COLEGIO LIBRE DE ESTUDIOS UNIVERSITARIOS COORDINACIN DE LABORATORIOS PLAN DE PRCTICA

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PRCTICA No: 4 FECHA (S): GENETICA FORENSE _________________________________ MATERIA HORARIOS: 14:00 15:00 HRS 15:00 16:00 HRS 16:00 17:00 HRS

TEMA DEL PROGRAMA QUE SE TRABAJA:

CUERPOS DE BARR _______________________________________ TTULO DE LA PRCTICA Alumno: Isaas Augusto Lpez Urbina. 9 A

OBJETIVO DE LA PRCTICA: Que el alumno pueda conocer el proceso de diferenciacin sexual y observe la evidencia citolgica del cromosoma X inactivo

COMPETENCIAS A DESARROLLAR CON LA REALIZACIN DE LA PRCTICA: El alumno identifica los cuerpos de Barr mediante la observacin microscpica.

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INTRODUCCION: En 1923, Painter demostr ciotolgicamente la existencia de los cromosomas X y Y en el humano. En 1949, Barr y Bertram descubrieron masas de cromatina sexual (cuerpos de Barr) en clulas en interfase femeninas y no en masculinas. A esta observacin sigui el desarrollo de una tcnica sencilla que permita detectar cuerpos de Barr en clulas de mucosa oral. Como resultado de su aplicacin se reconoci que las clulas femeninas eran cromatina positiva mientras que las masculinas erancromatina negativa, pero que existan excepciones: las pacientes con sndrome de Turner no tenan cuerpos de Barr y los pacientes con sndrome de Klinefelter si los presentaban. El anlisis citogentico de estos pacientes explic la discrepancia aparente al demostrarse que el sndrome de Turner tena un complemento cromosmico 45, X y el de Klinefelter 47, XXY. Estos hallazgos tambin demostraron que en presencia de un cromosoma Y, independientemente del nmero de cromosomas X, el embrin humano se desarrolla como macho, mientras que en ausencia del Y se desarrolla como hembra. El siguiente paso en el entendimiento de los cromosomas sexuales humanos fue la explicacin de la cromatina sexual en trminos de la inactivacin del cromosoma X. La hiptesis de Lyon establece que en las clulas somticas de mujeres normales, y no en las de hombres normales, un cromosoma X es inactivado al azar para compensar la dosis gnica en ambos sexos. El cuerpo de Barr representa al cromosoma X inactivo de replicacin tarda. En pacientes con cromosomas X supernumerarios, todos los cromosomas en exceso de uno son inactivados y forman cuerpos de Barr. La diferenciacin sexual es un proceso dinmico sujeto a un programa secuencial, ordenado e interrelacionado que se lleva a cabo en varias etapas consecutivas: el establecimiento del sexo cromosmico durante la fertilizacin, la etapa pregonadal, el desarrollo del sexo gnada, y la definicin de los genitales internos y externos, que condicionan el sexo fenotipo. Los individuos con reversin sexual (varones XX, mujeres XY y hermafroditas verdaderos XX) aparentemente rompen la regla de que el cromosoma Y controla la diferenciacin testicular. En el caso de los varones XX, se ha demostrado que el 80% presenta secuencias derivadas del cromosoma Y translocadas al cromosoma X por una recombinacin ilegtima durante la meiosis paterna. El anlisis molecular de los diferentes fragmentos del cromosoma Y presentes en estos pacientes permiti definir que la regin terminal del brazo corto era esencial en la diferenciacin testicular y postular la existencia de un gen cuya presencia o ausencia determina el destino de la gnada bipotencial en testculo u ovario. En el ser humano este gen se denomin TDF. (Por sus siglas en ingls testis determining factor). En 1987, Page y cols. Clonaron una regin de 140 kb en Yp presente en un varn XX y ausente en una mujer XY dentro de la cual identificaron un gen que llamaron ZFY. (zinc finger protein) y que propusieron como TDF. Sin embargo, en los aos subsecuentes se acumularon una serie de observaciones que excluyeron a ZFY.
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Como TDF. La nueva bsqueda de TDF. Se limit a una regin de 35 kb, presente entre el lmite de la regin pseudoautosmica y el punto de ruptura en varones XX, ZFY. Negativos, resultando en la clonacin del gen SRY. (sex determining regin, Ychromosome) por Sinclair y cols. En 1990. Las evidencias posteriores apoyan a SRY. Como TDF. El cromosoma X posee mas de 160 millones de pares de bases en su molcula de doble cadena, por lo tanto es considerado un cromosoma de gran tamao. Hemos planteado que los cromosomas poseen la informacin gentica que codifica la mayor de prote a nas que son sintetizadas en una clula, ya que son la condensacin del ADN. Debido a esto es posible deducir que las mujeres al poseer un cromosoma X mas que los hombres, y al este cromosoma ser mucho mas grande que el cromosoma Y (cromosoma masculino), se podr a deducir que posiblemente las mujeres tendr mucho mas informacin codificante que los an hombres, por lo tanto tendr un mayor numero de prote an nas en su organismo. Actualmente se conoce que esto no ocurre realmente as mediante experimentos , espec ficos, midiendo el numero de prote nas en diferentes organismos, se ha demostrado que el sexo femenino proporcionalmente posee la misma cantidad de prote nas que el sexo masculino. En 1949 Barr y Bertram observaron una masa que se te intensamente en ncleos en a interfase de clulas de gatas y les denominaron Satlite Nuclear. En 1951, Barr reconoci que esta masa estaba en el borde de la membrana nuclear y slo aparec en las hembras, a llamndolo: cromatina sexual o Corpsculo de Barr. La doctora Mary Lyon en 1960, plante que exist una relacin entre sta cromatina sexual a y el nmero de cromosomas X, ya que este corpsculo era la inactivacion de uno de los cromosomas femeninos, en donde solo uno de ellos, el activo, era el encargado de sintetizar prote nas, a lo que denomino compensacin de dosis. En organismos inferiores, se ha demostrado que tambin existe la compensacin de dosis, en donde las cantidades de productos sintetizados por hembras y machos siempre es la misma. Por ejemplo en la mosca drosophila los dos cromosomas X de la hembra estn activos y el nico cromosoma X del macho, sintetiza el doble de productos. Tambin en la lombriz de tierra C. Elegans los cromosomas X de la hembra trabajan a la mitad, por lo tanto el nico cromosoma X del macho trabaja normalmente y ocurre as la compensacin de dosis. La inactivacin contiene dos periodos fundamentales en las hembras. El primer periodo esta en el trofoblasto, y es no al azar, es siempre el cromosoma paterno el que es inactivado. El segundo periodo ocurre al azar e inicia en el brastocisto tard luego que es seleccionado el o, cromosoma X a inactivar en un linaje de clulas ya sea del padre o de la madre, todas las clulas hijas de ese linaje tendrn el mismo cromosoma inactivo. Las hembras poseen en sus clulas somticas dos cromosomas X pero solo uno de ellos activo, que puede ser tanto del padre como de la madre aleatoriamente, por lo tanto se dice que las hembras son mosaicos para los cromosomas sexuales.

