1

Efecto de los antibiticos Calendula officinalis (Mercadela) y cloranfenicol en colonias de microorganismos

Alba Martnez Zoe Cruz Salas Brenda Gabriela Estrada Santiago Atenas Hernndez Garca Diana Paola Salazar Gonzlez Paulina

Grupo 600C

Entrega martes 15 de noviembre de 2011

Profesor Pablo Gonzlez Yoval

ndice Introduccin3 Marco terico.....4 Objetivo...6 Hiptesis.7 Metodologa7 Resultados10 Discusin..13 Conclusiones15 Referencias..16

Introduccin Esta prctica busca probar la efectividad de los antibiticos naturales y artificiales en un medio de cultivo. Nosotros ocuparemos como antibitico natural la Calendula officinalis (Mercadela). Segn Ramrez (1999) Los remedios populares descritos indican el uso de poleo, para las anginas; marcela o coronilla, para la garganta, y ros de castilla, para la tos. De estas especies, los estudios botnicos proporcionan informacin posible para el poleo bajo el nombre de poleo blanco, mientras que para las otras dos especies no se encontr informacin pertinente. En resumen, los diferentes medicamentos naturales usados para la garganta son: o o o o o Alfilerillo (Erodium cicutarium) Gordolobo(Graphalium comoideu) Mercadela (Calendula oficinalis L.) Siempreviva(Sedum praealtum DC) Violeta, violeta de campo (Anoda cristata )

La mercadela se utiliza, como vimos para aliviar enfermedades de la garganta; segn la tradicin popular, como nos lo explica el Instituto Nacional de Antropologa e Historia (1993) la mercadela se hierve en la cantidad de agua segn uno desee y se le agrega unas 4 o 5 flores, no se toma, simplemente se realizan grgaras. As mismo Hernndez (1981) nos explica que la mercadela es una infusin de una cucharada de la planta en media taza de agua, se recomienda tomar despus de cada comida y nos explica que su uso prolongado puede causar daos como diarrea. Mientras que como antibitico artificial utilizaremos Clorafenicol. El clorafenicol y sus anlogos, nos explica Defill (1985) son antibiticos de amplio espectro de gran uso en la prctica mdica y de accin bacteriosttica. Se obtiene por sntesis y con produccin a gran escala. El clorafenicol y sus anlogos son efectivos contra muchas bacterias y rickettsias, pero ineficaces contra las clamidias. Ejercen su accin antimicrobiana en las infecciones por bacterias gran negativas, como: neisserias menigitidis y gonorrhoea; bacilos gran negativos como: brucella,shigella, E.Coli, bordetella perussis que ocasiona la tos ferina, enterobacter aerogenes, proteus, vibrin colrico, yersenia pestis culpable de la peste y las salmonellas, en especial la tifosa y la paratfica A.

Administrado por va oral, el clorafenicol se absorbe rpida y completamente y alcanza su concentracin plasmtica mxima en 2 horas. Fue aislado inicialmente de cultivos de Streptomyces e inhibe la sntesis protica.

Marco terico Concepto de antibitico Existen diferentes definiciones del concepto de antibitico. Segn Ingraham (1988) los antibiticos son sustancias quimioterpicas naturales que producen los microorganismos. Tambin se define a los antibiticos como compuestos sintetizados y excretados por los microorganismos, los cuales son selectivamente txicos para otros microorganismos. Stainer (1996). Descubrimiento de los antibiticos Alexander Flemming (bacterilogo britnico) descubri en 1929 por primera vez un antibitico quimioteraputicamente efectivo, la penicilina, a la que describi como una sustancia antibacteriana excretada por los hongos Penicillium. Generalmente los antibiticos son ms tiles en el tratamiento contra infecciones bacterianas que contra infecciones virales o fngicas. Miles de antibiticos han sido aislados y caracterizados, pero slo una pequea porcin de stos tiene buenos resultados como teraputico. Modo en que funcionan los antibiticos En general, los antibiticos deben su toxicidad selectiva a las diferencias bioqumicas fundamentales entre las clulas procariticas y eucariticas, siendo su eficacia txica la consecuencia de su capacidad de inhibir una reaccin bioqumica especfica esencial, bien sea para la clula procaritica o para la clula eucaritica. (Stainer, 1996, p. 720). Resistencia microbiana a los antibiticos La resistencia de un microorganismo a algn antibitico se llama resistencia, De la Rosa, M. () clasifica a la resistencia en dos: 1) resistencia natural y 2) resistencia

