UNIVERSIDADE DE BRASLIA FACULDADE DE TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA FLORESTAL

TRABALHO DE GENTICA E MELHORAMENTO FLORESTAL BIOTECNOLOGIA E GENTICA MOLECULAR

09/0111338 Edberto Moura Lima

Braslia-DF, 8 de dezembro de 2011

Introduo
A palavra gentica deriva da raiz grega gen, que significa "vir a ser". Foi empregada pela primeira vez em 1906, por Bateson, para designar o estudo da hereditariedade e da variao dos seres vivos. A gentica desenvolveu-se a partir de meados do sculo XIX com os estudos de hereditariedade de Mendel, passando pela elucidao da estrutura de DNA por Watson e Crick (1957) e chegando at a complexidade da biologia molecular atual, quando alguns genomas inteiros j so conhecidos, como, por exemplo, o genoma humano. O seguinte trabalho foi feito com base no estudo feito por CARRER - Biotecnologia na agricultura, e apresenta um resumo sobre os principais acontecimentos no campo da gentica molecular e biotecnologia, e algumas ferramentas, ramos e mtodos desta nova cincia que promete ser um dos principais instrumentos para combater a fome e a crise energtica mundial, alm de melhorar a qualidade de vida humana.

Biotecnologia e Gentica Molecular

A gentica molecular a rea da biologia que estuda a estrutura e a funo dos genes a nvel molecular. Ela usa os mtodos da gentica e da biologia molecular. Um campo importante da gentica molecular o uso de informao molecular para determinar padres de descendncia, e assim a classificao cientfica correta dos organismos: a isto chamamos sistemtica molecular. A biotecnologia comeou a ser discutida por volta dos nos 90 com a to chamada revoluo biotecnolgica, em 1981 a vida geneticamente engenheiradas foi concedida, onde Ananda Chakravarty conseguiu reproduzir em laboratrio uma nova variedade de bactria Pseudomonas geneticamente engenheirada. Porm acredita-se que a biotecnologia uma cincia antiga datando mais de seis mil anos. Perpassando pela descrio do DNA em 1953 at os dias atuais. Atravs desta moderna tecnologia possvel identificar e selecionar genes que codificam caractersticas benficas para serem usados como marcadores moleculares nos processos de seleo assistida, ou ter a expresso de um determinado gene em outro organismo por transgenia e, assim, com maior preciso, obter novas caractersticas agronmicas e nutricionais desejveis nos cultivos de plantas. (CARRER et al., 2010) Segue a seguir alguns episdios importantes na biotecnologia. A linha do tempo comea a partir da descoberta do DNA e permeia os dias atuais.
1953: A revista Nature publicou o manuscrito de James Watson e Francis Crick que descrevia a estrutura dupla-hlix do DNA. A descoberta da estrutura do DNA resultou em uma exploso de pesquisas em biologia molecular. 1956: Heinz Fraenkel-Conrat demonstrou como uma parte do vrus do mosaico do tabaco pode se remontar e ser funcional. 1957: Francis Crick e George Gamov elaboraram o dogma centralsobre como fun-ciona o DNA para produzir protenas. Matthew Meselson e Frank Sthal demonstraram o mecanismo da replicao do DNA. 1958: O National Seed Storage Laboratory (NSSI) foi aberto em Forti Collin no Colorado (Estados Unidos), tornando-se a primeira instalao de armazenamento de longo prazo de sementes no mundo. 1965: Cientistas noticiaram que os genes que levam a resistncia aos antibiticos em bactrias so frequentemente estruturas extracromossomais denominadas plasmdeos. 1966: Marshall Nirenberg, Heinrich Mathaei e Severo Ochoa demonstraram que uma sequncia de trs bases de nucleotdeos (cdon) determina cada um dos 20 aminocidos. 1970: Howard Temin e David Baltimore, trabalhando independentemente, isolaram a transcriptase reversa, uma enzima de restrio que corta a molcula do DNA em regies especficas. O trabalho descreveu como o RNA viral que infecta uma bactria hospedeira usa essa enzima para integrar sua mensagem dentro do DNA hospedeiro. Essa descoberta levou os cientistas a criar clones de bactrias e a observar seu funcionamento. 1972: Paul Berg isolou e empregou uma enzima de restrio para cortar o DNA e a DNA ligase para unir duas fitas de DNA e formar uma molcula circular hbrida. Esta foi a primeira molcula de DNA recombinante.

