Souza VB et al

REVISO

Alteraes Renais por Aminoglicosdeos

ISSN 0871-3413 ArquiMed, 2008

Alteraes Renais por Aminoglicosdeos

Vanessa Barboza de Souza, Rodrigo Fagundes de Oliveira, Aurigena Ferreira, Raimundo de Arajo Jnior Departamento de Morfologia, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Brasil

O objetivo dessa reviso o acesso crtico literatura a respeito dos efeitos txicos dos aminoglicosdeos nas estruturas histolgicas do rim. Foram pesquisados os artigos cientcos nas bases de dados da ScienceDirect, cujas palavras-chaves foram NEPHROTOXICITY, AMINOGLYCOSIDES, GENTAMICIN e RENAL INJURY. Os artigos que apresentavam apenas o abstract disponvel, bem como as revises sistemticas foram excludos. Foram considerados somente artigos relacionados com a morfologia do sistema renal publicados em lngua inglesa e espanhola, e aqueles acessados atravs da base de dados da Capes. Dois revisores independentes avaliaram a elegibilidade e a qualidade metodolgica de cada ensaio experimental e extraram os dados. Sete foram selecionados. As variveis estudadas foram as seguintes: autor(es), ano, objetivo, metodologia e concluses. Os artigos selecionados utilizaram desde tcnicas histoqumica e imunoistoqumica para identicao morfolgica das alteraes renais at espectroscopia. Foi possvel tambm, vericar mtodos de preveno nefrotoxicidade induzida pelos aminoglicosdeos, minimizando efeitos txicos. Os achados histopatolgicos mostraram que a administrao de aminoglicosdeos causaram apoptose e edema celular, interrupo da membrana basal, reduo do espao de Bowman e necrose tubular aguda. Palavras-chave: aminoglicosdeos; apoptose; gentamicina; necrose tubular aguda.

ARQUIVOS DE MEDICINA, 22(4/5):131-5

INTRODUO No trabalho de Souza et al (1), 100 pacientes HIV+ com AIDS internados no Hospital Giselda Trigueiro, Natal-RN, foram estudados e acompanhados quanto s seguintes variveis: manifestaes clnicas orais, comportamento de risco, manifestaes sistmicas, forma de tratamento, dentre outras. Os autores concluram que 93 pacientes desenvolveram uma ou mais infeco oportunista de origem bacteriana como a gengivite ulcerativa necrosante aguda (GUNA), periodontite, tuberculose, slis e/ou pneumonia bacteriana. Alm disso, foi observado que mais da metade desses pacientes utilizavam drogas com efeito bactericida, como os aminoglicosdeos. Os autores dessa pesquisa constataram que 40% desses pacientes desenvolveram nefropatias, possivelmente devido nefrotoxicidade causada pelo uso crnico desses medicamentos. Segundo Kierszenbaum (2) o sistema renal formado por um conjunto de estruturas histolgicas imprescindvel nos mecanismos de ltraes glomerular e tubular. O glomrulo renal constitudo primordialmente por uma rede de capilares fenestrados sem diafragma oriundos da arterola aferente; pela cpsula de Bowman formada pelos folhetos parietal e visceral (podcitos) e clulas mesangiais de suporte.

Os podcitos so clulas epiteliais com inmeros prolongamentos que esto em ntimo contato com a lmina basal dos capilares fenestrados do glomrulo. Essa unio resulta na formao de uma membrana basal conhecida como membrana de ltrao, pela qual passam os componentes do ltrado glomerular. As clulas mesangiais localizam-se entre os capilares fenestrados do glomrulo especicamente nas regies dos capilares desprovidos de lmina basal. Essas clulas controlam o uxo sanguneo atravs da sua ao contrtil sob os capilares do glomrulo. O nfron um local acometido por toxicidade medicamentosa, visto que o uso crnico desses alteram morfologicamente as estruturas histolgicas envolvidas nos processos de ltrao (3,2). Os aminoglicosdeos formam um grupo de antibiticos comumente usados em infeces bacterianas por Gramnegativas aerbicas, sendo formados por dois ou mais aminoacares unidos por ligao glicosdica do ncleo de hexose que normalmente se encontra numa posio central. Esta hexose ou aminociclitol a estreptidina ou a 2-desaxiestreptamina (4). Os aminoglicosdeos inibem a sntese protica atravs de sua ligao na subunidade ribossmica 30s induzindo a leituras incorretas e interrupo prematura da traduo do RNAm (5).
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As injrias renais so induzidas pelo acmulo dos aminoglicosdeos nas clulas nefrticas, inclusive nas clulas mesangiais, causando uma desregulao nos mecanismos siolgicos das ltraes glomerular e tubular, alm de aumentar os nveis de creatinina srica, edemas intracelulares, apoptose e necrose das clulas do tbulo proximal (6). O presente estudo tem o objetivo de realizar uma reviso sistemtica sobre as estruturas histolgicas envolvidas na nefrotoxicidade por aminoglicosdeos.