adquirida. La resistencia natural se presenta en grupos y/o especies de microorganismos que siempre son resistentes a algn tipo de antibitico, por ejemplo, la especie P. aeruginosa es resistente a la penicilina. La resistencia adquirida se da cuando un microorganismo que originalmente era sensible a algn microbiano se hace resistente a l, por ejemplo, la resistencia que el microorganismo Plasmodium (causante del paludismo) ha desarrollado a nuevos quimioterpicos; la frecuencia de la resistencia adquirida ha aumentado debido al abuso en el consumo de antibiticos. Mercadela Calendula officinalis. Caractersticas Planta herbcea de hojas oblongadas, alternas; flores en cabezuelas amarillas o anaranjadas. Es de origen europeo y en Amrica se cultiva como planta de ornato. Contiene aceite esencial y silicato de metilo. Hernndez & Gally (1981). Mide de 50 a 70 centmetros de alto, sus flores se cierran por las noches. Uso Se usa para tratar la inflamacin de las anginas, infeccin y dolor de garganta; calentura y bilis; paperas, tos, torceduras; dolor de espalda, estmago, muelas y pies. Se le considera un buen desinfectante y desinflamante de heridas. Qumica La hoja de esta planta contiene quinoide ubiquinona, y la raz contiena a los calendulsidos B, F, G y H y vanos glicsidos del cido oleanico. La flor de esta planta contiene aceite esencial, el cual contiene monoterpenos carvona y geranil acetona y geranil-acetona, y los sesquiterpenos dihidro-actinidilido, epxido de trans-cari-fileno, alfa y beta-ionona y el epxido de este ltimo componente, lolilido, oplopanona y penduculatina; flavonoides narcissn, isoquercetn e isoramnetn y sus glicsidos ramnosil-rutinsido, D-glucsido y neohesperidsido; las cumarinas esculetn, escopoletn y umbeliferona; los triterpenos alfa y beta-amirn y sus steres, arnidenediol, arnidiol bren y sus steres, calenduladiol y sus steres, calendulsido F, cofladiol, metil-ergostadienol, eritrodiol, fardiol y sus steres, heliantrol, longispinogenina, lupenetriol, lupeol, steres de lupeol, maniladiol, oleanenetriol, cido y aldehdo oleanlico y diez steres glicosdicos del cido oleanlico, metilestigmastadienol, taraxasterol, su ster y derivado trihidroxilado, ursadiol y ursenetriol; los esteroles campesterol, steres de campesterol, colesterol, su 24-metilene-derivado, fucosterol, beta-sitosterol, estigmasterol y esteres los dos ltimos esteroles los carotenoides aurocromo, auroxantina, alfa, beta, gama y psilon-caroteno, y el epxido del compuesto alfa, crisanremantn, cis-flavoxantn, luten, su epxido y el ismero cis,

