de latido cardaco fetal, desplazamiento de las membranas fetales, o apariencia nubosa del lquido fetal. En este caso est indicado el tratamiento directo con prostaglandinas, que no ha sido posible nicamente con tacto rectal. Un diagnstico temprano de preez puede llevar a una significativa reduccin en el nmero de das abiertos de las vacas, porque puede aplicarse una prostaglandina inmediatamente despus de definir por ultrasonografa la condicin de vaca, mortalidad embrionaria temprana o pimetra. Ventajas similares pueden existir en las vacas con adherencias en el tracto genital en las cuales no es sencillo el diagnstico por tacto rectal o en vacas con fetos macerados o momificados que podran no ser claramente diagnosticadas solamente por tacto rectal. Ecografa de los ovarios La ecografa ha sido una herramienta til para estudiar el desarrollo folicular durante el ciclo estral (y preez) en vacas sin interrumpir patrones fisiolgicos normales (29). Durante un ciclo estral normal pueden ser vistas dos (comienzan alrededor del da 3 y 12 del ciclo) o tres (comienzan alrededor del da 3, 10 y 16 del ciclo estral) ondas foliculares (8, 20, 30, 31). Cuando comienza la lutelisis, el folculo dominante contina creciendo y finalmente ovula 30 hs despus de iniciado el celo. Los folculos crecen 1.5 a 2.5 mm/da. El crecimiento es constante durante todas las fases del ciclo estral. En general, el folculo dominante alcanza un dimetro de 15 mm, pero son normalmente vistos folculos de 20 mm de dimetro. La mayora de los folculos preovulatorios alcanzan su mximo tamao dos das antes de la ovulacin. En la fase final se hacen ms blandos; sin embargo esto no pueden evidenciarse por ultrasonografa. En vacas no es posible usar el crecimiento folicular para definir cundo inseminar como puede ser hecho en yeguas (15). Estructuras normales, tales como folculos terciarios de 5 mm de dimetro, cuerpos lteos y vasos sanguneos, son fcilmente reconocidas cuando los ovarios son examinados con transductores de 5 y 7,5 MHz. Los folculos aparecen como cavidades redondeadas negras, lo que corresponde al fluido folicular. La pared folicular puede ser vista especialmente cuando dos folculos adyacentes estn en el mismo plano del transductor. Los folculos terciarios de 3 a 5 mm de dimetro estn presentes durante todo el ciclo estral y durante la preez. Se ha demostrado claramente que la ultrasonografa es ms segura para detectar la presencia de folculos que el tacto rectal (22). Si embargo, la pregunta es si otorga ventajas prcticas en un diagnstico reproductivo de rutina en bovinos. Debido a la apariencia griscea de la ecografa, un cuerpo lteo (CL) de mitad del ciclo puede ser claramente diferenciado por su diferente ecogenicidad de otros tejidos ovricos. Esto significa que la presencia de un CL de mitad del ciclo nico o doble no es inadvertida en un examen ecogrfico. No obstante, en manos de un clnico especializado con amplia experiencia en fertilidad bovina, la ecografa puede no ser ms segura que la palpacin rectal para detectar CL de mitad del ciclo (19). La ecografa mejorar el diagnstico en clnicos menos experimentados. Ms an, ciertamente ayudar a controlar y mejorar su habilidad en el diagnstico de estructuras ovricas al hacer el examen rectal previo a la evaluacin ecogrfica. Los CL jvenes y viejos pueden ser ms difciles de diagnosticar durante el examen rectal y la ecografa, porque dan una imagen menos ecognica. Incluso con transductores de 7,6 MHz pueden ser difciles de diagnosticar. nicamente luego de 3 4 das, un CL joven puede ser visualizado por ecografa. Crece alrededor de 1-2 mm/da, alcanzando un tamao mximo 8 a 12 das despus de la ovulacin (20). El CL desaparece a la imagen ecogrfica unos pocos das despus de la lutelisis, lo que significa que no puede ser ya visto en el siguiente estro (25). El color del CL por ecografa no puede ser utilizado para estimar el estadio del ciclo estral. El desarrollo as como la imagen ecogrfica del CL gravdico son iguales que las del CL peridico, por lo tanto no puede ser usado para diagnstico de preez. La ultrasonografa fue ms confiable que la palpacin rectal al comparar vacas con CL jvenes o viejos con vacas con CL de mitad del ciclo. La implicancia prctica de esta ventaja diagnstica de la ecografa es que las prostaglandinas no serian gastadas inyectando vacas con CL (jvenes o viejos) no sensibles a la misma.