proximal; 2 artigos investigam o efeito inibidor de alguns frmacos sobre a toxicidade causada pela gentamicina nas estruturas morfolgicas do nfron; 2 artigos descreveram como ocorrem os mecanismos de apoptose nas clulas dos tbulos contorcidos proximais pelo uso dos aminoglicosdeos e as conseqncias morfolgicas para o nfron (Tabela 1).

DISCUSSO Um marco histrico dos aminoglicosdeos se deu na dcada de 60 com a descoberta da gentamicina. Todos os aminoglicosdeos tm o potencial de produzir toxicidade renal reversvel ou irreversvel. Os eventos bioqumicos que levam leso das clulas e disfuno glomerular ainda no esto bem elucidados, mas podem envolver perturbaes nas estruturas das membranas celulares (5). Estudos remotos realizados com a microscopia ptica e o uso de uma pequena variedade histoqumica de corantes para a morfologia apontavam para as alteraes produzidas pelos aminoglicosdeos nas clulas do tbulo proximal, como pode ser visto nos estudos realizados por Bowman et al, (7); French et al, (8) que compararam a netilmicina com a gentamicina; amicacina e gentamicina em ratos, atravs de microscopia de luz, e vericaram a presena de corpos lisossomais, interrupo na membrana das clulas em borda de escova do tbulo proximal, edema celular e necrose do tbulo proximal. Segundo Hanslik et al (9) a nefrotoxicidade da gentamicina nos tbulos contorcidos proximais se deve ao fato de que esses frmacos so internalizados pelos lisossomos, causando liberao de enzimas hidrolases, conseqentemente causando necrose das clulas e obstruo do tbulo proximal. Um avano nos mtodos de anlise e elucidaes mais precisas sobre o envolvimento das estruturas lisos-

METODOLOGIA Foram pesquisados os artigos cientcos nas bases de dados da ScienceDirect, cujas palavras-chaves foram NEPHROTOXICITY e AMINOGLYCOSIDES (83 artigos no perodo de 1972 a 2007), NEPHROTOXICITY e GENTAMICIN (190 artigos no perodo de 1974 a 2007), NEPHROTOXICITY e RENAL INJURY (86 artigos no perodo de 1977 a 2007). Como critrios de excluso foram retirados os artigos que apresentavam apenas o abstract disponvel, bem como as revises sistemticas. Foram considerados somente artigos relacionados com morfologia do sistema renal publicados em lngua inglesa e espanhola, e aqueles acessados atravs da base de dados da Capes. Sete foram selecionados. As variveis estudadas foram as seguintes: autor(es), ano, objetivo, metodologia e concluses.

RESULTADOS Dos 7 artigos, 1 artigo descreveu os efeitos txicos dos aminoglicosdeos nas clulas dos tbulos renais; 1 artigo correlaciona a nefrotoxicidade por aminoglicosdeos nos receptores das clulas do tbulo proximal; 1 artigo relata os efeitos txicos da gentamicina sobre os lisossomos e mitocndrias das clulas do tbulo contorcido

Tabela 1 - Reviso sistemtica de artigos cientcos relacionados nefrotoxicidade.

Autor/Ano

Ttulo

Objetivo, Metodologia e Concluses

Polat et al, 2006

Objetivos: Investigar o efeito protetor da aminoguanidina contra os danos causados pela gentamicina. Metodologia: Tecidos foram xados em formalina, includos em parana, cortados e corados pela histoqumica com heProtective role of aminogua- matoxilina e eosina e cido peridico de Shiff (PAS), analinidine on getamicin-induced sados pela microscopia para observao das alteraes acute renal failure rats histolgicas. Concluses: Vericaram-se alteraes histolgicas no nfron, severa necrose tubular, apoptose celular, interrupo da membrana basal, edema intracelular.

