Universidade Tecnolgica Federal do Paran Departamento Acadmico de Qumica e Biologia

TOXICOLOGIA: ASPECTOS GERAIS DE TOXICODINMICA

Profa. Lucia Regina R. Martins

TOXICODINMICA
mecanismos de ao txica de substncias qumicas aspectos bioqumicos e moleculares Importncia: avaliao do risco: estimar a possibilidade de efeitos deletrios em populaes procedimentos preventivos/estratgias de tratamento desenvolvimento de produtos mais seletivos e menos txicos compreenso de mecanismos fisiolgicos/patolgicos (ex.: carcinognese) Consideraes: diversidade de mecanismos de ao permanncia do toxicante no stio de ao (alvo biolgico): fatores toxicocinticos no stio de ao: interao depende de aspectos qumicos e estruturais (substncia e stio molecular).
Lembrando Paracelso: todas as substncias so txicas... a dose faz a diferena entre remdio e veneno

Fatores que influenciam a interao com stio de ao xenobitico

Favorece o efeito txico: absoro distribuio para local de ao reabsoro bioativao Desfavorece o efeito txico: eliminao distribuio para outros tecidos excreo metabolizao (inativao)

xenobitico

Molcula-alvo (enzima, DNA, lipdio, receptor)

local de ao
mecanismos de reparo podem evitar danos celulares mesmo aps interao com alvo biolgico

TOXICIDADE classificao de acordo com a exposio

1. Aguda:
exposio nica ou mltiplas exposies em curto perodo de tempo (24 h) efeitos imediatos ou aps alguns dias (mx. 2 semanas) avaliao experimental: mnimo 3 espcies animais observao de sinais/sintomas determinao do percentual de mortalidade Parmetros para determinar o grau de toxicidade: DL50 ou DL10: doses letais para 50 ou 10% dos animais testados toxicidade inversamente proporcional ao valor da DL para medicamentos: DE50 ou DE90: doses efetivas (efeito esperado) para 50 ou 90% dos testados Para medicamentos: ndice Teraputico (IT) IT = DL50/DE50 Margem de Segurana (MS) MS = DL10 DE90 X 100 DE90 IT e MS: inversamente proporcionais ao risco de intoxicao.

TOXICIDADE classificao de acordo com a exposio

2. Crnica:
decorrente de exposies repetidas, durante longo perodo (meses ou anos)

efeitos podem ser lentos e graves ex.: mutagenicidade e carcinogenicidade

Classificao dos Agentes Txicos:

Critrios: qumico: metais, aminas aromticas, hidrocarbonetos halogenados, etc... fsico: gs, lquido e slido bioqumico: inibidor de enzimas especficas, metemoglobinizantes, etc. farmacolgico: bloqueio de receptores nicotnicos, canais de Cl-, etc...
Seletividade de ao:

1 no-seletivos: mesmo efeito em qualquer estrutura do organismo; ex.: cidos e bases corrosivos 2 seletivos: danos a estruturas/rgos especficos alvo biolgico geralmente protenas (enzimas, transportadores, canais inicos, receptores, inibio da expresso gnica) fatores: diferenas fisiolgicas/bioqumicas entre espcies e tipos celulares ex.: antibiticos, fungicidas, inseticidas A intensidade da intoxicao depende do alvo biolgico: capacidade de regenerao: tecido epitelial, heptico e nervoso capacidade funcional de reserva: rins, pulmes, hemoglobina

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos

I. Interao com receptores II. Interferncia na excitabilidade de membranas III. Inibio da fosforilao oxidativa IV. Complexao/reao com biomolculas V. Perturbao da homeostase clcica

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos I. Interao com receptores

Receptores: estruturas macromoleculares que participam de sinalizaes qumicas no organismo; interaes de alta seletividade localizao: membrana, citoplasma, ncleo respostas podem ser rpidas ou lentas (dependem do mecanismo de transduo): direto: ativao/desativao de canais inicos, inibio enzimtica,... indireto: segundos mensageiros, inibio/ativao da expresso gnica,... Agonista: substncia que promove o estmulo biolgico de receptores Antagonista: substncia que bloqueia/inibe a resposta do receptor