El CL activo puede contener una cavidad llena de lquido (60%), apareciendo como una cavidad negra de forma ms o menos regular en medio del tejido luteal. Algunas veces pueden ser vistas pequeas trabculas de tejido en estas cavidades. Estos CL son errneamente llamados cuerpos lteos qusticos. Algunas veces han sido vistas las trabculas en el centro del tejido luteal. No obstante, estas estructuras representan variaciones fisiolgicas normales del CL en la vaca y no tienen influencia en los niveles de progesterona o tasas de preez (14). Los quistes ovricos son frecuentemente definidos como folculos anormales, anovulatorios, con un dimetro mayor de 25 mm, sin tener en cuenta la presencia de otra estructura ovrica, tales como CL o folculos de tamao normal. La mayora de las veces no estn presentes CL junto con quistes ovricos. En base a la palpacin rectal es difcil discriminar entre quistes lutenicos y foliculares. Esta diferenciacin puede ser importante para elegir la terapia. Durante el examen ultrasonogrfico, la cavidad llena de lquido de los quistes puede presentar varias formas, especialmente cuando hay varios quistes presentes en el mismo ovario. En los quistes foliculares no puede visualizarse tejido dentro de la cavidad y aquellas partes de la pared que pueden ser vistas son siempre muy finas. El tratamiento con gonadotrofinas o GnRH est indicado para inducir la luteinizacin, la produccin de progesterona y finalmente celo aproximadamente 3 semanas despus. Tambin pueden utilizarse los tratamientos con progestgenos, tales como el PRID (Progesterone Releasing Intravaginal Device), que se deja generalmente 14 das en la vagina. Luego del retiro del dispositivo, el animal entra en celo a los dos das, cuando el quiste folicular ha desaparecido y una nueva generacin de folculos comienza a crecer. Los quistes lutenicos, en cambio, tienen una pared de varios milmetros causada por la luteinizacin de la capa granuloso. A la imagen ecogrfica, esta capa puede ser vista como una delimitacin griscea irregular de la cavidad. Algunas veces pueden verse trabculas en la cavidad del quiste. Cuando la capa de tejido luteinizado es bastante gruesa, la diferencia entre un CL normal con cavidad y un quiste lutenico con pared gruesa se hace arbitraria. En caso de duda, un nuevo examen revelar la naturaleza ms esttica del quiste lutenico, mientras que el CL con cavidad seguir el desarrollo cclico con una gradual disminucin de tamao de la cavidad y desaparicin del mismo en el celo. Las densidades ecognicas de las paredes del quiste luteal son ms frecuentemente, pero no siempre, acompaadas con altos niveles de progesterona plasmtica. Un nivel de 0.5 ng/ml de suero de sangre perifrica fue utilizado para discriminar entre animales con quistes foliculares o luteales. El tratamiento de los quistes lutenicos es posible con GnRH, Gonadotrofinas o PRID. Sin embargo, la ultrasonografa ayuda a justificar el tratamiento con prostaglandinas con la rpida desaparicin del quiste luteal seguida por el inicio de un nuevo ciclo estral. La palpacin rectal es significativamente menos segura que la ultrasonografa para diferenciar entre quistes foliculares y lutenicos. Aunque se han diagnosticado tumores ovricos por examen ecogrfico, son de muy baja frecuencia en las vacas. La ecografa parece ms til para estimar el tamao ms que la naturaleza del tumor. Conclusiones La ultrasonografa es una tcnica no invasiva para el diagnstico reproductivo en la vaca. Los veterinarios siempre deben ser selectivos en el uso de la ecografa durante sus trabajos a campo. Por ejemplo, cuando hay dudas luego de la palpacin rectal de los ovarios, para la confirmacin de la presencia de estructuras con actividad luteal y justificacin de un tratamiento con prostaglandina. La deteccin temprana por ultrasonografa de una vaca preada con el conceptus muerto nos permite el uso inmediato del tratamiento con prostaglandina. Tambin posibilita un diagnstico ms preciso de varias patologas de tero y ovarios cuando existen dudas luego de la palpacin rectal. Endometritis, pimetras, mucmetras o mortalidad embrionario temprana, as como quistes ovricos (foliculares o lutenicos) y la presencia de un CL activo pueden ser determinados sin error gracias a la ultrasonografa. Ms an, puede controlarse fcilmente los efectos de terapias dadas a estos animales. Finalmente, la ultrasonografa es clave en reproduccin bovina, tanto para veterinarios, como para programas comerciales de reproduccin y para fines de investigacin.