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Autor/Ano

Ttulo

Objetivo, Metodologia e Concluses Objetivos: Vericar os mecanismos da apoptose das clulas epiteliais do tbulo proximal LLC-PK1, envolvendo suas organelas como lisossomos e mitocndrias. Metodologia: Clulas epitelias LLC-PK1 dos tbulos proximais do rim. As clulas foram ressuspensas em PBS (phosphaste Buffer Saline) e xadas em 4% de paraformoldedo. Foram examinadas ao microscpio confocal com orange acridina. Concluses: A gentamicina administrada inuencia nas alteraes intracelulares como ruptura das membranas lisossomais, libertao de enzimas hidrolases cidas, diminuio no potencial das membranas miticondriais, liberao de citocromo C que activa a caspase-9 desencadeando os sinais da apoptose celular, alterando a ltrao glomerular. Objetivos: Analisar o comportamento dos receptores das clulas do tbulo contorcido proximal frente ao uso de gentamicina. Metodologia: Ratos machos Wistar (210-270g) foram utilizados para a deteco de NAG (N-acetil--D-glucosaminidase) na urina foi usado o mtodo de espectrofotometria e para a anlise de expresso da megalina pelo Western blot. Concluses: Os receptores da superfcie de membrana das clulas do tbulo proximal do rim internalizaram os aminoglicosdeos, ocasionando o acmulo e nefrotoxicidade por aminoglicosdeos. Objetivos: Investigar os efeitos da fosfomicina na peroxidao de lipdios induzida pela gentamicina no tecido renal de ratos. Metodologia: Ratos machos Wistar. Peroxidao lipdica, peroxidao do cido aracdnico e liberao de ferro dos microssomos das mitocndrias foram detectadas por espectrofotometria. Concluses: A gentamicina causou formao de perxido de hidrognio pelas mitocndrias, aumentando o estresse oxidativo e perturbao das membranas lisossomais. Objetivos: Anlise s alteraes na reabsoro de glicose pelas clulas epiteliais do tbulo proximal LLC-PK1 provocadas pelo uso de aminoglicosdeos. Metodologia: Clulas LLC-PK1 do epitlio dos tbulos proximais foram utilizadas para deteco do SGLT1 (Transportador de glicose dependente de sdio). As clulas foram cultivadas com soluo salina, aminoglicosdeos e orizina. Concluses: A neomicina, arbecacina, especialmente a gentamicina causa a nefrotoxicidade por ocasionar necrose das clulas do tbulo proximal do rim, inibio de transportadores de glicose dependente de sdio (SGLT1), aumentando a glicosria.

Servais et al, 2005

Gentamicin-induced apoptosis in LLC-PK1 cells: Involvment of lysossoles and mitochondria

Watanabe et al, 2004

Targed prevention of renal accumulation and toxicity of gentamicin by aminoglycoside binding receptor antagonists

Yanagida et al, 2004

Protective effect of fosfomycin on gentamicin-induced lipid peroxidation of rat renal tissue

Takamoto et al, 2003

Aminoglycoside antibiotics reduce glucose reabsorption in kidney through down-regulation of SGLT1

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Autor/Ano

Ttulo

Objetivo, Metodologia e Concluses Objetivos: Investigar o efeito inibidor da daptomicina sobre a nefrotoxicidade causada pela gentamicina atravs da espetroscopia. Metodologia: As disperses lipdicas foram preparadas para avaliao por espectroscopia infra-vermelho. Concluses: Os aminoglicosdeos acumularam-se nos lisossomos, causando inchao e consequente rompimento e liberao de enzimas cidas no citosol. Alm disso, a nefrotoxicidade induzida pelo aminoglicosdeo gentamicina, prejudicou as membranas em borda de escova das clulas dos tbulos proximais. Objetivos: Pesquisar os efeitos do antagonista do fator de activao plaquetria sobre a nefrotoxicidade induzida pela gentamicina. Metodologia: Coelhos machos foram usados no experimento. para o estudo histolgico, usou-se xador Dubosq-Brasil, incluso em parana, os tecidos foram corados pelo tricmio de Masson e hematoxilina, eosina e safran. Concluses: A gentamicina causou decrscimo de 80% no uxo do plasma renal e na ltrao glomerular, aumento na excreo urinria de ons Na+, K+ , C1-, Ca2+ e Mg2+. Alm disso, houve degenerao tubular vacuolar, inamao peritubular e necrose das clulas do tbulo proximal.