luteoxantn, mutacromo, neo-licopeno, neoxantn, fitoeno, fitoflueno, rubixantn, violaxantn y videoxantn; y los polisacridos de calndula PS-I, PS-II y PS-III. Calendula officinalis como antibitico Se ha demostrado que el aceite esencial de las flores presenta actividad antibitica contra Bacillus subtilis, Escherichia coli, Staphyhcoccus aureus, Candida albicans, Sarcina lutea, Strepoccus faecalis y Trichomonas vaginalis. Tambin presenta actividad antiviral contra Herpes simplex, Virus influenza y su variante APR-8. Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009). Cloranfenicol Usos Est indicado para el tratamiento de las infecciones externas del ojo y/o de sus anexos que afectan prpados, conjuntiva y/o crnea, causadas por microorganismos sensibles a los componentes de la frmula, como: conjuntivitis, blefaritis, queratitis, queratoconjuntivitis, blefaroconjuntivitis, etc. Es til en la profilaxis prequirrgica y postoperatoria. Cloranfenicol como antibitico Es un antibitico de amplio espectro altamente efectivo contra la mayora de bacterias grampositivas y gramnegativas, as como la mayora de anaerobios (incluyendo anaerobios obligados), Mycoplasma, Rickettsias y espiroquetas. Cuenta con una alta eficacia (reportada de 91 a 93% en infecciones oculares) y es activo contra ms del 94% de los patgenos oculares. Inhibe la sntesis de protenas de bacterias, y en menor grado, de mamferos, particularmente en las clulas eritropoyticas. Penetra a la clula bacteriana por un mecanismo de difusin facilitada y se une de manera reversibla a la subunidad 50S de los ribosomas a este nivel, interfiera con la incorporacin de aminocidos a la cadena peptdica recin formada, mediante el bloqueo de la accin de la peptidil transferasa (Mendoza, 2008, p.636).

Objetivo Observar y analizar la reaccin de los medios de cultivo preparados con bacterias, ante la presencia de un antibitico, ya se natural o artificial, as como la efectividad de los mismos.

Hiptesis S el antibitico utilizado en este caso Mercadela Calendula officinalis y el Cloranfenicol es efectivo, entonces impedir la infeccin bacteriana invasiva, (Courtney, 2007). S el antibiograma se realiza correctamente, entonces ste proporcionar informacin til para la iniciacin y marcha de la teraputica infecciosa (Garca y Fernndez, 1994).

Metodologa Para la realizacin de este experimento es necesaria la utilizacin de 10 cajas petri de plstico esterilizado en donde se colocaran los cultivos terminados. Para la preparacin del medio de cultivo es necesaria la preparacin previa de 350 ml de caldo de pollo concentrado ya que este ser el medio de nutrimentos que utilizaremos para la realizacin de los cultivos. La realizacin de los medios de cultivos ser primeramente poner a calentar en un vaso de precipitado de 500 ml, los 300 ml de caldo de pollo para que cuando ste alcance la temperatura de 40 C se le agregue el agaragar y con esto sea mas fcil su disolucin en el caldo, previamente ser pesada en la balanza una masa de 0.6g de y luego ser agregada al caldo de pollo; deber permanecer en constante movimiento para que no queden grumos y se homogenice correctamente. Cuando este lista la preparacin ser necesario agregarla en un matraz Erlenmeyer de la misma capacidad y taparlo, haciendo un tapn con gasas, algodn y masking tape. Posteriormente pasara a la autoclave para ser esterilizado pero se debe tener en cuenta que debe quedar correctamente cerrado el matraz para evitar errores y como consecuente la repeticin del experimento. Ser esterilizado aproximadamente en una hora y media y despus ser retirado para continuar con el experimento.

