NUTRIGENMICA E NUTRIGENTICA: FACES EMERGENTES DA NUTRIO MOLECULAR PARA MELHORAR A SADE E A PRODUO DE AVES

Dra. Maria Constanza Rodriguez, Departamento de Pesquisa da Alltech Brasil.

Profissionais das reas de nutrio e melhoramento animal sempre debateram sobre o que representa a maior porcentagem de impacto na produo animal, a gentica ou a nutrio. A verdade que h grande dificuldade em se separar a nutrio da gentica, uma vez que ambas esto sempre juntas. A Nutrigenmica e a Nutrigentica so dois campos da cincia que, apesar de terem abordagens distintas, possuem um nico objetivo possibilitando a anlise de ambos os fatores ao mesmo tempo. A abordagem Nutrigenmica visa desvendar os efeitos da dieta na sade e produo. J a Nutrigentica por sua vez, avalia como a composio gentica de um indivduo responde a dieta. Ambas possuem o objetivo comum de melhorar a sade e a produtividade animal atravs de dietas personalizadas e so consideradas abordagens poderosas para desvendar a complexa relao entre as molculas nutricionais, os polimorfismos genticos e o sistema biolgico como um todo. Desde os tempos do renomado fsico grego, Hipcrates, a nutrio tem apresentado claramente um papel predominante e reconhecido para a sade. Contudo, com o tempo, a nossa compreenso sobre a dieta e seus efeitos evoluiu muito passou de associaes leigas a fatos conclusivos e comprovados. O advento da cincia moderna levou a percepo de que no s alguns nutrientes so essenciais, mas que suas quantidades especficas tambm so muito importantes (MUTCH et al., 2005). Dessa forma, o desenvolvimento animal claramente definido pelas influencias ambientais (ex: dieta, atividade fsica, condies climticas etc) e pela hereditariedade, indicando que ambos os aspectos devem ser considerados a fim de melhorar a sade e o desempenho. Apesar disso j estar bem estabelecido, os delineamentos experimentais so normalmente especficos a apenas um fator, gene ou ambiente que so analisados isoladamente.

INTRODUO Apesar de todas as clulas do nosso organismo apresentarem um conjunto completo de genes idnticos, apenas uma frao desses genes est expressa ou ligada em cada tipo celular. o subconjunto desses genes que esto expressos que fornece a cada clula

a sua funo especfica e as suas caractersticas estruturais. Por esse motivo, por exemplo, as clulas hepticas so totalmente diferentes, em sua estrutura e funo, dos melancitos na pele. Enquanto os hepatcitos apresentam funes como metabolizao de substncias e produo da blis, os melancitos secretam melanina, sendo responsveis pela colorao da pele. Quando um gene est ativado, regulado positivamente, a maquinaria celular comea a transcrev-lo em outro tipo de material gentico chamado RNA mensageiro (mRNA). Alguns desses mRNA contm o cdigo ou a mensagem que ser ento traduzida em uma ou parte de uma protena. As protenas, por sua vez, apresentam diferentes funes no organismo, algumas esto envolvidas em processos metablicos, outras em estruturais, de transporte, regulao ou comunicao. Dessa forma, tipos celulares distintos so regulados e expressam diferentes protenas que daro a identidade a cada clula, tecido e rgo do nosso corpo. O fluxo da informao do DNA para o RNA e ento para a protena conhecido como dogma central da biologia (WATSON & CRICK, 1953) (Figura 1). A genmica analisa milhares de genes, ao invs de um s, utilizando tcnicas como os microarranjos aliadas bioinformtica que possibilita a anlise simultnea de toda essa informao para poder armazenar, manejar, integrar e interpretar o grande volume de dados. Uma vez que a variao gentica pode alterar a expresso dos genes, importante compreender melhor os genes associados ao controle da ingesto de alimento, balano energtico, imunidade, reproduo e uma srie de outros aspectos que influenciam direta ou indiretamente a produo e sade animal. A compreenso de como a expresso gnica regulada pelo estmulo nutricional e hormonal oferece novas perspectivas na atual nutrio de aves, alm de prticas de acasalamento e manejo. Para a anlise de seqncias usamos seqenciamento, para atividade dos genes transcriptoma, para anlise de protenas protemica, e a metabolmica para o estudo dos metablitos. No caso da avicultura, estas modernas tecnologias foram enriquecidas pelos dados obtidos atravs do projeto do seqenciamento do genoma da galinha (Gallus gallus). A primeira verso completa deste genoma revelou um genoma de tamanho relativamente pequeno de 1 bilho de pares de bases, como das aves em geral e a presena de aproximadamente 20-23.000 genes (HILLIER et al., 2004). A disponibilizao deste genoma levou a comunidade de pesquisa em avicultura a um novo patamar, possibilitando uma abordagem mais integrada do metabolismo para explorar o papel da dieta na produo e nas doenas desta espcie. Essa grande quantidade de informao