Velocidade de resposta mediante sinalizao qumica

Receptores celulares e mecanismos de transduo de sinal qumico

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos I. Interao com receptores

A interao com receptores normalmente reversvel: R + S RS R = receptor livre S = ligante (xenobitico) RS = complexo receptor-ligante

Kd = K1 / K2 = [R] [S] / [RS]

Nmero total de receptores [Rt] = [RS] + [R]; logo: [R] = [Rt] [RS] Portanto: [RS] / [Rt] = [S] / Kd + [S] [RS] / [Rt] = frao de receptores ocupados na presena de ligante na concentrao [S] a intensidade do efeito (E) dependente da frao de receptores ocupados; Logo: E = [S] / Kd + [S]
... lembrar da cintica enzimtica

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos

I. Interao com receptores

Exemplo de mecanismo de ao mediado por receptores:
bloqueio colinrgico em receptores nicotnicos da juno neuromuscular d-tubocurarina: alcalide presente no curare (usado em flechas para caa de animais) estrutura polar (quaternrio de amnio) prottipo de frmacos antagonista competitivo de receptores colinrgicos na placa motora impede despolarizao e propagao de estmulo nervoso aos msculos estriados efeitos: flacidez muscular (face membros tronco respiratrio)

Strychnos toxifera

acetilcolina

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos

II. Interferncia na excitabilidade de membranas
interao do toxicante com canais inicos de clulas excitveis influncia no fluxo de ons efeitos na transmisso nervosa e/ou contrao muscular ex.1: canais de Na+ voltagem dependente: despolarizao da membrana de axnios e potencial de ao* Tetrodotoxina (fugu e baiacu): bloqueio de canais de Na+ na membrana dos axnios impede impulso nervoso e liberao de Ach (placa motora) fraqueza muscular, paralisia e morte

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos II. Interferncia na excitabilidade de membranas

ex.2: Batrocotoxina: veneno de sapo (Phyllobates aurotaenia) permeabilidade de membrana em repouso a Na+ clulas hiperexcitveis potencial de ao prolongado despolarizao perda da capacidade excitatria efeitos no miocrdio: extra-sstole, arritminas e fibrilao mecanismo semelhante: aconitina, piretrinas e inseticidas organoclorados

aconitina

Piretrina I: R = CH3 Piretrina II: R = CO2CH3

aldrin

DDT

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos II. Interferncia na excitabilidade de membranas

Outros Mecanismos:

Bloqueio da liberao de Ach no terminal axnico: toxinas botulnicas (Clostridium botulinum) alimentos enlatados -bungarotoxina (veneno da Naja) sintomas: paralisia progressiva at parada respiratria, SNA (boca seca, viso turva, dificuldade para engolir)

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos II. Interferncia na excitabilidade de membranas

Outros Mecanismos:

Interao com canais de K+ : veneno de abelha (apamina) veneno de escorpio (caribdotoxina) dendrotoxina (serpente mamba verde)

Solventes orgnicos: (lipossolubilidade) Efeito: depresso do SNC alteram a fluidez da membrana; dificuldade na propagao do potencial de ao uso crnico de etanol: rigidez de membrana

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos III. Inibio da fosforilao oxidativa

etapa do metabolismo que utiliza oxignio para produo de ATP

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos III. Inibio da fosforilao oxidativa

III. Inibio da fosforilao oxidativa

Diferentes Mecanismos: 1 Fornecimento insuficiente de oxignio: - oxidao do ferro na hemoglobina (metemoglobinizantes); ex.: nitritos - formao de carboxihemoglobina (CO)

2 - Interferncia direta: - ligao citocromo oxidase; ex.: cianeto, sulfeto de azida - interao com complexos proteicos e bloqueio da cadeia transportadora de eltrons; ex.: rotenona, antimicina A - desacoplamento da fosforilao oxidativa; ex.: nitrofenis, pentaclorofenol - inibio da ATP sintase; ex.: oligomicina - inibio do ciclo de Krebs e formao de NADH; ex.: fluoracetato de sdio

III. Inibio da fosforilao oxidativa

diminuio de ATP celular consequncias: - integridade de membrana - funcionamento de bombas (transporte ativo) - sntese proteica - desacoplamento aumenta o consumo de oxignio: maior produo de calor sintomas: febre, estimulao respiratria/circulatria, nusea, sudorese e coma.