1973: Stanley Choen, Annie Chang e Herbert Boyer usaram setores de DNA viral e DNA bacteriano com as mesmas enzimas e produziram o primeiro plasmdeo com DNA recombinante, plasmdeo com dois genes de resistncia a antibiticos. 1974: Satanley Choen e Herbert Boyer demonstraram a expresso de um gene implantado em bactria por DNA recombinante. 1977: Genentech, Inc. mostrou a produo da primeira protena humana (somatostatina) sintetizada em uma bactria. Walter Gilbert e Allan Maxam, na Universidade de Harvard e Frederick Sanger, na Inglaterra, desenvolveram o mtodo de sequenciamento de DNA. 1978: Gentech, Inc. e o Centro de Medicina Nacional anunciaram a produo de insulina humana usando a tecnologia do DNA recombinante em laboratrio. David Botstein estabeleceu a tcnica de RFLP para anlise de polimorfismo 1980: Kary Mullis e outros desenvolveram a tcnica de PCR (reaes polimerase em cadeia). 1982: Gentech, Inc. recebeu aprovao da FDA para comercializar insulina humana modificada geneticamente. 1983: Patentes foram aprovadas para plantas geneticamente modificadas. 1985: Plantas geneticamente modificadas resistentes a insetos, vrus e bactria foram testadas em campo pela primeira vez. 1986: O EPA aprovou a liberao da primeira planta de tabaco geneticamente modificada. 1987: Calgene, Inc. obteve a patente da sequncia de DNA da poligalacturonase de tomate usada para produzir uma sequncia de RNA antissenso que aumenta o tempo de longevidade dos frutos. 1990: Michael Fromm reportou transformao estvel de milho utilizando bombardeador de gene. Consrcio internacional foi estabelecido para o sequenciamento do genoma humano 1994: A FDA aprova o primeiro produto alimentcio geneticamente modificado (GM), o tomate FlavrSavr 1995: O Comit Assessor Australiano (Gmac) permite liberao comercial de cravos azuis geneticamente modificados. 1997: Pesquisadores do Instituto Roslin na Esccia clonaram a ovelha chamada Dolly. 1998: Quarenta milhes de hectares de culturas GM so plantadas globalmente. Predominantemente soja, algodo, canola e milho. Liberao comercial da soja transgnica tolerante a herbicida concedida no Brasil e em seguida proibida por determinao judicial. 2000: O genoma da Arabidopsis completamente sequenciado. criada uma variedade de arroz GM com o gene precursor da vitamina A. 2001: Sequenciamento completo da bactria fitopatognica Xyllela fastidiosa por consrcio de pesquisadores brasileiros. Consorcio do Genoma Humano e o grupo Celera publicam o genoma humano 2002: O sequenciamento completo do genoma do arroz realizado por um consrcio internacional. A ovelha Dolly morre por problemas respiratrios. 2003: Plantas de canola tolerantes a herbicida e milho resistentes a lagartas so aprovadas nos Estados Unidos. Milho GM tolerante a herbicidas aprovado para uso como alimento na Austrlia. estabelecida a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio) com finalidade de prestar apoio tcnico consultivo e assessoramento ao governo federal na formulao, atualizao e implementao da Poltica Nacional de Biossegurana relativa a Organismos GM. Liberao da soja transgnica tolerante a herbicida no Brasil. 2006: Liberao nos Estados Unidos do arroz GM para consumo humano. Uvas geneticamente modificadas so testadas na frica do Sul. 2007: Liberao experimental de cana transgnica com alto teor de acar no Brasil pela empresa Allelyx/Monsanto. Liberao comercial de milho GM resistente a inseto e tolerante a herbicida no Brasil. 2008: Pesquisadores australianos desenvolvem plantas com altos nveis de um cido graxo (UFA) para produzir plsticos, tintas e cosmticos. Pesquisadores japoneses desenvolvem a primeira rosa azul GM. Liberao comercial de algodo GM tolerante a herbicida no Brasil. 2009: Liberao comercial da soja GM tolerante a herbicida e algodo resistente a inseto no Brasil. Desenvolvimento da terceira gerao de plantas GM com propriedades como tolerncia

