Tema 21.-Degradacin de carbohidratos. Introduccin al metabolismo. Digestin de carbohidratos. Transporte celular de glucosa. Glucolisis. Rutas del piruvato.

Regulacin de la glucolisis. Degradacin de otros monosacridos. Piruvato deshidrogenasa: regulacin. Ruta de las pentosas fosfato.

Glucolisis. Uso de la Glucosa por las Clulas

Glucosa Principal Nutriente: Energia libre de combustin completa -2840 Kj/mol
semiacetal

Destinos de la glucosa en la clula

Lehninger 4th ed Ch 7

Glucolisis
Glicolisis = lisis (rotura) gluco (dulce) Rotura de los glucidos Puede tener lugar en anaerobiosis o en presencia de oxgeno Es la ruta metablica probablemente ms antigua (ms de 3500 millones de aos), antes de la existencia de oxgeno atmosfrico. El producto final de la glucolisis en anaerobiosis es un derivado del piruvato: etanol (fermentacin alcohlica) o lactato (fermentacin lctica) Louis Pasteur descubri en 1856 la fermentacin alcohlica (cerveza, vino, pan) Buchner - 1897 Fermentacion en extractos celulares. Harden/Young - 1905 Fosfato estimula la fermentacion de glucosa. Las reacciones individuales de la glucolisis se descubrieron en 1930-1940, por Embden, Meyerhof y Otto Warburg. Se llama tambin: ruta de Embden-Meyerhof.

Louis Pasteur

Eduard Buchner

Las reacciones individuales de la glucolisis se descubrieron en 19301940, por Embden, Meyerhof y Otto Warburg. Se llama tambin: ruta de Embden-Meyerhof.

Otto Warburg

La glucolisis transcurre en el citosol.

La glucolisis tiene dos fases:

Fase de gasto de ATP: 2 ATP por glucosa
Productos finales: 2 triosas-P

Fase de formacin de ATP y NADH: 4ATP y 2NADH por glucosa

Productos finales: 2 piruvato

Mathews3eCh13

HK

Fase de gasto de ATP

G= -33kj

Fosfoglucosa isomerasa/ fosfohexosa isomerasa

G= -2.3kj

PFK (PFK1)

G= -22kj

Aldolasa

G= -1.3kj

Mathews3eCh13

1 1 2 3

4 6 5 6

Triosa fosfato isomerasa

G = 2.5kj/mol

A partir de aqu 3C = 4C 2C = 5C 1C = 6C

Mathews3eCh13

Fase de generacin de ATP y NADH

G= 6,3kj/mol G = -3kj/mol

Oxidacin del carbonilo en 1C a carboxilo: transferencia 2H a NAD+ acoplada a la incorporacin de Pi: endoergnico en condiciones standard pero no en la clula

Mecanismo de la Gliceraldehido-3-fosfato Deshidrogenasa (GAPDH)

2 Union del tiol y aldehdo: tiohemiacetal Oxidacin del tiohemiacetal al tioester La energa de hidrlisis del tioster se mantiene en el acil-fosfato

SH GAPDH tiene un tiol de una cisteina en su centro activo

Mathews3eCh13

Inhibicin de glucolsis por iodoacetato: se debe a alquilacin de GAPDH. Inactivacin de GAPDH inhibe la glucolisis: GAPDH-SH + ICH2-COOH GAPDH-S-CH2-COOH + HI

Gliceraldehido-3P-DH

Lehninger 4th ed Ch14-7, p530

Fase de Generacin de ATP y NADH

3fosfoglicerato quinasa: fosforilacin a nivel de sustrato

G = 2,6kj/mol

Fosfoglicerato Mutasa

Fosfoglicerato mutasa:

G = 1,6kj/mol

3-PG

[2,3PG]

2PG

2,3bisPG (2,3BPG) es in intermediario de la reaccin, presente en cantidades muy pequeas Mathews3eCh13