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos IV. Complexao/reao com biomolculas a) Enzimas:

Inibidores enzimticos ex.: inseticidas organofosforados (paration), carbamatos organofosforados: inibem de forma irreversvel a acetilcolinesterase (ligao a stio estersico*, fosforilando a enzima) carbamatos: inibio competitiva rpida e reversvel Efeito: reforo do estmulo colinrgico Sintomas neurolgicos difusos: miose/midrase, lacrimejamento, viso turva, fotofobia, salivao, bradicardia, paralisia respiratria

Acetilcolinesterase: Stio aninico e centro estersico (resduo de serina)

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos IV. Complexao/reao com biomolculas a) Enzimas:

Inibidores enzimticos metais, hexaclorobenzeno Metais: Pb, Hg, Cd, As: formam complexos (-SH) que inativam enzimas e outras protenas Pb, Hg inibio especfica: sntese do grupo heme (porfirias: manifestaes neurolgicas agudas, sintomas cutneos) (compostos orgnicos: hexaclorobenzeno, metablito da fase 1 do TCDD, PCBs e pesticidas) Co, Be, Cd, Pr inibio do citocromo P-450: reduz metabolismo de xenobiticos

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos IV. Complexao/reao com biomolculas b) Lipdios:

peroxidao lipdica: deteriorao oxidativa progressiva de c. graxos poliinsaturados; rompimento de estruturas celulares e necrose tecidual ex.: metablitos eletroflicos (produtos das reaes de Fase 1), radicais livres.

Efeitos observados em exposies crnicas (cumulativos)

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos IV. Complexao/reao com biomolculas c) cidos nucleicos:
espcies reativas (eletrfilos) podem reagir em vrios stios do DNA: modificao estrutural de nucleotdeos ex.: metablito epxido da aflatoxina B1 (hepatotxico e carcinognico) Consequncias: alterao da expresso gnica, sntese proteica, morte celular, cncer Mecanismos de reparo: reverso e manuteno da integridade do DNA (se falhar haver propagao do gene alterado mutao)

Mecanismos gerais de ao de agentes txicos V. Perturbao da homeostase clcica:

bomba de Ca2+: concentrao citoplasmtica mantida baixa funo fisiolgica do Ca2+: mensageiro intracelular em resposta estmulos endgenos ativao/inativao de enzimas cinases diversas; participa da contrao muscular adeso intercelular Mecanismos de ao txica: canais Ca2+: aumento no influxo de Ca2+ (meio extracelular ou REL) bomba Ca2+: inibio do efluxo pela membrana promove alteraes celulares diversas efeitos dependem do tecido-alvo Ex.: nitrofenis, quinonas, perxidos, dioxinas, alcenos halogenados, ons metlicos, ...

Interaes Toxicolgicas
exposio a dois (ou mais) toxicantes interferncia no mecanismo de ao um do outro 1. Efeito Aditivo: efeito txico final = soma dos efeitos separados; ex.: Pb e As (inibio da biossntese do heme) 2. Efeito Sinrgico: efeito txico final >> soma dos efeitos separados; ex.: CCl4 e compostos aromticos (hepatotoxicidade) 3. Potenciao: o efeito de um agente txico aumentado por substncia originalmente incua; ex.: propranolol e CCl4 (hepatotoxicidade) 4. Antagonismo: efeito txico final << efeito individual tipos: Competitivo (interao com mesmo stio de ao); ex.: atropina (antagonista da acetilcolina) no tratamento por organofosforados Qumico (reao entre antagonista e agente txico, com inativao); ex.: EDTA e Pb Funcional (atuam no mesmo sistema fisiolgico, com efeitos contrrios); ex.: glicosdeos cardiotnicos e bloqueadores -adrenrgicos (presso arterial)