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HERENCIA LIGADA A X La herencia ligada al x tiene varias diferencias con la herencia autosomica dominante o recesiva: o Las caractersticas se pueden transmitir solo de padres a hijas. o Las caractersticas se pueden transmitir de madres a hijas como a hijos. o Las enfermedades recesivas ligadas a X afectan mayormente a los hombres. o Las enfermedades dominantes ligadas a X afectan mayormente a las mujeres. Este tipo de herencia tambin se puede clasificar en Dominante ligada a X o recesiva ligada a X, segn se necesiten ambos o un solo alelo para que se exprese la caractersticas. En la herencia dominante ligada a X cuando la madre esta afectada de la enfermedad, el 50% de sus hijos estarn afectados y el 50% de sus hijas estaran afectadas. Si es el caso de que el padre padezca la enfermedad, el 0% de sus hijos estar afectado y el 100% de sus hijas estarn afectadas. En este tipo de herencia dominante ligada a x, no existe saltos generacionales y no hay transmisin de hombres a hombres, un ejemplo de esta enfermedad es el raquitismo hipofosfatmico. En la herencia recesiva ligada a X si son las mujeres afectadas el 50% de sus hijos estarn afectados y el 50% de sus hijas sern portadoras ya que son mosaicos para este tipo de herencia. En el caso de que el padre esta afectado el 0% de los hijos estar afectado, y el 100% de las hijas sern portadoras de la enfermedad. En este tipo de herencia no hay transmisin de hombres a hombres y si existen saltos generacionales, o sea que la progenie puede o no padecer la enfermedad pero los hijos de esta si la podrn padecer. Un ejemplo de enfermedad recesiva ligada a X es el Daltonismo en donde las personas afectadas no pueden distinguir los colores rojo y verde debido a alteracin es genticas en el brazo largo del cromosoma X. La enfermedad del cromosoma X frgil o sndrome de Martin Bell se caracteriza por tener propiedades tanto de la herencia recesiva ligada a X y herencia dominante ligadas a X debido a que el factor que determina la presentacin de la enfermedad no es la presencia o no de un alelo anormal en el genoma sino la repeticin en Tadem de pares de bases que producen anomalas fenotipicas en el producto. Su nombre de X frgil se denomina por que el cromosoma pierde parte de su brazo largo cuando se expone en un medio deficiente de cido flico. En esta anomala congnita existen saltos generacionales en la transmisin de la enfermedad y adems existen hombres que no presentan la enfermedad fenotpicamente pero genotpicamente si la tienen. O sea que son portadores para la enfermedad. La repeticin en tandem es del triplete de pares de bases Cistosina, Guanina, Guanina en el gen FMR1 del brazo largo del cromosoma X. Si existe una repeticin de este triplete de 6 a 50 veces en el gen, se considera una persona normal, en donde su progenie no tiene la posibilidad de estar afectado por esta anomala. Cuando la repeticin en tandem es de 50 a 200 veces, entonces es el organismo es de fenotipo normal pero es portador para la enfermedad y se considera como una permutacin del X frgil, ahora toda su progenie va a responder igual como si se expresara una
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enfermedad dominante ligada a X en donde se afectaran los hijos y las hijas de una madre permutada y solo las hijas de un padre con la premutacin. MATERIAL A UTILIZAR Y QUE EL ESTUDIANTE DEBER ADQUIRIR: EQUIPO O MATERIAL PRESTADO DE LABORATORIO: 1.- Clulas de descamacin de la mucosa oral 6.- Aceite de inmersin 11.2.Abatelenguas estril 7.12.3.- Portaobjetos 8.13.4.- Cubreobjetos 9.14.5.- Solucin de aceto-orcena al 2% 10.15.-

