AULA PRTICA N3 CROMATOGRAFIA EM PAPEL

1. Introduo

A cromatografia de aminocidos em papel uma cromatografia ascendente classificada como de partio. Partio de uma substncia sua distribuio entre duas fases solventes, e coeficiente de partio a relao da concentrao do soluto nas duas fases de equilbrio, a uma dada temperatura. Cada aminocido tem um coeficiente de partio distinto para qualquer par de solventes imiscveis. Na cromatografia de aminocidos em papel a fase estacionria a gua e a fase mvel um solvente. Os aminocidos so aplicados sobre um suporte inerte, como o papel. A celulose das fibras do papel hidratada e medida que o solvente, contendo a mistura de aminocidos, ascende na folha de papel, por ao capilar, inmeras distribuies microcpicas dos aminocidos ocorrem entre a fase mvel e a fase estacionria aquosa, unidas s fibras do papel. A separao dos aminocidos ocorre de acordo com o grau de afinidade dos mesmos com a fase estacionria (polar) ou com a fase mvel (apolar). Como os aminocidos so incolores e no fluorescentes, o cromatograma revelado com o reagente de ninidrina que, quente, forma um composto colorido com os aminocidos. A identificao dos aminocidos de uma amostra feita de forma comparativa, sabendo-se que a velocidade relativa de migrao de cada substncia uma constante caracterstica para cada sistema de solventes usado. A identidade do composto no papel pode ser estabelecida pela medida da distncia de migrao; ou seja, as substncias podem ser caracterizadas pela relao entre a velocidade de deslocamento da substncia e a velocidade de deslocamento da fase mvel, a qual denominada de Rf (taxa de fluxo), como mostra a equao abaixo. D Rf = L = (Distncia percorrida pelo solvente) (Distncia percorrida pela amostra)

O valor de Rf caracterstico de uma substncia em um dado sistema de solvente. Assim ele pode ser usado para identificar uma substncia em um experimento cromatogrfico. 2. Objetivos Utilizar a cromatografia em papel para separar uma mistura de aminocidos. 3. Materiais e Mtodos 3.1. Materiais o Papel; o Rgua; o Lpis; o Soluo de aminocido; o Grampeador;

o Bquer de 250mL; o Solvente; o Soluo de ninidrina 0,1%; 3.2. Mtodo 1. Cortar o papel n 4 com as dimenses de 15 x 15 cm. 2. Traar com lpis uma linha a 2 cm da borda. 3. Marcar sobre a linha pontos para a aplicao de amostras e padres, conservando entre eles a distncia de + ou + 2 cm. 4. Aplicar 2 gotas de soluo de aminocidos com tubo capilar e secar. A mancha no deve exceder 5 mm. 5. Com auxlio de agulha e fio ou grampeador dar a forma cilndrica ao papel. 6. Mergulhar o cilindro em uma cuba com o solvente, tomando cuidado para que a altura do solvente no alcance a linha de aplicao das manchas. 7. Deixar que o solvente desenvolva at + ou - 1 cm da extremidade superior do papel e marcar a linha de frente do solvente com um lpis. 8. Retirar o cromatograma da cuba e deixar secar temperatura ambiente.
9. Revelar com a soluo de ninhidrina a 0,1 %, em acetona, secar em estufa a

100C , por alguns minutos. 10. Identificar os aminocidos da amostra por comparao com os padres e calcular seu Rf. NOTA: Evitar o contato dos dedos no papel.