Fase de generacin de ATP y NADH

Enolasa: Eliminacin de agua

G = -6,6kj/mol

Piruvato quinasa: fosforilacin a nivel de sustrato

G = -33 kj/mol

Balance hasta aqu: glucosa + 2ADP + 2Pi + 2NAD 2pir + 2ATP + 2NADH Mathews3eCh13

Entrada de metabolitos en la glucolisis: Glicerol

Glycerol-P DH: hay dos enzimas: la citoslica, que forma NADH y la mitocondrial que forma FADH2 (lo veremos al hablar de las lanzaderas de NADH)

Entrada de otros monosacridos a la glucolisis: fructosa y galactosa

HK es inespecfica de sustrato

Stryer5eCh16

Entrada de la Fructosa en hgado

Entrada de la galactosa en la glucolisis

Gal-1-P uridil transferasa Gal-1-P + UDP-gluc UDP-gal + gluc-1-P UDP-gal 4 epimerasa UDP-gal UDP-glucosa Gal-1-P uridil transferasa UDP-gluc + Gal-1-P UDP-gal + gluc-1-P Fosfoglucomutasa Gluc-1-P Gluc-6-P

Entrada de disacridos: se hidrolizan en la pared intestinal Maltasa Lactasa Sacarasa maltosa 2glucosa lactosa glucosa + galactosa fructosa + glucosa sacarosa

Intolerancia a la lactosa: prdida de lactasa (en la edad adulta) Microorganismos del colon utlizan lactosa formando ac. lctico y los gases metano e hidrgeno (molestias intestinales) Galactosemia: falta congnita de Gal-1-P uridil transferasa. Ictericia, cirrosis, cataratas, retraso mental. Tratamiento: eliminacin de lactosa en la dieta.

Destinos del piruvato:

Aerobio: acetil-CoA y ciclo de Krebs Anaerobio: Fermentaciones: Necesidad de recuperacin del NAD

Stryer5eCh16

Destino del piruvato en anaerobiosis

Fermentacin lctica (Lactobacillus youghourt, msculo) Glucosa + 2ADP + 2Pi 2lactato + 2ATP

Fermentacin alcohlica Glucosa + 2ADP + 2Pi 2etanol + 2CO2 + 2ATP

Lehninger 4th ed Ch14

Isoenzimas de lactato deshidrogenasa:

Subunidades M (msculo) o H (heart, corazn) Composicin: tetrmero M4, M3H, M2H2, MH3, H4 M4: funciona sobre todo en la produccin de lactato (fermentativa) H4: funciona sobre todo en la utilizacin de lactato (oxidativa) Deuda de oxgeno Piruvato descarboxilasa de levaduras, bacterias utiliza TPP como coenzima. Es una alfa-descarboxilacin no oxidativa distinta de la PDH (que cataliza la descarboxilacin oxidativa de piruvato con transferencia a CoA) Alcohol DH: no slo en levaduras, tambin en hgado. Necesaria para metabolismo de etanol en la dieta.

Piruvato descarboxilasa.
Coenzima: Tiamina pirofosfato como coenzima de alfa-descarboxilaciones tiazol CH3-CO-COOH CH3-CHO +CO2 Piruvato descarboxilasa R1-CO-COOHR1-CO-CoA + CO2 Piruvato deshidrogenasa, KGDG R3-CO-CHOH-R4 R3-CO-CHOH-R5 Transcetolasa

Lehninger 4th ed Ch14 Stryer5e

La reaccin de la piruvato decarboxilasa tiene al acetaldehido activo unido a TPP (hidroxietil TPP) como producto intermedio

Piruvato CO2 CH3-CHO

TPP

Lehninger 4th ed Ch14

Piruvato descarboxilasa

Liberacin del acetaldehido y regeneracin del TPP

Producto de la adicin del TPP carbanion al piruvato Descarboxilacin

Protonacin para formar hidroxietilTPP

La descarboxilacin da un carbanin estabilizado por resonancia, gracias a que el tiazolio acta como sumidero de electrones