possibilitou no apenas o desenvolvimento ativo de plataformas analticas completas, mas tambm programas apropriados para armazenamento, organizao e anlise dos dados, alm de revolucionar a nossa abordagem para compreenso da sade e das caractersticas de desempenho de aves.

APLICAES DA GENMICA FUNCIONAL NA AVICULTURA Tecnologias recentes possibilitaram o desenvolvimento de um novo campo de pesquisa chamado genmica funcional. A genmica funcional estuda como o genoma de um organismo regula a homeostase e responde aos estmulos, possibilitando assim uma melhor compreenso de sua interao com seu ambiente (ASHWELL, 2006). Desta forma, este campo possui importantes aplicaes como ferramenta para o estudo da interao de um organismo com sua dieta. H uma srie de trabalhos que utilizam essas tecnologias de alta resoluo para a avicultura um dos motivos pela sua importncia na alimentao humana. Uma das principais fontes de protena para a maior parte das populaes humanas fornecida atravs da galinha domstica (Gallus gallus). Sua grande importncia econmica faz com que seja foco de numerosos projetos de pesquisa (WICKER, et al.; 2005).

1) NUTRIGENMICA O objetivo da Nutrigenmica fazer uma extrapolao de como a nutrio induz as alteraes na expresso gnica afetando as caractersticas de desempenho e sade (Figura 2). O enfoque o efeito dos componentes bioativos dos alimentos no genoma, transcriptoma, proteoma e metaboloma. Atravs da determinao do mecanismo do efeito do nutriente ou efeito do regime nutricional a Nutrigenmica busca definir a relao entre estes componentes especficos ou dietas e caractersticas de desempenho. As novas tecnologias como a PCR tempo real e os microarranjos tornam possvel mensurar a expresso gnica desde um nico gene at um genoma inteiro. A Nutrigenmica uma cincia nova, que ainda est engatinhando, mas cresce rapidamente.

Micronutrientes Zinco (Zn) O zinco um nutriente importante no metabolismo animal. Ele est presente em todas as clulas e participa de uma grande variedade de processos metablicos devido a seu papel cataltico em mais de 200 enzimas. Estas enzimas esto envolvidas na sntese e/ou degradao de carboidratos, lipdeos, protenas e cidos nuclicos (KAIM & SCHWEDERSKI, 1994). Em aves, serve no apenas como nutriente, mas tambm pode ser utilizado como suplemento na dieta para manipulao do sistema reprodutivo da ave. particularmente importante em poedeiras por ser um componente de uma srie de metaloenzimas como a anidrase carbnica a qual essencial para a formao da casca do ovo. Apresenta um papel importante tambm na resposta e cicatrizao de feridas. Foi um dos primeiros nutrientes que regulam a expresso gnica a ser estudado (BLANCHARD & COUSINS, 1996). A sua deficincia j foi bem caracterizada clinicamente e est associada com alteraes na expresso de uma srie de genes inclusive o da colecistocinina, uroguanilina e ubiquinona xido redutase

(BLANCHARD & COUSINS, 2000).

