Salvador, 22 de outubro de 2011 1 0

Coordenao de Qumica. Turma: 8842. Professora: Rosngela Novaes Experimento: Extrao de Pigmentos do Espinafre e Separao em Coluna de Acar Comercial

Equipe Tcnica: Matheus Itiel Raza Andrade Renata Mota

Salvador,22 de outubro de 2011

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SUMRIO
Pginas

1. Objetivos.............................................................................. .......... 04 2. Introduo....................................................................................... 04 3. Materiais e Mtodos...................................................................... 06 4. Resultados e Discusso.............................................................. .... 08 5. Concluso........................................................................................ 10 6. Bibliografia...................................................................................... 10

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OBJETIVO

Separar os pigmentos do espinafre atravs da cromatografia em coluna.

2- INTRODUO TERICA

A cromatografia em coluna costuma ser citada como o mais antigo procedimento cromatogrfico. Ela uma tcnica utilizada para separar os componentes de uma mistura. A cromatografia definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a outra mvel. Introduzida pelo pesquisador russo Michael Tswett em 1906, quando separou clorofila de uma mistura de pigmentos de plantas, atravs de uma coluna cheia de carbonato de clcio em p, fazendo a lavagem com ter de petrleo. Conforme a amostra descia pela coluna, apareciam bandas separadas e cores distintas. Palavra de origem grega, onde cromo significa cor e grafia significa escrita, ou seja escrita em cores. Mas a cromatografia pode separar os componentes sem nenhum aparecimento de cor. A cromatografia em coluna consiste em uma coluna de vidro, metal ou plstico, preenchida com um adsorvente adequado. O adsorvente pode ser colocado na coluna diretamente (seco) ou suspendido em um solvente adequado (geralmente o prprio eluente a ser usado no processo de separao). Os principais adsorventes normalmente utilizados so a slica gel, a alumina, o carbonato de clcio, o xido de magnsio, o carvo ativado, a sacarose e o amido, entre outros. A substncia a ser separada ou analisada colocada na coluna pela parte superior e o eluente vertido aps, em quantidade suficiente para promover a separao. A coluna pode ser um simples tubo de vidro, aberto em ambas as extremidades, ou semelhante a uma bureta. Em alguns casos aplica-se vcuo

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pela parte inferior da coluna ou uma ligeira sobrepresso pela parte superior da mesma. O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-seo com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo adsorvente(grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto. Quando a amostra a ser cromatografada possui cor, pode-se visualizar as diferentes zonas coloridas descendo pela coluna, que so recolhidas, separadamente, pela extremidade inferior. Quando a amostra no possui cor, recolhem-se vrias fraes iguais de eluente, testando-as quanto presena ou no de substncias dissolvidas atravs do uso de reveladores adequados (luz UV, reveladores qumicos, etc.). Um exemplo de aplicao da cromatografia em coluna a separao dos pigmentos do espinafre. Nesse caso, como resultado da eluio da coluna, observa-se a separao do b-caroteno (primeiro componente, de cor amarela), clorofila a (segunda componente de cor verde), clorofila b (terceiro componente, de cor verde) e xantofila (quarto componente, de cor amarela).

Fig 1: Fraes de cromatografia em coluna do extrato de espinafre.

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3 MATERIAIS E METDOS

1.REAGENTES
15 gramas de espiafre (5-6 folhas) Hexano Acetona P.A. Sulfato de Sdio Slica Soluo Hexano:Acetona 3:1

2.Equipamentos
Balana de Preciso

3.VIDRARIAS
Provetas de 10 mL Bqueres de 50 mL Recipiente de vidro Pyrex Pipetas Pasteur de pltico Funil Bquer de 125 mL Almofariz Tubos de ensaio Bureta Pistilo

2.PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL Extrao

Pesou-se 15 gramas do espinafre, colocou-se em um almofariz, adicionou-se 5 mL de acetona e 10 mL de hexano e prensou-se com um pistilo de madeira durante alguns minutos. Transferiu-se o lquido resultante para um bquer e retirou-se a fase aquosa com uma pipeta Pasteur. Adicionou-se a fase orgnica uma pequena quantidade de sulfato de sdio pra eliminar a gua residual. 1 0

Montagem da Coluna Cromatogrfica

Adicionou-se a bureta, com a torneira fechada, utilizando um funil, o

hexano, deixando um volume morto de 6-8 cm. Com um funil, despejou-se sobre o hexano, de forma contnua, 12g de slica. Antes de realizar a prxima etapa separou-se e numerou-se 10 tubos de ensaio.

Aplicao da Amostra

Depois do empacotamento da coluna, escoou-se o eluente at 3-5 mm acima da superfcie da slica. Com a torneira fechada aplicou-se a soluo hexano:acetona no topo da coluna, com pipeta de Pasteur, deixando a soluo escorrer lentamente atravs da parede bureta. Aps a aplicao da soluo, escoou-se o solvente para um bquer at que o nvel da soluo ficou 3-5 mm acima do nvel da superfcie da slica. Adicionou-se com a Pipeta de Pasteur cerca de 5 mL do hexano e repetiu-se a operao anterior.