Al finalizar con la esterilizacin, el medio de cultivo ser vertido en las cajas petri pero para la realizacin de este paso, es necesario trabajar en la lmpara de flujo laminado para evitar la contaminacin de los medios que previamente fue limpiada. Al momento de trabajar en la lmpara de flujo laminado se requiere entrar con bata y cubre bocas y trabajar de manera organizada y en silencio, la lmpara debe ser previamente desinfectada con alcohol para garantizar mejores resultados. Se finalizara con el vertido de los medios de cultivo en las cajas de petri y estas sern almacenadas para su uso despus. Para la siguiente fase del experimento es importante recoger cuatro cajas de petri y dejarlas por 30 min en cualquier lugar, pasado este tiempo debe ser cerradas y selladas con masking tape y depositadas en el horno para que ah se generen las condiciones adecuadas para el crecimiento microbiano. Despus de una semana las cajas petri sern sacadas del horno, tanto las cuatro de ellas en las que se habrn desarrollado los microorganismos, como las otras seis que slo contienen medio de cultivo y se usarn para probar la efectividad de los antibiticos. Es necesario conseguir un antibitico natural y otro artificial que en este caso el antibitico natural es la planta llamada Calendula officinalis (Mercadela) y como antibitico artificial tenemos el Cloranfenicol. El antibitico natural que se emplear deber estar en forma de infusin o te, para esto previamente se deben calentar 500 ml de agua durante 15 minutos, cuando esta empiece a hervir se deben agregar las flores de Calendula officinalis, apagar el agua, dejarla reposar durante 5 min y por ultimo dejar enfriar. El antibitico artificial, cloranfenicol, lo usaremos en su forma lquida (oftlmico) con el propsito de facilitarnos su empleo en la experimentacin, esta presentacin la encontramos en farmacias.

Antes de empezar debemos desinfectar la campana con alcohol y preparar los lotes. Para identificar los lotes se marcarn las bases de las cajas petri que no contienen microorganismos de manera que se identifique el rea en la que se aplicarn los antibiticos correspondientes, o en su caso, agua como testigo. Nosotros las marcaremos con seis pequeos crculos de masking tape, los cuales sern rotulados con las letras C (cloranfenicol), M (Mercadela) y T (agua, testigo); en cada caja se marcarn dos crculos con cada letra de manera que su distribucin sea espaciada. Perforaremos el papel filtro para obtener pequeos crculos. Ingresaremos al cuarto de la campana de cultivo y all se colocarn los crculos de papel filtro en las cajas petri sobre las marcas rotuladas. A cada crculo de papel filtro se le aplicar con ayuda de un gotero, una gota de la sustancia que indique su marca, de esta forma, cada caja tendr dos crculos remojados con cloranfenicol, dos con Mercadela y dos con agua. Por otra parte, de las cuatro cajas petri que presentan crecimiento microbiano se debe seleccionar una de ellas (la que contenga ms bacterias). Se calentar la punta del aza de cultivo con una lmpara de alcohol; se tomar (con ayuda del aza) una pequea muestra de microorganismos del medio de cultivo con crecimiento microbiano seleccionado; una vez que el aza contenga la muestra, sta se pasar sobre alguna de las cajas petri que contienen las muestras de antibiticos (moviendo el aza de derecha a izquierda y girando la caja en diferentes direcciones). El mismo procedimiento deber llevarse a cabo en todas las cajas con antibiticos, despus se cerrarn las cajas petri, se sellarn con masking tape y se guardarn en el horno por una semana. Vencido el lapso de tiempo mencionado se sacarn del horno aquellas cajas que contienen los antibiticos y se determinar la efectividad de los antibiticos empleados observando las cajas a contraluz, identificando si se present crecimiento microbiano y qu tipo de microorganismo se desarroll (bacterias u hongos) alrededor de los crculos que contienen tanto los antibiticos natural, artificial y agua; as como la cantidad en la que se desarrollaron los microorganismos.

10

Resultados Tabla 1: Grado y tipo de contaminacin que permiten los antibiticos Mercadela Calendula officinalis y Cloranfenicol

En la tabla 1 denominada Grado y tipo de contaminacin que permiten los antibiticos Mercadela Calendula officinalis y Cloranfenicol se muestran los resultados obtenidos a travs del experimento planteado. La tabla se distribuye de la siguiente manera: en la primera columna se muestran el numero de cajas que se utilizaron a las cuales se les colocaron 6 discos que estaran distribuidos de la siguiente forma: 2 tendran Mercadela Calendula officinalis, otros 2

