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Escola Secundria de Cames Biologia e Geologia 10.

ano
Muitos dos progressos nos vrios domnios da cincia, nomeadamente na citologia, devem-se a um instrumento de pesquisa o microscpio. Este aparelho produz uma imagem ampliada e de grande preciso do objeto em estudo.

1. CONSTITUIO E FUNCIONAMENTO DO MICROSCPIO TICO COMPOSTO O microscpio tico composto (MOC) constitudo por uma parte tica e uma parte mecnica. Conforme consta na tabela, a parte tica constituda por dois sistemas: o sistema de iluminao e o sistema de ampliao. Na tabela encontram-se tambm os constituintes da parte mecnica do microscpio e respetiva funo.Diversos constituintes do Figura 1 CONSTITUINTES PARTE PTICA Sistem Ilumin a de ao
MOC.

FUNO

PARTICULARIDADES Lmpada incorporada de microscpios mais modernos tungstnio

Lmpada ou Espelho Ilumina o campo do microscpio

Espelho de duas faces: plana luz natural; cncava luz artificial Condensador Concentra os raios omitidos pela fonte Sistema de duas ou trs lentes. luminosa, fazendo-os incidir na preparao (Fig. 1A). Regula a intensidade do campo visual Existe associado ao condensador do microscpio (Fig. 1B). constitudo por vrias palhetas. e

Diafragma Sistema de ampliao Objetivas

Sistema de lentes que ampliam Tipos de objetivas: a imagem do objeto a ser observado. A seco designao que advm do facto de Cada objetiva constituda por vrias existir uma camada de ar entre a lente frontal da lentes lente frontal, que fica mais objectiva e a preparao; prxima da platina, e lentes corretoras, De que corrigem aspetos como curvatura imerso a lente frontal fica imersa num leo, geralmente de cedro, com um ndice de de campo, etc. (Fig. 1C). refrao semelhante ao do vidro. Sistema de lentes que ampliam As oculares so especificadas por: a imagem fornecida pela objetiva, - Letra que indica o tipo; situado na parte superior do tubo (Fig. 1D). - Ampliao; - Dimetro do campo de viso; Por exemplo: P10x 13,4 uma Plan-acromtica (P) com poder ampliador de 10x e nmero de campo 13,4.

Oculares

Trabalho Experimental Biologia e Geologia Ano I Marta Silva

Professora

CONSTITUINTES PARTE MECNICA P ou base

FUNO Suporte do microscpio.

PARTICULARIDADES Apresenta formas diversas.

Brao ou coluna Pea fixa base, suporte outras partes do microscpio. Platina Pea, paralela base, onde se coloca Pode ser fixa e apresentar duas pinas que a preparao. No centro apresenta fixam a preparao. uma abertura a janela da platina Por por onde passam os raios de luz (Fig. vezes so mveis, deslocando-se pela aco de um conjunto de parafusos. 1E)

Tubo ou canho Pea que possui na extremidade inferior o revlver e na superior a ocular. Revlver Pea giratria objectivas. que suporte as Permite a seleco rpida das objectivas.

Parafuso macromtrico Possibilita movimentos verticais de Permite uma focagem rpida. grande amplitude. Parafuso micromtrico Possibilita movimentos verticais de Permite optimizar a focagem. Permite observar pequena amplitude. o material em diferentes planos e determinar a profundidade de campo.

1.1. IDENTIFICAO DAS OBJETIVAS No corpo da objetiva costumam vir marcados: Ampliao; Abertura numrica;

3
Figura 2 Representao em corte de uma objetiva. Figura 3 Objetivas com diferentes ampliaes.

Comprimento do tubo (distncia entre rosca da objetiva e a entrada para ocular); Espessura de lamela recomendada; Cdigo especificando o tipo (I de imerso).

Por exemplo: a marcao 40/0,25 k; 160/0,17 diz respeito a:

Uma objetiva com um poder ampliador de 40x; Abertura numrica de 0,25; Comprimento do tubo de 160 mm e espessura da lamela de 0,17 mm.

1.2. ILUMINAO E FOCAGEM Para proceder a uma correta iluminao do microscpio deve ter em conta que a luz deve atravessar a preparao. O ajuste correto da iluminao aquele em que: O campo visual est uniforme e completamente iluminado; O ngulo de entrada na objectiva est iluminado (Fig.4).
Figura 4 Iluminao por

Para se obter esse ajuste deve seguir-se um conjunto de procedimentos como: transmisso. 1 verificar se toda a componente tica est devidamente limpa;

