COLUNAS PARA HPLC Fase Reversa e Fase Normal Instrues de uso e cuidados

1. ATIVAO DE COLUNAS NOVAS OU ARMAZENADAS POR LONGOS PERODOS: - Fase Reversa (RP) apresentando grupos funcionais C18, C8, CN-RP, NH2 RP, Fenil C6H5, C4, C2 : Solvente de estocagem recomendado: 90% ACN : 10% H2O . (ACN = Acetronitrila) Ativao: 100% de ACN ou MeOH . (MeOH = Metanol) Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazo de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazo de 1ml/min. - Fase Normal (NP) apresentando grupos funcionais SiOH, OH, NH2, NO2, OH e N(CH3)2: Solvente de estocagem recomendado: 100% n-Heptano. Ativao: 100% de n-Heptano. Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazo de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazo de 1ml/min. OBS.: Antes de introduzir a fase mvel de trabalho, verifique a miscibilidade com o solvente de ativao. - Colunas RP: Passe gua antes de entrar com eluentes altamente concenrtados em tampo. - Colunas NP: Passese etanol ou n-Propanol antes de entrar com solventes aquosos. 2. PROCEDIMENTO DE LIMPEZA APS UMA LONGA SEQUNCIA DE ANLISE: - Colunas RP: Fase mvel -> *H2O -> ACN:H2O (10:90) -> ACN:H2O (90:10) * somente se a fase mvel for um tamponado concentrado. - Colunas NP: Fase mvel -> n-Propanol -> n-Heptano Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estgio, vazo de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estgio, vazo de 1ml/min. 3. PROCEDIMENTO DE REGENERAO QUMICA: Colunas RP: gua -> Metanol -> Clorofrmio -> Metanol -> gua ou 0,05M H2SO4 Colunas NP: Heptano -> Clorofrmio -> Acetato de Etila -> Acetona -> Etanol -> gua Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estgio, vazo de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estgio, vazo de 1ml/min. OBS.: Caso a presso de trabalho esteja elevada, pode-se inverter o sentido da coluna durante todo o processo de regenerao. Dependendo da gravidade do problema, este recurso de regenerao poder no recuperar a capacidade de separao da coluna.
DCtech Instrumentao Ltda Globallab group 1/1 www.globallab.com.br

mudana c/ gradiente linear (10min.)

4. CUIDADOS BSICOS: - No exceder a faixa de pH de 2 a 7.5 para colunas de slica convencional tipo Nucleosil; pH 1.5 a 9 para fases tipo Nucleodur e pH 1 a 11 para fases tipo Nucleodur Gravity. - No submeta a coluna a pHs extremos se no for estritamente necessrio. - Evite utilizar eluentes de trabalho puramente aquosos (>95% de gua) em colunas RP base slica convencional. Na necessidade da utilizao de eluentes de trabalho puramente aquosos em RP, utilize somente as colunas especiais tipo Nucleosil Nautilus C18 ou Nucleodur Pyramid C18. - Mantenha a concentrao do tampo dentro dos valores mnimos necessrios (ex.: 10mM ao invs de 100mM) - Exemplos de Tampes menos agressivos: amonia (acetato, formiato) e aminas (trietilamina, pirolidina). - Exemplos de Tampes mais agressivos: Fosfato e Borato. - Nunca armazene ou estoque a coluna em solues tamponadas. - Evite mudanas drsticas de fluxo e composio da fase mvel. - Utilize pr-colunas na entrada da coluna. - Utilize somente solventes graus HPLC e qumicos de alta pureza. - Filtre a fase mvel em membranas de 0,45m sob vcuo e daegaseique por 15 minutos no banho ultra-som. - Utilize cartuchos de extrao em fase slida CHROMABOND para limpeza das amostras em matrizes complexas tais como: cremes, pomadas, fludos biolgicos, alimentos, meio ambiente, etc). - Filtre todas as amostras em filtros CHROMAFIL de 0,45m antes da injeo. 4. ESQUEMA DE MONTAGEM PARA COLUNAS EM CARTUCHO (CHROMCART) E PRONTAS (EC): a) Coluna em cartucho ChromCART sem a instalao da pr-coluna. Obs.: Para utilizar o acoplador MN nas colunas LiChroCART, deve-se utilizar o extensor art. 721695

b) Coluna em cartucho ChromCART com a instalao da pr-coluna.

c) Coluna pronta EC com instalao da pr-coluna via adaptador direto EC art. 721359. d) Coluna pronta EC com instalao da pr-coluna via suporte externo e conector capilar.

Nucleosil, NucleosilNautilus, Nucleodur, NucleodurPyramid, NucleodurGravity, Chromafil, Chromabond e ChromCART so marcas registradas da empresa Macherey-Nagel (MN).

DCtech Instrumentao Ltda Globallab group

2/2

www.globallab.com.br