a alta salinidade e seca, ou para produo de produtos farmacuticos como vacinas orais, e produtos especializados como plstico biodegradvel. 2010: Craig Venter cria clula sinttica a partir de um genoma sintetizado em laboratrio. (CARRER et al., 2010)

Tanto no meio florestal quanto no meio agronmico a biotecnologia tem como papel fundamental garantir a segurana alimentar e de recursos energticos. Ela pode fornecer meios para o aumento da produo agrcola/florestal pela aplicao do conhecimento molecular da funo dos genes e das redes regulatrias envolvidas na tolerncia a estresse, desenvolvimento e crescimento, desenhando novas plantas (TAKEDA & MATSUOKA, 2008). O Brasil hoje o segundo maior produtor de transgnicos, alguns autores defendem que os transgnicos trazem uma srie de benefcios tais como aumento da produtividade, resistncia a pragas e injurias, reduo no uso de defensivos alm de melhor adaptar a plantas a condies extremas de ambiente. Segundo Carrer a insero de caractersticas antes ausentes na planta pode agregar valor aos seus produtos, multiplicando a renda do agricultor e diminuindo o xodo rural. A transformao gentica pode ser o motor de uma transformao social.

Genmica de plantas e expresso gnica

A genmica tem como objetivo entender como os genes e a informao gentica esto organizados dentro do genoma, e ainda como essa organizao determina a sua funo, tem o grande desafio de buscar a funo dos genes e entender essas sequncias para reduzir a distncia existente entre gentipo e fentipo. Entretanto, um grande nmero de genes sequenciados possui funo desconhecida. Sendo um fator limitante deste ramo.
Adicionalmente s informaes obtidas pela anlise do genoma, preciso ter conhecimento, por exemplo, sobre quais protenas esto realmente sendo expressas, quando e em quais so os nveis de expresso e, ainda, as eventuais modificaes ps-transcricionais (CANOVAS et al., 2004). O fato de as clulas de um organismo terem o mesmo genoma, mas apresentarem as mais variadas funes e morfologias, que so resultado de diferentes composies de protenas expressas, ilustra a importncia de estudar no s a sequncia dos genes, mas tambm a sua expresso para podermos compreender as suas funes biolgicas. A anlise da expresso gnica, tambm chamada de anlise de transcriptoma, uma metodologia significante para identificar genes candidatos, predio da funo de genes e regies regulatrias (MOCHIDA & SHINOZAKI, 2010). Esse mtodo baseado na hibridizao nos microarranjos e gene chips que permitem analisar a expresso de dezenas de milhares de genes simultaneamente. Genes identificados com expresso diferencial so clonados e analisados funcionalmente no metabolismo celular, sendo a transgenia um dos mtodos utilizados. (CARRER et al, 2010)

Transformao gentica
A transformao gentica acelera o processo de seleo natural e auxilia o melhoramento gentico tradicional. Ela consiste de vrios mtodos podendo ser classificados como diretos ou indiretos. No mtodo indireto a transferncia de genes intermediada por outros organismos como bactrias, e no direto h manipulao direta da maquinaria gentica da clula.