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2 confirmar se a objetiva de menor ampliao est no prolongamento do tubo; 3 abrir o diafragma e ligar a fonte de luz; 4 visualizar o campo do microscpio, que deve estar uniformemente iluminado. Aps este conjunto de operaes poder-se- procurar obter uma primeira visualizao do objeto, sendo necessrio proceder focagem. Para tal deve-se: 1 colocar a preparao na platina e, aps estar centrada na janela, prend-la com as pinas; 2 rodar o condensador para que fique ajustado janela da platina; 3 mover lentamente o parafuso macromtrico, para que a platina se aproxime da objetiva. Deve colocar-se numa posio lateral, relativamente ao microscpio para controlares estes movimentos; 4 verificar se o cone de luz da iluminao preenche somente o cone de entrada da objetiva. 5 observando atravs da ocular, afastar lentamente a platina at obter a primeira imagem; 6 com o auxlio do parafuso micromtrico, corrigir a focagem at se obter uma imagem ntida; 7 regular a abertura do diafragma, iluminando o campo do microscpio de acordo com o material que se est a observar. Se necessrio pode descer-se um pouco o condensador. 1.3. AMPLIAO E PODER DE RESOLUO DO MICROSCPIO TICO O microscpio tem como principal funo o fornecimento de uma imagem ampliada do objeto em estudo, permitindo a visualizao de pormenores que no eram passveis de observao a olho nu. Em microscopia tica o valor total da ampliao de uma imagem dado pela frmula seguinte:

Ampliao total = Ampliao objectiva

Ampliao

ocular

No entanto, pode-se considerar como caratersticas mais importantes que o poder ampliador de um microscpio, o poder de definio (que permite a formao de imagens com contornos bem definidos) e o poder de resoluo, que traduzido pela capacidade de se distinguir dois pontos que se encontrem muito prximos. Como se pode observar na figura 5, se ampliarmos uma imagem de 10x para 45x para 100x, a imagem de facto surge maior, mas no necessariamente mais ntida. Mas, se medida que se aumenta o poder ampliador de um sistema tico, se aumentar o poder de resoluo, a imagem surge com uma informao cada vez mais pormenorizada. A razo para esta dicotomia entre ampliao e resoluo relaciona-se com o limite de resoluo do olho humano, que aproximadamente de 0,1 mm. Ou seja, para que dois objectos sejam visualizados separadamente tm que se encontrar separados por uma distncia de 0,1 mm. Se a distncia que os separa for menor, ns vamos observ-los como se fossem um nico objeto. Como a maioria das clulas apresenta um dimetro inferior a 0,1 mm, surge a necessidade de recorrer ao microscpio para as observar. O limite de resoluo do microscpio tico composto de 0,2 m. Figura 5 Poder de ampliao 1.4. CARATERSTICAS DA IMAGEM EM MICROSCOPIA PTICA
versus poder de microscopia ptica. resoluo em

Como j foi referido, o microscpio tico composto fornece imagens ampliadas dos objetos. Esta ampliao obtida atravs da conjugao do poder ampliador do sistema objetivo e do sistema ocular (Fig.6).

Sistema objetivo a objetiva fornece uma imagem real, ampliada (o nmero de vezes indicado), simtrica e invertida.

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Sistema ocular a ocular fornece uma imagem ampliada (o nmero de vezes indicado) relativamente imagem fornecida pela objetiva, direita e virtual (porque se forma atrs da lente ocular). Pode-se concluir que a imagem que o observador recebe, relativamente ao objeto, : - uma imagem ampliada (primeiro pela objectiva e depois pela ocular); - simtrica e invertida; - virtual. Dado que a imagem invertida, deve-se movimentar sempre a preparao microscpica no sentido contrrio quele em que desejamos movimentar a imagem.
Figura 6 A imagem fornecida pela objetiva ampliada, simtrica e invertida.

1.5. DIMETRO DE CAMPO DO MICROSCPIO TICO Na utilizao do microscpio tico fundamental relacionar o dimetro da superfcie observada com a ampliao utilizada. Pode-se relacionar essas duas variveis atravs da frmula seguinte:

a2/a1 = d1/d2
a1 poder ampliador da objetiva de menor aumento; d1 dimetro do crculo observado com menor ampliao; a2 poder ampliador da objetiva de maior aumento; d2 dimetro do crculo observado com maior ampliao. Verifica-se assim que a rea da superfcie observada varia na razo inversa da ampliao utilizada. A execuo do trabalho experimental relativo determinao do dimetro de campo do microscpio ptico (Fig.7) permite concluir que se deve: 1. iniciar a observao microscpica utilizando a objetiva de menor ampliao, que permite captar uma ideia de conjunto e seleccionar a zona que interessa observar; 2. passar depois s objetivas de maior poder ampliador que apesar de reduzirem a rea observada, revelam pormenores que no so visveis em ampliaes menores.
Figura 7 Observao com ampliaes diferentes e os trs campos do microscpio em grandeza real.

1.6. PROFUNDIDADE DE CAMPO DO MICROSCPIO TICO A profundidade de campo do microscpio tico muito reduzida, pelo que ao observar um objeto necessrio ter em conta que s se consegue observar nitidamente um plano de cada vez. Assim, os planos que se encontram acima e abaixo desse ficam desfocados. Quanto menor for o poder de ampliao da objetiva, maior a profundidade de campo. importante que durante a observao microscpica se proceda a uma manobra constante do parafuso micromtrico, de modo a poderem visualizar-se nitidamente pormenores nos diferentes planos.

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