Lehninger 4th ed Ch14

Problema: 1 Suministras glucosa marcada en su 4C con 14C a unas levaduras y estudias la aparicin de lactato radioactivo. Qu carbono del lactato estar marcado? El COOH El CHOH El CH3 2 Suministras glucosa a una preparacin de hepatocitos tratados con iodoacetato. Indica qu metabolitos de los siguientes esperas que reduzcan sus niveles: Fructosa 1,6 bifosfato Piruvato 1,3 bisfosfoglicerato gliceraldehdo 3P

Regulacin de la glucolisis
Efecto Pasteur- Inhibicin de la glucolisis por oxgeno Disminucin de metabolitos debajo de F6P Estimulacin de la glucolisis en tumores* Pasos limitantes de la glucolisis: reacciones de no equilibrio, G alejado de 0: Hexoquinasa G = -20kj/mol, PFK1 PK G = -17kj/mol G = -31.4 kj/mol G = -33kj/mol G = -25 kj/mol G = -33 kj/mol

Mecanismos de Regulacin: Control alostrico por metabolitos de la va inhibicin feed-back, activacin feed-forward Modificacin Covalente (interconversin enzimtica) Variacin de niveles: Sntesis/Degradacin

Regulacin Fosfofructoquinasa PFK (PFK1) y PK

Moduladores

Inhibicin por ATP feed-back

Activacin por F-1,6-BP es feed-forward Mathews3eCh13 Stryer5eCh16

Hekoquinasa y glucoquinasa: Diferencias en afinidad, especificidad e inhibicin por producto. HK Alta afinidad por glucosa, pero poca especificidad. Tambin puede fosforilar otros monosacridos. Se inhibe por su producto: glucosa-6-P GK: mucha menor afinidad, pero mucha mayor especificidad para la glucosa. No se inhibe por G-6-P. HK: est en todos los tejidos GK: slo en hgado y clulas beta-pancreticas productoras de insulina

Funcin de GK: Metabolismo de grandes dosis de glucosa que llegan del intestino. En el pancreas es esencial para la secrecin de insulina. Su falta causa diabetes.

El efecto Pasteur se debe a la inhibicin de la PFK (PFK1) en presencia de oxgeno: La formacin de ATP aumenta en presencia de oxgeno. El aumento de la razn ATP/ADP inhibe la PFK y PK. Inhibicin de PFK produce acumulacion de G-6-P e inhibicin de HK

Ejercicio musculo/reposo

ATP, citrato

Hgado ayuno/alimentacin, F2,6 bisP (F-2,6-BP)

La entrada de glucosa en las clulas por difusin facilitada por los GLUT es una etapa reguladora adicional de la glucolisis

Ext

Citosol
GLUT2 tambin est en el intestino, membrana laterobasal, y coopera con el transportador de glucosa dependiente de Na en la salida de la glucosa desde el intestino a la sangre.

Stryer5eCh16

Lehninger 4th ed

La glucolisis se estimula y la actividad mitocondrial disminuye en tumores

(Otto Warburg) Las clulas cancerosas crecen ms deprisa que los vasos: hipoxia

VEGF=vascular endotelial GF

Stryer5eCh16

Destino del piruvato en aerobiosis: piruvato deshidrogenasa

Entrada a la mitocondria con un protn (electroneutro)

Piruvato + NAD+ + CoA

CO2 + acetil-CoA + NADH + H+

Transferencia a CoA CoA

CH3 | C=O | HOC=O Piruvato

Descarbo -xilacin

Oxidacin

CH3 | C= O | Acetillipoamida

CH3 | C= O | Acetil-CoA

TPP CO2

CH3 Lipoamida | H - C - OH | Hidroxi etil-TPP

PDH.