11

tendran Cloranfenicol y por ultimo los 2 restantes que pertenecen al lote testigo tendrn simplemente agua. La segunda columna parte de el primer antibitico utilizado que corresponde al antibitico natural denominado Mercadela Calendula officinalis. Por otra parte se tiene que en la tercera columna corresponde en la que se utilizo el antibitico artificial denominado Cloranfenicol, y por ultimo en la cuarta columna se muestra el lote testigo al cual solo se le aplico agua. En la parte inferior de la tabla se encuentran la cantidad de discos contaminados al aplicrseles los antibiticos y el agua. Tambin se muestra los microorganismos presentes en las cajas que se encontraban contaminadas. Por ultimo se tiene un apartado de las acotaciones utilizadas en esta prctica. Los resultados obtenidos son presentados de la siguiente manera: En la caja 1 se tiene que en los discos en los cuales se les aplico la Mercadela Calendula officinalis fueron uno contaminado y el otro ligeramente contaminado con la presencia de hongos y bacterias. En la siguiente columna los discos que se les aplico Cloranfenicol fueron ligeramente contaminados de hongos y bacterias y por ultimo se tienen a los discos que solo tenan agua los cuales fueron contaminados ligeramente y solo tienen presencia de hongos. En la caja 2 se muestran que los discos a los cuales se les aplico Mercadela Calendula officinalis fueron ligeramente contaminados solo con bacterias, mientras que los discos a los cuales se les aplico Cloranfenicol igualmente fueron ligeramente contaminados pero con hongos y bacterias y por ultimo el lote testigo uno fue ligeramente contaminado con la presencia de hongos y el otro contaminado totalmente con la presencia de hongos y bacterias. En la caja 3 se tienen que ambos discos a los cuales se les aplico Mercadela Calendula officinalis estn ligeramente contaminados pero uno solamente de hongos y bacterias y

12

otro de bacterias. Los discos a los cuales se les aplico Cloranfenicol ambos estn ligeramente contaminados y con la presencia de hongos y bacterias, por ultimo en los discos del lote testigo ambos estn contaminados de hongos y bacterias. Por ultimo los resultados de la caja 4 nos muestran que los discos en los cuales se uso Mercadela Calendula officinalis uno esta contaminado totalmente con la presencia de hongos y bacterias y el otro ligeramente contaminado con la presencia de bacterias. En los discos en los que se uso el Cloranfenicol ambos discos estn contaminados totalmente de hongos y bacterias y en los discos del lote testigo un disco esta contaminado con presencia de hongos y bacterias y el otro se encuentra ligeramente contaminado con la presencia de hongos. Como resultado final se tiene que los discos que fueron contaminados a los cuales se les aplico el antibitico natural de Mercadela Calendula officinalis en la presencia de las 4 cajas fue: 6/ fueron contaminados ligeramente y 2/8 fueron contaminados totalmente; solo 3/8 discos tuvieron presencia tanto de hongos como de bacterias los 5/8 solo muestran presencia de bacterias. Los discos a los cuales se les aplico Cloranfenicol tienen 6/8 discos que fueron ligeramente contaminados y 2/8 que fueron completamente contaminados, de los cuales 8/8 tuvieron la presencia de hongos y bacterias. Por ultimo en el lote testigo sus discos presentaron 4/8 discos que se encontraban ligeramente contaminados y 4/8 que se encontraban totalmente contaminados de los cuales 4/8 contaban con la presencia de hongos y los otros 4 restantes tenan la presencia de hongos y bacterias.