Selnio (Se) O selnio (Se) um microelemento mineral que apresenta importantes efeitos antioxidantes. Como co-fator da enzima glutationa peroxidase est diretamente envolvido na decomposio do perxido de hidrognio. Atualmente mais de 20 protenas que contm ou utilizam o Se como co-fator j foram identificadas. A eficincia do sistema antioxidante apresenta efeitos importantes na sade e no desempenho de frangos de corte, uma vez que o estresse oxidativo contribui para o dano e a morte celular. A importncia da fonte, forma e dos nveis do selnio na dieta de aves j foi demonstrada atravs de estudos de expresso gnica. DIETRICH et al. (2009) compararam aves alimentadas com baixos e altos nveis de selnio na dieta e demonstraram que os nveis de selnio alteraram a expresso de vrios genes no fgado desses animais, sendo que o grupo que recebeu uma suplementao de selnio proveniente de leveduras enriquecidas com esse mineral apresentaram uma maior expresso dos genes Gpx-1 e Gpx-4 das protenas glutationa peroxidase dependentes de NADPH indicando um maior status de Se. Alm disso, 24 protenas relacionadas ao ciclo da ubiquitina foram reguladas negativamente. As vias proteolticas da ubiquitina reconhecem protenas modificadas oxidativamente ou danificadas de forma que sua

regulao negativa pode ser indicativa de uma possvel reduo da degradao protica no grupo suplementado. POWER (2009) em seu estudo com matrizes de frango de corte observou que a fonte de selnio na dieta ocasionou mudanas transcricionais em genes ligados a fertilidade. O grupo suplementado com selnio proveniente de levedura enriquecida com este mineral apresentou uma maior expresso de genes importantes para as vias ligadas ao hormnio folculo estimulante (FSH) e a sntese protica no oviduto.

Minerais e Vitaminas A dieta materna durante a gestao influencia o aparecimento de diferentes doenas e caractersticas relacionadas a sade da prole. REBEL et al. (2006) investigaram a influencia da dieta de galinhas nos padres de expresso gnica intestinal dos descendentes. As galinhas receberam uma dieta comercial suplementada ou no com minerais e vitaminas durante um perodo de cerca de 11 semanas. Os descendentes de ambos os grupos no apresentaram alteraes em sua taxa de crescimento ou converso alimentar. Foram analisados os padres de expresso gnica intestinais desses descendentes aos 3 e 14 dias de idade atravs de um microarranjo de cDNA intestinal. Foram identificados 11 genes com diferena em sua expresso entre os dois grupos tanto aos 3 quanto aos 14 dias de vida. Esses genes tambm se expressaram

diferentemente em relao ao intestino imaturo e desenvolvido, esses genes afetam o turnover intestinal, a proliferao e o desenvolvimento, metabolismo e absoro de nutrientes. Para confirmar se essas diferenas na expresso gnica estavam relacionadas ao desenvolvimento intestinal, eles investigaram sua proliferao, a qual tambm demonstrou diferenas entre os grupos com 3 e 14 dias. Os resultados indicaram que a alimentao das matrizes influencia a funcionalidade intestinal da prole aos 3 e 14 dias.

Macronutrientes Alimentos Orgnicos GREEFF et al. (2009) estudaram pela primeira vez as diferenas entre aves alimentadas com dietas contendo ingredientes produzidos organicamente ou na forma convencional e encontraram diferenas significativas em sua expresso gnica. Os animais que receberam alimentos convencionais apresentaram uma menor expresso de 5 genes envolvidos diretamente na biosntese do colesterol (acetoacetil-CoA sintase,

isopentenil-PP isomerase, squaleno epoxidase, -colesterol-C4 metil oxidase e 17hidroxiesterol deidrogenase) e maior expresso de outros 2 genes indiretamente envolvidos (insig-1 e P450). Essas alteraes reduziram a sntese do colesterol no jejuno nos animais alimentados com as dietas convencionais.

Subproduto de CLA J se sabe que o cido linolico conjugado (CLA) apresenta uma srie de benefcios para a sade como efeitos anticarcinognicos, antiaterognicos, antidiabticos e imunoestimulantes. SUKSONBAT et al. (2006) encontraram nveis mais altos de CLA e cidos graxos nos lipdeos da gema de ovo a medida que o CLA da dieta aumentou. KIM et al. (2010) avaliaram se a suplementao de subproduto de CLA (CBP) na dieta aumentaria seu acmulo no msculo de frangos de corte e sua expresso lipognica no fgado. Um total de 456 pintos com 1 dia de idade foram distribudos aleatoriamente em quatro grupos, cada um recebendo 2% de suplementao durante 4 semanas: leo de soja (controle), leo de crtamo, CLA purificado e CBP. Pouca alterao no desempenho dos frangos foi observada durante o experimento. O resultado sugeriu que o CBP poderia ser uma fonte eficiente para promover o acumulo nos msculos sem induzir a lipognese no fgado ou comprometer o desempenho e a qualidade da carne dessas aves, o que foi avaliado atravs dos nveis de expresso gnica da protena 1 de ligao aos elementos regulatrios de esterol (SREBP1), assim como outros genes alvo como o da sintetase de cidos graxos (FAS) e a carboxilase acetil coenzima A (ACC). O CBP pode ser considerado uma fonte diettica eficiente que promove o acmulo de CLA nos msculos em frango de corte sem induo de lipognese heptica.