Gurnani et al, 1995

Molecular basis of the inhibition of gentamicin nephrotoxicity by daptomycin; an infrared spectroscopic investigation

Hanslik et al, 1994

Effect of the platelet activating factor antagonist BN52021 in rabbits: Role in gentamicin nephrotoxicity

somais observado no estudo de Gurnani et al (10) mostrou o acmulo de gentamicina no interior dos lisossomos, inibindo a atividade das fosfolipases e esngomielinases, causando a formao de corpos mielides. O inchao e exploso dos lisossomos resultam na liberao de enzimas lisossomais e aminoglicosdeos seguida de necrose das clulas do tbulo proximal, prejudicando as funes renais. Frente aos danos nefrotxicos causados principalmente pela gentamicina, pode-se notar o aumento da glicosria (aumento na excreo urinria de glicose) relatada nos experimentos de Takamoto et al (11) que ao trabalhar com clulas epiteliais LLC-PK1 do epitlio do tbulo contorcido proximal vericaram uma baixa regulao no transportador de glicose dependente de sdio (SGLT1), tendo como conseqncia a diminuio na reabsoro de glicose e aumento da sua excreo. Atualmente para a deteco de alteraes morfolgicas nos rins foram usadas tcnicas com marcadores de injrias renais tais como o NAG (N-acetil--D-glucosaminidase) no experimento de Watanabe et al (12) e -GST(glutathione-S-transferase) usado nos experimentos de Hosaka et al (13), o -GST um marcador enzimtico excretado pela urina que foi quanticado pelo mtodo ELISA. A presena do marcador NAG excretado pela urina, indicou nos experimentos que houve danos nos tbulos contorcidos proximais induzidos pela gentamicina, analisado atravs de espectroscopia.
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Alm da gentamicina causar danos aos tbulos proximais, tambm causa peroxidao lipdica e estresse oxidativo pelo aumento na produo de perxido de hidrognio (H2O2) pelas mitocndrias do crtex renal (14) . No estudo experimental de Servais et al (15), a gentamicina causou apoptose e necrose tubular das clulas LLC-PK1, envolvendo organelas como lisossomos e mitocndrias, interferncia na sntese e trfego de protenas no Complexo Golgi. Com o intuito de minimizar os efeitos txicos da gentamicina, Polat et al (16) investigaram o efeito protetor da aminoguanidina contra os danos provocados pela gentamicina como necrose do tbulo proximal, edema intracelular, reduo da cpsula de Bowman, formao do ONOO- que provoca a diminuio da ltrao glomerular. Na pesquisa de Allory et al, (17), O HNK-1 um antgeno que se expressa em clulas renais no s durante a nefrognese normal, mas esse eptopo foi consideravelmente aumentado em necrose tubular aguda e neoplasmas renais. Isso mostra que o HNK-1 tem a funo de um marcador de injrias renais que pode ser usado como um marcador imunoistoqumico para identicao histopatolgica renal, o que pode ser mais uma contribuio na elucidao dos mecanismos de nefrotoxicidade envolvida pelos aminoglicosdeos. Atravs dessa reviso sistemtica foi permitido analisar as principais estruturas histolgicas renais envolvidas com