13

Discusin Tanto la planta Mercadela Calendula officinalis tiene atributos antibiticos e inhibe principalmente el desarrollo de bacterias Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009), de igual manera que el cloranfenicol es conocido por su capacitad de inhibir la sntesis de protenas de la mayora de las bacterias Mendoza (2008); sin embargo, los resultados que presento nuestro experimento registran un desarrollo creciente de bacterias que de hongos en los lotes a los cuales se les aadi ste antibitico natural, recordando que puede ser que la falla provenga de la manera en que se aplico la planta de Mercadela Calendula officinalis, ya que existen diferentes maneras de aplicacin y una de ellas en parte por el tiempo que se tenia que invertir, la facilidad de su elaboracin y el material que se tenia que adquirir para su elaboracin nos llevo a utilizar la manera mas practica que se acomodaba a los tiempos establecidos y fue la manera de prepararla en infusin y despus de esto aplicarla en el lugar donde se encontraba contaminada, pero tambin se debe considerar que por lo investigado con anterioridad el uso de la Mercadela Calendula officinalis (las hojas y la flor principalmente) ayudan a la inhibicin de los hongos o enfermedades relacionadas con estos mismos Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana (2009). Mientras que en la totalidad de los lotes a los cuales se les aplic cloranfenicol hubo desarrollo bacteriano, contrastando esto con la informacin terica sobre este antibitico se puede ver como este es altamente efectivo contra la mayora de bacterias grampositivas y gramnegativas, as como la mayora de anaerobios (incluyendo anaerobios obligados), Mycoplasma, Rickettsias y espiroquetas, pero antes que nada se tendra que tener un conocimiento previo de cuales tipos de bacterias son estas, en que condiciones se presentan y obtenidos estos conocimientos se tendra que saber si estas bacterias fueron las obtenidas en el experimento y as poder saber si dara resultado y efecto el cloranfenicol en las colonias de bacterias. La cantidad de antibitico (tanto natural como artificial) que se emple fue mnima (una gota) y esto pudo haber sido un factor importante para permitir el crecimiento de microorganismos. El orden en que se prepararon las cajas (el hecho de que primero se hayan colocado las muestras de antibiticos y despus se hayan sembrado los microorganismos) pudo haber influido mucho en los resultados, ya que cabe la posibilidad de que al sembrar los microorganismos con el aza se hayan mezclado las muestras de los antibiticos y el agua. Los resultados que fueron mostrando anteriormente no mostraron algn lote que no estuviera contaminado, todos resultaron ligeramente o totalmente contaminados, aunque en algunos casos solamente fueron contaminados de bacterias u hongos. Tambin los factores que fueron influyentes en la realizacin de este experimento fue como ya se haba mencionado anteriormente la falta de conocimientos previos en cuanto a los tipos de bacterias sobre los que actuaban los antibiticos y por otra parte la manera en que se deba ser aplicado en antibitico en la zona afectada para una mejor eficacia y como consecuente mejores resultados.

14

Por lo que resta que es en el aspecto del agua, esta pudo haber tenido estos resultados porque probablemente el agua utilizada estaba contaminada y esto provoco la alteracin del experimento y con esto la variacin de los resultados. Tambin pudo alterar el resultado que no se desinfectara correctamente el aza, tal vez necesitaba permanecer un poco mas de tiempo en el fuego para poder esterilizarla completamente. Los microorganismos se propagan por diferentes formas y muy sencillas, ya sea al hablar, al tocar accidentalmente el cultivo o tal vez destaparlo fuera de la campana de flujo y esto pudo ocasionar que el cultivo se infectara. Podemos decir, que el trabajar con medios de cultivo necesita de una extrema precaucin ya que con cualquier insignificancia o cualquier descuido puede infectarse y alterar el resultado esperado.