2) PROTEMICA Devido grande dificuldade na padronizao das metodologias que permitam a comparao entre seus resultados, as tcnicas para o estudo do proteoma ainda no esto to popularizadas como as tcnicas utilizadas no estudo do transcriptoma. Contudo, mesmo assim, h um nmero crescente de estudos buscando identificar respostas celulares a constituintes dietticos, bem como seus alvos moleculares atravs da protemica. Uma srie de trabalhos com gentica nutricional utilizaram a protemica em animais de interesse zootcnico. CORZO et al. (2006) avaliaram o efeito de dietas com diferentes nveis de metionina na expresso protica de msculos esquelticos de frangos de corte. Eles no

identificaram nenhuma protena exclusiva nas aves alimentadas com os nveis adequados de metionina e frisaram a importncia de mais estudos em relao as protenas expressas apenas nos animais que receberam a dieta deficiente em metionina. GURIN-DUBIARD et al. (2006) analisaram protenas na clara de ovo atravs de eletroforese bidimensional e encontraram 69 protenas principais e 16 protenas secundrias das quais duas nunca haviam sido detectadas na clara de ovo. MOLETTE et al. (2006) avaliaram a resposta de duas linhagens genticas de perus, Label Rouge de crescimento lento e BUT9 com crescimento rpido, submetidas ao processo artificial de gerao de carne PSE. Eles analisaram a expresso de uma srie de protenas a fim de determinar se aves de crescimento rpido foram mais susceptveis a sndrome PSE, contudo no identificaram diferenas entre as linhagens e sugeriram a realizao de novos estudos em condies comerciais. Apesar das dificuldades encontradas na realizao de estudos com protemica h uma tendncia de que haja um aumento gradativo na utilizao destas tcnicas na rea zootcnica. O genoma humano, por exemplo, apresenta cerca de 30 mil genes identificados, mas capaz de expressar mais de 100 mil protenas o que demonstra a importncia da integrao de tcnicas transcriptmicas, como os microarranjos, com outras utilizadas no estudo das protenas. A genmica funcional apresenta grande potencial no redirecionamento da nutrio de aves para uma abordagem mais personalizada, nas quais as dietas podero ser direcionadas em funo das raas, linhagens ou mesmo grupos com caractersticas semelhantes. CONCLUSO O reconhecimento de que os nutrientes possuem a habilidade de interagir e modular os mecanismos moleculares responsveis pelas funes fisiolgicas do organismo levou a uma revoluo no campo da nutrio. A grande complexidade dos alimentos e do organismo animal demonstra que os nutricionistas no podem mais trabalhar isoladamente. Ao invs disso, necessrio que profissionais da biologia molecular, computao, matemtica e outras reas afins trabalhem juntos para compreender como o ambiente interage com o nosso DNA. Essas dificuldades j podem ser contornadas atravs de tecnologias modernas que consideram estes fatores simultaneamente. As abordagens holsticas podero melhorar a nossa compreenso sobre as complexas

interaes biolgicas que controlam as caractersticas e a variabilidade de animais importantes para a alimentao humana, como as aves.