1. REA O INSTALACIONES QUE REQUIERE PARA LA REALIZACIN DE LA

PRCTICA: LAB. CRIMINALSTICA (X ) LAB. CRMINOLOGA ( ) CASA DE HECHOS ( ) CUARTO OBSCURO ( ) JARDN ( ) LAB. MOVIL ( ) OTRO: ( ) ________________________________________

PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIN DE LA PRCTICA 1. Enjuagarse la boca repetidas veces con agua y raspar la mucosa interna de la mejilla con un abatelenguas. Eliminar el primer raspado con un algodn y repetir la operacin. 2. Hacer un frotis del segundo raspado sobre un portaobjetos. Aadir una o dos gotas de la solucin de aceto-orcena. Colocar un cubreobjetos. Eliminar el exceso de colorante. 3. Observar a seco dbil hasta encontrar un campo en donde se localicen clulas. Observar despus a inmersin para identificar el corpsculo de Barr el cual se aprecia como una mancha obscura adherida a la membrana nuclear y que no desaparece al mover el tornillo micromtrico del microscopio.

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NOTA: EN MUJERES NORMALES EL NMERO PROMEDIO DE CLULAS EN FROTIS BUCALES CON CUERPO DE BARR ES DE 18-60% . DESCRIPCIONES DE LO OBSERVADO:

En la del sexo masculino solo se observan las clulas epiteliales con su respectivo ncleo con ausencia de los cuerpos de barr ya que en hombres no se manifiesta esta situacin.

En la muestra de origen femenino se observan las clulas epiteliales con su ncleo pero con presencia del cuerpo de barr en uno de sus polos con lo cual se demostr que estos solo se presentan en Mujeres, pero tambin pueden no manifestarlo.

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CONCLUSIONES DEL ESTUDIANTE: Uno de los fenmenos ms importantes en gentica evolutiva es la inactivacin de uno de los cromosomas X en individuos femeninos (XX), proceso que mantiene el equilibrio gnico en ambos sexos al igualar el contenido de ADN cromosmico activo. La inactivacin del cromosoma X resulta en la formacin del corpsculo de Barr o cromatina X que se observa en los ncleos de clulas femeninas en interfase y este cromosoma X en la mujer se inactiva haciendo que la relacin autosomas-sexocromosomas sea igual que en el hombre. En las clulas somticas, el proceso de inactivacin es clonal. No obstante, una vez que se establece este evento, todas las clulas descendientes tendrn el mismo cromosoma X inactivo. Adems del mecanismo de compensacin gnica entre individuos XX y XY, el proceso de inactivacin ocurre sobre los cromosomas X supernumerarios generados por errores mitticos o meiticos lo cual se reconoce como sndromes cromosmicos sexuales supernumerarios si es que hay cromosomas sexuales adicionales.

BIBLIOGRAFIA y y y y Benjamn Lewins; Genes VII; Marban libros SL; 2001; Cambios globales en los cromosomas X; Pg. 601. T.W. Sadler, Ph.D.; Embriologa Medica; 8va edicin; Editorial Mdica Panamericana; Embriologa general; Pg. 1-132. Lynn B. Jorde, Ph.D. ; Gentica Mdica; segunda Edicin; Ediciones Harcourt, S. A.; 2000; Herencia Ligada al sexo y herencia mitocondrial; Pg. 58-84. Dra. Argelia Aybar Muoz; Primera Edicion; Manual de actividades Practicas de gentica Mdica; Editora NANY, C. x A.; Practica 6, Practica 7; Pg. 79-82 EVALUACIN: _________________ FECHA DE ENTREGA DEL REPORTE: 15 de Diciembre del 2010

NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE Q.B. JUDITH LUCAS TERN.

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