Resumen de los pasos entre Piruvato y Acetil-CoA

Coenzimas que participan en el complejo piruvato deshidrogenasa (PDH)

Se une a la proteina por un enlace amida: lipoamida

Coenzima A Stryer5eCh14

Complejo piruvato deshidrogenasa

E1

Piruvato deshidrogenasa Reacciones 1 y 2

E2
CH 3 | CO | HS S | |

Dihidrolipoil transacetilasa Reaccin 3

CoA-SH

H3C-CO-SCoA

CH3-CO-COOH TPP

E2
HS SH | | Lys

1
CO2

E1
TPP | CHOH | CH3

2 2
S S | |

4
FADH2

E3
5

FAD NADH + H+

E3

Dihidrolipoil deshidrogenasa, reacciones 4 y 5

NAD+

Destino del piruvato en aerobiosis: piruvato deshidrogenasa Piruvato + NAD+ + CoA CO2 + acetil-CoA + NADH + H+
El complejo PDH tiene 3 tipos de subunidades: E1, E2 y E3. E1 une TPP y cataliza la descarboxilacin del piruvato y transferencia de acetilo a acido lipoico E2 une ac lipoico /lipoamida E3 une FAD

PDH: estructura. La cadena lateral de la lipoamida permite su movimiento de una a otra subunidad
E2 (dihidrolipoil transacetilasa) tiene dominios de union de lipoamida (1-3, dependiendo de las especies), acetiltransferasa y de interaccion con E1 y E3 24 E1 (3x8) en los vrtices

12 E3, (6x2) en los centros de las caras

PDH de E.coli

8x3 =24

Stryer5eCh17

Coenzimas que participan en la PDH: relacin con vitaminas del complejo B TPP. La tiamina es la vitamina B1. Su falta ocasiona el beriberi (perdida de peso, disfuncin neurologica, temblores) CoenzimaA. El cido pantotnico es la Vitamina B5. Su falta causa hipertension. NAD. El cido nicotnico (nicotinamida es su derivado) es la vitamina B3. Su falta ocasiona la pelagra (dermatitis, depresin, diarrea) FAD. La riboflavina es la vitamina B2. Su falta ocasiona lesiones bucales, dermatitis Acido lipoico: no es vitamina. El envenenamiento por arsenito (AsO33-) se debe a la unin del mismo a los grupos tiol prximos del ac lipoico. Los sntomas son parecidos al beriberi

Balance energtico desde glucosa a acetil-CoA

Glucosa + 2ADP + 2Pi + 2NADcit transporte de pir 2piruvato(cit) 2 piruvato + 2ATP + 2(NADH + H)cit

2piruvato(mit)

PDH 2 piruvato + 2NADmit + 2CoA 2Acetil-CoA + 2CO2 + 2(NADH + H)mit 1 NADH mit da 2,5ATP. Por tanto, Glucosa Glucosa 2AcetilCoA + 2NADH(cit) + 2ATP (cit) + 5ATP(mit) 2AcetilCoA + 2NADH (cit) + 7ATP

Regeneracin del NAD citoslico: Oxidacin del NADH citoslico mediante las lanzaderas
Lanzadera del 3-gliceroP: el NADH citoslico entra en la mitocondria como FADH2, al mismo nivel que el complejoII. Se forman 1,5 ATP/NADH

Espacio interM Complex IV

Complex III

1/2O2

H2O

Stryer5e

Lanzadera Aspartato-malato: genera~ 2,5ATP/NADH Necesita energa NADH/NAD mit > NADH/NAD cit

OGC

H+ Ca2+ + AGC

Lehninger 4th ed Ch19

Modificada para 2009

Lanzadera Aspartato-malato: genera~ 2,5ATP/NADH Necesita energa NADH/NAD mit > NADH/NAD cit Lanzadera de NADH Aspartato-Malato
Citosol Glutamato COOH-CH-CH2-CH2-COOH NH2 H+ Matriz Mitocondrial Glutamato COOH-CH-CH2-CH2-COOH NH2

Ca2+

AGC AAT AAT

COOH-CH-CH2-COOH NH2 Aspartato COOH-CH-CH2-COOH NH2 Aspartato COOH-CO-CH2-CH2-COOH Oxalacetato (OAA) COOH-CO-CH2-COOH NADH -Cetoglutarato (oxoglutarato, -KG)

COOH-CO-CH2-CH2-COOH -KG COOH-CO-CH2-COOH OAA NADH Oxalacetato

MDH
NAD COOH-CHOH-CH2-COOH Malato NAD

MDH
COOH-CHOH-CH2-COOH

OGC

Malato

Balance energtico desde glucosa a acetilCoA

Glucosa 2acetilCoA y se producen 7ATP + 2NADH (cit)