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Alteraes Renais por Aminoglicosdeos 11 - Takamoto K, Kawada M, Usui T, Ishizuka M, Ikeda D. Aminoglycosides antibiotics reduce glucose reabsorption in kidney through dow-regulation of SGLT1. Biochem Biophys Res Commun. 2003;308:866-71. 12 - Watanabe A, Nagai J, Adachi Y, Katsube T, Kitahara Y, Murakami T, et al. Targeted prevention of renal accumulation and toxicity of gentamicin by aminoglycoside binding receptor antagonists. J Control Release 2004;95:423-33. 13 - Hosaka EM, Santos OFP, Seguro AC, Vattimo MFF. Effect of cyclooxygenase inhibitors on gentamicin induced nephrotoxicity in rats. Braz J Med Biol Res 2004;37:979-85. 14 - Yanagida C, Ito K, Komiya I, Horie T. Protective effect of fosfomycin on gentamicin-induced lipid peroxidation of rat renal tissue. Chem Biol Interact 2004;148:139-47. 15 - Servais H, Smissen PVD, Thirion G, Essen GVD, Bambeke FV, Tulkens PM, Mingeot-Leclercq M-P. Gentamicin-induced apoptosis in LLC-PK1 cells: Involvement of lysossomes and mitochondria. Toxicol Appl Pharmacol 2005;206:321-33. 16 - Polat A, Palakpinar H, Tasdemir S, Colak C, Vardi N, Ucar M, Emre MH, Acet A. Protective role of aminoguanidine on gentamicin-induced acute renal failure in rats. Acta Histochem 2006;108:365-71. 17 - Allory Y, Commo F, Boccon-Gibod L, Sibony M, Callard P, Ronco P, et al. Sulfated HNK1 epitope in developing and mature kidney: a new marker for thin ascending loop of Henle and tubular injury in acute tubular necrosis. J Histochem Cytochem 2006;54:575-84.

a nefrotoxicidade produzida pelos aminoglicosdeos so os tbulos contorcidos proximais, sendo essas clulas envolvidas principalmente pelo comprometimento dos lisossomos seja liberando enzimas hidrolases ou inibindo a atividade de enzimas fosfolipases ou esngomielinases, o que resulta na formao de corpos mielides com necrose tubular. Alm disso, ocorre uma baixa regulao no transportador de glicose dependente de sdio, aumento da excreo de NAG, peroxidao lipdica e aumento na produo de perxido de hidrognio pelas mitocndrias do crtex renal.

REFERNCIAS
1Souza L B, Pinto LP, Medeiros AMC, Arajo Jr RF, Mesquita OJX . Oral manifestations in HIV - infected patients in a Brazilian population. Pesqui Odontol Bras 2000;14:15-29. 2 - Kierszenbaum AL. Sistema urinrio. In: Kierszenbaum AL, organizador. Histologia e biologia celular: uma introduo patologia. Rio de Janeiro: Elsevier; 2004. p.389-15. 3 - Bennett CC. The aminoglycosides. Primary Care Update for OB/GYNS 1996;6:186-91. 4 - Busse HJ, Wostmann C, Bakker EP. The bactericidal action of streptomycin: membrane permeabilization caused by the insertion of mistranslated proteins into the cytoplasmic membrane of Escherichia coli and subsequent caging of the antibiotic inside the cells due to degradation of these proteins. J Gen Microbiol 1992;138:551-61. 5 - Chambers, HF. Aminoglicosdeos. In: Brunton, Larence L, Lazo JS, Parker KL, organizadores. Goodman E. Gilman. As bases farmacolgicas de teraputica. 10 ed. Rio de Janeiro: McGraw-Hill 2006;1039-54. 6 - Martnez-Salgado C, Henndez-Lpez FJ, Novoa-Lpez JM. Glomerular nephrotoxicity of aminoglycosides. Toxicol Appl Pharmacol 2007;223:86-98. 7 - Bowman RL, Silverblatt FJ, Kaloyanides GJ. Comparison of the nephrotoxicity of netilmicin and gentamicin in rats. Antimicrob Agents Chemother 1977;12:474-8. 8 - French MA, Cerra FB, Plaut ME, Schentag JJ. Amikacin and nephrotoxicity in critically ill patients. Antimicrob Agents Chemother 1981;19:147-52. 9 - Hanslik T, Blanchet F, Noohy D, Pirotzy E, Guilmard C, Seta N, et al. Effect of the platelet activatin factor antagonist BN52021 in rabbits: Role in gentamicin nephrotoxicity. Toxicol Appl Pharmacol 1994;128:111-5. 10 - GurnaniK, Khouri H, Couture M, Bergeron MG, Beauchamp D, Carrier D. Molecular basis os the inhibition of gentamicin nephrotoxicity by daptomycin; an infrared spectroscopic investigation. Biochim Biophys Acta 1995;1237:86-94.

Correspondncia: Prof. Dr. Raimundo de Arajo Jnior Departamento de Morfologia Centro de Biocincias Universidade Federal do Rio Grande do Norte Av. Senador Salgado Filho, S/N Campus Universitrio Lagoa Nova 59072-970 Natal, RN, Brasil e-mail: araujojr@cb.ufrn.br

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