15

Conclusiones Con la elaboracin de esta prctica se cumpli el objetivo propuesto ya que se observ la reaccin de los microorganismos ante diferentes antibiticos. Tambin se reforzaron los conocimientos tericos aprendidos en las clases y en las tareas. Aplicamos lo aprendido en cuanto a la elaboracin de medios de cultivo, las tcnicas utilizadas para la esterilizacin, las tcnicas de siembra de microorganismos y el proceso que se realiza en este caso de una manera un tanto mas sencilla par poder probar los diferentes antibiticos tanto naturales o artificiales y su efectividad ante las diferentes colonias de bacterias u hongos formados. Nos familiarizamos ms con conceptos utilizados en el campo de la microbiologa y tambin con mtodos de trabajo en laboratorio y entendimos mejor la importancia de la microbiologa en la sociedad, en este caso, la importancia y la manera en la que funcionan los antibiticos. Esta practica nos ayudo a mostrarnos de una manera mas clara la importancia benfica de la microbiologa en la sociedad en este caso enfocado de una manera mas directa al impacto benfico en la salud, con la elaboracin y prueba de los diferentes antibiticos que existen tanto naturales y artificiales, la efectividad que pueden llegar a tener en ciertos microorganismos y las caractersticas con las que cuentan no solo los microorganismos si no en si los antibiticos para que estos puedan desarrollar una efectividad en los seres humanos. Esta practica nos reforz la parte que corresponde a la elaboracin de un experimento y todo lo que conlleva una investigacin como lo que se haba visto con anterioridad, como se puede observar no solo esta practica tiene una relacin directa con la unidad abarcada en clase referente a Introduccin a la microbiologa si no tiene una ligera relacin con lo abarcado anteriormente de el mtodo cientfico y como este se plantea para obtener una excelente investigacin. Tambin pudimos complementar con las exposiciones realizadas en las clases, ya que nos hablan sobre la importancia de la microbiologa, y en este caso lo podemos relacionar con la sociedad, ya que muchas personas recurren a los antibiticos naturales cuando se enferman, as que comprobar su efectividad es un punto favorable ya que estos medicamentos son accesibles, fciles de tomar (en te), existen para diversos malestares y adems, como lo dice su nombre son naturales, no contienen qumicos que pueden causar daos a largo plazo. Podemos concluir que hemos cumplido nuestros objetivos y, en base a los temas vistos en clase, podemos decir que hemos adquirido la nocin de la relacin de la microbiologa, as como su importancia.

16

Referencias Biblioteca Digital de la Medicina Tradicional Mexicana. (2009). Mercadela Calendula officinalis L. Recuperado el 13 de noviembre de 2011 de http://www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx/monografia.php?l=3&t=Mercadela&id =7710 Courtney, M. (2007). Tratados de ciruga. (7a Ed.) Madrid: Elseiver. De la Rosa, M. & Prieto, J. (1997). Microbiologa en ciencias de la salud. Conceptos y aplicaciones. Espaa: Elsevier. Defillo, B. (1985). Farmacologa mdica. Dominicana: Amigo del hogar. Garca, P., Fernndez, M. y Parede, F. (1994) Microbiologa Clnica Prctica. (2a ed), Cdiz: Publicaciones de la Universidad de Cdiz. Hernndez, R. & Gally, M. (1981). Plantas medicinales. Mxico: rbol editorial. INAH (1993). Acerca de plantas y de curanderos: etnobotnica y antropologa mdica. Recuperado el 14 de noviembre del 2011 en: http://books.google.com.mx/books?id=gqgNAAAAYAAJ&q=MERCADELA&dq=MERCA DELA&hl=es&ei=dvTBToinDanDsQLos8y3BA&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum =6&ved=0CEMQ6AEwBQ Ingraham, J.L., Ingraham, C.A. & Prentiss, H. (1988). Introduccin a la microbiologa. Barcelona, Espaa: Revert. Ramrez, J.L. (1999). Cuerpo y dolor. Semitica de la anatoma y la enfermedad en la experiencia humana. Recuperado el 14 de noviembre de 2011 en http://books.google.com.mx/books?id=BuIxRx8C3LIC&pg=PA186&dq=MERCADELA+u aem&hl=es&ei=j_PBTpi9LumKsAK4rfXUBA&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum= 1&ved=0CC4Q6AEwAA#v=onepage&q&f=false Stainer, R.Y., Ingraham, J.L., Wheelis, M.L. & Painter, P.R. (1992). Microbiologa. Espaol (2a. ed.). Barcelona, Espaa: Revert.