20/05/2009

Reproduo e crescimento microbiano

Vernica Ortiz Alvarenga

Introduo ao crescimento
Crescimento: aumento ordenado de todos os componentes do sistema biolgico aumento da massa celular multiplicao celular Em microrganismos que se dividem por fisso ou por gemulao aumento do nmero de indivduos

Pontos de vista de estudo

Individual : ciclo celular
Replicao e segregao de cromossomos Sntese de novos materiais dos envoltrios celulares Coordenao da replicao e diviso celular Ciclo celular Sequncia de eventos identificveis que ocorrem desde que surge uma nova clula at que esta se divida em duas filhas.

Populacional
Cintica de crescimento Fatores que afetam o tempo de gerao Fatores ambientais que afetam o crescimento

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Multiplicao bacteriana por fisso binria

Termos para crescimento microbiano

Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das dimenses celulares. Crescimento Populacional: definido como o aumento do nmero, ou da massa microbiana.

Termos para crescimento microbiano

Taxa de crescimento (velocidade especfica de crescimento): a variao no nmero ou massa de microrganismos por unidade de tempo.

Tempo de gerao: o intervalo de tempo necessrio para que uma clula se duplique.
O tempo de gerao varivel para os diferentes organismos, podendo ser de 10 a 20 minutos at dias, sendo que em muitos dos organismos conhecidos, este varia de 1 a 3 horas. O tempo de gerao no corresponde a um parmetro absoluto, uma vez que dependente de fatores genticos e nutricionais, indicando o estado fisiolgico da cultura.

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Equaes para determinao dos parmetros de crescimento

O tempo de gerao pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial, pela frmula abaixo:
N=No.2n onde N= nmero final de clulas No= nmero inicial de clulas n= nmero de geraes

Equaes para determinao dos parmetros de crescimento

n= log(N) - log(No)/0,301

G = t/n onde G= tempo de gerao t= tempo de crescimento n= determinado acima.

Curva de crescimento microbiano

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Fase lag (fase de adaptao) (fase adaptao)

Perodo varivel, onde ainda no h um aumento significativo da populao. Ao contrrio, um perodo onde o nmero de organismos permanece praticamente inalterado. Esta fase apenas observada quando o inculo inicial proveniente de culturas mais antigas. A fase lag ocorre porque as clulas de fase estacionria encontram-se depletadas de vrias coenzimas essenciais e/ou outros constituintes celulares necessrios absoro dos nutrientes presentes no meio.

Fase lag (fase de adaptao) (fase adaptao)

A fase lag tambm observada quando as clulas sofrem traumas fsicos (choque trmico, radiaes) ou qumicos (produtos txicos), ou quando so transferidas de um meio rico para outro de composio mais pobre, devido a necessidade de sntese de vrias enzimas. Assim, durante este perodo observa-se um aumento na quantidade de protenas, no peso seco e no tamanho celular.

Fase log (fase exponencial) (fase exponencial)

Nesta etapa, as clulas esto plenamente adaptadas, absorvendo os nutrientes, sintetizando seus constituintes, crescendo e se duplicando. Deve ser levado em conta tambm que neste momento, a quantidade de produtos finais de metabolismo ainda pequena. A taxa de crescimento exponencial varivel, de acordo com o tempo de gerao do organismo em questo. Geralmente, procariotos crescem mais rapidamente que eucariotos.

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Fase log (fase exponencial) (fase exponencial)

Nesta fase so realizadas as medidas de tempo de gerao.
S. cerevisiae : g= 90 minutos E. coli : g= 20 minutos

Geralmente, ao final da fase log, as bactrias passam a apresentar fentipos novos, decorrentes do processo de comunicao denominado "quorum sensing".

Fase estacionria
Nesta fase, os nutrientes esto escasseando e os produtos txicos esto tornando-se mais abundantes. Nesta etapa no h um crescimento lquido da populao, ou seja, o nmero de clulas que se divide equivalente ao nmero de clulas que morrem. na fase estacionria que so sintetizados vrios metablitos secundrios, que incluem antibiticos e algumas enzimas. Nesta etapa ocorre tambm a esporulao das bactrias.

Fase estacionria
Foram detectados alguns genes (sur) que so necessrios sobrevivncia das clulas na fase estacionria. Alm destes, existem outros genes (fatores s alternativos da RNA polimerase, protenas protetoras contra dano oxidativo).

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Fase de declnio (fase de morte) morte)

A maioria das clulas est em processo de morte, embora outras ainda estejam se dividindo. A contagem total permanece relativamente constante, enquanto a de viveis cai lentamente. Em alguns casos h a lise celular.

Fase de declnio (fase de morte) morte)

Culturas descontnuas tendem a sofrer mutaes que podem repercutir na populao como um todo. As prprias condies ambientais tendem a promover variaes de carter fenotpico (reversvel) nas culturas.

Crescimento em culturas contnuas

Crescimento em culturas contnuas: tcnica muito usada nos processos industriais de obteno de produtos microbiolgicos.Nestes casos, tem-se o interesse em manter as clulas em fase log ou estacionria. Utilizam-se fermentadores ou quimiostatos, que permitem um crescimento em equilbrio dinmico, havendo assim um controle da densidade populacional e da taxa de crescimento.

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Crescimento em culturas contnuas

Estes so respectivamente controlados pela concentrao do nutriente limitante (fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluio). Em baixas concentraes do nutriente limitante, a taxa de crescimento proporcional concentrao do nutriente (que virtualmente zero).

Entrada de meio fresco

Regulador de fluxo

Espao no preenchido Cuba

Cultura

Esquema de um quimiostato

Sada

Mtodos de contagem Contagem direta ao microscpio

CMARA DE NEUBAUER

Ao microscpio aumento de 400X Ao microscpio aumento de 100X

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Contagem de clulas viveis

Contagem em placas

Turbidimetria

Fonte de luz

Filtro

Amostra contendo clulas microbianas

Detector sensvel luz

Leitura dos resultados em absorbncia ou transmitncia no espectrofotmetro

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Tcnica da membrana filtrante

A membrana filtrante foi colocada sobre o meio de cultura e a placa foi incubada. Clulas bacterianas na superfcie da membrana (poros)

Tcnica do nmero mais provvel

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Microbiologia preditiva
Baseada na resposta microbiana frente a mudana de fatores ambientais
pH Temperatura Concentrao de inculo Concentrao de nutriente

Curvas de crescimento L.fermentum e S.cerevisiae, em S.cerevisiae, culturas puras e culturas mistas.

Aplicaes da microbiologia preditiva

APPCC (Anlise de Perigos e Pontos Crticos de Controle); Eventos fora do processo; Determinao de vida-de-prateleira; Anlise de Risco.

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