Marcadores moleculares em espcies vegetais

No melhoramento gentico, o desenvolvimento de marcadores ligados a genes de resistncia contra pragas e agentes patognicos, ou a sua utilizao para acelerar a escolha do melhor parental, permite uma conduo mais precisa dos programas de seleo quando comparado s selees baseadas em outros marcadores. Alm disso, a seleo assistida por marcadores moleculares permite a construo de gentipos que seriam dificilmente produzidos apenas com a seleo fenotpica (ALZATE-MARIN et al., 2005). Um marcador molecular um locus polimrfico que informa sobre o gentipo do indivduo que o possui. Dessa maneira, os marcadores correspondem ao polimorfismo presente no nvel do DNA. A anlise desse polimorfismo por meio da biologia molecular endereada ao genoma como um todo, traduzido ou no em protenas, e independente das condies ambientais. Contrariamente aos marcadores morfolgicos e bioqumicos, os marcadores moleculares no dependem do tipo de tecido analisado, nem do estgio de

desenvolvimento da planta. Atualmente, esses marcadores so utilizados com as mais diversas finalidades genticas, desde testes de paternidade e identificao de parentesco at a construo de mapas genticos complexos (ROCHA et al., 2003). O nmero de marcadores genticos teoricamente ilimitado, e o gentipo de uma planta pode ser determinado em um estgio de desenvolvimento precoce, assim que haja material suficiente para a extrao do DNA. Em razo dessas caractersticas, os marcadores moleculares so uma ferramenta cada vez mais til no melhoramento gentico de culturas de valor agronmico, sobretudo para caractersticas de difcil seleo fenotpica, sendo de grande utilidade para a acelerao de programas de melhoramento gentico de espcies de ciclo de vida longo, onde um ciclo de seleo pode durar vrios anos (MALUF et al., 2005)

Didaticamente, os mtodos de marcao podem ser reunidos em duas grandes categorias: os marcadores do tipo RFLP e os marcadores baseados no mtodo da reao em cadeia da polimerase. A RFLP uma tcnica da primeira gerao de marcadores, baseada na presena de variabilidade nas sequncias de nucleotdeos do DNA genmico aps digesto por enzimas de restrio. Aps a digesto do DNA, um grande nmero de fragmentos com tamanhos variados gerado, os quais so hibridizados a uma sonda de DNA para a identificao de fragmentos homlogos. Mutaes nos locais de restrio e/ou delees/inseres de um fragmento de DNA na regio reconhecida pela sonda so responsveis pelo polimorfismo detectado. Atravs da PCR possvel obter-se cpias de uma parte do material gentico em quantidade suficiente que permita detectar e analisar a sequncia que alvo do estudo. s vezes referida como fotocpia molecular, a PCR pode amplificar qualquer sequncia especfica de DNA, a partir de amostras de diferentes materiais biolgicos.

Referencias Bibliogrficas
ALZATE-MARIN, A. L. et al. Seleo assistida por marcadores moleculares visando ao desenvolvimento de plantas resistentes a doenas, com nfase em feijoeiro e soja. Fitopatologia Brasileira, v.30, n.4, p.333-42, 2005. CANOVAS, F. et al. Plant proteome analysis. Proteomics, v.4, p.285-98, 2004. MARTINEZ, Marcos Antonio Rodrigues et al . Gentica molecular aplicada ao cncer cutneo no melanoma. An. Bras. Dermatol., Rio de Janeiro, v. 81, n. 5, Oct. 2006 . MALUF, M. P. et al. Genetic diversity of cultivated Coffea arabica inbred lines assessed by RAPD, AFLP and SSR marker systems. Scientia Agricola, v.62, p.366-73, July/Aug. 2005. MOCHIDA, K.; SHINOZAKI, K. Genomics and Bioinformatics Improvement. Plant Cellular Physiology, v.51, p.497-523, 2010. Resources for Crop

ROCHA, R. B. et al. O mapeamento gentico no melhoramento de plantas. Revista Biotecnologia Cincia e Desenvolvimento, n.30, p.27-32, jan./jun. 2003. TAKEDA, S.; MATSUOKA, M. Genetic approaches to crop improvement: responding to environmental and population changes. Nature Reviews Genetics, v.9, p.444-57, 2008.