cidos Nucleicos

Fuente: Clases de pre-Residentado Mdico - UNMSM - 2003 Autor: Mag. Doris Huerta Canales Artculo recibido en Diciembre del 2003 Los organismos estn compuestos por una extraordinaria variedad de molculas. Una bacteria tpica puede contener aproximadamente 2000 protenas, las clulas eucariontes contienen unas 50000; adems, muchas otras molculas contribuyen a formar la diversidad de organismos que se conocen. Esta gran cantidad de informacin se encuentra codificada en las macromolculas denominadas CIDOS NUCLEICOS. El ncleo de la clula contiene toda la informacin necesaria para determinar la gama de expresin proteica que se observa en los diferentes tipos celulares. Esta informacin se almacena dentro de los cromosomas, en el ADN y ser la que defina el orden de los aminocidos en una cadena polipeptdica. Las regiones que tienen informacin para las protenas se llaman genes, los que estn compuestos por una secuencia lineal de nucletidos en el ADN y se encuentran en regiones especficas de los cromosomas en el ncleo de la clula; no obstante el desciframiento del cdigo del ADN en una secuencia de aminocidos no ocurre en el ncleo sino en el citoplasma en unas organelas especiales, los ribosomas. El ADN no proporciona directamente ni de inmediato la informacin para el ordenamiento de los aminocidos y su polimerizacin en polipptidos, por lo tanto debe intervenir alguna molcula intermedia para transferir la informacin del ncleo al citoplasma, esto sucede en todos los organismos inclusive en los procariotes. La informacin codificada en el ADN es copiada, es transcrita en el RNA, proceso denominado Transcripcin, que luego ser expresada o traducida en molculas de protenas en un proceso denominado Traduccin o Sntesis de Protenas. Los detalles de la estructura molecular del ADN pueden variar, sin embargo, todas son polmeros de cuatro unidades monomricas denominadas nucletidos que contienen las purinas A,G y las pirimidinas C,T unidas a una desoxiribosa fosfato, formando una estructura bsica de doble hlice regular. La secuencia de bases constituye la informacin gentica y las variaciones en la secuencia entre los diferentes individuos, da lugar a la asombrosa complejidad de los organismos. Las bases se enlazan por puentes de hidrgeno en pares complementarios, de modo que la separacin de la doble cadena permite que la secuencia de bases se copie formando dos hlices hijas, esencialmente idnticas al ADN progenitor; sta es la base de la Replicacin en los sistemas biolgicos. Las enzimas que catalizan este proceso son las ADN polimerasas participando otras protenas tambin. Durante el tiempo de vida de un organismo su ADN est sujeto a daos provocados por diversos agentes (fsicos, qumicos y biolgicos) y a mutaciones espontneas. Estas lesiones pueden repararse mediante: sistemas a base de enzimas o provocar la muerte de la clula o causar un cambio en el genoma que puede transferirse a la siguiente generacin. (es decir, una mutacin). La expresin de los genes en una clula determina la estructura y funcin de esa clula y por tanto es decisiva para el normal crecimiento y desarrollo de los organismos vivos. Todas las enfermedades de base gentica son el resultado de la expresin incorrecta de genes especficos. Una mutacin en la regin codificadora de un gen, da como resultado la expresin de una protena no funcional, mientras que una mutacin en una regin reguladora altera el control transcripcional o traduccional de la expresin de dicha protena. Es obvio que para tener un buen conocimiento de la enfermedad es necesario comprender bien a fondo la estructura y funcin de los genes especficos y la manera que es controlada su expresin. El avance de la Biologa Molecular y la aparicin de nuevas tcnicas en los ltimos 20 aos han ayudado enormemente a comprender los aspectos biomoleculares de la enfermedad en el hombre. Si queremos hacer un estudio de un gen humano relacionado con alguna deficiencia de inters, debemos seguir una secuencia para analizarlo:

Aislamiento del gen vale decir la clonacin de un gen para una protena purificada. Determinar cuantas copias existen de l en el genoma. Localizacin del gen en el cromosoma. Estudio detallado de cmo est ese gen regulado, mediante el anlisis del RNA y la expresin de las protenas.

El conocimiento de la estructura y funcin del material gentico, el descubrimiento de las enzimas de restriccin y de vectores de clonacin (plsmidos), fueron los pilares para el desarrollo de las tcnicas de Biologa Molecular. En la actualidad es posible secuenciar de manera rutinaria una protena purificada utilizando un secuenciador automtico, as se determina la secuencia de aminocidos, se deduce su RNA y a partir de sta ltima se deduce la secuencia del ADN. Una secuencia de ADN corta (oligonucletidos) se puede sintetizar con facilidad para producir 100 pares de bases. Un oligonucletido solo o un coctel de ellos puede etiquetarse con marcadores y entonces usarse como sondas para aislar el gen que contiene estas secuencias de ADN, mediante la bsqueda en bibliotecas de ADN complementario (DNAc) recombinante. En forma alternativa, la disponibilidad de anticuerpos, inmunoglobulinas que reconocen especficamente una protena de inters puede contribuir de manera directa a la clonacin del DNAc que expresa esa protena. Una de las ms importantes tcnicas disponibles para el anlisis de genes, es la determinacin del rden preciso de los nucletidos dentro de un gen mediante la secuenciacin de ADN, este es el primer paso en el estudio de un gen de inters. Para localizar un gen en el cromosoma y estimar la cantidad de copias en el genoma por lo general se usa tcnicas de hibridizacin. La estructura del gen es decir si tiene o no intrones y su localizacin, puede determinarse utilizando el microscopio electrnico y haciendo estudios con nucleasas. Muchas enfermedades son una consecuencia de la expresin inadecuada o incorrecta de genes especficos, por ello , un conocimiento del sitio y grado de expresin exactos de un gen de inters suele ser importante para comprender las bases moleculares de la enfermedad. En muchos casos, una vez clonado el gen es indispensable el anlisis de las regiones de control para comprender su funcin. La Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) permite la amplificacin masiva de secuencias de ADN especficas y se ha convertido en una poderosa herramienta del Bilogo Molecular. Esta capacidad de amplificar una secuencia de ADN objetivo tiene muchas aplicaciones en clnica, por ejm. Detectar ADN o RNA infrecuentes, como los cidos nucleicos virales o bacterianos, para detectar mutaciones en transtornos genticos conocidos.