Figura 1. Dogma central da Biologia (Watson & Crick, 1953). Elaborao: Alltech

Figura 2. Representao esquemtica centralizando a Nutrigenmica na interao Nutrio, Genmica e desempenho. Elaborao: Alltech

Referncias ASHWELL, C. M. Functional genomics: the beginning of a new age in nutritional research. In: Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industry: Alltechs 22th International Symposium, 2006. BLANCHARD, R.K.; COUSINS, R.J.. Differential display of intestinal mRNAs regulated by dietary zinc. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:6863-6868, 1996. BLANCHARD, R.K.; COUSINS. R.J. Upregulation of rat intestinal uroguanylin mRNA by dietary zinc restriction. Am. J. Physiol. 272(5 Pt 1):G972-978, 2000. CORZO, A.; KIDD, M. T.; DOZIER, W. A.; SHACK, L. A. and BURGESS, S. C. Protein expression of pectoralis major muscle in chickens in response to dietary methionine status. Br. J. Nutr., (95):703708, 2006. DESERT, C.; GURIN-DUBIARD, NAU, C. F.; JAN, G.; VAL, F. and MALLARD, J. Comparison of Different Electrophoretic Separations of hen egg white proteins. J. of Agric. and Food Chemistry, 49 (10): 4553-4561, 2001. DIETRICH, B.; BUCHER, B.; WENK, C. Microarray analysis of gene expression in poultry fed low and adequate selenium diets. In: Science and Technology in the Feed Industry: Poster of Alltechs 25th International Symposium, 2009. GREEFF, A.; HUBER, M.; VAN DE VIJVER, L.; SWINKELS, W.; PARMENTIER, H.; REBEL, J. Effect of organically and conventionally produced diets on jejunal gene expression in chickens. Br. J. Nutr., 1-7, 2009. GUERIN-DUBIARD C., PASCO M., MOLLE D., DESERT C., CROGUENNEC T., NAU F. Proteomic analysis of hen egg white. J. Agric Food Chem., (54):3901-3910, 2006. HILLIER, L. W. et al. Sequence and comparative analysis of the chicken genome provide unique perspectives on vertebrate evolution Nature. 432(7018):695-716, 2004. KAIM, W.; SCHWEDERSKI, B. "Bioinorganic Chemistry: Inorganic Elements in the Chemistry of Life", 1st ed. John Wiley & Sons, USA, 1994. KIM, J. H.; JEONG, W. S.; KIM, I. H et al. Effect of an oil byproduct from conjugated linoleic acid (CLA) purification on CLA accumulation and lipogenic gene expression in broilers. J Agric Food Chem. 57(6):2397-2404, 2009.

MOLETTE C, SRIEYE V, ROSSIGNOL M, BABIL R, FERNANDEZ X, RMIGNON H.High postmortem temperature in muscle has very similar consequences in two turkey genetic lines. Poult Sci., 85(12):2270-2277, 2006 MUTCH, D. M.; WAHLI, W.; WILLIAMSON, G. Nutrigenomics and nutrigenetics: the emerging faces of nutrition. The FASEB Journal. Vol (19) 1602-1616, 2005. POWER, R. Nutrigenomics: Practical applications explaining the effects of selenium at a molecular level on hen reproductive performance. In: Science and Technology in the Feed Industry: Poster of Alltechs 25th International Symposium, 2009. REBEL, J. M.; HEMERST, S. V.; HOEKMAN, A. J.et al. Maternal diet influences gene expression in intestine of offspring in chicken (Gallus gallus). Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 145(4):502-8. 2006. SCHWERIN, M.; DORROCH, U.; BEYER, M.; SWALVE, H.; METGES, C.C.; JUNGHANS, P. Dietary protein modifies hepatic gene expression associated with oxidative stress responsiveness in growing pigs. Faseb J., 16(10):1322-1324, 2002. SUKSOMBAT, W.; SAMITAYOTIN, S.; LOUNGLAWAN, P. Effects of Conjugated Linoleic Acid Supplementation in Layer Diet on Fatty Acid Compositions of Egg Yolk and Layer Performances Poultry Science 85:16031609, 2006. WATSON, J.D.; CRICK, F.H. Genetical implications of the structure of deoxyribonucleic acid. Nature, 171 (4361): 964967, 1953. WICKER, T..; ROBERTSON, J. S. et al. The repetitive landscape of the chicken genome. Genome Research, 15: 126136, 2005.

Biological Trace Element Research Volume 101, Number 2, 147-163, Original Articles Review on the role of dietary zinc in poultry nutrition, immunity, and reproduction S. Y. Park, S. G. Birkhold, L. F. Kubena, D. J. Nisbet and S. C. Ricke. 2004.