Desenvolvimento da Coluna
Aps a adio do eluente, com escoamento adequado, coletar as fraes (2/3 do volume do tubo de ensaio), completando o volume de eluente e sem deixar a coluna secar. Aps a coleta das fraes da primeira faixa colorida, no colocar mais eluente na coluna e deixar a altura do lquido chegar a 1,0 cm da fase estacionria. Completar o volume da coluna, com cuidado, com uma soluo de hexano: acetona 3:1. Proceder a coleta das fraes da segunda faixa colorida at a eluio completa. Comparar o conjunto de fraes coletadas e registrar o eluente de cada uma das faixas.

OBS: Essa etapa no pde ser realizada devido ao pouco tempo disponvel, mas foi colocada no procedimento a titulo de curiosidade.

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4- RESULTADOS E DISCUSSO

Iniciou-se a prtica utilizando uma coluna cromatogrfica onde possua uma parte porosa ao final que permite a passagem do removedor de cera que foi substitudo por hexano que apresentava caractersticas semelhantes, aps utiliza-se sulfato de sdio no lugar do sal de cozinha e acar no lugar da slica para servir de fase estacionria. Inicialmente fez-se a macerao do espinafre,utilizando grau de porcelana com auxlio de pistilo, para a extrao do extrato do espinafre, onde se adicionou hexano e acetona e ocorreu a formao de duas fases a inorgnica e a orgnica que era composta pelo hexano, acetona e a pigmentao do espinafre, que possui uma maior afinidade com a fase mvel que tem uma polaridade intermediria. Por conta do tempo no foi possvel perceber a separao dos pigmentos, notou-se apenas o traos do pigmento amarelo mas no foi possvel uma separao total para retir-lo e,no sendo possvel assim perceber o pigmento de colorao verde, entretanto com os conhecimento adquiridos ao longo do curso foi possvel prever o resultado desta anlise . As interaes qumicas referente a cada cadeia ,pode-se observar onde ocorreria interaes e a separao dos pigmentos. Aqueles que sairiam primeiro seriam os de pigmentao amarela que so constitudas principalmente de -carotenos e as xantinas mostrada nas figuras abaixo (figura2):

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Figura 2. Estruturas do -caroteno (I) e de uma xantina ou xantofila (II)

Os compostos acima so reconhecidos como apolares,ou seja,possuem o momento de dipolo igual a zero,compostos desse tipo possuem uma cadeia carbnica longa,geralmente.Entretanto,a xantofila possui hidroxilas porm,estas no so suficientes para torn-la polar, por conta disso estes compostos tero uma maior afinidade com a fase mvel,hexano,que tambm um composto apolar. Os prximos pigmentos apresentam colorao

esverdeada,apresentando a presena de clorofilas,mostrada na figura 3, neste caso utilizou-se uma fase mvel conferida como gradiente,ou seja possui no mnimo compostos diferentes para conferir uma polaridade intermediria, com esta nova fase mvel constituda por hexano:acetona numa proporo 3:1 conferindo assim uma fase mvel menos apolar que a anterior.As clorofilas so reconhecidas como complexos e neste presena de um metal o Mg que confere a esta molcula uma certa polaridade,que ainda apolar porm menos que as xantinas e o -caroteno,esta interage mais com a fase estacionria em relao com os outros compostos. Os resultados no foram obtidos por conta da demora de eluio,isto pode ser nota com a sada das gota que estavam em um intervalo muito grande uma em relao a outra,conferindo assim uma gota por minuto.Tentou-se acelerar o processo usando um mecanismo, inadequado,de oferecer ao sistema uma presso maior,para que a velocidade fosse aumentada,porm de nada adiantou.Isto deve-se a porosidade do filtro que,provavelmente,estava menor que o desejado para esta anlise ou deveriam estar entupidos,contudo ,ainda sim com o mecanismo no foi possvel observar a separao.

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Figura 3. Estruturas da clorofila a (III) e b (IV)

V- CONCLUSO
Dado o exposto, possvel notar que a qumica to simples de se notar quanto o ar que respiramos,esta prtica foi realizada com o intuito de promover uma maior aprendizagem,porm no foi possvel perceber a separao total.Porm,foi vlido notar que apesar de possuirmos laboratrios completos possvel realizar prticas qumicas com artefato simples,encontrados em nosso cotidiano.

6-REFERNCIAS BIBLIOGRAFIA
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 http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/COLUNA. htm Acessado em: 09/10/2011. http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAjJwAK/apostila-cromatografia-coluna Acessado em: 09/10/2011. http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc20/v20a10.pdf Acessado em: 09/10/2011.

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