Regeneracin de 1NADHcit da 1,5ATP (lanz gliceroP) da 2,5ATP (lanz asp-mal) Por tanto: Glucosa 2acetilCoA y se producen 10ATP (lanz gliceroP) y se producen 12ATP(lanz asp-mal)

Ciclo de las pentosas fosfato

Objetivos: Formar NADPH sntesis de lpidos (cidos grasos y colesterol) Formar pentosas (cidos nucleicos) Localizacin: tejido adiposo, hgado glndula mamaria, glndula adrenal (hormonas esteroideas)

Tiene dos fases: Oxidativa desde glucosa-6-P a ribulosa-5-P No oxidativa: a partir de ribulosa-5-P Fase no oxidativa tiene 3 variantes: 1. de ribulosa-5-P a ribosa-5-P para sntesis de nucletidos 2. de ribulosa-5-P a Fructosa-6-P y regeneracin de glucosa-6-P para sntesis de NADPH 3. de ribulosa-5-P a Fructosa-6-P y piruvato para su oxidacin en ciclo de Krebs

3 3x 3 Fase no oxidativa

Partiendo de 3 Glucosa-6-P que dan 3 Ribulosa-5-P se forman 2 Frucosa-6-P y 1 gliceraldehdo-3P Stryer5eCh20

Fase oxidativa: dos reacciones de formacin de NADPH

Stryer5eCh20

Fase no oxidativa: Transformaciones de pentosas entre s: Ribulosa -5-P epimerasa y Ribulosa-5-P isomerasa

Isomerasa

Epimerasa

Stryer5eCh20

Fase no oxidativa: Transcetolasa transfiere 2 carbonos

Transcetolasa usa TPP como coenzima Stryer5eCh20

Transaldolasa: transfiere 3 carbonos

Stryer5eCh20

Transcetolasa: transfiere 2 Carbonos

Stryer5eCh20

Fase no oxidativa:
Partiendo de 3 Ribulosa-5-P 3 Isomerasa

x3 x3

Epimerasa

Transcetolasa

Transaldolasa

se forman 2 Frucosa-6-P y 1 gliceraldehdo-3P Transcetolasa

Stryer5eCh20

Defectos en el ciclo de las pentosas. Deficiencia en glucosa-6-P DH. Causa anemia hemoltica, a consecuencia de la falta de NADPH NADPH es necesario para mantener reducido el glutation (GSH), o gamaglutamil-cisteinil-glicina. GSH se requiere para eliminar H2O2 glutation peroxidasa H2O2 + 2GSH 2H2O + GSSG glutation reductasa GSSG + NADPH + H+ 2GSH + NADP+ G6P DH G-6-P + NADP+ NADPH + H+ + 6PGluconolact GSH

Prevalencia de deficiencia en G6PDH en lugares con malaria.

Regulacin de la PK
ProteinaKdependiente de cAMP, PKA 2.Modificacin covalente en hgado

PKA

Regulacin PFK1 y PK 1.Efectos alostricos Activacin por F-1,6-BP es feed-forward Stryer5eCh16

Formacin de F-2,6-BP
Fructosa-6-P + ATP

PFK2

+ ADP

FBPasa2 F-2,6-BP + H2O F-6-P + Pi

PFK2 es una enzima bifuncional: dominio K para sntesis de F-2,6-BP y dominio fosfatasa para la hidrlisis de F-2,6-BP. Se comporta como quinasa o como fosfatasa de forma regulada por fosforilacin. PFK2 Stryer5eCh16&Mathews3eCh13

Hgado, regulacin hormonal de la glucolisis

Abundancia de glucosa promueve estimulacin de la glucolisis Inactiva a PiruvatoK

Ayuno: falta de glucosa promueve secrecin de glucagon y esto inhibe la glucolisis: a nivel de PFK1 y PiruvK

PKA

Disminuye F2,6bisP Stryer5eCh16